小鼠CD3AK的诱生与抗瘤活性的实验研究

采用固相抗小鼠ＣＤ３单抗和重组白细胞介素２刺激小鼠脾细胞以诱生抗ＣＤ３单抗激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）。结果表明这种方法诱生的ＣＤ３ＡＫ能够增殖并介导体外抗瘤活性。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

目的:比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞(Mtb AK)、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性.方法:分别用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),在含rIL-2的RPMI 1640培养液中诱导扩增MtbAk、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδ T细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性.结果:与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性.结论:MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗.     

CD_3AK的制备及杀瘤作用观察

目的：观察CD_3AK抗CD3单克隆抗体）的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和／或IL-2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果：CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论：由于CD3AK较LAK对IL-2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞全外增殖和杀瘤活性比较

目的：比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞（MtbAK）、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性。方法：分别和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞（PBMC）,在含rIL-2的RPMI1640培养液中诱导扩增MtbAK、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδT细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性。结果：与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性。结论：MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗。     

NK细胞联合西妥昔单抗对大肠癌细胞ADCC作用的研究

目的比较3株肠癌细胞株(LOVO、SW480、SW620)与自然杀伤(natural killer,NK)细胞、西妥昔单抗(Cetuximab)混合作用之后,NK细胞抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell cytotoxicity,ADCC),探讨Cetuximab抗肿瘤过程中ADCC的作用。方法免疫组织化学方法检测3种不同肠癌细胞系(LOVO、SW480、SW620)的EGFR表达水平;MTT法检测6种不同浓度Cetuximab作用48h后肿瘤细胞的生长抑制情况;NK细胞与Cetuximab包被的肿瘤细胞共孵育,LDH法检测NK细胞的ADCC功能变化。结果免疫组织化学结果显示,3株细胞EGFR表达:LOVO(),SW480(+),SW620(-);Cetuximab对LOVO细胞和SW480细胞的生长抑制呈剂量依赖,对SW620细胞无抑制作用;LOVO细胞和SW480细胞经Cetuximab处理后,NK细胞的ADCC作用均增强且有统计学意义(P<0.05)。结论单独的Cetuximab可抑制EGFR阳性的LOVO细胞和SW480细胞,而对EGFR阴性的SW620细胞生长抑制作用不明显,所选的2株EGFR阳性肿瘤细胞都可被Cetuximab所介导ADCC作用所抑制,高EGFR表达的肿瘤细胞更加敏感。     

CD3AK细胞在肿瘤治疗中的研究进展

随着免疫学、分子生物学与基因工程技术的发展,以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术、化疗和放疗后的最新模式。CD3AK（anti～CD3antibody induced activated killer cells）是指抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞,以其存活时间长、外源性IL-2用量小,     

枸杞子多糖、黄芪多糖、刺五加多糖和鼠伤寒杆菌内毒素多糖对LAK活性的调节作用

采用~(125)IUdR释放法测定了不同浓度的枸杞子多糖、黄芪多糖、刺五加多糖及鼠伤寒杆菌内毒素多糖对不同剂量rIL-2激活的杀伤细胞(LAK)抗肿瘤活性的影响,发现4种多糖在一定浓度条件下均可在体外增强LAK活性。枸杞子多糖在0.01～0.1mg·ml~(-1)、黄芪多糖和刺五加多糖在0.01mg·ml~(-1)时增强作用最显著(P<0.001),内毒素多糖在0.0001～0.1μg·ml~(-1)时可增强LAK活性,在0.0001μg·ml~(-1)时最显著。4种多糖浓度过低或过高则不能增强,甚至抑制LAK活性。     

黄芪水煎剂和黄芪多糖对CD3AK细胞毒性的增强作用

目的探讨黄芪水煎剂和黄芪多糖(APS)对CD3AK细胞毒性的增强作用.方法将黄芪水煎剂、不同浓度的APS分别加入CD3AK细胞和靶细胞K562中,共同培养24 h后,用MTT比色法测定CD3AK细胞毒性.结果黄芪水煎剂和APS具有明显增强CD3AK细胞的毒性(P＜0.001),有效剂量为0.01 g/L.结论黄芪水煎剂和黄芪多糖能够增强CD3AK细胞的细胞毒性作用.     

CD3AK细胞治疗对原发性肝癌患者免疫功能影响的研究

为了观察ＣＤ３ＡＫ细胞对原发性肝癌（简称肝癌）患者免疫功能的影响。采用ＣＤ３ＡＫ细胞治疗６５例不能切除的肝癌患者，分别于治疗前后测定患者Ｔ细胞亚群（ＡＰＡＡＰ法）和血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平（ＦＬＩＳＡ法）。结果ＣＤ３ＡＫ细胞治疗后肝癌患者Ｔ细胞亚群ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋升高，ｓＩＬ－２Ｒ水平下降，统计学有显著性差异（Ｐ〈０．０５）。提示ＣＤ３ＡＫ细胞治疗肝癌对提高     

联合应用NK细胞及CTL对黑色素瘤B16细胞的影响

目的探讨联合应用自然杀伤(NK)细胞及细胞毒T细胞(CTL)对黑色素瘤B16细胞的作用。方法提取NK细胞及CTL,分别用白细胞介素-2(IL-2)(6 000、600IU/L)及植物血凝素(8μg/mL)活化,流式细胞仪检测细胞表面受体,将NK细胞及CTL互为靶细胞及效应细胞进行细胞毒性实验;以黑色素瘤B16细胞为靶细胞检测CTL的杀伤率。结果 NK细胞表面受体NK1.1+的百分比在87%以上,NKp46+在90%以上;CTL表面受体CD3+的百分比在99%以上,CD8+在98%以上。NK细胞与CTL相互无细胞毒性,联合应用NK细胞与CTL明显增加对黑色素瘤B16细胞的杀伤作用。结论联合应用NK细胞及CTL对黑色素瘤B16细胞有协同杀伤作用。     

肝动脉化疗栓塞与CD3AK细胞联合治疗中晚期肝癌的临床研究

目的：探讨肝动脉化疗栓塞与ＣＤ３ＡＫ细胞联合治疗中晚期肝癌的效果。方法：对３４例中晚期原发性肝癌采用经肝动脉化疗栓塞（ＴＡＣＥ）联合ＣＤ３ＡＫ细胞进行治疗（Ａ组）;同时对２７例相同患者单纯进行肝动脉化疗栓塞治疗（Ｂ组）。结果：①Ａ组部分缓解率为７６．５％（２６／３４）,高于Ｂ组部分缓解率为５１．９％（１４／２７）（Ｐ〈０．０５）。Ａ组中位生存期为２２．３月,Ｂ组为１５．７月,两组相比有显著差异（Ｐ     

对小鼠黑色素瘤细胞肺转移的抑制作用mGM-CSF基因转染

目的探讨小鼠粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(mGM-CSF)基因转导对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制效果.方法应用脂质体将含有mGM-CSF基因的真核表达载体转染B16小鼠黑色素瘤细胞,经G418加压筛选后,挑选表达mGM-CSF基因的B16黑色素瘤细胞.观察转导或未转导mGM-CSF基因的B16黑色素瘤细胞在Balb/c小鼠体内的肺转移.结果转导mGM-CSF基因的B16黑色素瘤细胞可以稳定表达mGM-CSF,在小鼠模型上其肺转移灶数目显著少于未转染基因的黑色素瘤细胞对照组,二者差异显著(n=5,125.8±34.3vs27.8±24.0,P<0.01).结论mGM-CSF转导可显著抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的肺转移,提示GM-CSF具有治疗黑色素瘤的临床应用前景.     

BALB/c小鼠黑色素瘤B 16移植肿瘤模型的建立

[目的]建立宜于进行早期观察及测量的小鼠黑色素瘤模型.[方法]将不同数量的处于对数生长期的B16细胞株黑色素瘤细胞接种于BALB/c小鼠背部及足垫皮下,建立移植肿瘤动物模型.观察小鼠肿瘤的生长特点,应用病理学和免疫组织化学染色方法进行鉴定,归纳总结接种细胞数与肿瘤发生率的关系及肿瘤生长对小鼠生活状态的影响.[结果]接种5d后BALB/c小鼠皮肤浅表部位相继出现黑色的点或线状改变,发展为结节状改变直至肿瘤破溃、出血、死亡或破溃、出血、结痂、愈合,部分小鼠出现肿瘤消退.在接种细胞数大于5×105个时BALB/c小鼠的肿瘤模型全部建立成功.[结论]B16细胞株黑色素瘤细胞接种于BALB/c小鼠的肿瘤模型成功率与接种细胞数成正比,它具有建立肿瘤模型成功率高,观察及测量方便等优点,接种部位以背部皮下为宜.     

半乳糖结合位点封闭免疫毒素的研制及其杀伤活性

作者报道B链半乳糖结合位点封闭的蓖麻毒素-胃癌单克隆抗体MGb_2结合物的制备及其细胞毒特征。首先将引入碘乙酰基团的毒素与引入巯基的抗体反应,得到的结合物通过琼脂糖亲和层析柱除去仍保留半乳糖结合能力的部分。细胞毒性试验结果表明,结合物对肿瘤靶细胞具有较强的选择性杀伤作用,在1.0×10~(-11)mol/L水平,对人胃癌细胞KATOⅢ的杀伤率为46％,优于MGb_2-蓖麻毒素A链结台物(12％),而对非靶细胞作用很弱,在1.0×10~(-9)mol/L水平对正常人胚肺细胞SL_7杀伤率仅为42％,无需半乳糖拮抗。     

小鼠CD_3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能在小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对照组比较有显著差异。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的体内外抗肿瘤作用     

肿瘤疫苗对小鼠肝癌作用的研究

目的 :通过动物实验评价肿瘤疫苗对肝癌的防治作用 ,为临床应用提供实验依据。方法 :用小鼠肝癌细胞系MM45T .Li经过化学修饰制成肿瘤疫苗免疫小鼠 ,然后再用该细胞系接种于小鼠腋下。分别观察免疫鼠及未免疫小鼠的肿瘤生长情况 ,进行病理学检查 ;并用3H -TdR释放法检测小鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力差异。结果 :①经肿瘤疫苗免疫的小鼠的肿瘤生长速度明显低于未免疫小鼠 ;②病理学检查发现免疫鼠肿瘤组织内大量淋巴细胞浸润 ,未免疫鼠内罕见淋巴细胞浸润 ;③3H -TdR释放实验显示免疫鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力明显高于未免疫鼠。结论 :按我们现行方法制备的肿瘤疫苗能激活小鼠抗肝癌的免疫反应 ,抑制肝癌的生长 ,但完全保护作用尚不明确     

可溶性肿瘤抗原对小鼠CD_3AK细胞生物免疫功能的影响

目的:观察可溶性肿瘤抗原(STA———由S180 细胞提取)对小鼠CD3AK细胞的体外增殖、体外杀瘤活性以及体内抑瘤作用的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),分别检测小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性和杀瘤效应细胞体外杀瘤活性,并通过测定实体瘤质量来分析杀瘤效应细胞的体内抑瘤作用。结果:STA协同增强小鼠CD3 单抗诱导的小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性。由STA联合小鼠CD3 单抗共同诱导的T- AK细胞,不仅在体外对S180 细胞杀瘤活性强于CD3AK细胞,且在小鼠体内抑制S180 肿瘤细胞的生长和扩散作用也强于CD3AK细胞。结论:STA能增强小鼠CD3AK细胞的体外增殖活性和杀瘤活性     

茶多糖对实验小鼠B16F10细胞瘤治疗效应的机制研究

目的:观察茶多糖(TPS)对实验小鼠黑色素B16F10细胞瘤治疗效应,探讨茶多糖抑制黑色素细胞瘤的免疫学机制。方法:将C57BL/6随机分组,建立小鼠黑色素细胞瘤模型,通过持续灌胃服用茶多糖28 d,观察并记录荷瘤小鼠一般情况、肿瘤体积变化,最终检测实验小鼠NK细胞活性以及IFN-γ和IL-4分泌水平。结果:1TPS治疗组延缓了小鼠体质量改变,差异均有统计学意义(P<0.05),以中剂量治疗组尤为明显(P<0.01);2TPS治疗组小鼠肿瘤直径与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),以中剂量治疗组差异最为显著(P<0.01),中剂量抑瘤率最好;3TPS治疗组的NK细胞活性在效靶比为20∶1时,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),中剂量治疗组的NK活性达39.06%,差异有显著统计学意义(P<0.01);4TPS治疗组IFN-γ分泌水平均显示升高,而IL-4分泌水平则呈现下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),以中剂量治疗组变化尤为显著(P<0.01)。结论:在本实验条件下,TPS对荷瘤小鼠显示出较为有效的治疗效应,以中剂量治疗组(400 mg/kg)效果最好,其机制可能与增强小鼠NK细胞活性、增加IFN-γ以及降低IL-4分泌水平等免疫调节有关。