水杨醛氨基酸Schiff碱铜三元配合物对人胃癌细胞株BGC823增殖的作用及机制

背景与目的:水杨醛氨基酸Schiff碱基本结构中含C=N键,当其与金属离子配位后生物活性增强,表现出一定的抗癌、抑菌等活性。本研究主要探讨4种水杨醛氨基酸Schiff碱铜配合物(6B、7B、6P、7P)对人胃癌细胞株BGC823增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:取对数生长期的BGC823细胞传代培养,24h后加药,MTT法测定4种配合物对BDC823细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化;DNAladder试验检测DNA损伤;免疫细胞化学法检测P53蛋白表达水平。结果:MTT实验结果:不同种类的水杨醛氨基酸Schiff碱铜配合物对BGC823细胞的生长均有明显的抑制作用,并且随配合物浓度的增大抑制作用有增强的趋势。4种配合物对BGC823细胞的IC50分别为6B18.10μmol/L,7B27.50μmol/L,6P3.61μmol/L,7P3.45μmol/L。流式细胞仪检测表明4种铜配合物均可明显提高BGC823细胞凋亡率,DNAladder试验也证实这一点;流式细胞仪检测还揭示铜配合物引起S期细胞和G2期比率增加,G1期细胞减少;P53蛋白免疫细胞化学染色显示,4种配合物均能够下调BGC823细胞突变型P53蛋白的表达,提示细胞凋亡的发生与p53依赖的凋亡通路有关。结论:配合物6B、7B、6P、7P在体外均能明显抑制肿瘤细胞BGC823生长增殖,诱导细胞凋亡,并造成细胞周期分布的改变。其机制可能与p53依赖的凋亡通路有关。     

西妥昔单抗增强放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823的作用及其机制

目的 观察西妥昔单抗（C225）联合放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823增殖的影响,并探讨其机制。方法 （1）采用MTT法观察C225联合放疗对细胞生长增殖的影响,评价两者联合效应;（2）采用FCM检测C225联合放疗对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;（3）通过Western blot法检测C225联合放疗对EGFR细胞信号蛋白及其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化的影响。结果 （1）当C225联合三种不同剂量放疗时,均可显著抑制细胞的增殖,两者具有协同作用。（2）单用C225可使细胞阻滞于G0/G1期,并减少S期细胞比例。在C225作用后,G0/G1期及S期MGC803细胞比例分别为67.3％及24.8％,BGC823细胞则分别为71.9％及18.8％。单用放疗可使细胞阻滞于G2/M期。在放疗作用于MGC803细胞及BGC823细胞后,G2/M期比例分别为18.2％及19.5％。当C225与放疗联合作用时,G2/M期MGC803细胞及BGC823细胞比例进一步升高,分别为25.7％及26.4％,而S期细胞比例进一步下降,分别为18.6％及13.5％。（3）在C225处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为4.9％及9.9％,放疗处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为11.7％及19.8％,与对照组相比差异均具有统计学意义。当C225与放疗联合作用时,MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为20.1％及47.3％,与单用放疗组相比差异均具有统计学意义。（4）C225与放疗联合应用时,可使细胞EGFR信号蛋白表达下降,并能使其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化活性降低。结论 （1）西妥昔单抗可增强放疗对MGC803和BGC823细胞株的生长抑制作用;（2）其增敏作用的机制可能与抑制EGFR信号转导通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡增加等有关。     

大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27Kip1表达的影响

背景与目的：在研究大蒜素抑制人胃癌细胞BGC823恶性增殖,将其阻滞于G1期并诱导BGC823细胞凋亡的分子机制及其靶基因过程中,我们发现cvclin D1和p27^Kip1。蛋白在G1期阻滞中起重要作用。本实验从mRNA和蛋白水平探讨大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cvclin D1和p27^Kip1表达水平的影响。方法：用25μg／ml大蒜素处理BGC823细胞,并分别提取对照组和大蒜素处理组的总RNA和总蛋白,然后采用RT-PCR和Western blot法检测大蒜素处理前后cvclin D1和p27^Kip1 mRNA和蛋白的变化。结果：经25μg／ml大蒜素处理BGC823细胞24h,cyclin D1蛋白表达下调,p27^Kip1蛋白表达上调,处理48h,上述变化更明显。而mRNA水平未见明显改变。结论：大蒜素可影响cyclin D1和p27^Kip1蛋白的表达,而不影响mRNA的转录。     

PHGDH对胃癌细胞BGC823增殖和化疗药物敏感性的影响

目的 磷酸甘油酸脱氢酶(phosphoglycerate dehydrogenase,PHGDH)催化糖酵解中间产物3-磷酸甘油酸生成3-磷酸羟基丙酮酸,将糖酵解中间产物引入丝氨酸生物合成途径,它在包括乳腺癌和结肠癌等多种肿瘤中表达升高.本研究旨在探讨PHGDH的表达对胃癌细胞(BGC823)增殖以及对化疗药物顺铂敏感性的影响.方法 免疫组织化学染色检测PHGDH蛋白在75例配对的胃癌和癌旁正常组织中的表达情况;siRNA转染胃癌细胞BGC823干扰PHGDH表达,蛋白质印迹法验证siRNA对PHGDH蛋白表达的干扰效率;CCK-8法和平板克隆实验检测PHGDH基因沉默对胃癌细胞BGC823增殖和克隆形成能力的影响;流式细胞术检测PHGDH基因沉默对BGC823细胞周期的影响;流式细胞术检测凋亡评估PHGDH基因沉默对胃癌细胞BGC823对化疗药物顺铂反应性的影响.结果 PHGDH在胃癌组织中的阳性表达率为72.0%(54/75),显著高于癌旁正常组织的41.3%(31/75),差异有统计学意义,χ2=14.36,P<0.01;在转染siRNA后,实验组BGC823-siPHGDH细胞中的PHGDH/β-actin蛋白表达相对灰度比值为0.09±0.02,显著低于阴性对照组的0.70±0.05和空白对照组的0.74±0.06,差异有统计学意义,F=62.35,P<0.01;CCK-8实验结果显示,细胞铺板后5 d,BGC823-Mock、BGC823-siNC和BGC823-siPHGDH细胞各组在第5天时BGC823细胞增长倍数分别为11.13±0.35、11.30±0.72和5.58±0.66,差异有统计学意义,F=48.61,P<0.01;平板克隆形成实验结果显示,细胞培养14 d后,BGC823-Mock、BGC823-siNC和BGC823-siPHGDH细胞形成的克隆数分别为182.67±11.85、173.33±7.26和28.33±10.93,差异有统计学意义,F=71.85,P<0.01;细胞周期检测结果显示,阴性对照组BGC823-siNC的G0/G1期细胞百分比为(70.3±2.4)%,实验组BGC823-siPHGDH的G0/G1期细胞百分比为(87.5±1.3)%,说明实验组BGC823-siPHGDH的G0/G1期细胞增多,PHGDH基因沉默引起胃癌细胞发生G0/G1细胞周期阻滞;细胞凋亡检测结果显示,经1 μg/mL的顺铂处理BGC823-siNC和BGC823-siPHGDH细胞24 h后,BGC823-siNC凋亡率为(28.8±2.5)%,BGC823-siPHGDH组为(45.0±5.1)%,提示PHGDH基因沉默能够增加胃癌细胞BGC823对顺铂的敏感性.结论 PHGDH基因沉默抑制胃癌细胞BGC823的增殖,引起细胞周期阻滞,增加对化疗药物顺铂的敏感性,这不仅为胃癌临床治疗提供一个新的靶点,而且为肿瘤代谢在肿瘤发生和发展中的作用提供了新的实验证据.     

二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823 细胞周期G2/M期阻滞的机制*

目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的。笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物（diallyl disulfide,DADS）可抑制人胃癌BGC 823 细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C（Cell division cycle protein 25C,Cdc25C）、cyclinB 1 表达使部分BGC 823 细胞停滞在G2/M期,但G2/M期阻滞的机制还未完全阐明。本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC 823 细胞周期G2/M期阻滞的可能机制。方法:RT-PCR 检测Chk1 和Chk2 在mRNA 水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC 823 细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3 相关基因（ATM-RAD3-related gene,ATR ）、细胞周期检查点蛋白激酶1（checkpoint kinase1,Chk1）、细胞周期检查点蛋白激酶2（checkpoint kinase2,Chk2）表达和ATR 、Chk1、Chk2 的磷酸化程度;免疫共沉淀检测Chk1、Chk2 与Cdc25C 结合情况。结果:RT-PCR 检测显示,Chk1 和Chk2 的mRNA 水平在处理组与未处理组之间无显著性差异（P>0.05）。 Western blot检测显示,总Chk1 和Chk2 蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/LDADS刺激BGC 823 细胞2h 后,处理组细胞Chk1 磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性（P<0.05）,而Chk2 磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异（P>0.05）。 15mg/L DADS 作用15～120min,ATR 磷酸化程度明显增加,呈时间依赖性（P<0.05）,而ATR 表达无改变。免疫共沉淀分析表明,DADS 能促进BGC 823 细胞Chk1 与Cdc25C 结合,而对Chk2 与Cdc25C 结合无影响。结论:DAD诱导人胃癌BGC 823 细胞G2/M期阻滞与Chk1 的活化有关,DADS可能是通过激活ATR 、Chk1,调节Cdc25C 的表达引起人胃癌BGC 823 细胞G2/M期阻滞。      

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT和细胞周期的实验研究

目的:探讨过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞上皮-间质转化和细胞周期的作用机制。方法:将课题组前期已成功转染过表达KLF4的BGC-823细胞分为KLF4过表达载体组(BGC823-OE组)、空病毒载体组(BGC823-NC组)和未经处理的BGC-823细胞组（BGC823-Ctrl组）。Western blot和qRT-PCR检测KLF4、EMT和Wnt信号通路相关蛋白和mRNA在三组细胞中的表达水平。CCK-8实验、划痕实验、Transwell迁移实验、平板克隆实验和流式细胞术观察各组细胞的增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和细胞周期变化情况。结果:Western blot和qRT-PCR实验结果显示BGC823-OE组KLF4蛋白和mRNA表达水平明显升高。上皮-间质转化的上皮标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白和mRNA表达水平降低。Wnt信号通路下游靶基因β-catenin和Cyclin D1的蛋白和mRNA表达水平降低。CCK-8增殖实验结果显示BGC823-OE组的增殖能力下降。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示BGC823-OE组的迁移能力下降。平板克隆结果显示BGC823-OE组的克隆能力下降。流式细胞术结果显示BGC823-OE组G0/G1期比例增高,S期比例降低。结论:过表达KLF4可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT及阻滞胃癌细胞的细胞周期。     

双歧杆菌脂磷壁酸对凋亡抑制因子survivin表达及其调控基因的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）对结肠上皮细胞癌LoVo细胞内凋亡抑制因子survivin表达的影响及其调控机制。方法采用RT-PCR和Western blot方法分别检测经双歧杆菌LTA处理后LoVo细胞中survivin mRNA和survivin蛋白表达的变化;用Western blot检测PI3K／AKT细胞信号通路中关键蛋白激酶AKT的磷酸化型pAKT（Thr308）以及p53和PFEN表达的变化。结果结肠癌LoVo细胞中存在survivin mRNA和蛋白的高表达,经LTA处理后其表达水平均明显下降（P〈0．01）;AKT蛋白激酶活性在LTA处理后也明显降低（P〈0．01）;而与下调survivin蛋白相关的p53和PTEN表达上升（P〈0．01）,且呈现一定的剂量依赖性。结论双歧杆菌LTA可以通过抑制PI3K／AKT细胞信号通路的活性,促进p53的表达,抑制凋亡抑制蛋白survivin的活性,导致caspases酶活性升高,诱导了LoVo细胞凋亡的发生。     

熊果酸诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其作用机制初探

背景与目的：熊果酸（ursolic acid,UA）广泛存在于夏枯草、白花蛇舌草等清热解毒药中,可抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,具有广泛生物学活性。本研究将UA作用于人胃癌BGC823细胞,观察其对细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测UA对BGC823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化;Realtime-PCR检测细胞bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果：UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,分别作用24、48、72h后半数抑制浓度依次为36.88、34.72、32.18μmol/L;UA能诱导BGC823细胞凋亡,并阻滞细胞于G2/M期;此外,其还可上调BGC823细胞bax及下调bc1-2mRNA表达,且作用随剂量的增加而加强。结论：UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞于G2/M期;其凋亡机制可能与上调bax及下调bcl-2基因的表达有关。     

Cdc25C cyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用

目的：研究二烯丙基二硫化物（DADS）对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cdc25C、cyclin B1的作用。方法：采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性；流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响；Western blot观察DADS对Cdc25C蛋白、cyclin B1蛋白表达的影响。结果：MTT比色实验结果显示，DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用，且呈显著的剂量-效应依赖关系（P〈0．05）。流式细胞分析发现，DADS作用12h时，G2/M期细胞增加到30．1％；24h时增加到58．1％；36h达50．2％（P〈0．05）。Westernblot结果表明，DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达，cyclin B1表达在DADS处理24h后开始下降（P〈0．05）。结论：DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖，其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关；DADS可能是通过抑制Cdc25C、cyclin B1表达使部分BGC823细胞停滞在G2／M期。     

亚砷酸钠对人胃癌细胞株BGC-823的作用机制

 目的探讨亚砷酸钠对人胃癌细胞株BGC-823的作用机制。方法采用MTT法、光镜、电镜、流式细胞仪检测和免疫细胞化学法研究亚砷酸钠对BGC-823细胞生物学行为的影响。结果不同浓度的亚砷酸钠均可有效抑制BGC-823细胞生长,且具有浓度和时间依赖性,其中效浓度为4.86μmol/L。流式细胞仪检测发现亚砷酸钠作用不同时间后,细胞均出现G2/M期阻滞。形态学观察显示亚砷酸钠作用72h后,细胞出现典型的凋亡和坏死形态学改变。免疫细胞化学法发现亚砷酸钠能显著上调细胞Caspase-3蛋白的表达。结论亚砷酸钠对BGC-823细胞的生长有明显的抑制作用,并可诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡和坏死,其机制可能与其抑制ROS的清除,上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。