脂质体与完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

目的 :探讨完全弗氏佐剂 (CFA)、不完全弗氏佐剂 (IFA)、大复层脂质体 (LML)、小单层阳离子脂质体(DOTAP)对NOD鼠胰岛炎和糖尿病发病的影响。方法 :①将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予CFA后脚板注射 (n =16 ) ,IFA和PBS乳化后腹腔注射 (n =16 ) ,单独PBS后脚板注射 (n =16 )。观察 12周龄胰岛病理及 30周龄糖尿病发病情况。②将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予大复层脂质体 (LML) (n =13) ,小单层阳离子脂质体 (DOTAP) (n =13) ,单独PBS腹腔注射 (n =13) ,同上观察胰岛病理及糖尿病发病情况。结果 :①CFA后脚板注射能明显降低胰岛炎计分 ,减少糖尿病的发生。 30周龄时 ,CFA组的发病率明显低于PBS后脚板注射对照组 (分别为9 2 %和 81 8% ,P =0 .0 0 1)。 12周龄时 ,CFA组胰岛炎计分明显低于对照组 [分别为 (0 0 5± 0 0 2 )和 (0 5 4± 0 11) ,P<0 .0 0 1]。②LML腹腔注射能明显降低胰岛炎计分。 12周龄时 ,LML组胰岛炎计分明显低于PBS腹腔注射对照组 [分别为 (0 16± 0 0 2 )和 (0 5 8± 0 0 6 ) ,P <0 .0 0 1]。 30周龄时 ,LML组糖尿病发生率为 6 0 % ,对照组为 90 % ,两组间无统计学差异。③在预防胰岛炎的作用上 ,CFA优于LML。结论 :CFA后脚板注射可预防NOD鼠发生糖尿病并减     

普伐他汀对非肥胖糖尿病小鼠糖尿病预防作用的机制

目的 探讨普伐他汀对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病的预防作用及机制.方法 3-4周龄NOD雌鼠分为4组,对照组(摄普通饲料,30只),小剂量组(普伐他汀1 mg·kg-1·d-1,29只),中剂量组(普伐他汀10 mg·kg-1·d-1,29只)和大剂量组(普伐他汀40 mg·kg-1·d-1,30只),观察糖尿病发病至30周龄.各组另取8只12周龄未患病NOD鼠,胰腺HE染色观察胰岛炎;制备脾细胞悬液后,流式细胞仪检测脾细胞中CD4+ CD25+ 调节性T细胞数量;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测脾细胞对特异性抗原的刺激增殖反应;ELISA法测特异性抗原刺激后脾细胞培养上清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;RT-PCR检测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA的表达水平.结果 30周龄时,大剂量普伐他汀组NOD鼠糖尿病的发病较对照组明显降低(P＜0.01).12周龄时,大剂量普伐他汀组胰岛炎严重程度低于对照组(P＜0.001);大剂量普伐他汀组脾细胞培养上清中IFN-γ水平(42±20)Pg/ml,脾脏IFN-γmRNA表达水平(0.24±0.10)pg/ml均低于对照组(157±32)pg/ml,(0.81±0.18)pg/ml,均P=0.000),IL-4水平(91±22)pg/ml,脾脏IL-4mRNA表达水平(0.39±0.18)pg/ml均高于对照组[(44±20)pg/ml,P=0.000;(0.20±0.08)pg/ml,P=0.002)];小、中、大剂量普伐他汀组和对照组特异性抗原增殖指数分别为3.85±0.35、3.53±0.82、3.32±0.44、3.70±0.62,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05);小、中、大剂量普伐他汀组和对照组脾细胞中CD4+ CD25+调节性T细胞数量分别为(9.6±2.6)%、(10.2±2.4)%、(8.9±2.7)%、(10.0±2.4)%,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 早期使用大剂量普伐他汀进行干预,可以通过下调Th1细胞因子INF-γ,上调Th2细胞因子IL-4,促使免疫平衡向Th2方向偏移,从而减轻NOD鼠胰岛炎,预防NOD鼠糖尿病的发生.     

吡格列酮对非肥胖性糖尿病小鼠糖尿病的预防作用及机理探讨

目的　探讨吡格列酮对非肥胖性糖尿病 (NOD)小鼠胰岛炎和糖尿病的影响及其作用机理。方法　 4周龄NOD雌性小鼠随机分为 3组 ,分别摄食 0 0 1% (小剂量组 ,2 3只 )和 0 0 4 %(大剂量组 ,2 5只 )的吡格列酮混合饲料和普通营养饲料 (对照组 ,2 5只 )。每周检测尿糖 1次 ,发现阳性后用血糖仪测血糖 ,连续 2次血糖≥ 16 7mmol/L即诊断为糖尿病。各组取 12周龄未患病的小鼠胰腺组织切片HE染色后计算胰岛炎积分 ,取脾后制成脾细胞悬液行细胞培养 72h ,酶联免疫吸附试验法测定血清、脾细胞培养液上清干扰素 γ(IFN γ)和白介素 (IL) 4水平 ;抽提胰腺总RNA后行反转录 聚合酶链反应半定量检测IFN rmRNA水平。结果　 (1) 30周龄时 ,对照组、小剂量组和大剂量组糖尿病发病率分别为 80 0 %、6 0 9%和 6 0 0 % (P >0 0 5 ) ;但在下列时点药物组与对照组发病率之间差异有显著意义 (P <0 0 5 ) :小剂量组 :① 10 0d时发病率 0 %对 16 % ;185d时发病率 39%对6 8% ;②大剂量组 :110d时 :0 %对 16 % ;12 0d时 :4 %对 2 4 % ;135d时 :12 %对 36 %。 (2 ) 12周龄时 ,小剂量组、大剂量组和对照组胰岛炎积分分别为 1 0 1± 0 6 8、1 19± 0 84和 1 99± 0 75 (P >0 0 5 ) ;但总药物组和对照组相比差异有显著意义 (     

口服胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的: 观察口服胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病(non-obese diabetic, NOD)鼠胰岛炎、β细胞凋亡和糖尿病的影响,并探讨其诱导免疫耐受的机制.方法: 86只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组(n=43)和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)对照组(n=43),从4周龄始每周灌胃人普通胰岛素1mg(70μL)2次,12周后改为每周灌胃1次至30周,对照组予等体积的PBS;于12周龄观察胰岛炎和胰岛β细胞凋亡;检测胰岛Fas和FasL的表达;测定血清IL-4和IFN-γ浓度,以及胰岛内I-Aβg7,IL-1β,IFN-γ,Fas,IL-4,TGF-β mRNA和小肠PP(Peyer's Patch)淋巴结IL-4,IFN-γ,TGF-β mRNA的表达水平.结果: NOD鼠口服胰岛素组30周龄和52周龄时发病率为55.6%和70.4%,分别比PBS对照组(85.7%和96.4%)低(P＜0.05).胰岛素组胰岛炎积分比对照组低,但差异无统计学意义(P＞0.05).胰岛素组胰岛Fas抗原表达和β细胞凋亡率均比PBS对照组低(均P＜0.05).胰岛素组胰岛内I-Aβg7,IFN-γ,IL-1β,Fas mRNA和PP淋巴结IFN-γ mRNA表达均较PBS对照组低(均P＜0.05),而IL-4,TGF-β mRNA表达较对照组高(均P＜0.05);胰岛素组血清IL-4比PBS组高,IFN-γ比PBS组低(均P＜0.05).结论:口服胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生,但不能阻断胰岛炎的进展.口服胰岛素能诱导调节性T细胞产生,使全身和胰岛局部T细胞由Th1向Th2转型,从而抑制Fas介导的β细胞凋亡而预防糖尿病.     

Bc-tIGF-1对NOD 小鼠T细胞亚群的调节作用

目的　了解Bc tIGF 1是否能预防NOD小鼠糖尿病 (DM )的发生并探讨其免疫机制。方法　 4周龄时给NOD雌性小鼠腹腔注射 (ip)Bc tIGF 17.5 μg/ (kg·d) ,连续应用 2周 (n =10 ) ;同时等体积生理盐水ip 2周作为对照组 (n =10 )。 4 0周龄处死小鼠 ,测定血清C 肽和谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD -Ab) ,并观察脾脏T细胞亚群、胰岛病理和淋巴细胞免疫组化变化。结果　Bc tIGF 1组DM发病率 ( 5 0 % )明显低于NS组 ( 90 % ,P <0 .0 5 ) ,且发病时间延缓 ,胰岛炎症程度也明显减轻 ;脾脏CD 4T淋巴细胞较NS组明显降低 ,CD 8细胞比例则显著升高 (P <0 .0 1)。免疫组化显示Bc tIGF 1组胰岛CD 4T细胞浸润较对照组减少且局限在胰岛周围。两组的GAD -Ab阳性率无显著性差异。结论　早期应用Bc tIGF 1可减少和延缓NOD小鼠糖尿病发病 ,其机制可能与恢复CD 4和CD 8T细胞亚群平衡、抑制CD 4T细胞活动有关     

谷氨酸脱羧酶对不同周龄的非肥胖型糖尿病小鼠发生1型糖尿病的影响

目的 谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)对不同周龄非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠糖尿病免疫干预效果的影响. 方法 将3周龄NOD小鼠40只随机分为4组.3周龄组在3周龄时腹腔注射GAD 3 mU+不完全弗氏佐剂(IFA)50 μl,8周龄组在8周龄时腹腔注射GAD 3 mU+IFA 50 μl,12周龄组在12周龄时腹腔注射GAD 3 mU+IFA 50 μl,PBS为对照组.动态观察血糖、尿糖,并且眼内眦取血分离血清.28周龄时全部处死,取脾、胸腺检测淋巴细胞亚群的变化及胰腺作病理组织学检测. 结果 3周龄组胰岛个数最多,胰岛炎评分最低.在胸腺和脾脏中,CD8+/CD4+比率最大(P<0.05).各组小鼠随着周龄增加血清中IL-4水平总趋势增加,在同一时间点各组之间有差异(P<0.05).在12周和28周时,3周龄组γ-IFN水平比其他组显著降低. 结论 NOD小鼠在3周龄时腹腔注射GAD可以延缓小鼠1型糖尿病的发生,主要是通过诱导Th2类因子表达,抑制Th1类因子表达,调节CD8+/CD4+比率增加来实现.     

皮下注射胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的：观察皮下注射胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病（non-obese diabetic,NOD）鼠胰岛炎、B细胞凋亡和糖尿病的影响,并探讨其诱导免疫耐受的机制。方法：60只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组（n=34）和磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）对照组（n=28）,分别于4周、12周、20周、28周皮下注射中效胰岛素优泌林N（Humulin N）6U（60μL）＋不完全弗氏佐剂（incomplete Freund＇s adjuvant,IFA）60μL,对照组予PBS（60μL）＋IFA（60μL）。于12周龄观察胰岛炎和胰岛B细胞凋亡;检测胰岛Fas和FasL的表达;测定血清IL-4和IFN-γ浓度,以及胰岛内I-Aβ^x7,IL-1β,IFN-γ,Fas,IL-4 mRNA的表达水平。结果：NOD鼠皮下注射胰岛素加IFA组30周龄和52周龄时发病率仅为21．4％和28．6％,而皮下PBS加IFA组为71．4％和85．7％（P〈0．05）。胰岛素组胰岛炎积分比对照组低,但差异无统计学意义（P〉0．05）。胰岛素组胰岛Fas抗原表达和B细胞凋亡率均比PBS对照组低（均P〈0．05）。胰岛素组胰岛内I-Aβ^x7,IFN-γ,IL-1β,FasmRNA表达较PBS对照组低（均P〈0．05）,而IL-4mRNA表达较对照组高（P〈0．05）;胰岛素组血清IL-4比PBS组高,IFN-γ比PBS组低（均P〈0．05）。结论：皮下注射胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生,但不能阻断胰岛炎的进展。皮下注射胰岛素能诱导调节性T细胞产生,使全身和胰岛局部T细胞由,Th1向Th2转型,从而抑制Fas介导的B细胞凋亡而预防糖尿病。     

完全弗氏佐剂诱导脾脏T淋巴细胞凋亡预防非肥胖性糖尿病鼠1型糖尿病

为探讨脾脏T淋巴细胞凋亡在完全弗氏佐剂 (CFA)预防非肥胖性糖尿病 (NOD)鼠糖尿病中的作用 ,4 2只NOD雌鼠随机分成CFA组 (2 1只 )和磷酸盐缓冲盐水 (PBS)组 (2 1只 ) ,3周龄时于鼠后脚板注射CFA 5 0 μl 只和PBS5 0 μl 只。按不同的观察时间分 6周、12周和 30周 3个观察组。采用TUNEL末端标记法和免疫组织化学方法观察脾脏T淋巴细胞凋亡情况。结果显示 :CFA诱导脾脏成熟的CD4 + T淋巴细胞凋亡 ,但不能诱导成熟的CD8+ T淋巴细胞凋亡 ;CFA能预防NOD鼠糖尿病的发生。提示CFA可通过诱导脾脏T淋巴细胞凋亡 ,以减少外周的CD4 + T淋巴细胞 ,达到预防NOD鼠 1型糖尿病     

GAD对NOD小鼠β细胞淋巴细胞性炎症的防护作用

目的：了解GAD对NOD小鼠的1型糖尿病是否具有预防作用并探讨其免疫作用机制。方法：用猪脑GAD50μg和不完全全弗氏佐剂（FIA）50μl混合后给4周龄雌性NOD小鼠腹腔注射（ip)(n=32),同时单独注射等量FIA作为对照组（n=19),8周龄时环磷酰胺（CY）250mg/kg ip以加速糖尿病。每周测定体重、血糖20周龄处死小鼠后测定血清C－肽、观察胰腺病理和超微结构变化。结果：20周龄时，FIA对照组的糖尿病总发病率为73．58％，而GAD组仅有6．25％小鼠发生糖尿病（P＜0．01），发病时间也明显延缓，GAD组的胰岛炎症分数较FIA组明显降低，且炎症程度减轻（P＜0．05）；GAD组的C-p水平也明显高于对照组（P＜0．05）；FIA组残存胰岛的β细胞数目稀少，有核膜和内浆网扩张、核糖体脱颗粒、分泌颗粒空泡样变等超微结构异常，而GAD组胰岛β细胞数显著多于对照组（P＜0．05），且无上述超微异常。结论：独脑GAD可预防NOD小鼠胰岛炎发生，且有保护其岛β细胞超微结构的作用。     

口服胰岛素后非肥胖性糖尿病小鼠胰岛组织病理改变

目的　研究非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠口服胰岛素后,小鼠胰岛组织病理学的改变。方法　5周龄雌性NOD小鼠随机分成3组,分别口服1mg胰岛素、0.1mg胰岛素和PBS,小鼠13周龄宰杀。以免疫组化方法检测各组小鼠胰岛炎性浸润程度。结果　口服1mg胰岛素、0.1mg胰岛素和PBS,3组小鼠胰岛炎性浸润程度各为0.8974±0.3336、1.2288±0.4948和2.1213±0.3916,口服1mg胰岛素小鼠炎性浸润程度最轻,其次是口服0.1mg胰岛素小鼠,两个实验组炎性浸润程度与口服PBS的对照组相比,都有统计学意义。结论　口服胰岛素自身抗原,能诱导免疫耐受,有效减轻胰岛组织的炎性浸润程度     

脂质体与完全费氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

OBJECTIVE: To explore the effects of complete Freund's adjuvant (CFA), incomplete Freund's adjuvant(IFA), large multilamellar liposome (LML) and small cationic liposome (DOTAP) on insulitis and diabetes. METHODS: 1. 3-week-old non-obese diabetic(NOD) female mice were randomly divided into 3 groups: CFA group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16), IFA group (injected intraperitoneally, n = 16) and PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16). Three mice from each group (9 in total) were killed at the age of 12 weeks for the analysis of pancreatic pathology, and the others were not killed until they were 30 weeks old for diabetes incidence. 2. 3-week-old NOD female mice were randomly divided into 3 groups and injected intraperitoneally with LML (n = 13), DOTAP (n = 13) and PBS (n = 13), respectively. The insulitis score and diabetes incidence were estimated in the same way. RESULTS: 1. CFA injected subcutaneously in the hind footpad could significantly reduce the insulitis score and decrease diabetes incidence in NOD mice. At the age of 30 weeks, the incidence of diabetes in the CFA group was lower than that in the PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad) (9.2% vs 81.8%, P = 0.001). At the age of 12 weeks, the insulitis score in the CFA group was lower than that in the control group [(0.05 +/- 0.02) vs (0.54 +/- 0.11), P < 0.001]. 2. LML injected intraperitoneally could significantly reduce the insulitis score in NOD mice. At the age of 12 weeks, the insulitis score in the LML group was lower than that in the PBS control group (injected intraperitoneally) [(0.16 +/- 0.02) vs (0.58 +/- 0.06), P < 0.001]. At the age of 30 weeks, there were no significant differences in the diabetes incidence between the LML group and the PBS group (60% vs 90%). 3. The protective effect of CFA was better than that of LML in NOD mice. CONCLUSION: CFA injected subcutaneously in the hind footpad may prevent NOD mice from developing diabetes and reduce the insulitis severity. Although the protective effect of CFA is better than that of LML, LML can lessen the insulitis severity and may become a new preventive strategy in NOD mice.     

Oral administration of insulin to female nonobese diabetic mice inhibited diabetes and induced Fas ligand expression on islets of Langerhans

Objective To detect oral administration of recombinant human insulin to nonobese diabetic (NOD) mice for preventing them from diabetes and insulitis and to detect the effects of oral administration of insulin on Fas and Fas ligand expression on islet of Langerhans. Methods Sixty-four female NOD mice were divided into two groups.One group (34) was orally administered recombination human insulin 1 mg in 500 μl PBS and the other (30) 500 μl PBS only at age of 5 weeks old, twice a week for the first week, then weekly until 30 weeks of age. Results Oral administration of insulin to female NOD mice can significantly suppress diabetes and insulitis.The insulitis was less severe in the group fed with insulin than that in the control group (score of insulitis: 1.25±0.45 vs 3.0±0.76 at 16 weeks of age, P&lt;0.01).We examined Fas ligand and Fas expression on islets of Langerhans in both groups of NOD mice by using immunohistochemical techniques.We find that Fas only expressed on islets when the mice suffered the diabetes, whereas Fas ligand expressed on islets of the mice fed with insulin at 16 and 20 week of ages.We did not find Fas ligand positive staining on the islet feeding with PBS. Conclusion We speculated that oral insulin may induce Fas ligand expression on the islets and plays a role in protecting the pancreatic β-cell from autoimmune destruction.These results show that oral insulin affected autoimmune diabetes and insulitis in NOD mice.The immune mechanism of oral tolerance is closely related to the change of Fas ligand and Fas system.     

胰岛素早期强化治疗对发病NOD小鼠胰岛炎及bax、bcl-2表达的影响

目的探讨胰岛素早期强化治疗对发病非肥胖糖尿病(NOD)小鼠胰岛炎及对胰岛细胞凋亡与再生的影响。方法选取近期发病NOD小鼠12只,随机平均分为A、B两组,A组给予胰岛素早期强化治疗,B组为发病未治疗组。同时选取同周龄未发病小鼠6只为C组。B和C组分别于分组当日即开始予PBS缓冲液对照治疗。B组于20 d处死,A和C组于60 d处死。HE染色观察各组小鼠胰岛炎性积分,免疫组化观察小鼠胰岛bax、bcl-2蛋白的表达。结果 A组小鼠糖尿病症状得到明显控制,其胰岛炎性积分显著低于B组(P<0.05),与C组相比差异无统计学意义(P>0.05)。A组bax表达低于B组,但差异无统计学意义(P>0.05),与C组相比差异有统计学意义(P<0.05)。A组bcl-2表达显著高于B组和C组(P<0.05)。结论胰岛素早期强化治疗能够减轻胰岛炎症,减少细胞凋亡,促进胰岛细胞再生。     

完全弗氏佐剂抑制NOD鼠胰岛β细胞凋亡及其机制

目的:探讨完全弗氏佐剂( complete Freund’s adjuvant, CFA)对非肥胖糖尿病( nonobese dia-betic, NOD)鼠胰岛β细胞凋亡及凋亡相关基因Fas,FasL和Bcl-x表达的影响。方法:将4周龄NOD雌鼠随机分为CFA组(n=5)和生理盐水( NS)对照组(n=5 ) ,给CFA组鼠后脚板注射50μLCFA,对照者鼠后脚板注射等量NS。监测血糖,若血糖连续2 d≥11.1 mmol /L即诊断为糖尿病。当NOD鼠发生糖尿病或至30周龄时,处死动物,取胰腺组织制成薄切片,HE染色观察胰岛炎,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记( TUNEL)及ABC免疫组织化学双标记染色观察并计数凋亡的胰岛β细胞,ABC免疫组织化学法染色观察并记数Fas,FasL和Bcl-x表达阳性细胞。结果:至NOD鼠30周龄时,CFA处理组鼠无1只发生糖尿病,对照组鼠有3只发生糖尿病;CFA处理组的胰岛炎积分低于NS对照组(1.820±0.962 vs. 3.020±1.040,P<0.05 ) ;CFA处理组胰岛β细胞凋亡率、Fas阳性细胞率、FasL阳性细胞率均低于NS对照组[ (10.2±2.8) % vs. (15.9±6.5) %,(54.9±14.5)% vs.(75.7±12.9) %,(20.3±10.4) % vs. (27.9±12.0) %,P<0.05] ,Bcl-x阳性细胞率高于NS对照组[ (74.9±10.7) % vs. (66.0±18.3) %,P<0.05]。结论:CFA能够减轻NOD鼠胰岛β细胞凋亡,其机制与减少促凋亡基因Fas和FasL表达及增加抑制凋亡基因Bcl-x表达有关。     

咯利普兰诱发NOD小鼠bcl-2、bax在脾脏、胰腺的差异性表达

目的 通过检测bcl-2、bax在脾脏、胰腺的表达旨在探讨IV型磷酸二酯酶抑制剂咯利普兰(rolipram)对NOD小鼠的免疫干预机制。方法 将60只体重相近的4周龄雌性NOD小鼠随机分为干预、对照两组，每组30只。干预组腹腔注射咯利普兰(8mg／kg)，每日两次；对照组注射等次等量的PBS。两组小鼠均于实验第1和第14天备注射1次环磷酰氨(200mg／kg)以加速糖尿病的进程。实验第30天处死，HE染色观察胰岛炎；免疫组化检测bcl-2，bax在胰岛、脾脏的表达。结果 咯利普兰处理组在胰岛过表达bcl—2基因(P＜0．01)，而在脾脏过表达bax基因(P＜0．01)；PBS对照组与咯利普兰处理组相反。结论 咯利普兰在胰腺组织能促进bcl—2的表达以抑制胰岛β细胞的凋亡；而在淋巴系统却能促进比的表达以加速T淋巴细胞的凋亡从而减轻自身免疫反应。