透射电镜超薄切片法与负染法探讨

透射电镜生物样品超薄切片技术是医学生物学研究中常用的方法。其它一些制备技术如免疫电镜、电镜细胞化学、放射自显影等,都必须进行超薄切片;而超薄切片所显示的生物样品的微细结构,也是识别扫描电镜图像、冷冻蚀刻复型及其他电镜图像的基础。负染色是相对正染色而言...     

用电镜X射线显微分析法研究梗塞样心肌细胞内钙的分布

用电子显微镜X射线显微分析技术,结合用新鲜组织的快速冷冻固定及冷冻超薄切片技术,对新鲜大鼠心房细胞肌原纤维内Ca~(2+)进行定量分析。大鼠经30mg/kg异丙基肾上腺素(ISO)皮下注射后6G,发现肌原纤维Ca~(2+)浓度明显升高,达每kg(干重)361mmol/L,正常对照组的Ca~(2+)浓度小于1mmol/L,每kg(干重),而ISO与异搏定同时使用时Ca~(2+)浓度与对照组近似。结果证明,ISO引起的心肌细胞缺血损伤与肌原纤维内Ca~(2+)浓度升高有关,而异搏定能阻止Ca~(2+)内流,有对抗ISO的心肌毒作用。     

计算机实时处理技术在细胞内钙元素研究中的应用

生物组织细胞内的元素 (如钙、钾、钠、镁、磷、硫、氯 )通常以可溶性元素形式存在。这些元素对生物组织细胞的功能活动及病理改变有着极为重要的影响。应用电子显微镜技术、X射线能量色散谱微区分析技术及超低温快速冷冻固定技术是目前解决可溶性元素定位定量微区分析这一世界性难题的唯一途径 [1 ,2 ] 。国外从 80年代初开始此项研究 ,但由于在各方面存在着很大困难 ,使该研究一直处于实验阶段。我们针对国际上该项研究中的难点 ,从细胞超低温快速冷冻固定以及冷冻固定对细胞、细胞器的影响入手 ,以骨骼肌为研究对象 ,借助计算机实时控制…     

线粒体病变和糖原累积在Duchenne型肌营养不良症中的意义

目的：本文应用超薄切片和冷冻复型电子显微镜技术观察Duchenne型肌营养不良症（DMD）患者病变肌肉超微病理特征，从亚细胞水平上探讨该病病因和发病机理。方法：对临床确诊的7例DMD患者，通过肌肉活检超薄切片透射电镜观察其超微结构变化。结果：超薄切片电镜观察显示：（1）肌原纤维“Z”线模糊不清，肌丝排列紊乱等变性，坏死的表现；（2）肌纤维线体空泡样变；糖原累积等病变。结论：DMD时，肌细胞膜结构缺陷除可导致肌纤维变性，坏死外，还可致线粒体变性，坏死，糖原颗粒累积等一系列细胞水平的变化，此在本病的发病中也起着重要作用。     

人精子冷冻复苏后活动力和超微结构变化

应用超薄切片电镜技术结合精子活动轨迹摄片法研究了十二种甘油-蔗糖不同配伍的冷冻保护剂冻存精子的超微结构及活动力。结果发现:①冷冻复苏主要影响精子的膜相结构,且不同部位的生物膜对损伤的敏感性不同;②精子的活动能力明显降低;③以5％甘油、50mmol/L蔗糖配伍的保护剂效果较好。     

制备培养细胞超薄切片的简便方法

制备培养细胞透射电镜标本的技术应用较广,但较理想的简便方法不多。以往常将培养细胞分离离心后制做超薄切片,不但需要细胞数量大,而且得不到原位细胞。用盖片或裁片培养细胞制做透射电镜标本时,除净盖片或载片比较困难,需要用于冰,液氮冷冻或加温处理,由于方法不易掌握,往往影响切片质量。我们采用聚脂薄膜培养细胞制做电镜标本简便易行。     

冷冻保存Epon812包埋剂在电镜样品制备中的应用

[目的]探讨冷冻保存Epon812包埋剂及其再利用的方法。[方法]将电镜样品制备中剩余包埋剂在特定条件下冷冻保存,需要时解冻,进行常规浸透包埋。比较包埋剂冷冻前后超薄切片的切割性能。[结果]用冷冻后复温的包埋剂制备的包埋块,超薄切片时切割性能良好,两种包埋剂制备的样品各项观察指标无明显差异。[结论]冷冻保存Epon812包埋剂及其再利用的方法是可行的。     

建立基于超薄切片的高分辨成像技术解析组织的精细空间结构

目的 建立基于超薄切片方法的高分辨三维成像技术,提高Z轴分辨率,并用于组织的精细结构研究。方法 组织样品用LRWhite树脂渗透聚合后,用钻石刀将组织切片切成50~1 000 nm的连续半薄或超薄切片,具体切片的厚度即Z轴的分辨率。切片经甲基蓝-洋红染色或多重抗体标记后,利用全自动显微镜对连续切片进行成像,通过二维拼接和三维重构获得组织高分辨的三维空间信息。结果 对人正常结肠组织和小鼠肝脏进行高分辨成像分析,获得比传统显微镜更高的分辨效果和更丰富的结构细节。结合多重抗体染色方法,对小鼠脑组织微管蛋白的分布进行了高分辨三维成像。结论 所建立的高分辨三维成像技术适用于各种组织的空间精细结构研究,超薄切片方法同时为超高分辨显微成像提供Z轴的解决方案。     

人胎隔腹膜毛细血管超微结构的研究

本文应用血管铸型、ODO冷冻断裂、超薄切片和冷冻复型技术,在电镜下观察了人胎隔腹膜毛细血管的超微结构.研究结果表明:①人胎膈腹膜毛细血管有三种构型,即网囊型、树枝型和发丝型;②毛细血管属连续型,无窗孔;③毛细血管内皮细胞以桥粒连接;④胞质小泡是内皮细胞中最明显特征,可开口在细胞间隙、基底面和管腔面.     

影响透射是生物样品超薄切片效果因素分析

由于电镜技术的不断发展,样品制备技术的不断改进,制备切片厚度在50nm 以下的超薄切片已成为透射电镜生物样品制备的常规制样技术。但是如何制得高质量的超薄切片,得到清晰的高反差电镜图像客观存在很多因素影响,比如超薄切片机性能好坏、玻璃切片刀是否锋利、组织包埋块硬度怎样、操作者技术经验等等。笔者根据几年的切片经验就上述影响超薄切片的几个因素作简略分析如下。1 具有性能良好的超薄切片机一台性能良好的超薄切片机是切出没有刀痕与颤痕的优质超薄切片的重要保证。我们电镜室1997年购置的德国徕卡牌超薄切片机,就是性能优…     

315例冷冻切片病理诊断分析

目的总结我院病理科开展手术中冷冻切片诊断的体会。方法对病理科所做冷冻切片诊断与术后石蜡切片诊断资料进行对比分析。结果冷冻切片诊断与石蜡切片诊断符合率为96.83%,未能确诊率为0.95%,误诊率为2.22%。误诊原因中,取材不当占42.86%,制片不良和读片错误各占28.57%。结论冷冻切片诊断是手术中确定病变良恶性的有效方法,效果满意,宜在县级医院推广应用。提高取材技术、制作优质切片、掌握疑难少见病例大体表现和镜下特征及冷冻切片注意事项,有望提高冷冻切片诊断的准确性。     

三种电镜技术在细胞紧密连接研究中的应用

细胞紧密连接是细胞侧表面的特化结构 ,随着电镜技术与其他生物技术的发展 ,对其结构与功能的研究不断深入。电镜技术在该领域中的应用已日趋广泛 [1～ 3 ] ,常用的有电镜常规超薄切片技术、硝酸镧示踪电镜细胞化学技术和电镜冷冻蚀刻技术。各种方法各有其优缺点 ,观察的侧重点也不一样。本文介绍三种技术的各自特点 ,探讨如何根据科研工作需要 ,选择合适的方法 ,以达到预期结果。1　材料与方法1.1　电镜常规超薄切片技术　取小鼠小肠和黄鱼小肠各切成 1mm× 1mm× 2 mm,迅速投入 4℃的 3%戊二醛 - 1.5 %多聚甲醛 - 0 .1m ol/ L 磷酸盐缓冲…     

冷冻超薄切片技术及应用

近几年,电子显微镜技术已从医学基础理论研究越来越广泛地应用于临床诊断。而传统方法需要将组织经化学的固定、脱水、包埋等处理,制样过程要求严格、程序繁锁、周期长,而冷冻超薄切片技术以其制样时间短、简单,可减少化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等给样品带来的...     

电镜超薄切片技术实践的探讨

在21世纪的今天 ,电子显微镜技术早已在工业、农业、地矿、环境科学尤其在生物医学、计量医学、远程病理诊断等方面得到普遍的应用。在整个电子显微镜技术中 ,超薄切片技术是技术的难点与关键 ,因电镜下观察样品制备的优劣直接反映在超薄切片上。影响切片质量的因素很多 ,不论什么样的组织 ,不论何种病变基础 ,不论标本块包埋的软硬度如何 ,超薄切片者保证要切出良好的切片 ,否则将给电镜观察者带来很多困难。现根据多年来超薄切片技术的经验 ,浅谈切片缺陷的产生及对策。1超薄切片的常见问题切片缺陷大致可分为10种。有刀痕、颤痕、皱褶、…     

影响透射电镜生物样品超薄切片效果因素分析

由于电镜技术的不断发展,样品制备技术的不断改进,制备切片厚度在50nm以下的超薄切片已成为透射电镜生物样品制备的常规制样技术.但是如何制得高质量的超薄切片,得到清晰的高反差电镜图像,客观存在很多因素影响,比如超薄切片机性能好坏、玻璃切片刀是否锋利、组织包埋块硬度怎样、操作者技术经验等等.笔者根据几年的切片经验就上述影响超薄切片的几个因素作简略分析如下.     

肥大心肌缝隙连接的超微结构及临床意义

采用电镜冷冻蚀刻和超薄切片的方法观察了大鼠腹主动脉狭窄致左室肥厚心肌细胞缝隙连接的结构特点，结果发现，心肌细胞超微结构损伤严重，闫盘肿胀，扩张，冷冻蚀刻法见ＰＦ面颗粒排列紊乱、颗粒的中心距离变大。     

非生物标本的电镜样品制备及超切技术的探讨

目的：探讨非生物标本的电镜样品制备及超薄切片技术。方法：选择无色透明纤维，黑色纤维及无色透明薄膜等材料，进行脱水，环氧树脂包埋，超薄切片。结果：切出满意切片，并在电镜下拍摄出高质量的照片。结论：根据非生物标本的特性成功地进行了电镜样品制备及超薄切片，使材料科学的超微结构研究成为可能。     

浅谈冷冻切片技术的常见问题及处理

浅谈冷冻切片技术的常见问题及处理方法。按切片完整性、平整度、染色等指标进行冷冻切片观察并评价。结果切片不完整19.56%,染色差6.76%,切片脱落1.47%,切片卷缩17.79%,切片完好54.41%。因此,预防冷冻切片中各种常见问题的出现,提高冷冻切片水平,可更好地发挥冷冻切片技术在病理诊断中的作用。     

影响冷冻切片技术的常见问题及处理

探讨冷冻切片技术的常见问题及处理方法。按切片完整性、平整度、染色等指标进行冷冻切片观察并评价。结果，切片不完整，15．63％，染色差6．25％，切片脱落10．29％，切片卷缩13．79％，切片完好54．04％。因此，预防冷冻切片中各种常见问题的出现，提高冷冻切片水平，可更好地发挥冷冻切片技术在病理诊断中的作用。     

疑难超薄切片技术的探讨

超薄切片工作是整个电子显微技术工作中的重点与难点。一个电镜室具有水平高超的观察经验和电镜调试维修的技能,如没有一张好的切片,也无法进行观察。因此,超薄切片的质量是电镜技术的基础。影响切片质量的因素很多,现总结多年来超切实践和克服疑难切片的经验,供同行参考、讨论。