生物人工肝细胞材料研究进展

生物人工肝是治疗肝功能衰竭的有效方法.肝细胞是生物人工肝系统的核心,生物人工肝的肝支持作用完全依赖于所用肝细胞的特异性生物学功能.生物人工肝中使用的肝细胞来源主要有人源性肝细胞、异种肝细胞、肝细胞株等.近20年来,虽然对各种来源的肝细胞进行了广泛和深入研究,但是生物人工肝细胞材料的来源问题至今未能得到满意解决.文章综述此方面的最新研究进展.     

生物人工肝细胞材料肝细胞株的研究进展

0引言 肝细胞是生物人工肝支持系统的核心原材料,生物人工肝对肝衰竭患者的肝支持作用依赖于所用肝细胞的生物学功能．无论是动物肝细胞还是人肝细胞,在体外培养时均存在生长条件要求严格、存活时间有限、传代困难等缺点．采用永生化程序建立肝细胞株就成为解决生物人工肝细胞来源的重要途径,而永生化的人肝细胞株则可为生物人工肝提供取之不尽的细胞源．现就这一方面的研究进展综述如下．     

基于生物人工肝细胞材料研究新进展

1986年Demetrion教授首先提出生物人工肝（bioartificial liver,BAL）,它由微载体粘附的肝细胞和人工解毒装置共同组成的体外肝灌流系统,能发挥肝细胞合成并结合胆红素和合成肝特异性蛋白的作用[1]。BAL是以人工培养的肝细胞为基础构建的体外生物反应装置,是当前体外人工肝支持系统研究领域的主流,主要由肝细胞来源、     

高密度无血清培养肝细胞的研究

利用高密度无血清培养肝细胞 ,以观察体外肝细胞形态和分化特点、白蛋白合成及其mRNA表达 ,为生物人工肝提供理想的肝细胞来源。结果 :培养肝细胞 4 8h后逐渐形成肝板样网络结构 ,伴胆小管形成。原位杂交显示所培养肝细胞具有良好的白蛋白mRNA表达。结果提示高密度无血清培养的肝细胞可形成类似体内肝细胞的形态和功能 ,可为生物人工肝提供理想的肝细胞来源。     

生物人工肝的安全性问题

以异种动物作为肝细胞来源的生物人工肝已进入临床试验阶段。本文从生物学评价以及使用动物肝细胞潜在风险角度讨论了生物人工肝的安全性问题。就生物人工肝的生物学试验、免疫反应、人畜共患疾病、生命伦理等问题展开讨论。     

生物人工肝的研究进展

近年来杂化型生物人工肝在治疗急性肝功能衰竭中发挥了很大的治疗作用，是研究最多、最有希望的人工肝。随着细胞培养技术和细胞工程技术的发展，肝细胞培养系统配合生物反应器提供肝功能的研究取得了重大进展。本就人工肝的发展历程，特别是杂化型生物人工肝研究中的核心问题肝细胞来源、培养方法及生物反应器的发展做了详尽的综述。     

浙江省2006年医药卫生科研进展

一、基础医学研究 1.生物人工肝用细胞源与混合型人工肝的研究:浙江大学医学院附属第一医院为解决生物人工肝的瓶颈即肝细胞源的问题,在国内率先建立四步灌流法分离肝细胞的新方法,使新鲜分离的肝细胞活率和得率得到了显著提高,开辟了为人工肝及细胞生物学研究提供高质量肝细胞的新途径.     

嵌合肝研究进展

嵌合肝 (chimericliver)是不同种属肝细胞移植后在受体动物体内形成的含有不同种属肝细胞及其立体结构的混合肝 ,是组织工程、人工器官研究热点领域。嵌合肝的成功建立对肝脏细胞生物学理论的建立和发展具有重大的推动作用 ,对肝炎病毒感染动力学及病毒性肝炎的演变研究提供了坚实的技术支持 ,也为异种肝细胞移植用于治疗重型肝炎肝衰竭病人提供了理论基础 ,更为生物人工肝的肝细胞来源提供了可靠的途径保障。uPA/RAG 2小鼠的发现为异种肝细胞移植后形成嵌合肝的研究提供了一个有效的动物模型。在uPA/RAG 2转基因小鼠体内注入大鼠、土拨…     

人工肝支持系统的研究现状

经过40多年的研究，尤其是近10年来应用半透膜、中空纤维技术、肝细胞分离及培养等技术，人工肝支持系统得到了迅速发展，在动物实验及临床应用中取得了较好效果。在人工肝支持系统中，非生物人工肝支持系统仅有解毒功能；生物人工肝支持系统虽具有重要功能，如参与糖、蛋白质、脂肪及中间产物代谢，生物合成等重要功能，但肝细胞易受毒害；而混合型生物人工肝支持系统合前二者之优点，因此，混合型生物人工肝支持系统，将是日后研究的主要方向。     

3D细胞培养体系在促进干细胞向肝细胞诱导分化研究中的作用进展（英文）

功能性肝细胞被广泛应用于细胞移植、生物人工肝治疗、肝脏组织工程、药物代谢及毒性等研究,但作为功能性肝细胞主要来源之一的原代肝细胞无法完全满足这些研究需求。在2D或3D细胞培养体系中经干细胞诱导获得的功能性肝细胞可能可作为替代来源。目前,3D细胞诱导体系与2D体系相比,因前者能模拟体内部分生物微环境而备受关注。该文概述3D细胞培养体系在促进干细胞向肝细胞诱导分化研究中的作用进展,重点关注用于研制3D培养支架的材料。     

Isolation and cultivation of porcine hepatocytes for extracorporeal artificial liver support system

目的　开发从屠宰器官进行高活性猪肝细胞规模分离的优化程序。方法　采用部分肝叶逆行灌注、机械及组酶肝消化并经密度梯度离心获取高产量、高纯度肝实质性细胞。结果　部分肝叶经消化可获取 1 39× 10 9肝细胞的平均产量 (9 9× 10 6肝细胞 /克组织 )及 92 5 %的平均细胞存活率。经组合性dispase/胶原酶的消化处理肝细胞的收获量及存活率明显增加。对细胞灌流及分离液进行氧化处理能阻止泡状细胞的发生。分离的猪肝细胞经原代培养其活性及机能保持着与鼠肝细胞一致的水平 ,且随时间的推移而减退。结论　通过我们改良的方法可收获高产量成年猪肝细胞 ,并保持良好的活性与分化机能。因此 ,成年猪肝细胞被证实是人工肝脏辅助支持系统中生物组的一个很有价值的肝细胞来源。     

新型中空纤维编织型生物人工肝反应器的初步构建

目的 为体外生物人工肝支持系统构建一种新型中空纤维编织型生物反应器，提高传统中空纤维生物反应器的性能。方法 采用中空纤维编织方法，制作三维立体型生物反应器，对反应器进行物质传输试验后，将分离的新生实验小型猪肝细胞接种于中空纤维支架上，用培养液循环式人工毛细管系统进行培养，检测生物反应器的生物功能，观察培养猪肝细胞的酶漏出量。结果 传输试验显示，中空纤维编织型反应器的半秀快速传输含人白蛋白和酚红的RPMI 1640培养液。加入肝细胞并培养后，SDS／PAGE可从生物反应器内检测出猪肝细胞分泌的白蛋白，生物反应器内的猪肝细胞有效地将氯化铵转换成尿素。反应器实验中，肝细胞仅释放了少量的ALT、LDH。结论 初步研制出一种新的、符合生物人工肝基本要求的实验型生物反应器，该反应器内培养的肝细胞保持较好的细胞活力，具有生物合成与转换功能。     

大鼠肝抑素提取物生物效应的体外研究

应用酒精深山析和超速离心等方法人正常成年大鼠中提取肝抑素粗制品。离体实验检测提取物对再生肝肝细胞，、肝癌细胞、胃癌细胞的生物效应，结果是：（１）肝抑素提取物对再生肝肝细胞增殖具有很强抑制作用。随剂量的增加，细胞增殖抑制率增大，其最大抑制率为７１．４％（２）对肝癌细胞同样具有抑制作用，其最大抑制率为４３％；对人胃癌细胞无抑制作用。表明提取物中含有肝抑素，经对培养再生肝肝细胞、人肝癌细胞的增殖具有抑制     

新型生物人工肝系统治疗急性肝衰竭犬后猪内源性逆转录病毒传播的实验研究

目的:探讨猪肝细胞为基础的新型生物人工肝(BAL)系统体外灌流后及治疗急性肝衰竭(ALF)犬后猪内源性逆转录病毒(PERV)的传播。方法:构建新型BAL,应用BAL进行体外灌流6h。采用门腔分流及胆总管结扎切断术建立犬ALF模型,应用BAL治疗ALF犬6h。采用PCR检测灌流前猪细胞中PERV原病毒DNA和猪mtDNA,采用RT-PCR检测灌流前后中空纤维管内腔循环液和治疗前后犬血清PERV RNA。结果:猪细胞可检测到PERV原病毒DNA和猪mtDNA,灌流前后中空纤维管内腔循环液和犬血清PERV RNA均为阴性。结论:猪肝细胞为基础的新型BAL体外灌流和用于ALF犬治疗6h后未发现PERV传播。     

用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究

目的 对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法 采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统，对5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持，综合评价其临床疗效和安全性。结果 5例患者经混合人工肝支持后，肝衰竭均得到不同程度的控制，表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转，肝性脑病改善。最终2例好转出院，1例经肝移植存活，2例 死亡，死亡原因与不良反应无关。结论 猪肝细胞型混合生物人工肝系统可用作重型肝炎肝衰竭的辅助支持和治疗。     

Metabolic effects of a novel bioartificial liver on serum from severe hepatitis patients: an in vitro study

Theextracorporealbioartificialliversupportsystem(EBLSS)hasbeenestablishedtocompensateforhepaticfunctionin patientswithseverehepatopathy ,andtoprovidesupportivetherapyforthesepatients EBLSShasanimportantstatusintheresearchofartificialorgans Atpresent,thestudyofartificiallivershasprogressedtothestageofthehybridbioartificialliver (BAL)consistingofmammalianhepatocytesinartificialsyntheticmaterials 1Thistype ofartificiallivercannotonlyprovidethebiologicalfunctionsoflivinghepatocytes,butcanalso…     

肝干细胞研究进展

肝干细胞是具有自我更新能力和分化为成熟肝细胞与胆管上皮细胞的双向分化潜能的原始细胞.肝干细胞不仅参与了肝脏的稳态维持、损伤修复和肝再生,而且在肝脏疾病的细胞治疗、人工生物肝及肝导向基因治疗中有着巨大的应用潜能.本文对几种主要类型的肝干细胞及它们的来源、分子标志物等进行了综述.     

人工肝支持系统应用简介

本文回顾了人工肝的发展及在临床急慢性肝脏功能衰竭中的应用。目前非生物型人工肝仍在临床广泛应用并取得了较好效果。非生物型人工肝目前国内应用最多的方法为血浆置换法。一般血浆置换法设备是由多组泵、阀、管路、传感器以及过滤器(分离器)组合而成,并由计算机控制的系统。因为血浆置换法是侵人性的,设备的特点是安全性必须好,但由于肝脏功能的复杂性,以体外培养活性细胞为中心的生物型或混合型人工肝在肝衰时的支持治疗作用会更加明显和接近自然肝脏的功能。生物型人工肝发展迅速,但还有一系列问题需要解决。     

乳鼠肝细胞的体外培养及组织化学观察

本文用等量混合低浓度胶原酶、胰蛋白酶,直接消化乳鼠肝组织小块的方法,获得了存活率较高的大量肝细胞。培养的乳鼠肝细胞呈上皮状,形态多样,可分为大形细胞和小形细胞,胞质内充满颗粒。在培养的肝细胞内糖原丰富,琥珀酸脱氢酶活性强,乳酸脱氢酶活性阳性。培养的乳鼠肝细胞具有整体肝中细胞的特殊功能,可做为研究肝细胞的实验模型。