P38蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶-2mRNA表达的影响

目的　探讨 P3 8蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶 - 2 m RNA表达的影响。方法　采用蛋白质印迹、逆转录-聚合酶链反应 ( RT- PCR)和放射免疫分析法检测脂多糖 ( L PS)刺激的肺泡巨噬细胞 ( AM)核提取物 P3 8蛋白激酶、环氧合酶 - 2 ( COX- 2 ) m RNA及细胞培养上清血栓素 B2 ( TXB2 )和 6-酮 -前列腺素 F1α ( 6- Keto- PGF1α)含量的变化 ,并观察特异性 P3 8蛋白激酶抑制剂 SB2 0 3 5 80对 L PS作用的影响。结果　 L PS能显著刺激肺泡巨噬细胞 P3 8蛋白激酶活化 ,COX- 2 m RNA及细胞培养上清 TXB2 和 6- Keto- PGF1α含量随之增加 ( P<0 .0 1) ;SB2 0 3 5 80能显著抑制上述作用 ;P3 8蛋白激酶的活化与 COX- 2 m RNA及细胞培养上清 TXB2 和 6- Keto- PGF1α含量之间呈显著正相关 ( r=0 .862 ,0 .5 69,0 .715 ,均为 P<0 .0 1)。结论　 L PS刺激肺泡巨噬细胞 P3 8蛋白激酶活化可能参与了对 COX- 2 m RNA及其炎症介质的调控     

脑复聪对脂多糖激活的小胶质细胞合成环氧合酶-2和分泌前列腺素E2作用的实验研究

目的 观察中药脑复聪(NFC)含药血清对脂多糖(LPS)激活后的小鼠神经小胶质细胞BV-2的形态、BV-2中环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达以及BV-2上清液中前列腺素E2(PGE2)分泌量水平的影响.方法 将体外培养的小鼠神经小胶质细胞BV-2分成:正常对照组、LPS组、NFC血清组(高、中、低剂量)培养24h,用倒置相差显微镜观察细胞形态,蛋白印迹方法检测BV-2中COX-2蛋白的表达,酶联免疫吸附法测定培养BV-2上清液中PGE2蛋白的浓度.结果 (1)NFC各组对LPS所致的BV-2细胞形态变化均有一定的恢复作用.(2)LPS组BV-2中COX-2含量较正常对照组升高;与LPS组相比,NFC含药血清各剂量组COX-2蛋白含量均下降.(3)BV-2上清液中PGE2蛋白的浓度LPS组较正常对照组含量升高;与LPS组相比,NFC各剂量组PGE2含量均下降.结论 NFC含药血清可以显著下调LPS激活后BV-2中COX-2蛋白的表达量并显著减少BV-2上清液中PGE2的分泌量,减轻炎症反应,改善细胞形态.     

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌注后环氧合酶-2及环氧合酶-2 mRNA表达的影响

目的探讨藻蓝蛋白对大鼠局灶性脑缺血再灌注后COX-2及COX-2 mRNA表达的影响。方法用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),分别对假手术组、模型对照组、藻蓝蛋白组进行神经功能缺失评分,用TTC染色法测量脑梗死体积,应用免疫组化和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌注后不同时间点COX-2及COX-2 mRNA在神经元中的表达情况。结果(1)假手术组和模型对照组非缺血侧脑组织可见到少量COX-2阳性细胞。模型对照组COX-2阳性细胞主要位于缺血周围区,而缺血中心区仅有少量阳性细胞出现,缺血再灌注后6h COX-2阳性细胞数开始增加,至再灌注24 h达高峰,2 d后阳性细胞逐渐减少,至14 d时仍有表达,略高于假手术组。藻蓝蛋白组COX-2阳性细胞也主要位于缺血周围区,阳性细胞数量相对较少,其变化规律与模型对照组相似,同一时间点相比较,藻蓝蛋白组周围区COX-2阳性细胞数均显著低于模型对照组。(2)假手术组和模型对照组非缺血侧脑组织可见到少量COX-2 mRNA的表达。模型对照组COX-2 mRNA阳性细胞主要位于缺血周围区,而缺血中心区阳性细胞明显减少。缺血再灌注6 h后COX-2 mRNA阳性细胞数逐渐增加,至再灌注12 h达高峰,持续24 h~3 d,然后开始下降,至14 d时仍有表达,略高于假手术组;藻蓝蛋白组COX-2 mRNA阳性细胞数量相对较少,其变化规律与模型对照组相似,与模型对照组同一时间点相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论脑缺血再灌注后,缺血周围区的神经元内COX-2及COX-2 mRNA均高表达,其在局灶性脑缺血再灌注损伤中起重要作用。藻蓝蛋白可能通过选择性抑制COX-2及COX-2 mRNA的表达来抵抗脑缺血损伤,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

利用RNA干扰技术抑制环氧合酶-2表达对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡影响的实验研究

目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况。15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞。抑制组接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞。4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率。结果WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%。COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次)。正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490g±0.017g,5只)和(0.490g±0.013g,5只)。抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050g±0.003g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%。结论COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达。     

肾癌细胞中环氧合酶-2的高表达及NS398对肾癌细胞生长抑制和凋亡作用机制的研究(英文)

目的揭示COX-2选择性抑制剂NS398对肾癌细胞的增殖和凋亡作用的影响，及其可能的作用机制。方法采用标准的细胞培养方法对人肾癌786—0细胞进行培养，将NS398分别以不同浓度剂量加入细胞中作用24及48h后，应用流式细胞仪检测凋亡，应用RT-PCK和Western blotting检测COX-2和Bcl-2表达的改变。结果NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用，且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大，呈浓度依赖关系（P〈0．05）；RT—PCR和Western Blot结果表明，不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中，COX-2和Bcl-2的表达明显减弱，且呈剂量梯度下降。NS398作用于肾癌786-0细胞24h后。在细胞周期G0／G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，随着浓度的升高，凋亡峰亦越来越高（P〈0．05）。结论肾癌786—0细胞中存在着COX-2的过表达；选择性COX-2抑制剂NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786—0细胞的增殖，其机制可能是通过抑制COX-2的表达及下调Bcl-2来完成的。     

低强度超声对大鼠牙槽骨改建过程中COX-2和PGE2表达的影响

目的 探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对大鼠正畸牙移动速度及牙槽骨改建过程中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)表达的影响.方法 健康6～8周雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠25只,采用左右对照实验,分为单纯加力组(左上颌,对照组)以及LIPUS+加力组(右上颌,实验组),2组各又下设LIPUS刺激后1、3、5、7、14 d5个时相点.建立正畸牙移动动物模型,每只实验鼠右上颌加力后第2天行LIPUS刺激(频率1.5 MHz、强度30 mW/cm2、脉冲宽度200μs、重复频率1 kHz),每天1次,每次20 min,左上颌行不开功率的假刺激,于相应时间点处死实验鼠,取上颌第一磨牙至第三磨牙及周围牙槽骨用于牙齿移动距离测量,脱钙后取第一磨牙及周围牙槽骨行免疫组织化学染色.结果 实验组牙齿移动速度快于对照组,第5、7、14天2组比较差异有统计学意义(P＜0.01);免疫组织化学染色结果显示:实验组COX-2、PGE2的表达均高于对照组,均在第7天达到高峰,实验组第5、7天表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 LIPUS能有效促进牙槽骨改建过程中COX-2、PGE2的表达,从而促进牙槽骨改建,对加快正畸牙移动有一定的促进作用.     

阿斯匹林抑制内毒素致猪肺泡巨噬细胞核因子-κB活化的作用

目的探讨阿斯匹林对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致猪肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophages,AM)核因子kappaB(nuclearfactorkappa-B,NF-κB)活化抑制作用的机制。方法AM经单独或联合应用阿斯匹林、CalphostinC及过氧钒酸盐预处理,分别予以LPS刺激,以Western方法测定其IκBα水平及EMSA方法检测NF-κB活化程度。结果LPS(10μg/mL)刺激后,AMNF-κB在15min即可检测到,并于1、2h达到峰值,AM胞浆IκBα水平在5min起开始下降,低谷出现在LPS刺激后45min。治疗剂量阿斯匹林可抑制LPS引起的AMNF-κB活化及IκBα降解,PTP抑制剂POV可增强LPS刺激后AMNF-κB活化水平,阿斯匹林能减低该效应;PKC抑制剂CalphostinC可降低LPS引起的AMIκBα降解程度,且阿斯匹林与之具协同效应。结论阿斯匹林可通过影响AM蛋白激酶-磷酸酶系统平衡,抑制LPS致AMIκBα磷酸化降解及NF-κB活化。     

阿司匹林对脂多糖和猪肺泡巨噬细胞PKC和PTP活性变化的影响

目的 探讨脂多糖（LPS）刺激后猪肺泡巨噬细胞蛋白激酶C（PKC）、蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）活性变化及阿司匹林的干预效果。方法 LPS刺激猪肺泡巨噬细胞（AM），并单独或联用阿司匹林、Calphostin C以及过氧钒酸盐进行干预，分别测定其胞质PKC和PTP活性。结果 LPS（1μg/ml)刺激后，AMPKC活性在5min即显著升高，并于10min达到峰值；AM胞质内PTP相对活性水平则逐渐减低，低谷出现在LPS刺激后15min。治疗剂量阿司匹林可抑制LPS引起的AMPKC活性增加，并明显抑制LPS引起的AMPTP活性降低。PTP抑制剂POV可相对增强LPS刺激后AMPKC活性，阿司匹林能减低该效应；PKC非特异性抑制剂Calphostin C可使LPS引起的AMPTP活性降低有轻微回升，阿司匹林与之具协同效应。结论 阿司匹林对可通过影响AM蛋白激酶－磷酸酶系统平衡，干预细胞内信号蛋白磷酸化反应发挥抗炎作用。     

LPS刺激牙龈成纤维细胞PGE_2的产生及COX-2基因表达

目的:本实验观察两种重要的牙周致病菌（牙龈卟啉菌、中间普氏菌）细胞表面脂多糖（LPS）刺激人牙龈成纤维细胞后PGE2水平的变化,及PGE2产生过程中COX-1和COX-2的表达。方法:采用热酚-水法抽提牙龈卟啉菌ATCC33277和中间普氏菌ATCC25611细胞表面脂多糖,刺激体外培养的人牙龈成纤维细胞,通过放射性免疫技术检测上清液中PGE2的含量。同时利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学的方法,进一步观察牙龈成纤维细胞内COX-1、COX-2 mRNA和COX-2蛋白水平的表达。结果:在LPS的作用下,PGE2水平明显升高,含量以剂量依赖和时间依赖的方式递增（＊P<0.01,＊＊P<0.01）。对COX-1和COX-2 mRNA和免疫组化的研究表明,未受刺激的牙龈成纤维细胞COX-2 mRNA和蛋白水平表达阴性,受LPS作用后呈阳性表达。COX-1mRNA在正常和受刺激的牙龈成纤维细胞中均呈阳性表达,且表达不受LPS作用的影响。结论:牙龈卟啉菌和中间普氏菌LPS能够刺激牙龈成纤维细胞分泌PGE2,PGE2水平主要受COX-2 mRNA转录水平的影响,与COX-1的表达无明确相关性。     

星形细胞瘤发生的分子生物学机制及与COX-2 mRNA表达的相关性

目的:探讨环氧合酶2(COX-2)mRNA的表达与星形细胞瘤发生、发展的关系以及星形细胞瘤发生的分子生物学机制。方法:应用RT-PCR技术检测各级别星形细胞瘤组织及非肿瘤脑组织中COX-2mRNA的表达水平。结果:COX-2mRNA表达阳性率肿瘤组织为83.3%,非肿瘤脑组织为28.6%;COX-2mRNA的相对含量肿瘤组织为119.67±46.56,非肿瘤脑组织为43.14±19.26;COX-2mRNA在肿瘤组织中的表达显著高于其在非肿瘤脑组织中的表达(P<0.05)。结论:COX-2mRNA表达与星形细胞瘤的发生、发展呈显著正相关,其过表达是星形细胞瘤的重要分子生物学特征。     

塞来昔布对实验性结肠癌原位移植瘤生长及环氧化酶-2表达的影响

目的 探讨塞来昔布对实验性结肠癌原位移植瘤生长及环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 将对数生长期的人结肠癌细胞(HT-29)接种于裸鼠皮下,4周后形成稳定的皮下移植瘤,再将皮下移植瘤组织原位接种于24只裸鼠盲肠浆膜下,制作原位移植瘤模型.术后随机分为对照组(C组)及塞来昔布高、中、低剂量组(H、M、L组)共4组.饲养42 d后处死裸鼠,观察各组原位移植瘤的瘤体积和瘤体质量,计算抑瘤率.采用放射免疫法(RIA)测定瘤组织匀浆上清中前列腺素E2(PGE2)含量,免疫组化检测肿瘤组织COX-2的表达.结果 24只裸鼠实验期间无死亡,成瘤率为100%,比较各组原位移植瘤体积和瘤体质量差异有统计学意义(均P＜0.05).L组、M组和H组的抑瘤率分别为25.30%、38.80%、76.92%,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且存在明显的剂量依赖.干预组瘤组织中COX-2的表达和匀浆上清中PGE2含量与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);随着剂量的增加,瘤组织中COX-2的表达和PGE2含量逐渐降低.瘤组织中PGE2含量与瘤体质量及COX-2表达存在显著正相关性(分别为1=0.881,P＜0.01和r=0.825,P＜0.05).结论 塞来昔布通过抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤的COX-2表达,抑制PGE2合成,从而抑制对结肠癌的生长.     

穿琥宁注射液对内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的:研究穿琥宁对内毒素(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(AM)过度分泌肿瘤坏死因子(TNF-d)的影响及机制.方法:体外培养大鼠AM,分为对照组、LPS组、穿琥宁 LPS组、来立信 LPS组和穿琥宁 来立信 LPS组.测定上清TNF-α水平、上清LPS水平以及细胞中Ⅰ-Kb的表达.并在电镜下观察穿琥宁对LPS结构的影响.结果:经穿琥宁作用后,上清中的TNF-α和LPS含量明显下降,而且电镜下证实LPS已失去其正常结构,同时,Ⅰ-Kb的表达也增加.结论:穿琥宁对LPS诱导大鼠AM过度分泌TNF-α有明显抑制作用.其机制可能与破坏内毒素结构和抑制Ⅰ-Kb的低表达有关.     

塞来昔布抑制Tca8113释放PGE2及与COX-2、VEGF-C mRNA表达的相关性研究

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞释放前列腺素E2及抑制COX-2、VEGF-C mRNA表达的作用. 方法 MTT法检测细胞的生长抑制率,ELISA法检测细胞分泌PGE2变化,RT-PCR法检测COX-2、VEGF mRNA表达变化. 结果 塞来昔布以量效依赖方式抑制Tca8113细胞增殖的同时,抑制PGE2释放,其抑制Tca8113细胞释放PGE2与抑制VEGF-C mRNA的表达呈正相关关系(r=0.880,P=0.000),但与抑制COX-2 mRNA的表达相关关系虽然有统计学意义,但并不密切(r=0.422,P=0.020)). 结论 塞来昔布抑制Tca8113细胞增殖、抑制VEGF-C及COX-2蛋白及mRNA的表达,可能与调控PGE2的释放有关.     

IGF-1对IL-1诱导的兔关节软骨细胞NO和PGE2的影响

目的:检测合成性细胞因子胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对损伤性细胞因子IL-1(interhukin-1)诱导的兔关节软骨细胞产生NO(nitric oxide)和前列腺素(prostaglandinE2,PGE2)的影响,探讨IGF-1在骨关节炎治疗中的作用机制.方法:实验分为IL-1β10μg/L组、IL-1β10 μg/L IGF-1 1μg/L组、IL-1β 10 μg/L IGF-1 10μg/L组、IL-1β 10 μg/L IGF-150 μg/L组、IL-1β 10 μg/L IGF-1 100 μg/L组、IGF-150 μg/L组和空白对照组.首先进行2月龄兔原代软骨细胞的培养并进行鉴定,然后将IL-1β 10 μg/L单独或与不同浓度的IGF-1共育于第2代兔关节软骨细胞,硝酸还原酶法测定实验组细胞上清液NO的含量,ELISA酶联免疫竞争法测定细胞上清液中PGE2含量,再对测定的NO和PGE＜2的浓度与IGF-1和IL-1的浓度进行有关的统计学分析.结果:IL-1β10μg/L组NO浓度为(89.971±10.224) μmol/L,PGE2浓度为(22.028±8.731)ng/L;空白组NO浓度为(12.404±8.809)μmol/L,PGE＜2浓度为(1.900±0.227)ng/L.IL-1β 10 μg/L组与空白组比较,NO和PGE＜2明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).在IL-1β均为10 μg/L时,IGF-1可以呈剂量依赖地降低IL-1诱导的兔关节软骨细胞NO和PGE2的升高,并且在50 μg/L时即可达到最佳浓度.结论:IL-1能增加软骨细胞培养中的NO和PGE2的产生.IGF-1在体外可以呈剂量依赖地降低IL-1诱导的兔关节软骨细胞NO和PGE2的升高,其最佳浓度为50 μg/L.