NGF和CGRP对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质CHOP蛋白表达的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元CHOP蛋白表达的影响及其作用机制。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lotting)测定CHOP蛋白表达;M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果假手术组大鼠顶叶皮质未见CHOP蛋白表达;缺血组CHOP蛋白在缺血再灌注后12 h明显表达,24 h达高峰,72 h显著下降,缺血组较假手术组CHOP蛋白表达显著增加(P<0.01);NGF组和CGRP组CHOP蛋白表达分别弱于缺血组(P<0.01);NGF和CGRP合用组CHOP蛋白表达明显弱于缺血组(P<0.01),也分别弱于NGF组和CGRP组(P<0.01)。结论NGF和CGRP能分别下调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CHOP蛋白表达,联合应用则作用更强,二者对保护脑缺血神经元可能有协同作用。     

电针结合康复训练对缺血脑卒中大鼠Notch1与Notch4表达的影响

目的探讨电针结合康复训练治疗对脑卒中大鼠神经功能及大鼠大脑皮层Notch1与Notch4表达的影响。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组(S)、模型组(M)与电针+康复训练组(E),采用大脑中动脉阻塞法(MCAO)建立局灶性脑缺血动物模型。采用Longa法评定实验大鼠的神经功能缺损程度,免疫组织化学方法与Western blot和real time PCR方法检测大鼠大脑皮层Notch1与Notch4表达。结果与模型组相比,电针+康复训练组大鼠在实施治疗后,Longa评分明显改善(P0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠大脑皮层Notch1与Notch4蛋白与mRNA表达水平显著升高(P0.01);而与模型组相比,电针+康复训练组大鼠大脑皮层Notch1与Notch4蛋白与mRNA表达水平升高更为显著(P0.01)。结论电针结合康复训练改善脑卒中大鼠的神经功能可与上调大鼠大脑皮层Notch1与Notch4的表达相关。     

牛磺酸对弥漫性脑创伤大鼠脑葡萄糖转运体表达的影响

目的: 检测弥漫性脑创伤(DBI)大鼠脑内葡萄糖转运体1(GLUT1)和葡萄糖转运体3(GLUT3)的表达以及牛磺酸对其的影响。方法: SD雄性大鼠随机分为假手术组、脑创伤组、低剂量牛磺酸组(200 mg/kg)和高剂量牛磺酸组(300 mg/kg),连续灌胃给药7 d。建立大鼠DBI模型,脑创伤后24 h,免疫组化和Western blotting检测脑组织中GLUT1和GIUT3蛋白的表达;透射电镜观察大脑皮层神经元超微结构的变化。结果: 各组脑组织中均可见有GLUT1表达的阳性细胞,其表现为在微血管内皮细胞胞浆或胞膜呈棕黄色。与假手术组相比,脑创伤组大鼠脑GLUT1蛋白表达无显著差异;与脑创伤组相比,低、高剂量牛磺酸组脑GLUT1蛋白表达显著增多(P<0.01);且低剂量牛磺酸组脑GLUT1蛋白表达显著高于高剂量牛磺酸组(P<0.05)。各组仅在第三脑室周围可见GLUT3表达的阳性神经元,阳性细胞胞浆或胞膜呈棕黄色。与假手术组相比,脑创伤组大鼠脑GLUT3蛋白表达显著增多(P<0.01);与脑创伤组相比,低、高剂量牛磺酸组脑GLUT3蛋白表达显著增多(P<0.01);且高剂量牛磺酸组脑GLUT3蛋白表达显著高于低剂量牛磺酸组(P<0.01)。低剂量牛磺酸组大脑皮层神经元病理改变明显减轻。结论: 牛磺酸可对DBI大鼠发挥脑保护作用,其机制可能是上调GLUT1和GLUT3蛋白表达,维持脑组织的能量供给。     

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响

 摘要:目的 探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响。方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。缺血2h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7d 3个时间点。取双侧“合谷”穴（LI 4）为电针刺激穴位。免疫组化法检测eNOS蛋白的表达;逆转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达;Western blot法检测eNOS 、MMP-9蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组各时间点eNOS 蛋白及mRNA增加明显（P<0.01）。eNOS蛋白表达于再灌注3d达高峰,假手术组表达为 (0.4291±0.0173),模型组再灌注3d表达为 (0.7374±0.0252),电针组表达为 (0.8536±0.0212),各组比较差异显著（P<0.01）。与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1d低于模型组（P<0.01）,再灌注3、7 d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组（P<0.01）。 结论 电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马CHOP mRNA及蛋白表达的影响

探讨NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马神经元CHOPmRNA及蛋白表达的影响。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),应用原位杂交方法检测CHOPmRNA的表达;应用免疫组织化学SABC法检测CHOP蛋白表达;应用显微图像分析系统进行分析。结果显示:假手术组大鼠海马CHOPmRNA及蛋白表达极少;缺血组较假手术组CHOP表达mRNA和蛋白均显著增加(P<0.01),缺血再灌注3h后CHOPmRNA表达明显增加,24h达高峰,48h开始显著下降,72h接近对照组水平,CHOP蛋白在缺血再灌注12h时明显表达增高,24h达到高峰,72h显著下降,但仍高于对照组水平(P<0.01);在缺血再灌注12、24、48h,NGF组CHOPmRNA及蛋白表达明显低于缺血组(P<0.01)。本研究表明,外源性NGF能显著抑制局灶性脑缺血再灌注后CHOPmRNA及蛋白表达,提示NGF可能对脑缺血再灌注损伤后的海马神经元有保护作用。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB表达的上调作用

为探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、WesternBlotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达。结果显示:缺血再灌注组CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);NGF组CREB和p-CREB表达高于缺血再灌注组(P<0.05)。以上结果表明NGF明显上调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过上调CREB和p-CREB的表达来实现。     

Effects of electroacupuncture on mRNA, protein expression of eNOS and protein expression of MMP-9 in rats after focal cerebral ischemia/reperfusion

目的 探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型.将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组.缺血2h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7d3个时间点.取双侧“合谷”穴(LI4)为电针刺激穴位.免疫组化法检测eNOS蛋白的表达;反转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达;Western blot法检测eNOS、MMP-9蛋白的表达.结果与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,电针组各时间点eNOS蛋白及mRNA明显增加(P＜0.01).eNOS蛋白表达于再灌注3d达高峰,假手术组表达为0.4291±0.0173,模型组再灌注3 d表达为0.7374 *0.0252,电针组表达为0.8536±0.0212,各组比较有显著差异(P＜0.01).与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1d显著低于模型组(P＜0.01),再灌注3、7d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组(P＜0.01).结论 电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达.     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马cAMP-PKA-CREB信号通路的影响

目的: 观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)-cREB反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法: 将大鼠随机分为补阳还五汤组、尼莫地平组、模型组、假手术组。用改良Pulsinellis四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型,分别给予相应的药物,连续30 d。利用放射免疫分析法检测海马组织cAMP含量,Western blotting法检测PKA催化亚基(PKAc)蛋白表达,电泳迁移率改变分析法检测CREB的DNA结合活性。结果: 与假手术组比较, 模型组大鼠海马组织cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性均降低(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤组和尼莫地平组cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性均升高(P<0.01)。结论: 补阳还五汤可增加血管性痴呆大鼠海马cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性,增强cAMP-PKA-CREB信号通路的作用。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的上调作用

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化的CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、W estern B loting和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和磷酸化CREB表达。结果假手术组海马CA1区CREB有明显表达,缺血再灌注组CA1区表达较假手术组减少,NGF组CA1区的CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组海马CA1区p-CREB表达很少,缺血再灌注组p-CREB表达多于假手术组,NGF组p-CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论NGF上调海马CREB和p-CREB的表达,对缺血神经元起保护作用,CREB和p-CREB参与NGF对缺血神经元的保护作用机制。     

基于Keap1/Nrf2/NLRP3炎症小体和p62途径探讨右美托咪定改善脑卒中后损伤的内在机制北大核心CSCD

目的:探讨右美托咪定(Dex)对脑卒中后模型脑损伤的改善作用,并基于Keap1/Nrf2/NLRP3炎症小体和p62途径探讨其作用机制。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、Dex组,除假手术组外,各组采用线栓法制造缺血性脑卒中大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模成功后,依达拉奉组大鼠给予依达拉奉3.2 mg/kg,Dex组大鼠灌胃给予Dex 50 mg/kg,模型组、假手术组大鼠给予等体积生理盐水,连续给药14 d。采用改良m-NSS法评价大鼠行为学变化;TTC染色测定脑梗死体积;ELISA检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;免疫荧光染色检测脑组织内ROS含量;RT-PCR检测脑组织Keap1、Nrf2、NLRP3、p62 mRNA水平;Western blot检测Keap1、Nrf2、NLRP3、p62蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠脑神经功能评分明显升高,脑梗死体积明显增大(P<0.01),脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及ROS水平明显升高(P<0.01),Keap1、Nrf2、NLRP3、p62 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,Dex组大鼠脑神经功能评分明显降低,脑梗死体积明显减小(P<0.01),脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及ROS水平明显降低(P<0.01),NLRP3、p62 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01),Keap1、Nrf2 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:Dex可明显改善脑卒中大鼠脑损伤,其可能是通过调控Keap1、Nrf2、NLRP3炎症小体及p62相关基因及蛋白表达实现的。     

地塞米松对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型TNF-α和IL-1β的影响

目的:探讨地塞米松(dexamethasone,dexasone DEX)对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用及其作用机制.方法:建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,参照改良Nagasawa大脑中动脉线栓法,随机将50只雄性SD大鼠分为5个组(n=10),分别为假手术组、脑缺血再灌注模型组、DEX注射液小剂量治疗组、DEX...     

脑缺血再灌注大鼠额叶皮质内Bcl-2和HSP70的表达及川芎嗪、尼莫地平的干预作用

为了探讨脑缺血再灌注(CIR)大鼠额叶皮质细胞内Bcl-2和HSP70的表达及川芎嗪、尼莫地平的干预作用,本研究采用Bannister’s颈动脉血引流法复制Wistar大鼠CIR模型,将动物随机分成6组,即正常对照组、假手术组、模型组、川芎嗪治疗组、尼莫地平治疗组和川芎嗪+尼莫地平联合治疗组,每组各15只动物。川芎嗪治疗组按100mg/kg经腹腔注射,尼莫地平组经静脉给药(1mg/kg),联合治疗组则同时给上述剂量药物。三个治疗组均自缺血起给药一次,然后每24h给药一次。所有动物额叶皮质的切片均采用免疫组织化学技术检测Bcl-2和HSP70阳性细胞的表达情况。结果显示:正常对照组Bcl-2和HSP70无阳性表达,假手术组仅HSP70有少量表达,模型组Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显有所增多,而川芎嗪或尼莫地平治疗组Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05)。与单独用药组相比,川芎嗪+尼莫地平联合治疗组Bcl-2、HSP70阳性细胞数明显增多(P<0.05)。以上结果表明川芎秦和尼莫地平能够上调CIR时Bcl-2和HSP70的表达,提示它们可能在CIR中发挥保护作用。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内CREB mRNA表达的影响

探讨外源性神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内的cAMP反应元件结合蛋白(cyclicAMPresponseelementbindingprotein,CREB)mRNA表达的影响。用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,运用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质内CREBmRNA的表达。结果显示:缺血再灌注组缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREBmRNA阳性反应产物平均光密度(OD)比假手术组减少(P<0.05),NGF组CA1区和顶叶皮质内的CREBmRNA阳性产物平均光密度高于缺血再灌注组(P<0.05)。本研究结果提示NGF可以上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质缺血神经元CREBmRNA的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。     

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P 0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P 0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P 0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P 0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。     

氟伐他汀预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织TNF-α及IL-10表达的影响

目的观察氟伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织肿瘤坏死因子(TNF-α)及白介素-10(IL-10)含量变化,探讨氟伐他汀的脑保护机制。方法实验大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、溶剂对照组(Vehicle组)和氟伐他汀预处理组(Flu组)。线栓法制作大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,Flu组在模型制备前用氟伐他汀连续灌胃14 d。于缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,采用ELISA法、免疫组织化学法和半定量RT-PCR法,检测大鼠脑组织中TNF-α及IL-10表达的变化。结果与Sham组比较,I/R组和Vehicle组脑组织中TNF-α和IL-10的表达明显上调(P<0.05)。与I/R组和Vehicle组比较,Flu组脑组织中TNF-α的表达明显下调,IL-10的表达显著上调(P<0.05)。结论氟伐他汀对脑缺血再灌注损伤的保护作用,其作用机制可能与上调IL-10,下调TNF-α的表达有关。     

白花丹参对小鼠局灶性脑梗死ICAM-1表达及白细胞浸润的影响

目的 探讨白花丹参水提取物预处理对局灶性脑梗死细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达及白细胞浸润的影响。方法 小鼠随机分为假手术组、脑梗死组、白花丹参组，采用光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型，免疫组化和ELISA法检测梗死侧皮层ICAM-1的表达变化，比色法检测梗死侧皮层髓过氧化物酶（MPO）的活性变化，2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色法测定梗死体积。结果 假手术组ICAM-1表达低，各时间点无差异（P〉0．05）。脑梗死组ICAM-1表达于梗死后3h开始升高．12h达高峰，24h开始下降。与脑梗死组相应时间点比较，白花丹参组于梗死后3．6、12和24h ICAM-1的表达均降低（P〈0．05）。MPO的活性变化规律基本同ICAM-1的表达变化。与脑梗死组比较。白花丹参组梗死体积明显缩小（P〈0．01）。结论 白花丹参水提取物预处理对小鼠局灶性脑梗死有保护作用，其机制之一可能是降低梗死侧皮层ICAM-1的表达，减少中性粒细胞的浸润。     

降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达的影响

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达的影响。方法：在脑缺血后再灌注模型上，应用原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法检测c-fos mRNA及蛋白表达。结果：缺血组大鼠纹皮质较假手术组c-fos mRNA和蛋白表达非常显著增加；CGRP组和NGF组c-fos mRNA和蛋白表达分别显著弱于缺血组；CGRP和NGF合用组c-fos mRNA和蛋白表达非常明显弱于缺血组、CGRP组和NGF组。结论：CGRP和NGF分别抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达，联合应用则能显著抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达，二者对保护缺血神经元可能有协同作用。     

骨髓间充质干细胞移植对脑梗塞大鼠神经功能恢复及突触素表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对脑缺血大鼠神经功能恢复和脑组织中突触素(synaptophysin)mRNA表达的影响.方法:72只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(vehicle组)和BMSC治疗组(BMSC组),每组18只,采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,BMSC移植前用DAPI标记,BMSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入BMSC(1×106),vehicle组则注射同等剂量的PBS,术后4 d、7 d和14 d通过平衡木行走、转棒上行走及网屏抓握进行神经功能评估,观察其恢复状况,并断头取脑,免疫组织化学及RT-PCR法检测突触素表达情况.结果:BMSC组缺血周边区脑组织中观察到DAPI染色的阳性细胞.BMSC组术后7 d和14 d神经功能评估明显优于MCAO组和vehicle组(P＜0.05 or P＜0.01);BMSC组术后4 d、7 d和14 d脑组织中突触素表达较MCAO组和vehicle组明显增高(P＜0.01).结论:BMSC移植可以促进脑缺血大鼠神经功能的恢复,促进缺血脑组织中突触素生成,BMSC移植促进脑缺血大鼠神经功能恢复部分是通过促进脑组织中生成突触素发挥作用.