垂体同源盒家族因子3和孤儿核受体相关因子1基因在帕金森病模型大鼠腹侧中脑表达显著下调

目的:探讨垂体同源盒家族因子3(Pitx3)和孤儿核受体相关因子1(Nurr1)基因在帕金森病(PD)模型大鼠腹侧中脑的表达变化。方法:(1)采用免疫荧光方法检测PD模型组、成年正常组和假手术组大鼠腹侧中脑TH、Pitx3/TH和Nurr1/TH阳性细胞并计数;(2)分别采用半定量RT-PCR和Western Blot方法检测Pitx3和Nurr1基因在PD模型组、成年正常组和假手术组大鼠腹侧中脑转录和翻译水平的变化。结果:(1)免疫荧光检测显示PD大鼠模型组腹侧中脑多巴胺能神经元数目显著减少;(2)半定量RT-PCR和Western Blot检测显示PD大鼠模型组腹侧中脑左侧Pitx3和Nurr1表达显著下调,其中Pitx3表达下调更明显。结论:Pitx3和Nurr1基因的持续表达与腹侧中脑多巴胺能神经元的生存维持密切相关,为探索PD的病因诊断及基因治疗提供可能的新途径。     

同源盒基因在乳腺发育和乳腺癌发生中的作用

同源盒基因广泛存在于真核生物中 ,是转录因子中的大家族 ,具有高度的保守性 ,在个体发育和细胞分化中起重要的调控作用 ,其异常调控可导致细胞癌变。近年来对同源盒基因在乳腺发育和乳腺癌中的研究已成为探索乳腺癌发病机制的热点之一。     

转录因子Pitx3和Nurr1在中脑多巴胺能神经元终末分化中的表达特点

目的:探讨转录因子垂体同源盒家族因子3(Pitx3)和孤儿核受体相关因子1(Nurr1)在多巴胺(DA)能神经元终末分化中的表达特点。方法:采用免疫荧光方法检测体外培养的中脑源性神经干细胞(mNSCs)诱导分化后和大鼠胚胎发育至出生腹侧中脑Pitx3、Nurr1和酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果:(1)体外培养的mNSCs诱导分化48 h的Map-2阳性细胞不表达Pitx3、Nurr1和TH;分化7 d的TH阳性细胞均表达转录因子Pitx3和Nurr1;(2)在大鼠腹侧中脑黑质(SN)、腹侧被盖区(VTA)和中缝背核(DRN)可见大量TH与Pitx3(或Nurr1)共表达的神经元;(3)Pitx3和Nurr1阳性细胞主要分布于E16.5、P0大鼠SN、VTA和DRN区,其中Pitx3阳性细胞还少量分布于腹侧中脑非DA能神经元区域,Nurr1阳性细胞在腹侧中脑分布范围较Pitx3更广泛。结论:转录因子Pitx3、Nurr1在中脑DA能神经元的终末分化和生存维持中起重要作用。     

CNTF基因在大鼠脊髓中的表达及生后发育的变化

目的 观察CNTF基因在大鼠脊髓中的表达以及生后发育过程中的变化。方法 以地高辛标记（dig）－CNTF cDNA为探针,采用原位杂交法,观察CNTF mRNA在大鼠脊髓中的分布;采用TR－PCR法,半定量分析大鼠生后发育过程中,脊髓CNTF mRNA表达水平的变化。结果 CNTF mRNA原位杂交阳性信号存在于正常大鼠脊髓白质的腹索、外侧索周边的部分胶质细胞中;灰质中未能发现阳性杂交信号。RT－PCR结果显示,大鼠生后1d脊髓细胞中即可见CNTF mRNA表达,但表达量较低;出生15d表达量迅速增加;30d时最高;60d时的表达量有下降的趋势。结论 大鼠脊髓白质的部分胶质细胞可表达CNTF mRNA;大鼠出生后1d CNTF mRNA即有表达,之后随脊髓的发育而呈动态变化的趋势。     

人胚胎脊髓发育过程中神经营养因子3的表达及变化

目的:探讨神经营养因子3(NT-3)在不同发育时期人胚胎脊髓中的表达变化及意义.方法:采用免疫组织化学和免疫印迹法对4周～7月人胚胎脊髓发育过程中NT-3的定位及定量进行研究.结果:NT-3在所检测的11个时段中均有表达,从第6周开始逐渐增加,至第9周时达高峰,之后下降并维持在一定水平,且以细胞突起和纤维表达最明显.结...     

远端同源异型盒2和叉头盒O3a在大鼠脑皮质发育过程中的分布与表达

目的 了目的 探讨远端同源异型盒2（Dlx2）和叉头盒O3a（FoxO3a）在SD大鼠脑皮质发育过程中的表达特点。 方法 应用Real-time PCR法检测Dlx2 mRNA和FoxO3a mRNA分别在受孕11d（E11）、E13、E15、E17、E19及生后1d（P1）的表达情况;应用免疫组织化学技术显示Dlx2和FoxO3a在E11、E13、E15、E17、E19及P1蛋白的表达情况。 结果 FoxO3a与Dlx2 mRNA在E11～P1均有表达,而FoxO3a mRNA表达高峰明显早于Dlx2 mRNA;Dlx2 mRNA表达在E15～E17时大幅度上升,而在此之后始终保持这一高水平的表达;Dlx2 mRNA与FoxO3a mRNA的表达在E15～P1呈现出一致的变化趋势;Dlx2基因在E19时出现mRNA水平的高表达而未见蛋白表达。 结论 Dlx2和FoxO3a基因在胚胎后期鼠脑皮质中均有表达,且其表达趋势具有一定的一致性;两基因的分布随皮质分层而改变。     

pitx3和nurr1基因在不同年龄大鼠不同脑区的表达变化

目的:探讨正常不同年龄SD大鼠不同脑区pitx3、nurr1基闪的表达变化.方法:使用RT-PCR、免疫印迹法和免疫荧光方法检测pitx3、nurr1基因在正常不同年龄SD大鼠不同脑区转录与翻译水平的表达.结果:RT-PCR、免疫印迹法检测显示,pitx3、nurr1基因在各年龄组火鼠中脑、大脑皮质、海马、纹状体、嗅球和下丘脑均有表达,其中在海马和中脑表达较高;在各年龄组中新生组表达最高,并随着年龄的增长表达呈下凋趋势;免疫荧光检测E16.5 d组和新生组的中脑和海马区观察到有大量Pitx3或Nurr1单标细胞和Pitx3/TH或Nurrl/TH双标细胞.结论:pitx3、nurr1基凶的表达小仅与中脑多巴胺能神经元,而且可能与儿茶酚胺类神经元的发育和生存维持有关;老年期pitx3、nurr1基因表达下降可能与脑老化和神经退行性变疾病.如帕金森病和老年性痴呆等有关.     

同源盒基因Lhx3和Lhx4在成年大鼠缺血性脑损伤后的表达变化

目的 揭示发育基因Lhx3和Lhx4参与成年动物中枢神经损伤修复的过程。方法 线栓法制作局灶性脑缺血模型,阻断成年大鼠右侧大脑中动脉,缺血2h后再灌注,分别于损伤再灌注后3d、7d、14d和2ld取左右侧大脑皮层组织,采用RT-PcR结合HPLC测定方法,相对定量分析上述不同损伤时相同源盒基因Lhx3和Lhx4在损伤侧与对照侧皮层运动神经元mRNA表达量的改变。结果 正常成年大鼠大脑皮层运动神经元中,从Lhx3和Lhx4基因均维持一定的表达水平,在局灶性脑缺血再灌注3d、7d、14d后,大脑皮层运动神经元损伤侧的从Lhx3和Lhx4基因表达均有明显改变,但变化规律不同。其中Lhx3在损伤后mRNA表达量较自身对照侧明显降低,而Lhx4的mRNA表达量较自身对照侧明显升高,该结果与成年大鼠坐骨神经夹伤后,脊髓中Lhx3和Lhx4的基因表达变化规律基本一致。结论 LIM同源盒基因家族中的Lhx3和Lhx4基因不仅在神经元发育过程中起重要调控作用,而且可能参与成年动物中枢神经损伤的修复过程。     

突触后密度蛋白-95在大鼠脊髓发育过程中的表达变化

目的:探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在大鼠脊髓发育过程中的表达变化以及细胞定位。方法:采用实时定量PCR(Real-Time PCR)和Western blot测定发育不同时期PSD-95 mRNA及蛋白水平的表达变化。采用免疫荧光染色显示PSD-95在发育脊髓中的细胞定位。结果:大鼠脊髓发育过程中PSD-95 mRNA及其蛋白水平从生后1d开始逐渐升高,在生后1周达高锋,成年后维持在一定的生理水平。免疫荧光双标证实PSD-95在生后发育早期主要定位于脊髓灰质,与神经元的标记物NeuN和突触的标记物synapsin存在共定位;成年后广泛分布于脊髓前角、后角以及白质,分别与NeuN和synapsin以及小胶质细胞的标记物OX-42共定位。结论:大鼠脊髓发育过程中PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,在生后发育早期主要表达在前角运动神经元和后角感觉神经元,提示PSD-95参与了神经元的发育和成熟。     

挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和 NT-4增加可能与脊髓损伤的早期修复有关     

Somatotopic organization of lumbar muscle-innervating neurons in the ventral horn of the rat spinal cord

The ventral horn of the rat spinal cord was investigated with respect to the somatotopic organization of the motor neurons that innervate the lumbar muscles. Neurotracer 1,1′‐dioctadecyl‐3,3,3′,3′‐tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) was applied to specific sites in lumbar muscles. Spinal cord segments at L1 through L4 levels were cut into 40‐μm serial transverse sections. Labeled neurons were located in the ventromedial nucleus (VM) and lateromedial nucleus (LM) nuclei of Rexed’s lamina IX. Motor neurons innervating the m. interspinales lumborum and m. multifidus were without exception present in the VM, whereas all motor neurons innervating the m. rectus abdominis were present in the LM. Forty percent of motor neurons innervating the m. quadratus lumborum were present in the VM and the other 60% were in the LM. Although most of the motor neurons innervating the m. psoas major were present in the LM, a few labeled neurons existed in the VM. These results suggest that the border zone demarcating the areas of innervation of the dorsal and ventral rami of spinal nerves crosses the m. quadratus lumborum.     

大鼠坐骨神经损伤后脊髓前角神经元死亡数量的研究

目的：研究周围神经损伤后，脊髓前角运动神经元胞体的死亡数量变化。方法：选择10只正常SD大鼠，先计算两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量是否对称；再选择35只SD大鼠，切断并原位吻合其右侧坐骨神经，左侧不作任何处理、作为对照，于术后不同时间取L4～6节段脊髓作HE染色，计算脊髓前角运动神经元胞体数量的变化。结果：正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量呈对称分布；右侧坐骨神经损伤后，其脊髓前角运动神经元胞体数量较左侧减少。结论：大鼠坐骨神经损伤后，脊髓前角运动神经元的胞体有死亡，其死亡具有一定的时间特征。     

Mu opioid receptors in developing human spinal cord

The distribution of mu opioid receptors was studied in human fetal spinal cords between 12–13 and 24–25 wk gestational ages. Autoradiographic localisation using [³H] DAMGO revealed the presence of mu receptors in the dorsal horn at all age groups with a higher density in the superficial laminae (I–II). A biphasic expression was noted. Receptor density increased in the dorsal horn, including the superficial laminae, between 12–13 and 16–17 wk. This could be associated with a spurt in neurogenesis. The density increased again at 24–25 wk in laminae I–II which resembled the adult pattern of distribution. A dramatic proliferation of cells was noted from the region of the ventricular zone between 16–17 and 24–25 wk. These were considered to be glial cells from their histological features. Mu receptor expression was noted over a large area of the spinal cord including the lateral funiculus at 24–25 wk. This may be due to receptor expression by glial cells. The study presents evidence of mu receptor expression by both neurons and glia during early development of human spinal cord.     

牛脊髓前角匀浆皮下注射损伤豚鼠脊髓运动神经元

目的探讨牛脊髓前角匀浆对豚鼠脊髓、前根及坐骨神经的影响。方法采用新鲜牛脊髓前角匀浆免疫豚鼠。观察脊髓、前根、坐骨神经光镜及超微结构的变化。结果豚鼠体重在第4次免疫后明显下降。脊髓前角运动神经元变性和丢失,有卫星、噬节及墓穴现象形成。电镜下最主要的表现是线粒体异常;其次神经元核周质内异常神经丝聚集,形成包涵体;轴突内异常神经丝聚集形成轴索球。前根及坐骨神经的变化,表现为轴索变性及继发的髓鞘改变。结论牛脊髓前角匀浆可以作为抗原引起豚鼠脊髓、前根及坐骨神经免疫所介导的损伤,为进一步研究运动神经元病的发病机制提供了可靠的方法。     

大鼠脊髓半横断损伤后脊髓神经细胞凋亡与caspase-3的表达

为研究损伤脊髓神经细胞凋亡和相联系的caspase-3的表达,用原位末端标记法(TUNEL)检测了成年大鼠胸脊髓(T9)半横断损伤(hSCI)后脊髓神经细胞的凋亡变化,并用免疫组织化学染色方法观察了caspase-3的表达。结果显示:hSCI后6h损伤侧脊髓腹角即出现较多的TUNEL阳性神经细胞,并持续至5周。损伤脊髓的吻侧段于手术后4d达高峰,尾侧段脊髓于伤后1d达高峰。与假手术组相比,在所有观察的时间点TUNEL阳性神经细胞的数量在损伤侧均有明显增加。caspase-3免疫组化染色显示,与假手术组相比,伤后6h损伤侧脊髓腹角caspase-3表达也明显增加,并持续至5周。以上结果提示hSCI后,脊髓可出现神经细胞凋亡,且此凋亡的发生可能与caspase-3的表达有关。     

脊髓压迫性损伤大鼠海马和脊髓内BDNF的表达变化

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在脊髓压迫性损伤后的表达变化及作用。方法用自行设计的方法制作脊髓压迫模型,免疫荧光检测BDNF在星形胶质细胞、神经元和上下行轴突的表达;WB检测BDNF在大鼠海马及脊髓的表达。结果随着时间延长,受损部位的BDNF+-GFAP荧光强度逐渐增强;BDNF+-Tuj1荧光强度逐渐减弱;受损部位相邻上下段的BDNF+-NF200比受损部位的明显增强。海马和脊髓受损中心相邻的上、下段的BDNF蛋白表达在损伤后1d达到峰值,然后逐渐下降(P0.05);而脊髓受损中心的BDNF蛋白表达逐渐下降(P0.05)。结论脊髓损伤后,BDNF的表达下调,随伤后时间呈一定规律变化,是引起受损部位神经元表达下降的原因之一。     

Role of Neurotrophin 3 in spinal neuroplasticity in rats subjected to cord transection

That neuroplasticity occurs in mammalian spinal cord is well known, though the underlying mechanism still awaits elucidation. This study evaluated the role of endogenous Neurotrophin-3 (NT-3) in the spinal neuroplasticity. Following cord transection at the junction between T9 and T10, the hindlimb locomotor functions of rats showed gradual but significant improvement from 7 to 28 days post-operation. Corresponding to this was a significant increase in the level of NT-3 in the cord segments caudal to injury site. Significantly, after NT-3-antibody administration, the spinal transected rats displayed poor hindlimb locomotor functions and a decrease in the number of neurons in spinal laminae VIII–IX. Whether NT-3-antibody was administered, corticospinal tract regeneration and somatosensory evoked potentials could not be detected. Our findings suggested that endogenous NT-3 could play an important role in spinal plasticity in adult spinal cords subjected to transection, possibly through a regulation of neuronal activity in the local circuitry.