板蓝根活性部位体外抗单纯疱疹病毒1型的作用研究

目的:探讨板蓝根活性部位抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用和对Hep-2、Hela、U937细胞表达干扰素(IFN)的影响。方法:MTT法检测Hep-2细胞中药物对HSV-1的抑制作用。实时定量RT-PCR检测Hep-2、Hela、U937细胞各组IFN-α、IFN-β、IFN-γ的mRNA,ELISA检测各组IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达。结果:MTT结果显示板蓝根活性部位为0.5 mg/mL时其8 h预防治疗的病毒抑制率为13.96%。Hep-2、Hela、U937细胞药物组IFN-α、IFN-β、IFN-γ的mRNA较正常细胞组均有增高,且U937细胞的IFN-α、12 h的IFN-βmRNA显著升高(P0.05)。Hep-2细胞药物组24 h IFN-γ表达量较正常组显著升高(P0.05)。结论:板蓝根活性部位可能通过诱导细胞产生IFN发挥抗HSV-1作用。     

槐定碱2种加药方式对LPS激活的RAW264.7巨噬细胞TLR4-JNK通路的影响

目的:观察槐定碱预处理和预混合2种给药方式对脂多糖(LPS)激活的RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)及下游c-jun氨基末端激酶(JNK)、c-jun表达的影响,探讨槐定碱抗LPS的分子机制。方法:将RAW264.7细胞分为5组:RAW264.7细胞对照组加入未加血清的DMEM培养基;LPS组加含100μg/L LPS的DMEM培养基;槐定碱药物组加含31.25 mg/L槐定碱的DMEM培养基;槐定碱预处理组以含31.25 mg/L槐定碱的DMEM培养基孵育细胞24 h弃去槐定碱,而后加入100μg/L LPS的DMEM培养基继续孵育细胞;槐定碱预混合组以终浓度为31.25 mg/L槐定碱与100μg/L LPS预先混合1 h的DMEM培养基孵育细胞。上述5组处理完毕后于5、30、60、120 min收集细胞,以RT-PCR技术检测RAW264.7细胞TLR4、JNK、c-jun mRNA表达,免疫细胞化学和Western blot检测细胞c-jun的蛋白的表达。结果:RAW264.7细胞对照组与槐定碱药物组各项指标差异无统计学意义(P0.05);LPS组RAW264.7细胞的TLR4、JNK、c-jun mRNA及c-jun蛋白表达均显著高于RAW264.7细胞对照组(P0.01或P0.05),但各指标显著升高的时间点有所不同;槐定碱预处理组与槐定碱预混合组RAW264.7细胞TLR4、JNK、c-jun mRNA及c-jun蛋白表达均显著低于LPS组(P0.01或P0.05),但各指标显著降低的时间点有所不同。结论:槐定碱可通过调控TLR4-JNK信号转导通路发挥抗LPS作用,其不同加药方式显示的效应表明其作用可能是多环节的。     

总丹参酮抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的作用机制研究

目的:探讨总丹参酮抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的潜在分子机制。方法:MTT检测1、2、4μg/mL总丹参酮对RAW264.7细胞活力的影响;ELISA和qRT-PCR检测1、2、4μg/mL总丹参酮对LPS诱导RAW264.7细胞合成分泌细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的影响;Western blot检测1、2、4μg/mL总丹参酮对LPS诱导RAW264.7细胞iNOS、COX-2及NF-κB、TLR4/MyD88/TAK1通路蛋白表达影响。结果:不同浓度总丹参酮(1、2、4μg/mL)对RAW264.7细胞活力无明显影响;2、4μg/mL总丹参酮显著抑制了LPS诱导RAW264.7细胞中iNOS、COX-2表达及细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β合成分泌增加,阻断了TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号传导。结论:总丹参酮能通过阻断TLR4/MyD88/TAK1/NF-κB信号级联反应发挥抗炎作用,提示总丹参酮是一种用于治疗炎性疾病的潜在药物。     

苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响。方法:将宫颈癌Hela细胞分为宫颈癌组和药物组,宫颈癌组无药物干预,药物组采用三种1.0、1.5、2.0 g/L浓度干预,采用MTT法、Transwell法、流式细胞仪及免疫印迹分别检测Hela细胞活性抑制率、细胞侵袭数目、细胞凋亡及细胞中Bcl-2/Bax蛋白表达。结果:MTT结果显示,宫颈癌组Hela细胞活性抑制率低于药物组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞活性抑制率高于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),同一组中,72 h Hela细胞活性抑制率高于24、48 h(P<0.05),随着药物浓度及时间延长Hela细胞活性抑制率逐渐升高; 1 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于1、2 g/L药物组(P<0.05),四组细胞侵袭数目比较,差异有统计学意义(P<0.05); G₀-G₁期宫颈癌组细胞凋亡与药物组比较,具有统计学差异(P<0.05),G₀-G₁期、G₂-M期各组相差较小(P>0.05),2 g/L药物组Hela细胞凋亡率最高,宫颈癌组细胞凋亡率最低,四组Hela细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05); 1 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),Bax表达与Bcl-2相反。结论:苦参碱抑制宫颈癌Hela细胞活性,加快Hela凋亡,减少Hela细胞侵袭,并具有浓度依赖性,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达,增加Bax水平相关。     

月华丸(胶囊)及其拆方对巨噬细胞增殖影响的研究

目的:研究月华丸(胶囊)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)活性的影响,为后续研究月华丸(胶囊)对耐多药结核分支杆菌感染细胞自噬的影响提供前期实验基础。方法:取对数生长期的RAW264.7细胞,用10%胎牛血清培养制成的细胞悬液加入96孔培养板中培养。分别采用终浓度为1.25g/m L、0.63g/m L、0.32g/m L、0.16g/m L、0.125g/m L、0.063g/m L、0.032g/m L、0.016g/m L不含阿胶的月华丸(胶囊)以及相同浓度梯度含阿胶的月华丸(胶囊)处理RAW264.7细胞,并设不加药的对照组。以4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活情况。结果:(1)不含阿胶的月华丸(胶囊)在1.25g/m L、0.63g/m L浓度时对RAW264.7细胞增殖抑制率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),表明不含阿胶的月华丸(胶囊)高浓度对巨噬细胞的增殖有一定的抑制作用。(2)含阿胶的月华丸(胶囊)对RAW264.7细胞增殖率明显升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),提示含阿胶的月华丸(胶囊)对巨噬细胞的增殖有明显促进作用。(3)浓度为0.32g/m L的含阿胶月华丸(胶囊)对RAW264.7细胞增殖率最高,为最佳促细胞增长药液浓度。结论:月华丸(胶囊)能提高巨噬细胞的活力,增强巨噬细胞的增殖。     

苦杏仁苷对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响

目的研究苦杏仁苷(Amygdalin)体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型的影响。方法采用MTT法检测苦杏仁苷对RAW264.7细胞及其LPS(0.5μg·m L~(-1))诱导后增殖作用的影响;q RTPCR法检测RAW264.7细胞炎症模型的炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5的m RNA表达;Western Blot法检测胞浆和胞核NF-κB p65以及p38、p-p38的蛋白表达。结果与正常对照组比较,苦杏仁苷在6.25~200μmol·L~(-1)浓度范围对RAW264.7细胞生长没有明显影响(P0.05),而400μmol·L~(-1)可导致RAW264.7细胞活力明显下降(P0.001)。与正常对照组比,LPS作用后RAW264.7细胞活力下降,细胞增殖受到抑制(P0.05);LPS刺激3h后可诱导RAW264.7细胞炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5 m RNA表达显著上升(P0.05,P0.01);LPS作用1h后可引起RAW264.7细胞的胞核NF-κB p65表达明显上调,胞浆NF-κB p65表达下调,胞核与胞浆比值明显上调(P0.05),p-p38蛋白表达也显著上升(P0.001)。与模型组比较,5μmol·L~(-1)苦杏仁苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型未见明显变化(P0.05),而20,50μmol·L~(-1)苦杏仁苷作用后细胞增殖抑制状态恢复(P0.05,P0.01);苦杏仁苷(50μmol·L~(-1))提前干预后,IL-17A、IL-23、CCL2及CCL5 m RNA表达均显著下降(P0.01,P0.001);RAW264.7细胞NF-κB p65的胞核与胞浆比值明显下调,p-p38蛋白表达也显著下调,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论苦杏仁苷对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型的干预作用可能与抑制炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5的表达,抑制NF-κB、p38MAPK信号通路的过度激活有关。     

山蜡梅叶颗粒对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应及变应性鼻炎小鼠炎症的影响北大核心CSCD

目的:探讨山蜡梅叶颗粒对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及卵清蛋白(OVA)诱导小鼠的变应性鼻炎(Allergic Rhinitis, AR)的治疗作用。方法:以LPS与IFN-γ联合刺激RAW264.7细胞诱导炎症模型。采用MTT法比较细胞活力;采用比色法(Griess)比较细胞上清液中一氧化氮含量的变化;采用ELISA法比较细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量的变化。将SPF级BALB/c小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、鼻炎灵片0.5 g/kg组、山蜡梅叶颗粒3.9、7.8、15.6 g/kg组。除正常对照组外,其余各组利用OVA建立小鼠变应性鼻炎模型。造模期间观察小鼠变应性鼻炎行为学指标,给药结束后取材,使用吉姆萨染色测定小鼠全血中嗜酸粒细胞的数目;HE染色比较小鼠鼻黏膜的形态结构差异;ELISA法检测小鼠血清中免疫球蛋白IgE含量及小鼠鼻腔灌洗液中TNF-α及IL-6的含量。结果:在LPS诱导RAW264.7细胞的炎症反应试验中,与空白对照组比较,模型对照组RAW264.7细胞NO含量,炎症因子TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.01);与模型对照组相比,山蜡梅叶颗粒0.25、0.5、1 mg/mL组均能显著抑制NO分泌,降低TNF-α和IL-6的含量(P<0.01)。在OVA诱导的小鼠变应性鼻炎的研究中,与正常对照组比较,模型对照组小鼠行为学评分、嗜酸性粒细胞数、血清中IgE含量、鼻腔灌洗液中TNF-α和IL-6含量明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,山蜡梅叶颗粒各剂量组给药后小鼠行为学评分、嗜酸性粒细胞数、血清中IgE含量、鼻腔灌洗液中TNF-α和IL-6含量明显降低(P<0.05或P<0.01),明显改善OVA模型小鼠鼻黏膜充血、水肿、炎细胞浸润状态。结论:山蜡梅叶颗粒对变应性鼻炎小鼠的炎症反应起到了明显的抑制作用,且这种作用可能与其抑制鼻炎发生过程中促炎因子的释放有关。     

当归藤不同部位对LPS诱导RAW264.7细胞的影响及抗氧化作用

目的通过研究当归藤不同极性部位对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞NO、TNF-α、IL-6表达的影响及其对DPPH和ABTS自由基的清除作用来表明其抗炎作用机制和抗氧化作用的强弱。方法利用LPS(25μg/mL)诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,用MTT法检测当归藤不同部位药物浓度毒性,用Griess试剂法和ELISA法检测体外炎症模型分泌一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)等炎性细胞因子的影响;通过DPPH和ABTS自由基考察当归藤的抗氧化能力。结果当归藤不同极性部位在0～0.5 mg/mL范围内对小鼠RAW264.7细胞无不良反应;其对LPS诱导RAW 264.7细胞产生的炎症因子NO、TNF-α和IL-6具有抑制的作用,并具有浓度依赖性;乙酸乙酯部位的DPPH和ABTS的IC50值均0.04 mg/mL。结论 LPS诱导小鼠RAW264.7细胞能使TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白含量增加,当归藤可抑制该生物反应,发挥间接抗炎作用;乙酸乙酯部位具有较强的抗氧化活性。     

华蟾素对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:探讨华蟾素对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:分别采用四氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪检测华蟾素对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡的影响。用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果:1不同浓度华蟾素对RPMI 8226细胞的增殖均有抑制作用,随药物浓度的增加及作用时间的延长,药物的作用效果增强;2不同浓度华蟾素(0.0625、0.125、0.25、0.5μg/m L)作用于RPMI 8226细胞72h,细胞凋亡率分别为(14.92±1.59)%、(19.17±2.10)%、(19.43±2.63)%和(27.47±3.39)%,与对照组(2.98±0.67)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。0.5μg/m L浓度华蟾素凋亡率高于其于各组(P<0.01);3与对照组比较,不同浓度华蟾素作用于RPMI 8226细胞72h,细胞上清中IL-6及VEGF水平下降,其中高浓度华蟾素组(0.25及0.5μg/m L)的变化有显著性差异(P<0.01),但低浓度组(0.0625及0.125μg/m L)变化无统计学意义(P>0.05)。结论:华蟾素在体外具有抗多发性骨髓瘤的作用,并呈时间和剂量的依赖性,与其直接细胞毒作用及诱导凋亡有关,降低瘤细胞分泌IL-6及VEGF的水平可能是其作用机制之一。     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS(1μg/mL)刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB(NF-κB)核转运的作用,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的变化。结果当Tet浓度<1μmol/L时,单独或与1μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度>10μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞(红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状)为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

紫金龙乙醇组分对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:研究紫金龙乙醇组分(AVEC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的影响。方法:用脂多糖(10μg·L-1)刺激生长良好的RAW 264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度AVEC对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)含量。结果:AVEC在低于400 mg·L-1时对RAW 264.7细胞无毒性作用。与空白对照组相比,LPS可以明显诱导RAW 264.7细胞分泌炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.01);与模型组相比,100~400 mg·L-1的AVEC可明显下调LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.05,P<0.01),并呈现良好的剂量依赖关系。结论:AVEC可以抑制脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其抗炎作用可能与减少炎症因子TNF-α,IL-6和NO有关。     

氨基酸转化三七花中稀有人参皂苷及提取液对脂多糖诱导的RAW264.7细胞活性的影响

目的通过添加食品级氨基酸将三七Panaxnotoginseng花中普通人参皂苷转化为稀有人参皂苷,并对转化前后提取物的抗炎活性进行比较。方法应用单因素和正交试验考察了不同氨基酸种类、氨基酸浓度、反应温度、反应时间和液固比对稀有人参皂苷转化的影响,探讨并分析了转化前后三七花提取物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞增殖和抗炎活性的影响。结果天冬氨酸是最佳催化剂,在温度为120℃、天冬氨酸为5%、液固比为30m L/g和反应时间为2h时,4种稀有人参皂苷总转化含量为(47.12±0.52)mg/g。转化前后三七花提取物在1.56~200μg/m L,显著抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞的活性(P<0.05),显著抑制NO和白细胞介素-6(IL-6)的释放(P<0.05)。在质量浓度≥6.250μg/m L时,转化后三七花提取物显著对LPS诱导RAW264.7细胞炎症有更好的抑制作用(P<0.05),NO和IL-6促炎因子的分泌也显著减少(P<0.05)。结论对稀有人参皂苷的转化提供了绿色、安全和高效的转化方法。三七花在转化后对LPS诱导的炎症反应有明显的抑制作用,为三七花的开发利用提供了新思路。     

瑶药黄稔根不同极性部位对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的:黄稔根不同极性部位对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨。方法:用系列浓度(12.5、25、50、100、200μg/m L)的黄稔根的不同极性部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位)处理RAW264.7细胞,MTT法检测细胞增殖活性;通过LPS(1μg/m L)诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,采用系列浓度黄稔根不同极性部位处理炎症模型,MTT法检测黄稔根4个不同极性部位对细胞的保护作用。结果:在实验浓度范围内,黄稔根的不同极性部位对细胞无细胞毒性作用。与LPS模型组比较,浓度为50、100、200μg/m L黄稔根乙酸乙酯部位和正丁醇部位能显著改善LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症反应,具有较好的浓度依赖性。黄稔根石油醚部位与LPS模型组相比仅在200μg/m L浓度下有保护性作用。而不同浓度的黄稔根水部位未表现出保护作用。结论:初步证明了黄稔根乙酸乙酯部位及正丁醇部位对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用。     

青心酮抑制脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞凋亡的机制探讨

目的阐明青心酮对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞凋亡抑制作用的可能机制。方法采用LPS刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞株为炎症模型,采用RT-PCR检测血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA,血红蛋白结合法测定一氧化碳(CO)的相对水平,流式细胞仪结合细胞形态学检测观察细胞凋亡。结果1×10-5mol/L青心酮作用24h,在增加细胞HO-1mRNA及CO水平的同时,可使LPS诱导的巨噬细胞凋亡率显著下降(P<0.01);加入牛血红蛋白清除CO后,青心酮对LPS所致细胞凋亡的抑制率由(63.2±3.8)%降低为(45.1±5.3)%,差异显著(P<0.01)。结论青心酮可抑制LPS所致的小鼠RAW264.7巨噬细胞的凋亡,此作用部分由HO-1/CO系统所介导。     

灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症介质分泌的影响

[目的]研究灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症的影响,初步探讨其抗炎作用机制。[方法]用噻唑蓝(MTT)法检测灯盏乙素对RAW264.7细胞活力的影响;用Griess法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮(NO)生成的影响;用荧光素酶报告质粒法检测灯盏乙素对LPS诱导的核转录因子(NF-κB)转录活性的影响;用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB靶基因肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)m RNA表达的影响。[结果]0.01~10μmol/L的灯盏乙素处理24 h后对RAW264.7活力无显著影响;1、10μmol/L的灯盏乙素可以显著抑制LPS诱导的NO的生成及NF-κB转录活性;灯盏乙素可以不同程度的抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB靶基因TNF-α、IL-1β、IL-6m RNA的上调作用。[结论]灯盏乙素可能通过抑制NF-κB的活化及炎症因子的表达发挥一定的抗炎作用。     

玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响

目的:研究玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响。方法:采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型,利用NO试剂盒检测NO分泌量。结果:玉叶金花苷酸甲酯能够显著减少LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生和释放,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:玉叶金花苷酸甲酯可能通过减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

岩白菜素对LPS诱导RAW264.7细胞炎性因子产生及细胞形态变化的影响

目的:探讨岩白菜素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下RAW264.7细胞产生炎性因子及细胞形态变化的影响。方法:以不同浓度岩白菜素作用RAW264.7细胞24、48 h,记录巨噬细胞形态,将RAW264.7细胞随机分为正常对照组、模型组及岩白菜素300、50μg/mL组,各组设置24、48 h处理,处理完毕后,用RT-PCR法检测LPS诱导的RAW264.7细胞内炎性相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β及参与细胞骨架调节因子RhoA、Rac1、Cdc42的表达。结果:岩白菜素作用RAW264.7细胞24 h后能显著降低细胞炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达,作用48 h后能显著升高TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达。岩白菜素处理细胞48 h后,巨噬细胞骨架调节因子Rac1、Cdc42 mRNA表达显著上调,RhoA mRNA表达显著下调。结论:一定浓度的岩白菜素处理LPS诱导的RAW264.7细胞24 h,巨噬细胞形态变化不明显,能显著发挥抗炎作用,而当岩白菜素作用时间为48 h时,巨噬细胞伪足增多,炎症反应加强。     

温通活血乳膏对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响

目的观察温通活血乳膏对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响。方法将RAW264.7细胞随机分为正常对照组、LPS组、空白对照组、温通活血乳膏浓缩液高、中、低剂量组(250、50、10μg/m L)。样品与细胞共同孵育24 h后,进行相关检测。结果不同剂量温通活血乳膏对细胞生长均无抑制作用,细胞活力正常。与LPS组比较,温通活血乳膏组能显著抑制NO、ROS产生及TNF-α、IL-6水平(P0.05,P0.01),并均呈量效关系;也能显著抑制LDH释放(P0.05),但量效关系不明显。RAW264.7细胞经LPS刺激后,p65、p-p65、IKK、p-IKK细胞核区可见明显的绿色荧光表达,与细胞核蓝色叠加,其核内荧光强度显著高于正常对照组(P0.01);经温通活血乳膏干预后,p65蛋白荧光强度显著降低(P0.01)。结论温通活血乳膏能有效抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞释放炎症因子,具有一定抗炎作用,其机制可能与抑制p65蛋白核转位有关。     

五味子乙素对内毒素诱导脓毒症模型的抗炎作用及机制研究

目的:探讨五味子乙素对内毒素(LPS)诱导的脓毒症模型的抗炎作用及机制。方法:将浓度为0～16μmol/L不等的五味子乙素预处理RAW 264.7细胞1 h后,1μg/mL LPS诱导脓毒症,分为模型组(单用LPS)及不同浓度(2、4、8、16μmol/L)五味子乙素组。Griess法测定一氧化氮(NO)水平,MTT法测定细胞存活率,实时PCR法测定细胞TLR4/NF-κB/MyD88通路的mRNA表达。并考察五味子乙素对注射LPS小鼠生存率及血清IL-1β、TNF-α含量的影响。结果:五味子乙素可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞分泌PGE_2、NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、HMGB1,下调MyD88、TLR4 mRNA及蛋白的表达,降低LPS激活的RAW 264.7细胞中MAPKs的磷酸化,并能提高LPS作用下小鼠存活率和降低小鼠血清IL-1β、TNF-α的含量。结论:五味子乙素对LPS诱导的炎症和脓毒症具有抗炎作用,其通过TLR4/NF-κB/MyD88信号通路防治内毒素诱导的脓毒症,可能是一种新型的抗炎和免疫抑制药。     

乌蔹莓醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用

目的 探讨乌蔹莓70%醇提物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制。方法 MTT法观察不同质量浓度乌蔹莓醇提物对RAW264.7细胞活性的影响，筛选合适的实验剂量。以LPS(1μg/mL)诱导建立细胞炎症模型，同时加入30、60、120μg/mL乌蔹莓醇提物进行处理，24 h后Griess法检测细胞上清液NO水平，DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平，ELISA法检测细胞上清液PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，RT-qPCR法检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达，Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果 乌蔹莓醇提取物质量浓度在180μg/mL及以下时对RAW264.7细胞存活率无明显变化(P>0.05)。与模型组比较，乌蔹莓醇提物组细胞内ROS水平及上清液NO、PGE₂、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低(P<0.01),细胞T...