GST对转染APP695基因PC12细胞形态和增殖能力的影响

目的:观察APP695MT基因转染对PC12细胞形态和增殖能力的影响及植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)的干预作用,初步探讨GST对表达APP695MT基因PC12细胞的保护作用。方法:以pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常PC12细胞,电镜观察各组细胞形态学改变,细胞计数方法检测各组细胞增殖能力差异。结果:电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;APP695转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集;GST干预组较APP695转染组细胞形态明显改善,线粒体髓样变和空泡样变明显减少,胞核凹陷明显减轻。细胞计数结果显示,在各细胞计数时间点,与正常对照组比较,空载组细胞数目无显著变化(P>0.05),APP695转染组PC12细胞数目减少(P(0.01),细胞生长增殖能力明显受到抑制;GST各剂量处理组与APP695转染组比较细胞生长增殖能力均有不同程度的增强(P(0.01)。结论:GST能改善突变型APP695基因转染引起的PC12细胞病理变化,并提高其增殖能力,对转染细胞有一定的保护作用。     

β-淀粉样蛋白(1-42)对PC12细胞的氧化损伤

目的：探讨Aβ（1-42）对PC12细胞的氧化损伤作用。 方法: 利用不同浓度的Aβ(1-42)处理PC12细胞，采用MTT法、抗氧化酶活性测定以及RT-PCR分析观察Aβ(1-42)对PC12细胞的影响，分析Aβ(1-42)与SeGPx、MnSOD基因表达的关系。 结果: 随着Aβ(1-42)浓度的增加，SeGPx的表达不断下降；0.1 μmol/L Aβ(1-42)能诱导MnSOD的活性增加，Aβ(1-42) 对PC12的损伤作用能被acetovanilon（一种抑制内源性自由基产生的化合物）所抑制。 结论: Aβ(1-42)能介导PC12细胞内源性自由基的产生增多。     

靶向微管解聚蛋白stathmin siRNA对Aβ1-42诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨微管解聚蛋白stathmin siRNA对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:构建靶向stathmin基因的shRNA真核表达载体;然后用脂质体转染的方法将重组质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,用G418筛选得到稳定转染的细胞;通过RT-PCR和Western印迹方法分析stathmin基因mRNA及蛋白表达水平,筛选表达最低的稳定细胞株。用不同质量浓度的Aβ1-42诱导稳定细胞株,用MTT试验观察筛选稳定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,转染了重组载体pSilencer4.1-s的细胞中stathmin核酸和蛋白水平的表达均显著下调。与Aβ1-42处理的PC12细胞(63.88±2.36)和PC12-parental细胞(65.78±5.74)比较,Aβ1-42处理的PC12-s细胞(78.57±5.22)的存活率明显增加。用Aβ1-42处理过的PC12细胞(28.31±1.65)和PC12-parental细胞(26.65±3.64)的凋亡比用Aβ1-42处理过的PC12-s细胞(17.77±2.37)的凋亡明显增加。结论:Stathmin基因的下调对Aβ1-42诱导PC12细胞损伤具有保护作用,为阿尔茨海默病的治疗探索了一条新策略。     

Genistin对Aβ1-42诱发的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨Genistin对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为:正常对照组、Aβ1-42处理组和Genistin预处理组。Aβ1-42处理组用Aβ1-42处理细胞,Genistin预处理组在用Aβ1-42处理前2h加入Genistin。使用细胞形态学方法、LDH法和MTT法观察Genistin的神经保护作用。结果单纯Aβ1-4210滋mol/L处理细胞24h,MTT吸光值减小,LDH释放量明显增加,与正常对组比较差异有显著性(P<0.01);细胞形态发生明显改变。用25mmol/LGenistin预处理PC12细胞2h,MTT吸光值与Aβ1-42处理相比明显增加,LDH释放量显著降低,与Aβ1-42处理组相比差异有显著性意义(P<0.01)。结论Genistin在体外抑制Aβ1鄄42对细胞的毒性作用。     

硫化氢对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗β-淀粉样蛋白(β-amylmoid)诱导PC12细胞凋亡的作用及机制。方法应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学变化,罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。结果淀粉样多肽β25-35(Aβ25-35)引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增大,同时引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成率显著增加。当NaHS与Aβ25-35共同作用于PC12细胞时,NaHS浓度依赖性地阻断20μmol/LAβ25-35引起PC12细胞的存活率降低,100μmol/LNaHS显著地降低20μmol/LAβ25-35引起PC12细胞的凋亡率并阻断Aβ25-35引起的MMP降低及ROS升高。结论H2S的供体NaHS具有细胞保护作用,能对抗Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡,此作用可能与其阻断MMP降低及ROS生成增多有关。     

雌激素减轻β-淀粉样蛋白25-35所致的PC12细胞毒活性

目的：观察17-β雌激素对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)毒活性的影响。方法：PC12细胞暴露于不同浓度的Aβ25-35或Aβ25-35加17-β雌激素，观察PC12细胞的细胞计数，四甲基偶氮唑蓝(MTT)代谢率与乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果：Aβ25-35引起PC12细胞计数及MTT代谢率减少，LDH释放率升高，且有剂量依赖性；而17-β雌激素可提高相应的细胞计数及MTT代谢率，降低相应的LDH释放率。结论：17-β雌激素具有拮抗Aβ25-35所致PC12细胞毒性的作用。     

氯胺酮上调GSK-3β活性加重Aβ25-35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨氯胺酮对凝聚态Aβ<,25-35>诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)Tau蛋白过度磷酸化的影响及可能作用的机制.方法 将培养的PC12细胞随机分为对照组(C)、10 μmol/L Aβ<,25-35>(A组)、1 mmol/L氯胺酮(K组)、氯胺酮和Aβ<,25-35>(AK组),作用时间均为6 h....     

脂多糖对PC12细胞环氧合酶-2表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对PC12细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法:采用LPS(200 μg/L)刺激培养的PC12细胞(0.5、1、2、4 h)后,以免疫细胞化学染色分别检测0.5、1、2、4 h各时间点COX-2的免疫反应活性,进一步选择COX-2免疫反应活性表达最高时间点进行Western blot检测.结果:在正常培养的PC12细胞中,细胞无或呈浅棕黄色染色;LPS刺激培养的PC12细胞后,0.5 h检测到COX-2的免疫反应活性,1 h后免疫反应活性增强,2 h时达到高峰,4 h时开始降低;Western blot结果分析COX-2免疫反应活性的最高点(2 h),与对照组相比较,经LPS刺激2 h,PC12细胞COX-2 Western blot分析的阳性信号明显增强(P<0.01).结论:LPS可诱导培养的PC12细胞中COX-2一过性高表达.     

Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤关系研究

目的:探讨不同浓度Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位相关性。方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,Aβ25-35160、80、40、20、10、5、2.5μmol.L-17个浓度刺激PC-12细胞,CCK-8法观察细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察hochest33342/PI双染后细胞形态,罗丹明染色后荧光显微镜检测细胞线粒体跨膜电位变化。结果:同正常组比较,Aβ25-35刺激PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性,20μmol.L-1以上浓度Aβ25-35刺激12 h后PC-12细胞的细胞活力呈明显下降(P<0.05),凋亡率明显增加(P<0.05)。PC-12细胞有核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象,线粒体跨膜电位下降。20μmol.L-1以下各浓度组对PC12细胞活力、细胞凋亡率、线粒体跨膜电位无明显影响(P>0.05)。结论:Aβ25-35刺激PC-12后致细胞凋亡与线粒体跨膜电位下降呈正相关,20μmol.L-1刺激12 h即可致理想的PC12细胞凋亡模型。     

β淀粉样蛋白_(25～35)对PC12细胞骨架的毒性作用

目的建立阿尔茨海默病(AD)的细胞模型,并探讨β淀粉样蛋白_(25～35)(Aβ_(25～35))对细胞骨架的神经毒性机制。方法采用MTT法检测不同浓度的Aβ_(25～35)对PC12细胞存活率的影响,应用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法和TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法和鬼笔环肽(phalloidin)染色观察细胞骨架的形态变化。结果 Aβ_(25～35)经过"老化"处理后,可以明显引发PC12细胞死亡,导致PC12细胞发生凋亡,并具有剂量依赖性(P0.05)。Aβ_(25～35)也可以引起细胞骨架解体,同样具有剂量依赖性(P0.05)。结论 PC12细胞的细胞骨架对Aβ_(25～35)的神经毒性非常敏感,细胞骨架的解体很可能是AD重要的病理学改变,同时Aβ是AD发病机制的关键分子。     

淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响

背景:淀粉样蛋白β在人体组织中广泛存在,它的异常表达与阿尔茨海默症、骨质疏松等多种慢性炎症性疾病密切相关.研究表明淀粉样蛋白β在人椎骨和股骨中沉积并引起骨质破坏,但关于淀粉样蛋白β低表达对骨代谢的影响尚不清楚.目的:探讨淀粉样蛋白过表达及低表达对小鼠骨代谢的影响.方法:纳入12月龄淀粉样蛋白β过表达的APPswe+/+...     

阿尔茨海默病发病机制中β淀粉样蛋白对星形胶质细胞和神经细胞α7尼古丁受体的影响

目的 探讨阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）患者脑组织和高表达β淀粉样蛋白前质蛋白（APP）转基因小鼠脑组织中α7尼古丁受体亚型的改变,以及β淀粉样蛋白（Aβ）对体外培养的星形胶质细胞和神经细胞中α7尼古丁受体亚型蛋白表达的影响。方法 选取尸解后AD患者脑组织和高表达APP转基因小鼠脑组织,用免疫组织化学方法（ABC法）检测人脑组织中胶质细胞和神经细胞α7尼古丁受体的表达,用Westernblot方法测定小鼠脑组织中α7尼古丁受体蛋白含量;体外培养星形胶质细胞和神经细胞,用不同浓度的A1325-35进行处理,然后用Westernblot方法测定细胞中α7尼古丁受体蛋白水平。结果 AD患者脑组织中星形胶质细胞数量增多,并密集于老年斑周围;AD患者脑组织表达d7尼古丁受体的星形胶质细胞增多,而表达α7尼古丁受体的神经元减少;高表达APP转基因小鼠脑组织中胡尼古丁受体蛋白水平升高49％;用不同浓度的Aβ25-35处理培养细胞后,星形胶质细胞中胡尼古丁受体蛋白水平增高（达38％）,而神经细胞中胡尼古丁受体蛋白水平减少可达32％。结论 神经元α7尼古丁受体减少可能与AD患者智力障碍的发生有关,而过多Aβ刺激星形胶质细胞后所引起的胶质细胞胡尼古丁受体表达增多则可能是一种神经保护性代偿方式。     

缺糖损伤的PC12细胞中grp75基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时应激基因葡萄糖调节蛋白(grp75)的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR、Western blot 和细胞免疫化学法分析缺糖损伤时grp75的表达情况.结果 RT-PCR结果显示细胞缺糖损伤3h起grp75基因转录水平已显著增高,并在缺糖后3～24h间持续上升;蛋白印迹法和细胞免疫化学法证实grp75在细胞缺糖过程中蛋白水平的表达明显高于对照组,且随着缺糖时间推延而进一步升高.结论缺糖损伤时,细胞中的应激基因grp75特异性上调表达.     

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase-3活力检测等方法，了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF、和RPMI1640作对照。结果 培养细胞的突起生长数量和长度、M1TT微量比色的A值、AnnexinV—PE／7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标，在NRF组和NGF组问无明显差异；而与窄白对照组间差异有显著性意义。结论 神经再生素对低血清培养下PCI2细朐的凋亡有抑制作用。     

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的 观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果.方法 取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内.移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像.移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只.结果 嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05).结论 嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助.     

β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能及tau蛋白异常磷酸化的影响

为了探讨β淀粉样蛋白对大鼠学习记忆功能和tau蛋白异常磷酸化的影响,本文在海马注射Aβ25-35建立阿尔茨海黙病(AD)大鼠模型的基础上,通过行为学检测、HE染色、免疫组化和免疫蛋白印迹技术对动物的学习能力、组织的病理改变和tau(pS202)、tau(pT231)和tau-5的表达情况进行了分析。在行为学检测中,Aβ注射组大鼠在穿梭箱实验中的主动回避次数和被动回避次数减少,失败次数增多,而在Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期和游泳距离延长。HE染色显示Aβ注射组大鼠海马CA1、CA3、齿状回的神经细胞数目减少;而免疫组化和免疫印迹结果显示注射组tau(pS202)阳性细胞明显增加,tau(pS202)、tau(pT231)和tau-5蛋白表达增加。以上结果提示海马内注射Aβ25-35可引起大鼠学习记忆功能下降,可能与神经细胞减少,tau蛋白异常磷酸化增多有关。     

β-淀粉样蛋白和drebrin在培养的APP/PS1转基因小鼠神经元中的表达

目的: 探讨阿尔茨海默病(AD)脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)积聚与树突棘蛋白drebrin表达变化之间的关系.方法: 采用免疫细胞化学、ELISA和免疫印迹法等方法检测大脑皮层原代培养的APP/PS1转基因小鼠的神经元和同种野生型(WT)小鼠的神经元Aβ和drebrin的表达.结果: 培养至12d (days in vitro)时,可见Aβ在APP/PS1神经元胞体内聚集,培养基内的Aβ水平也同时升高;此期神经元内drebrin斑点状免疫反应产物分布较为稀疏,drebrin的表达水平下降.18d时,Aβ在胞体内聚集的基础上,向突起内延伸,培养基内的Aβ水平进一步升高;drebrin的表达则明显下降.结论: 原代培养的APP/PS1小鼠神经元内Aβ积聚的同时,树突棘蛋白drebrin的表达下降.提示AD脑内Aβ积聚可能是影响树突棘蛋白drebrin表达的因素之一.     

PC12细胞缺糖损伤过程中凋亡相关基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时凋亡相关基因bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR法分析PC12细胞有糖和无糖条件下bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达情况.结果细胞缺糖损伤6-16hbcl-2基因、bcl-xl基因、c-myc基因表达量显著增高,此后表达量逐渐下降.结论缺糖损伤早期,凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xl、c-myc上调表达产生细胞应激保护效应.     

淀粉样β蛋白42在正常大鼠视网膜节细胞中的发育及表达

目的:探讨淀粉样β蛋白42(Aβ42)在正常大鼠视网膜节细胞巾的发育及表达.方法:SD大鼠分为正常见光组和避光饲养组.眼球做冷冻切片和视网膜裱片,采用免疫细胞化学方法检测Aβ42的表达.结果:出生后3、6、13 d组大鼠视网膜节细胞未见Aβ42表达,15 d(见光后)以后开始有表达,并逐渐增多,90 d组表达最多.其中15 d和25 d组在避光饲养下未见表达.结论:Aβ42在正常大鼠出生后第15日开始表达,并逐渐上调;在15 d后避光饲养动物的视网膜节细胞中未见表达,提示该蛋白在视网膜视觉功能的发育中可能发挥了重要作用.     

咪达唑仑对凝聚态Aβ25～35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化和凋亡蛋白的影响

目的 探讨咪达唑仑对凝聚态Aβ25～35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化的影响及凋亡相关蛋白表达的变化.方法 将培养的PC12细胞随机分为4组:对照组(C组);10μmol/L Aβ25～35(A组);20μmol/L咪达唑仑(M组);咪达唑仑和Aβ25～35(MA组),作用时间均为6小时.四甲基偶氮唑盐(M...