5-氮杂胞苷通过p53/Gadd45α信号途径影响小鼠神经干细胞的增殖

目的:通过研究DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)对小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的影响,进一步阐明DNA甲基化模式的变化对神经发生的影响及机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测5-Aza对NSCs增殖的影响;应用流式细胞仪检测5-Aza对NSCs细胞周期和凋亡的影响;并用RT-PCR、Western Blot法检测给予5-Aza对NSCs细胞p53和Gadd45αmRNA水平和蛋白表达的影响。结果:MTT法测定结果显示:与对照组相比,5-Aza能够明显抑制NSCs的增殖;流式细胞仪测定结果显示,5-Aza组NSCs在G0/G1期细胞数量较对照组明显减少(P0.01),而S期、G2/M期细胞数量则明显增多(P0.01),表明5-Aza可引起细胞周期在G2/M期停滞;且5-Aza组NSCs的凋亡率与对照组相比明显增加(P0.01)。RT-PCR结果显示:5-Aza组NSCs中p53和Gadd45αmRNA水平较对照组明显增高(P0.05);Western Blot结果也显示:与对照组相比,5-Aza组NSCs中p53和Gadd45α蛋白表达量明显增加(P0.05)。结论:5-Aza可能通过影响NSCs细胞周期和诱导凋亡抑制小鼠NSCs增殖;5-Aza阻滞NSCs细胞周期的作用机制可能与p53/Gadd45α信号途径相关。     

ERK1/2信号通路在IGF-1诱导新生小鼠海马神经干细胞增殖分化中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)诱导新生小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖分化中的作用。方法:取新生C57BL/6J小鼠海马体外分离、培养NSCs,分别加入终浓度100 ng/ml的IGF-1和20μmol/L的抑制剂U0126。CCK-8试剂盒检测IGF-1对NSCs增殖的影响;免疫荧光细胞染色法检测IGF-1对细胞分化的影响;Western blot检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达,并对各组进行比较。结果:CCK-8测定细胞增殖,第3 d U0126组相对OD值显著低于IGF-1组,第7 d时IGF-1组OD值则显著高于对照组和U0126组(P<0.05)。倒置荧光显微镜下可观察到IGF-1组βⅢTubulin和GFAP阳性分化率均明显高于对照组和U0126组(P<0.05)。Western blot结果显示:IGF-1组蛋白表达量显著高于对照组和U0126组(P<0.05),IGF-1促进ERK磷酸化,U0126则抑制ERK的活化。结论:IGF-1可显著诱导NSCs的增殖和分化,ERK1/2信号通路可能具有重要作用,同时IGF-1可能参与ERK1/2的活化。     

p53对体外神经干细胞增殖能力的影响

目的:探讨p53对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖能力的影响,寻求维持NSCs活力的有效途径。方法:分离出生后0 d(postnatal day 0,P0)和生后90 d(postnatal day 90,P90)小鼠前脑室管膜下区(subventricular zone,SVZ)组织,培养NSCs。比较P0和P90 NSCs增殖能力并通过q PCR和Western Blot检测衰老相关分子p53和p21在新生和成年NSCs的表达变化。应用p53抑制剂PFT-α(20μmol/L)连续作用于P90 NSCs 72 h,通过Brd U掺入实验和CCK-8实验,分析抑制p53对NSCs增殖能力的影响。结果:随年龄增加,NSCs的增殖能力降低,P90组神经球的数量和直径分别是P0组的22.9%±1.2%(P0.01)和63.5%±3.7%(P0.05)。P90NSCs p53和p21 mRNA表达水平分别较P0 NSCs显著增高了1.4±0.05和1.2±0.04(P0.01)。Western Blot结果证明P90 NSCs p53蛋白的表达水平比P0 NSCs增加了1.2±0.01倍(P0.05)。经p53抑制剂PFT-α连续处理P90 NSCs 72 h后,CCK-8结果显示PFT-α组吸光度值1.1±0.02高于DMSO组0.8±0.03(P0.05),Brd U掺入实验也显示PFT-α组Brd U阳性细胞率为43.3%±4.0%显著高于DMSO组24.8%±3.1%(P0.05)。结论:p53信号通路激活可能是导致成年小鼠NSCs增殖能力下降的重要因素,应用p53抑制剂PFT-α能够增加成年NSCs的增殖能力。     

重组人生长激素治疗特发性矮小症对患儿血清p21 waf/cip1、瘦素水平及生长情况的影响

探究重组人生长激素治疗特发性矮小症（ISS）对患儿血清p21 waf/cip1、瘦素（LP）水平及生长情况的影响。114例ISS患儿随机分为常规治疗的对照组（ n=57）和联合重组人生长激素治疗的观察组（ n=57）。治疗12个月,两组血清IGF-1、IGFBP3、LP及身高、生长速度、预测成年身高...     

抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21cip1转录的影响

目的　分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。　方法　将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑制细胞中 cyclin D1的表达 ,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化 ,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平。　结果　 cyclin D1表达受到抑制的细胞与对照相比 ,细胞增殖速率明显下降 ,培养至第 6 d时 ,生长抑制率为 5 4%。细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化 ,G1期细胞比例上升 ,而 S期及 G2 / M期细胞比例下降。cyclin E和 CDK2的 m RNA水平显示出有不同程度的下降 ,而 p2 1cip1的表达无明显变化。　结论　 cyclin D1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖 ,同时表明同为细胞周期调控基因的 cyclin E和CDK2的表达与 cyclin D1的表达密切相关 ,而 p2 1cip1的表达不受 cyclin D1的影响     

神经干细胞增殖分化过程中Notch通路信号分子的表达

探讨Notch通路信号分子在神经干细胞增殖分化中的表达变化。以Notch1,PS1,RBPJk和HES1为研究对象,用RTPCR、Westernblot法检测其在神经干细胞增殖分化中的表达。RTPCR结果表明:PS1和RBPJkmRNA表达量在神经干细胞分化第2d明显降低,而在分化其它阶段无显著差异;Notch1和HES1mRNA表达量在神经干细胞各分化阶段无明显差异。Westernblot结果显示:PS1蛋白表达量在神经干细胞分化第2d降低,其它阶段无明显差异。Notch信号通路对于维持体外培养的神经干细胞增殖有重要的作用。     

褪黑素促进体外缺氧的神经干细胞增殖及定向分化

目的:观察褪黑素对体外缺氧诱导的小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响。方法:取孕12.5 d胚胎小鼠大脑皮质分离培养NSCs,建立缺氧模型。利用免疫荧光染色,检测分析褪黑素对缺氧诱导后不同时间点的NSCs增殖和分化的影响。结果:缺氧后NSCs的增殖能力明显下降,而褪黑素可显著改善这一现象,促进缺氧后NSCs的增殖。缺氧后NSCs向神经元的分化明显受阻,褪黑素处理组的神经元的分化率明显高于对照组,其中作用高峰期是分化的第七天。结论:体外缺氧的NSCs增殖和分化均明显受到抑制,而褪黑素的干预可明显改善干细胞的增殖,促进NSCs向神经元的分化,但对星形胶质细胞的分化没有显著影响。     

神经调节蛋白-1与碱性成纤维细胞生长因子对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法:从新生大鼠大脑组织分离NSCs,进行体外培养,分别用bFGF、 NRG-1和NRG-1加bFGF处理,观察各组神经球的形成情况;应用免疫细胞化学法鉴定NSCs及检测分化后神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、 2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)的表达.结果:NRG+bFGF组和bFGF组形成的神经球数量和直径的差别不明显,但都明显多于和大于NRG组和对照组.免疫细胞化学显色结果显示,NRG+bFGF组、bFGF组中的神经球分化出的NSE、 GFAP、 CNP阳性细胞数量明显多于NRG组和对照组,尤其是NRG+bFGF组分化的NSE、CNP阳性细胞的突起较bFGF组更长和增多.结论:NRG-1与bFGF合用能促进NSCs的增殖和分化,促进分化的神经元、少突胶质细胞突起的生长.     

肿瘤抑制基因p53和p21WAF1／Cip1／Sdi1的相关性

抑癌基因p53在细胞周期调控、基因组稳定性维持、细胞分化和凋亡中起重要作用。DNA损伤后的细胞反应包括凋亡或细胞周期阻滞 ,它们都需要野生型p53基因转录活化。对此 ,目前研究集中在p53下游靶基因p2 1WAF1 /Cip1 /Sdi1 ,该基因编码一种细胞周期蛋白激酶抑制剂 ,后者在介导p53依赖性的细胞周期阻滞中起重要作用。然而DNA损伤诱发的凋亡需要有转录活性的p53而不是p2 1WAF1 /Cip1 /Sdi1参与。     

20S蛋白酶体β5亚单位对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:体外分离培养新生BALB/c小鼠(P0)的NSCs,应用免疫荧光染色观察PSMB5在NSCs中的表达与分布;利用real time RT-PCR方法检测PSMB5 mRNA的表达;荧光分光光度法测定PSMB5相关的糜蛋白酶活性的变化;应用PSMB5-siRNA抑制P0 NSCs中PSMB5基因的表达;使用含有PSMB5基因的重组慢病毒((lentiPSMB5))感染成年小鼠(P90) NSCs。利用CCK-8试验检测PSMB5对NSCs增殖能力的影响,利用BrdU和Tuj1染色观察PSMB5基因敲低和过表达对NSCs增殖及分化能力的影响。结果:PSMB5主要分布于NSCs的胞浆,P0的NSCs分化后,PSMB5 mRNA的表达下调。成年和老年小鼠NSCs中糜蛋白酶体活性较新生小鼠显著降低。PSMB5敲减后NSCs增殖能力和向神经元分化能力减弱,PSMB5过表达后NSCs增殖能力和向神经元分化能力增强。结论:PSMB5可能参与小鼠NSCs增殖及分化的调控。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80%新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0.2%的细胞继续增殖、分化,参与修复。 目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。 方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。 结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5 d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元﹑少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Involvement of p21 (waf1) in merlin deficient sporadic vestibular schwannomas

Previous studies have demonstrated that merlin acts as a tumor suppressor by blocking Ras-mediated signaling. However, the mechanism by which merlin controls cell proliferation has remained obscure. Here we show that merlin deficient tumors exhibited loss of p21, concomitant with elevated CDKs/cyclin D1 levels in sporadic vestibular schwannomas (VS) from clinic patients. Likewise, silencing of merlin gene expression in the cell lines resulted in down-regulation of p21. Furthermore, we find that merlin-enhanced p21 protein stability, rather than increased RNA accumulation, was responsible for the elevated p21 levels. Interestingly, p21 was required to maintain merlin levels and the inhibitory effect of merlin on Ras signaling was partially overridden by knockdown of p21. Consistent with the observation that over-expression of merlin arrested cell growth at G1-phase, the current study indicates that merlin exerts its antiproliferative effect, at least in part, by maintaining p21 expression, and loss of p21 is a prominent feature of merlin deficient schwannomas.     

叔丁基对苯二酚激活蛋白酶体活性促进成年小鼠神经干细胞增殖与分化

目的:探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对成年小鼠神经干细胞(aNSCs)增殖分化能力的影响,寻找维持aNSCs活力的有效手段。方法:成年BALB/c小鼠腹腔注射tBHQ(每日16.7 mg/kg)7 d,收集室管膜下区(SVZ)的脑组织,应用荧光酶标仪定量检测其蛋白酶体的活性;同时小鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),Brd U免疫荧光染色检测SVZ内a NSCs的增殖能力。分离培养SVZ aNSCs,tBHQ(20μmol/L)作用7 d,分析比较tBHQ组与DMSO组a NSCs的蛋白酶体活性、BrdU阳性率以及形成神经球的数量和直径。应用1%的胎牛血清诱导a NSCs分化,早期神经元标记物β-Ⅲ微管蛋白(Tuj1)免疫荧光染色并比较tBHQ组与DMSO组a NSCs向神经元分化的能力。结果:小鼠腹腔注射tBHQ,其SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组上调12.9%±4.6%(P0.05),并且BrdU标记实验显示tBHQ组阳性细胞数为31.3±6.3,与DMSO对照组(15.4±1.3)比较,aNSCs增殖能力显著提高(P0.05)。体外实验结果也显示tBHQ组aNSCs蛋白酶体活性较DMSO对照组上升10.1%±0.8%(P0.01)。tBHQ组Brd U阳性率(31.3%±3.2%)是DMSO对照组(20%±1.5%)的1.6倍(P0.05)。tBHQ组神经球的数量和直径分别是DMSO对照组的1.7倍(P0.05)和1.4倍(P0.05),提示tBHQ促进aNSCs的自我更新。此外,tBHQ组Tuj1阳性率为26.5%±1.6%,较DMSO对照组18.6%±2.1%显著提高(P0.05),提示tBHQ能够促进a NSCs向神经元方向分化。结论:tBHQ能够上调蛋白酶体活性,促进aNSCs的增殖与分化。     

An Immunohistochemical Analysis of Cyclin D1, p53, and p21 Proteins in Tumors Originating fromthe Follicular Epithelium of the Thyroid Gland*

This study aimed at clarifying the factors closely related to the tumor progression of thyroid neoplasms. We examined the immunoreactivity of cyclin D1, p53, and p21^waf1/cip1 proteins in 179 thyroid tumors originating from the follicular epithelium using an immunohistochemical technique. Cyclin D1 positivity was frequent in well-differentiated thyroid carcinomas (39/122 cases), but it was rarely seen in follicular adenomas (1/33 cases), (p < 0.05). Positivity for p53 was more frequent in poorly differentiated carcinomas (7/19 cases) and undifferentiated carcinomas (4/5 cases) than in well-differentiated carcinomas (14/122 cases) (p < 0,05, respectively). P21^wafl/cip1 positivity was more frequent in well-differentiated thyroid carcinomas (43/122 cases) than in follicular adenomas (4/33 cases) (p < 0.05). Regarding the relationships of these proteins, co-positivity for cyclin D1 and p53 was observed more often in poorly differentiated carcinomas (5/7 cases) than in well-differentiated carcinomas (7/39 cases) (p < 0.05). Most cases with cyclin D1 positivity did not show p21^waf1/cip1 expression in poorly differentiated carcinomas (6/7 cases). Three cases examined showed co-positivity of p53 and p21^waf1/cip1.Our results suggest that cyclin D1 is invoved in thyroid oncogenesis. Moreover, p53 might be closely related to the development of poorly differentiated carcinomas and undifferentiated carcinomas originating from well-differentiated carcinomas.     

成年小鼠神经干细胞体外培养、鉴定及分化

目的:建立一种简便易行的从成年小鼠脑组织分离、培养和鉴定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法,为相关研究提供新的研究手段。方法:采用机械分离和酶消化结合方法分离成年昆明种小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)观察NSCs的自我增殖能力;免疫荧光细胞化学技术检测NSCs标志物巢蛋白(Nestin)的表达;多聚赖氨酸铺板和撤除培养基中FGF和EGF的条件下,给予5%血清和1μm维甲酸诱导NSCs分化,免疫荧光细胞化学技术检测GFAP(标记胶质细胞),β-tubulin Ⅲ(标记神经元)蛋白的表达来测定NSCs的分化能力。结果:从成年小鼠脑组织分离的细胞,在无血清培养液中可形成神经球,并可在体外扩增和连续传代,免疫荧光细胞化学表明神经球Nestin阳性表达,在给予血清和维甲酸条件下神经球可表达GFAP和β-tubulin Ⅲ。结论:本研究成功建立了体外培养成年小鼠脑组织分离和培养NSCs的方法,培养的NSCs具有自我更新、增殖及多向分化潜能。此方法是一个稳定、简便易行的方法,可广泛用于神经干细胞相关的基础和应用研究。     

放散式冲击波通过Notch1/Hes1通路调节脑缺血后海马组织中神经干细胞的增殖与分化

背景:作者前期研究发现,放散式冲击波在体外可以促进神经干细胞增殖和向神经元分化,其具体机制与上调Notch1信号通路有关,但在体内是否也可以通过该途径促进神经干细胞增殖和分化,目前尚未见相关研究报道.目的:探究放散式冲击波在体内是否可以通过Notch1/Hes1信号通路影响脑缺血后大鼠海马组织中神经干细胞的增殖与分化....     

p21WAF1/Cip1 expression is associated with cell differentiation but not with p53 mutations in squamous cell carcinomas of the larynx

p21^WAF1/Cip1 is a recently identified gene involved in cell cycle regulation through cyclin-CDK-complex inhibition. The expression of this gene in several cell lines seems to be induced by wild-type, but not mutant, p53. p21^WAF1/Cip1 expression has been studied at both mRNA and protein levels in a series of 49 normal mucosae and squamous cell carcinomas of the larynx. A significant association was found between mRNA and protein expression in tumours (P<0·0001). p21^WAF1/Cip1 expression was strongly associated with squamous cell differentiation of carcinomas, because six of seven (86 per cent) undifferentiated carcinomas (grade 4) showed very low levels of p21^WAF1/Cip1 expression, whereas 41 out of 42 (98 per cent) carcinomas with squamous cell differentiation (grades 1–3) had normal or high levels of p21^WAF1/Cip1 expression (P<0·0001). In addition, p21^WAF1/Cip1 expression was topologically related to the squamous differentiation of tumour cells with a distribution similar to that seen in normal squamous epithelium. No correlation was found between p21^WAF1/Cip1 expression and the global S-phase of the carcinomas. p53 mutations (exons 5–9) were found in ten carcinomas with p21^WAF1/Cip1 expression, but no p53 mutations were detected in three p21^WAF1/Cip1-negative tumours. In conclusion, p21^WAF1/Cip1 expression is frequently upregulated in squamous cell carcinomas of the larynx and is associated with tumour cell differentiation. p21^WAF1/Cip1 expression in these tumours is independent of p53 gene mutations. © 1997 John Wiley & Sons, Ltd.