升清胶囊对胆色素结石豚鼠肝细胞核因子-κB蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝利胆中药升清胶囊防治胆色素结石的作用机制。方法:用原代细胞培养方法建立胆色素结石豚鼠肝细胞模型;采用血清药理学方法制备不同浓度含升清胶囊药物血清;建立脂多糖刺激下体外培养原代肝细胞高核转录因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)蛋白表达的实验模型,用Western-blotting检测不同浓度含药血清对于NF-κB蛋白表达的影响。结果:升清胶囊能降低脂多糖刺激引起的NF-κB蛋白的表达;随着用药浓度的增加,升清胶囊对脂多糖刺激引起的NF-κB蛋白表达的抑制作用也越强。结论:疏肝利胆中药升清胶囊能降低脂多糖刺激引起的NF-κB蛋白的表达,可能是其防治胆色素结石成石及胆道炎症反应的作用机制之一。     

升清胶囊对豚鼠胆石病相关基因的影响

目的:探讨中药升清胶囊在分子层面防治胆石病的机制.方法:雌性豚鼠60只,随机分成正常组(喂正常饮食作为对照)、模型组(喂低蛋白饮食致石)和中药组(喂低蛋白饮食致石加中药升清胶囊治疗).6周后处死并取材,观察动物成石情况,检测肝组织胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(bilirubin UDP-glucuronosyltransferase, B-UGT)mRNA及胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase, CYP7A1)mRNA表达.结果:各组豚鼠成石比例分别为正常组2/14、模型组为9/11、中药组为4/14,组间有显著差异(P＜0.05),正常组和中药组豚鼠的肝组织B-UGT mRNA及CYP7A1 mRNA表达明显高于模型组(P＜0.05).结论:中药升清胶囊可能是通过上调肝组织中B-UGT mRNA和CYP7A1 mRNA的表达,干预胆红素和胆固醇代谢,抑制致石性胆汁形成,起到预防胆结石的作用.     

清胆胶囊与养肝利胆颗粒对豚鼠胆色素结石炎症反应环节的影响

目的：观察两种不同治则的中药清胆胶囊和养肝利胆颗粒对豚鼠胆色素结石形成过程中炎症环节的影响。方法：应用雄性豚鼠建立胆色素结石模型,分别观察清胆胶囊和养肝利胆颗粒对该模型成石率、胆囊容积、胆汁中黏蛋白浓度及C反应蛋白（CRP）浓度等指标的影响。结果：清胆胶囊组与养肝利胆颗粒组成石率均显著降低（P〈0．01）,胆囊容积明显减小（P〈0．05）;胆汁中黏蛋白及CRP浓度明显降低（P〈0．05）,两种中药制剂对黏蛋白及CRP的影响无统计学意义。结论：清胆胶囊与养肝利胆颗粒对胆色素结石有良好的防治作用,而且二者在干预胆色素结石病炎症反应环节上的作用效果和机制基本相似。     

升清胶囊对胆囊胆固醇结石小鼠模型生化学指标的影响

目的：观察疏肝利胆中药升清胶囊对胆囊胆固醇结石小鼠生化学指标的影响。方法：38只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常对照组（n=10）、模型组（n=15）和升清胶囊组（n=13）。除正常对照组外,模型组和升清胶囊组小鼠采用高脂饮食诱发法建立胆固醇结石模型。造模过程中,升清胶囊组小鼠予升清胶囊0.22 g/（kg.d）灌胃治疗。8周后观察各组小鼠的成石率、血脂含量、血清钙离子浓度、肝脏丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。结果：模型组成石率为73.33%,明显高于正常对照组和升清胶囊组,差异有统计学意义（P〈0.01）。升清胶囊组血清总胆固醇和低密度脂蛋白含量低于模型组（P〈0.01）,高密度脂蛋白含量高于模型组（P〈0.01）;升清胶囊组小鼠肝脏SOD活性升高和MDA含量下降,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：升清胶囊可通过降低小鼠胆固醇结石模型成石率,改善血清和肝脏的生化学相关指标,从而发挥防治胆石病的作用。     

复方过氧化氢溶解胆色素类结石的实验研究

目的　研究含不同浓度过氧化氢的溶剂对胆色素类结石的溶解情况。方法　将胆色素类结石在不同浓度的复方过氧化氢溶剂中浸溶的试验。结果　对胆色素类结石需含 30 %H2 O2 溶剂才能破坏其结构而溶解。结论　对纯胆红素或以胆红素为主的混合结石只能采用外科手术取石 ,别无它法。     

牛黄参含药血清调控Bax、Bcl-2表达诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的实验研究

目的观察牛黄参胶囊含药血清对人肝癌细胞HepG-2的Bax、Bcl-2的调控作用。方法建立并分为空白对照组,环磷酰胺组和牛黄参胶囊5%、10%和20%含药血清组。采用实时定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测HepG-2细胞Bax、Bcl-2的表达;Western blotting检测Bcl-2蛋白的表达水平。结果牛黄参胶囊20%含药血清能在基因和蛋白水平明显上调Bax表达(P0.01),明显抑制Bcl-2的表达(P0.01),并具有明显的剂量依赖性。结论牛黄参胶囊含药血清能明显上调Bax表达,同时下调Bcl-2表达,可能是其诱导肝细胞凋亡的机制之一。     

清开颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡和Caspase-3表达的影响

目的:研究急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡和Caspase-3表达的变化及清开颗粒对其影响,探讨清开颗粒防治急性肝衰竭的作用机制。方法:以Ga1N LPS染毒昆明小鼠造成急性肝衰竭动物模型。分别以大、中、小剂量清开颗粒进行干预,并以大、中、小剂量促肝细胞生长颗粒(HGF)作为阳性对照,采用TUNEL染色观察肝细胞凋亡,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达,采用免疫印迹方法(Western Blot)检测Caspase3表达。结果:清开颗粒各组凋亡细胞数均较HGF各组明显减少(P<0.05);清开颗粒中、高剂量组Caspase-3 mRNA表达明显低于HGF低、中剂量组(P<0.05);清开颗粒各组活化的Caspase3表达较HGF低、中剂量组显著降低(P<0.05)。结论:清开颗粒能减少内毒素肝损伤小鼠肝细胞凋亡、下调肝细胞Caspase-3的表达,提示其抑制肝细胞凋亡可能是其防治急性肝衰竭的机制之一。     

丹芍化纤方对CCl4损伤大鼠原代肝细胞保护作用的研究

目的探讨丹芍化纤方抗肝纤维化作用的机制。方法采用Ⅳ型胶原酶消化及Ficoll密度梯度离心的方法，分离、培养大鼠肝细胞，先加入5％、10％和20％药物血清干预体外培养的肝细胞24h，再用四氯化碳（CCl4）蒸熏法制造肝细胞损伤模型。分别用MTT法及荧光实时定量PT—PCR（Real Time RT—PCR）法检测CCl4损伤肝细胞的增殖、天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3（cysteinyl aspartate—specific protease，cas—pase-3）mRNA表达，并检测细胞培养上清中的谷草转氨酶（aspartatetransaminase，AsT）活性。结果丹芍化纤方药物血清能促进损伤肝细胞的增殖，下调肝细胞内caspase-3mRNA的表达，降低培养上清中的AST活性，与正常大鼠血清比较差异有显著性，呈明显的血清浓度依赖关系。结论丹芍化纤方抗肝纤维化机制与其抑制肝细胞凋亡、保护肝细胞免受损害有关。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

中药复方调控肝干细胞分化及机制的实验研究

目的研究中药复方牛黄、西洋参（简称牛黄参）含药血清对大鼠肝干细胞系WB-F344增殖、分化的影响,探讨益气解毒法体外诱导肝干细胞分化为肝细胞的内在机制。方法采用中药血清药理学方法,以不同浓度的牛黄参含药血清（5%、10%、20%）作用于WB-F344,以正常大鼠血清（5%、10%、20%）处理的WB-F344为空白对照组,以单纯培养体系处理的WB-F344为正常对照组;噻唑兰（MTT）比色法检测不同浓度含药血清对WB-F344增殖的影响;取增殖的最佳浓度,蛋白印迹法（western blot）检测含药血清对WB-F344细胞HGFR、EGF、EGFR、TGFβ1R、TGFβ2R表达的影响;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测含药血清对WB-F344肝细胞表面标志物白蛋白（ALB）的mRNA表达的影响。结果牛黄参含药血清能促进WB-F344的增殖（P〈0.01）,且10%为增殖的最佳浓度梯度;能刺激WB-F344细胞HGFR、EGF、EGFR、TGF-β1R、TGF-β2R的表达量上调（P〈0.01）;能促进WB-F344肝细胞表面标志物ALB的mRNA表达（P〈0.01）。结论牛黄参含药血清可以通过细胞因子体系对肝干细胞WB-F344的增殖、分化进行调节,为利用中药复方制剂调控肝干细胞,促进肝再生和肝损伤修复提供实验与理论基础。     

胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用

目的　建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法　提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响。结果　ELISA曲线方程为Y =0 .0 3 5X(r=0 .99) ;胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量分别为 (2 13 .4± 70 .1)mg/L、(179.8± 97.9)mg/L ,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组 (P <0 .0 5) ,而后三者之间没有显著差异 (P >0 .0 5) ;利胆冲剂治疗两周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化。结论　胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著 ;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量 ,改变胆汁致石性     

升清胶囊下调胆囊结石豚鼠胆囊上皮组织雌、孕激素受体

目的：研究雌激素受体和孕激素受体在胆固醇结石形成中的作用及升清胶囊对其表达的影响。方法：将80只雌性豚鼠随机分为正常对照组、模型组、熊去氧胆酸组和升清胶囊组,每组20只。除正常对照组外,采用高脂致石饮食法建立胆囊胆固醇结石模型。升清胶囊组和熊去氧胆酸组豚鼠分别灌胃相应药物。造模7周后观察各组豚鼠胆囊成石情况,并采用免疫组织化学法检测豚鼠胆囊上皮组织雌、孕激素受体的表达。结果：升清胶囊可降低造模豚鼠的成石率,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。按正常对照组、升清胶囊组、熊去氧胆酸组和模型组的顺序,各组豚鼠胆囊组织雌、孕激素受体阳性表达半定量分级逐级升高,升清胶囊组与模型组、熊去氧胆酸组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。各组间雌、孕激素受体阳性表达率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：疏肝利胆方药升清胶囊可下调雌、孕激素受体的表达,降低胆固醇结石形成。     

黄芪解毒汤对乳腺癌细胞凋亡及Notch1基因表达的影响

目的:观察黄芪解毒汤对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及Notch1基因表达的影响,探讨该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制。方法:制备含药血清,分为黄芪解毒汤血清组、阿霉素血清组、参一胶囊血清组,另设生理盐水血清组。常规培养细胞,MTT法检测不同浓度含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;选择最佳抑制浓度的含药血清分别干预乳腺癌细胞,干预3 d后流式细胞仪检测各组MCF-7细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞Notch1基因的表达。结果:MTT法检测结果显示,3种含药血清均可抑制MCF-7细胞增殖(P0.05)且对细胞抑制最佳浓度为20%含药血清。流式细胞检测结果显示,与生理盐水血清组比较,黄芪解毒汤血清组、参一胶囊血清组、阿霉素血清组均可明显诱导MCF-7细胞凋亡(P0.05);实时荧光定量PCR结果显示,与生理盐水血清组比较,黄芪解毒汤血清组、参一胶囊血清组、阿霉素血清组Notch1基因表达均明显降低(P0.05)。结论:黄芪解毒汤可能通过诱导MCF-7凋亡、降低Notch1基因表达起到抑制乳腺癌复发转移的作用。     

不同中药对豚鼠胆色素结石模型的生化学影响

目的：观察中药清胆胶囊和养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆色素结石模型的生化学影响。方法：雄性豚鼠皮下注射林可霉素建立胆色素结石模型,并设立空白组、模型组、清胆胶囊干预组和养肝利胆颗粒干预组,观察各组动物的成石率、胆汁中总胆红素（total bilirubin,TBIL）、游离胆红素（unconjugated bilirubin,UCB）和钙离子浓度等指标的变化。结果：与模型组比较,清胆胶囊组和养肝利胆颗粒组成石率均显著降低（P〈0.01）,胆汁中总胆红素、游离胆红素和钙离子浓度也明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：清胆胶囊和养肝利胆颗粒可通过降低胆汁中总胆红素、游离胆红素和钙离子含量而逆转成石胆汁,起到预防胆色素结石形成的作用。     

消黄方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏库普弗细胞激活的影响

目的:检测消黄方对胆管结扎大鼠肝组织库普弗细胞(KCs)激活的干预作用。方法:将Wistar大鼠随机分为假手术组和胆管结扎组(BDL),BDL大鼠在造模后2周末再随机分为消黄方组和模型组。造模第3周起消黄方组予灌胃消黄方煎出液(1.73 g/kg),每日1次,至5周末;假手术组与模型组灌胃等量蒸馏水。实验结束留取肝组织样本及血清,以免疫印迹和免疫组化及实时定量PCR法检测KCs标志物CD68及炎症因子TNF-α表达。结果:免疫组化结果显示,假手术组肝组织CD68表达极低,几乎呈阴性表达;模型组肝组织CD68阳染表达显著升高,主要分布在肝窦及增生的胆管周围;消黄方组CD68表达显著下降。实时定量PCR结果和免疫印迹结果与上述结果基本一致,PCR结果显示TNF-αmRNA表达在假手术组较低,模型组TNF-αmRNA表达有所升高,但并不明显;消黄方对TNF-α降低作用不明显。ELISA法检测显示,假手术组血清TNF-α含量相对较低,模型组大鼠TNF-α含量显著升高,而消黄方组显著降低。结论:消黄方可显著抑制肝脏KCs激活和降低血清TNF-α含量,但对肝脏TNF-α表达无作用,提示TNF-α多器官来源性及消黄方的多靶点治疗作用,而TNF-α来源于何器官有待进一步研究。     

242例胆道手术患者胆汁成分与胆石成因研究

目的:研究胆道手术患者的胆汁成分与胆石形成的可能原因。方法:回顾性分析242例胆道手术病例的临床资料,统计分析其胆汁成分与其他生化检测数据。结果:1胆结石患病率女性显著高于男性;2年龄分布以40~60岁组最多;3病种以结石性慢性胆囊炎居首;4结石性质主要为胆固醇结石或胆固醇为主的混合结石;5胆固醇结石患者胆汁胆固醇、甘油三酯含量及腹壁脂肪厚度显著高于胆色素结石患者,组间比较具有统计学差异(P<0.05);6胆色素结石主要为胆道细菌感染后形成。结论:胆结石患者具有明显的性别、年龄等特征;胆固醇高易发胆固醇石,不易发生色素石,可能与胆固醇有易溶解胆色素的作用有关。