中国人G6PD基因Eco R I酶切位点研究

应用DNA Southern印迹杂交技术，以G6PD cDNA为探针，研究了16种限制酶的限制性片段长度多态，结果表明除EcoR Ⅰ外，其余15种限制酶均无多态改变，分析39例正常人与38例G6PD缺乏者G6PD基因EcoR Ⅰ酶切位点时，发现约20％的人出现7.0kb的片段，1例G6PD患者出现6．0kb片段，国外并无类似报道，并对这些片段来源及意义进行初步探讨。     

动脉硬化性脑梗塞遗传因素载脂蛋白AI基因DNA多态性分析

应用限制性片段长度多态性方法分析了52例动脉硬化性脑梗塞患者及60例健康对照ApoAⅠ基因,并应用酶学方法测定了二种基因型患者血清高密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇及甘油三脂水平。结果表明载脂蛋白AⅠ基因PstⅠRFLP由2.2kb和3.3kb组成,3.3kb片段频率在二组间分别为0.16、0.02,二组间具有极显著性差异(P<0.o1),提示多态片段3.3 kb与动脉硬化性脑梗塞相关,是HDL-L水平下降的遗传因素之一。     

情感性精神病与Ha—ras基因限制性片段长度多态性关系的研究

用人C-Ha-ras-1全长基因组DNA作探针，对38例双相型情感性精神病人和正常对照人群66个进行RFLP分别，SacⅠ酶解产生5.2kb,5.7kb,6.2kb和6.8kb四种等位多态片段，但各等位片段的频率与北美人比较有较大差别，BP病人和正常之间，等位片段分布及等位片段组成的基因型分布均无显著差异。对4个BP家系进行分析，其中两个家系可见到等位片段分离现象，但基因传递和情感性精神病之间的关系难以确定，研究结果不支持情感性精神病与Ha-ras基因连锁。     

动脉硬化性脑梗塞遗传因素载脂蛋白AⅠ基因DNA多态性分析

应用限制性片段长度多态性方法分析了52例动脉硬化性脑梗塞患及60例健康对照ApoA J基因，并应用酶学方法测定了二种基因型患血清高密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇及甘油三脂水平。结果表明载脂蛋白A Ⅰ基用PstⅠRFLP由2.2kb和3．3kb组成，3．3kb片段频率在二组间分别为0.16，0.02，二组间具有极显性差异(P<0.01)，提示多态片段3．3kb与动脉硬化性脑梗塞相关，是HDL-L水平下降的遗传因素之一。     

贵阳地区新生儿G6PD缺乏症分子筛查结果分析

目的：了解贵阳地区葡萄糖‐6‐磷酸脱氢酶（G6PD ）缺乏症的发生率及基因突变分布情况。方法选取新生儿脐血DNA样本515例,采用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱系统检测G6PD基因15种突变类型和1种多态位点。结果515份样本检出G6PD基因突变10例,检出率为1．94％。检出5种突变类型：1388G＞ A 4例（40．0％）,1024C＞ T 和519C＞ T各2例（20．0％）,1376G＞ T和95A＞G各1例（10．0％）。多态位点1311C＞T的等位基因频率为12．79％。结论贵阳地区是G6PD缺乏症的高发区,1388G＞A是该地区最常见的G6PD基因突变类型。     

携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定

目的 构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础.方法 应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞.结果 重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段.与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功.以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中.重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6 介导转染293 包装细胞出现细胞病变效应(CPE).采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断.结论 携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础.     

携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞。结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段。与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功。以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中。重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6介导转染293包装细胞出现细胞病变效应(CPE)。采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断。结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。     

多重PCR-RFLP用于药酶CYP2C9基因分型的研究

目的 建立鉴定CYP2C9基因型的多重PCR-RFLP方法.方法 用2对引物分别在同一管中PCR扩增针对外显子2中T269C和外显子7中A1075C两个多态位点的靶片段,PCR产物用MvaⅠ酶切分型;另用2对引物分别在同一管中PCR扩增针对外显子3中C430T和外显子6中A895G两个多态位点的靶片段,PCR产物用VpaK11B Ⅰ酶切分型.结果 多重PCR-RFLP分型结果与单管单位点PCR-RFLP分型结果一致.结论 建立了一种一次可以同时检测CYP2C9基因T269C,A1075C两个多态位点及C430T,A895G两个多态位点的方法,该法具有简单、快速、灵敏、经济、准确等特点.     

中国人群中首例Ⅰ类葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷

目的 探索中国东北地区的葡萄糖-6-磷酸脱氧酶(G6PD)变异情况.方法 采用Fujii方法筛选G6PD缺陷个体,从滤纸片上洗脱DNA,PCR扩增各外显子,通过DNA测序检测突变点.结果 在中国东北地区发现1例D6PD缺陷患者,其基因突变型为1339G>A,为G6PD Santiago de Cuba.在东北地区其他血液样品中未发现G6PD缺陷个体(0/414).结论 在中国东北地区发现1例G6PD Santiago de Cuba突变个体,这是中国人群中首例Ⅰ类G6PD缺陷(极重度G6PD缺陷)患者.     

长爪沙鼠线粒体DNA限制性物理图谱的研究

长爪沙鼠线粒体DNA经限翩性内切酶BamHⅠ、BglⅡ．EcoRⅠ和PstⅡ水解后分别产生1个、6个、6个和3个片段，其中少量动物经BglⅡ或EcoRⅠ酶切后各水解为4个片段．对上述片段的分子量进行了测定，长爪沙鼠线粒体DNA分子量为16．05kb。以BamHⅠ单一酶切点作零点，PstⅠ酶切片段c→a为顺时针方向，根据双酶解产物和不完全酶解产物分析定位，得到了4种内切酶水解产生的15个片段组成的物理图谱。     

A novel mis-sense mutation (G1381A) in the G6PD gene identified in a Chinese man

Objective　To detect new mutations among 29 glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficient individuals from Yunnan province. Methods　The nitroblue tetrazolium (NBT) method was used to screen G6PD deficient individuals. Mutation was identified by single strand conformation polymorphism (SSCP), amplification created restriction site (ACRS), amplification refractory mutation system (ARMS) and DNA sequencing. Results　Among 29 cases, 18 cases of G1388A, 1 case of C1004A, and 1 case of G1381A were identified. Nine cases remained to be defined. The G1381A mutation is a novel mis-sense mutation, with a substitution of threonine for alanine (A461T). The resultant G6PD had reduced enzymatic activity. In addition, G1381A caused a restriction site of Stu I to disappear, providing a rapid method for the detection of this mutation. Conclusion　A novel mis-sense mutation G1381A was found. This mutation results in a substitution of threonine for alanine, producing enzyme with reduced activity. The loss of the Stu I restriction site offers a rapid method for the detection of this mutation.     

慢性乙型肝炎患者外周血中T细胞受体基因重组及其作用

运用ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ技术分析１０９例慢性乙型肝炎患者外周血Ｔ细胞受体基因β链（ＴｃｅｌｒｅｃｅｐｔｏｒｇｅｎｅＢｅｔａｃｈａｉｎ，ＴＣＲβ）重组。发现有４．５ｋｂ，５．０ｋｂ，２１ｋｂＥｃｏＲ１重组带和５．５ｋｂ，１６ｋｂ，１８ｋｂＨｉｎｄⅢ重组带。白人患者的５．０ｋｂＥｃｏＲ１和５．５ｋｂＨｉｎｄⅢ重组带出现的频率（分别为４４．４％）高于亚裔患者（１０．８％和１８．８％）和土著患者（１５．６％和２５．６％）。表明：慢性乙型肝炎患者对ＨＢＶ的应答由寡克隆参与，优势克隆分别由Ｃ１区和Ｃ２区参与重组，白人患者对ＨＢＶ感染有较强的应答能力。     

用限制性核酸内切酶分析钩端端螺旋体DNA的研究

For the application of restriction endonuclease analysis in typing and identifying leptospira, we selected some serovars and isolates, and analysed preliminarily their DNA with four restriction enzymes, EcoR I, Bgl II, Hha I, and Hind III. The DNA samples were isolated from the reference strains and isolates as follows: Serovar lai 56601, 017 (the virulent strain for PDH model of guinea pig), Serovar autumnalis 56606, Serovar manhao II 67020, and isolates 87112 and 87369. Each 2 micrograms of DNA was digested with 20mu of restriction enzyme at 37 degrees C for 2h and electrophoresed in 0.8% agarose gel. The gels were stained in ethidium bromide and photographed with UV light. In our experiments, apparently different restriction patterns of serovar lai 017 were observed with four restriction enzymes. Serovar lai, serovar autumnalis and serovar manhao II showed different patterns with EcoR I, especially in high molecular regions. We also observed in serovar lai 017 a distinct 10.5kb band which was obscure in 56601, the reference strain of serovar lai, after EcoR I digestion. The three serovars showed some delicate differences in Hind III restriction pattern. The two isolates from Apodemus agrarius in Sichuan (1987) 87112 and 87369 had patterns identical to those of serovar lai 56601, 017 with EcoR I, and 87112 also had a pattern identical to 56601, 017 with Hind III. Our results indicate that selected three serovars can be identified by analysis of their DNA with EcoR I and Hind III. It is suggested that restriction endonuclease analysis be a good method in typing and identify leptospira and in studying the differences of special DNA molecules.     

霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR的PCR扩增及克隆

为了构建霍乱弧菌和杜氏利什曼原虫双价口服活疫苗候选株,作者采用ＰＣＲ对霍乱弧菌毒力表达调控基因ｔｏｘＲ进行扩增及克隆,并对霍乱弧菌ｔｏｘＲ基因进行限制性酶切分析。结果显示：７株霍乱弧菌均扩增出１．３ｋｂ的ｔｏｘＲ基因片段,ｔｏｘＲ基因中部含有ＥｃｏＲⅠ酶切位点,再将ＴｏｘＲ基因克隆在质粒ｐＡＴ１５３上,对所获的重组质粒ｐｔＲ４进行限制性酶切分析,证实质粒ｐｔＲ４插入的１．３ｋｂ的ＤＮＡ片段为ｔｏｐ     

应用聚合酶链单链构象多态技术检测葡萄糖6磷酸脱氢酶基因突变

为了探索一种快速、灵敏及准确的检测红细胞葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因点突变方法，我们采用单链构象多态技术（ＳＳＣＰ），对２０例Ｇ６ＰＤ变异型基因外显子２进行分析。发现有４例患者双链ＤＮＡ中有一条链出现泳动变位，明显慢于正常人及其他患者，用ＰＣＲ直接侧序表明在ｃＤＮＡ第９５位核苷酸发生碱基置换（Ｔ→Ｃ）。结果说明ＳＳＣＰ技术检测点突变具有广泛的应用前景，比现行的点突变检测方法简便易行。作者还对ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的优点和所检测突变的特点进行了探讨。     

大肠杆菌头孢哌酮抗性基因亚克隆及序裂初步分析

为了确定耐药质粒所编码β－内酰胺酶衍化类型,用人介入临床分离出一大肠杆菌耐药质粒ｐＦＣ包哌酮抗性基因,经分段亚克隆,构建重组质粒ｐＦＢ１、ｐＦＢ２、ｐＦＢ３,对上述３个重要闰分别测序获得的抗生基因序列经Ｉｎｔｅｒｎｅｔ互联网同源性检索,表明该抗性基因部分序列,与肺炎克雷伯氏菌编码超广谱β－内酰胺酶ＴＥＭ－５２的抗性基因序列存在高度同源性（９７％）,提示ｐＦＣ头孢哌酮抗性基因所编码的β－内酰胺酶可能     

Studies on renin-2 gene in transgenic rats

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆ,ｉｎｖｉｖｏ,ｒｅｎｉｎａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｒｅｎｉｎ２ｇｅｎｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｍａｐｗａｓｃ...     

正常人及胃癌患者胃蛋白酶原C基因多态性研究

以ＰＧＣ３０１为探讨，对１０例胃癌组织及１１例正常人体组织基因组ＤＮＡ中胃蛋白酶原Ｃ基因的ＥｃｏＲ Ｉ限制性片段长度多态性作了观察分析。发现在正常人体有三种常见等位片段，分别为２０ｋｂ、５．７ｋｂ及３．６ｋｂ；一种稀有片段，３．５ｋｂ。在胃癌患者，未发现与正常人体不同的等位片段。但是，稀有片段及稀有杂交带型的出现频率高于正常组。这一结果对深入探讨胃蛋白酶原Ｃ基因稀有片段及稀有杂交带型对胃癌的诊断价     

RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM （RFLP） ANALYSIS OF GENOMIC DNA OF 5 STRAINS OF TRICHINELLA SPIRALIS IN CHINA

Five restriction endonucleases were used to digest genomic DNA from 5 isolates of Trichinella spiralis obtained from Changchun,Tianjin,Xian,Henan and Yunnan.All the isolates were secured from pigs ex-cept the Changchun strain which came from dog.The DNA fragments digested by endonuclease were sepa-mted by agarose gel electrophoesis.The DNA fragments digested by endonuclease were sepa-rated by agarose gel electrophoresis.The Changchun is olate had a EcoRI band at 1.12kb and a Dral band at 1.97kb which were unique to this isolate.A cloned specific repetitive DNA sequence(1.12kb) from the Changchun strain was selected to prepare a probe for the Southern blotting of EcoRI restriction DNA frag-ments for the 5 isolates.The 1.12kb hybridizing band did not appear except in the Changchun isolate.These results seem to indicate that there are differences between the isolates obtained from hosts in differ-ent geographical regions.     

武汉地区正常汉族人载脂蛋白B基因区域DNA多态频率的研究

应用载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）ｃＤＮＡ探针（ＬＢ１．５），检测了２１名武汉地区正常汉族人血脂个体的ＡｐｏＢ基因限制性内切酶ＭｓｐⅠ限制性片断长度多态性（ＲＦＬＰ）等位基因频率。结果显示：２１份标本共出现２．３５ｋｂ（Ｍ_１）和２．６０ｋｂ（Ｍ_２）２条杂交片段；突变型等位基因Ｍ_２位于ＡｐｏＢ基因３’端侧翼的高变区（ＨＶＲ）内，其基因频率为０．０２４，并具有种族差异。Ｍ_２基因的检出和基因频率的获得，为进一步揭示ＡｐｏＢ基因区域在脂类代谢中的作用提供了一个很好的遗传标记。