人癌基因c-sis的RFLPs在肝癌和正常组织中的分布(摘要)

癌基因c-sis是PDGF-Ⅱ链(Platelet-Derived Growth Factor,PDGF)的编码基因。PDGF可以诱导细胞c-myc和c-fos等癌基因的表达,而c-myc和c-fos癌基因与肝癌形成有密切关系。     

栉孔扇贝糖胺聚糖对bFGF诱导的血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-myc mRNA表达的影响

目的 观察栉孔扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及原癌基因(c-myc)mRNA表达的影响,并探讨SS-GAG抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法 建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的VSMC增殖模型,用MTT法观察bFGF、SS-GAG对VSMC增殖活性的影响;用原位杂交方法观察SS-GAG对bFGF诱导增殖的VSMC内c-myc RNA表达的影响.结果 bFGF模型组细胞活性最高,与正常对照组比较,差异有统计学意义,不同浓度的SS-GAG组细胞增殖活性均低于模型组细胞,差别有统计学意义;bFGF诱导增殖的VSMC内c-myc mRNA基因表达强度明显高于对照组;与模型组比较,SS-GAG作用后,增殖的VSMC内c-myc mRNA表达强度和阳性细胞数量均减少,差别有统计学意义.结论 bFGF对VSMC有明显的促增殖作用,SS-GAG能显著抑制VSMC增殖,且对bFGF诱导增殖的VSMC的c-myc mRNA的阳性表达有抑制作用.     

钌红、维拉帕米对去甲肾上腺素诱导的心肌c-fos、c-myc表达的影响

目的了解经典的钙通道阻断剂维拉帕米和肌浆网Ca2 释放抑制剂钌红对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌c-fos、c-myc基因表达的影响.方法通过离体心脏灌流,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,测定左心室c-fos、c-myc表达水平.结果钌红明显降低NE诱导的c-fos、c-myc表达,维拉帕米部分阻断NE诱导的c-fos表达,但对c-myc基因表达无明显影响.结论 NE诱导的心肌c-fos、c-myc基因表达有赖于细胞内钙([Ca2 ];)的增高.     

低表达核糖体蛋白L22对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究抑制核糖体蛋白L22(ribosomal protein L22,RPL22)基因表达后对ET-1诱导的人肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,HPASMC)异常增殖的影响?方法:体外原代培养HPASMC,用ET-1诱导其增殖?设计siRNA-RPL22干涉片段,瞬时转染siRNA-RPL22后培养HPASMC,检测其增殖状况?采用Realtime-PCR?Western blot分别检测RPL22 mRNA 和RPL22蛋白的表达;PCNA?FACScan流式细胞仪检测细胞增殖?结果:HPASMC 在转染siRNA-RPL22后,与对照组相比,RPL22 mRNA和RPL22蛋白的表达都显著减少(P < 0.05);siRNA-RPL22组HPASMC增殖较对照组显著降低?结论:抑制RPL22表达后,可抑制ET-1诱导的HPASMC增殖,提示RPL22与HPASMC增殖有关,值得进一步深入研究?     

雷公藤内酯醇对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其作用机制.方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,细胞融合达60%时培养基中加入不同浓度的雷公藤内酯醇和雷帕霉素.采用细胞计数法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测VSMCs内c-fos mRNA表达水平.结果雷公藤内酯醇和雷帕霉素均明显抑制血清诱导的大鼠VSMCs增殖,阻断细胞由G0/G1期向S期转化;RT-PCR检测显示,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,c-fos mRNA表达明显减少.结论雷公藤内酯醇能明显抑制血清诱导的VSMCs增殖,而阻断细胞周期、下调原癌基因c-fos mRNA的表达可能是其药理机制之一.     

不同心脏负荷及心室内压变化对大鼠早期心肌原癌基因表达的影响

目的:检测容量(VOL)和压力超负荷(POL)早期大鼠左心室内压变化诱导左心室心肌原癌基因c-fos、c-jun、c-myc、egr-l mRNA表达时间变化和差异.方法:测定假手术大鼠、及心脏超负荷后不同时间点左心室收缩压(LVSP)和内压谷值(LVDP)变化,用狭缝杂交检测各时间点左室心肌c-fos、c-jun、c-myc、egr-l mRNA表达,用密度仪定量分析.结果:与假手术组比较,不同心脏负荷后早期LVSP均下降(P＜0.05),48 h VOL组最低,POL组恢复至对照组水平;负荷后LVDP逐渐增高,POL后6 h,VOL12 h最高(P.＜0.05),后者48 h与假手术组相近(P＞0.05).POL诱导原癌基因表达峰值早于VOL,48 h c-myc、c-jun出现第2次表达增加.VOL后1 h检测到c-fos、c-jun、egr-l、c-myc弱表达,48 h c-fos无表达,c-jun表达减弱,c-myc和egr-l仍有较高表达.结论:VOL、POL后左室内压增加诱导不同的心肌c-fos、c-jun、c-myc、egr-l表达增加的时间顺序,与LVDP增高无关,c-fos、c-jun、c-myc表达与LVSP增高有关,提示左心室主动收缩产生的室内压为诱导原癌基因表达的主要因素;心脏超负荷后心肌原癌基因可持续表达,不同负荷原癌基因表达的时间过程差异可能对发生不同类型心肌肥厚有重要影响.     

TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞中c-myc和c-fos表达及胶原分泌的影响

目的了解TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞中癌基因c-myc和c-fos的表达及胶原分泌的影响,探讨瘢痕增生机制. 方法烧伤患者增生性瘢痕6例标本,通过细胞培养研究了TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞癌基因c-myc和c-fos的表达(免疫组织化学和图像分析方法)及胶原分泌(3H-脯氨酸法)的影响. 结果 TGF-β1可显著提高增生性瘢痕成纤维细胞癌基因c-myc和c-fos的表达, 图像分析结果面密度(c-myc: 0.0687±0.0072 vs 0.0141±0.0016,P<0.01;c-fos: 0.0529±0.0048 vs 0.0223±0.0021,P<0.01);平均灰度(c-myc: 3340±462 vs 1120±232 ,P<0.01; c-fos: 1402±286 vs 605±79,P<0.01);积分吸光度[c-myc: 2.0±0.3 vs -(1.5±0.2), P<0.01; c-fos: 3.3±0.4 vs -(1.3±0.1), P<0.01]等指标经统计学处理与对照组有显著性差异;TGF-β1可促使增生性瘢痕成纤维细胞合成分泌胶原率提高2.0倍(P<0.01). 结论 TGF-β1可能是通过癌基因c-myc和c-fos的表达而促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成分泌增加.     

桂皮酸诱导NB_4细胞分化及c-myc和c-fos蛋白表达

目的:探讨桂皮酸对NB4细胞诱导分化的作用及其机制。方法:采用光镜观察形态变化,嗜银蛋白染色检测各组细胞AgNORs颗粒数,流式细胞术检测CD11b和CD33,免疫组化测定细胞c-myc、c-fos蛋白表达。结果:桂皮酸作用NB细胞后,CINN可诱导NB4细胞向终末细胞分化,分化率较对照组差异明显（P<0.01）;细胞AgNOR3颗粒数明显减少（P<0.01）;CD11b表达升高,CD33表达下降;c-myc表达下降,c-fos蛋白表达升高（P<0.05）。结论:桂皮酸能使NB4细胞分化成熟,增殖能力下降,其机制可能是通过凋控NB4细胞的增殖、分化相关的基因c-myc、c-fos表达来抑制细胞增殖,诱导细胞分化。     

原癌基因c-fos及c-myc在IL-13诱导Dami细胞分化中的表达关系

目的研究重组人白细胞介素-13(recombinant humaninterleukine-13,rhIL-13)诱导Dami细胞分化中原癌基因c-fos及c-myc表达,探索原癌基因c-fos及c-myc在IL-13信号传导通路中的作用。方法采用RT-PCR检测rhIL-13分别作用不同时间GPⅡb mRNA、c-fos mRNA和c-myc mRNA的表达;Western     

抗多胺代谢与HL-60细胞c-myc、c-fos、c-Ha-ras及ODC基因的表达

用核酸分子杂交技术研究多胺生物合成限速酶L-鸟氨酸脱羧酶(ODC)的不可逆抑制剂—二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对HL-60细胞c-myc、c-fos、c-Ha-ras癌基因及ODC基因表达的影响。结果表明DFMO处理的HL-60细胞中,c-myc癌基因表达减少,c-fos基因表达水平上升,而DFMO对ODC基因表达无明显影响。此外,本文证实了加入外源性腐胺能阻止DFMO引起的上述变化,表明DFMO对HL-60细胞基因表达的影响是其抑制细胞内多胺生物合成所致。     

质粒介导靶向c-myc的siRNA对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察靶向原癌基因c-myc的siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达及细胞增殖的影响。方法以原癌基因c-myc mRNA 589-609位碱基为靶序列构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,用脂质体Lipo2000包裹转染MCF-7细胞。采用RT-PCR、Western blot检测c-myc mRNA及蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞增殖。结果与pEGFP-C1及p-Mis09-1比较,转染p-Mat01-1能够特异性抑制MCF-7细胞c-myc mRNA(24h:P<0.01)及蛋白(5d:P<0.01)表达,显著降低MCF-7细胞增殖能力(3d:P<0.05,5、7d:P<0.01)。结论采用siRNA表达质粒技术能够有效抑制MCF-7乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达,初步证实下调c-myc/c-Myc表达能够抑制MCF-7细胞增殖,为RNA干扰技术在乳腺癌生物治疗中的应用打下一定实验基础。     

通脉宁调控AngⅡ、LPC诱导血管平滑肌细胞c-fos、c-myc基因表达的研究

目的观察通脉宁胶囊对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导的兔血管平滑肌细胞(VSMC)c-fos、c-myc癌基因表达的影响。方法组织贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞,用AngⅡ、LPC诱导VSMC增殖,采用RT-PCR方法,观察通脉宁全方及益气拆方和活血拆方药物血清对AngⅡ、LPC诱导的VSMC c-fos、c-myc蛋白表达。结果AngⅡ、LPC组c-fos和c-myc蛋白表达增加,与空白组比较有显著性差异(P<0.01);通脉宁全方组、益气拆方组、活血拆方组均可使c-fos和c-myc的蛋白表达下调,与AngⅡ、LPC组比较有显著性差异(P<0.01);通脉宁全方组与益气拆方组、活血拆方组比较也有显著性差异(P<0.01)。结论通脉宁胶囊可下调AngⅡ、LPC诱导的VSMC c-fos、c-myc基因表达,而对VSMC增殖起到抑制作用。     

内皮素-1刺激对血管平滑肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用

目的研究ET-1对血管平滑肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-1）表达的影响以及与血管平滑肌增殖的关系。方法以成年16m周Wistar大鼠为研究对象，采用主动脉血管平滑肌原代培养技术，培养大鼠腹主动脉血管平滑肌1～3代，然后加入ET-1进行刺激．使用RT—PCR和Western blot技术观察ET-1作用后0、12、24、48、72h以及不同浓度ET—1刺激48h后PPAR-γ mRNA和蛋白表达变化，同时用MTT法检测血管平滑肌（VSMCs）增殖。结果ET-1刺激后12h．PPAR-γ在mRNA和蛋白水平表达上未见明显变化（P〉0．05），而24h时出现了表达轻度下调，与对照组（无ET-1刺激）差异具有显著性（P〈0．05），48～72h下降更加明显，与对照组相比差异具有高度显著性（P〈0．01）。不同浓度ET-1刺激48h后，随着浓度的增加．PPAR-1表达减低，各组相比具有显著性差异（P〈0．01）。而血管平滑肌的增殖在12h就出现，且随着时间的延长，增殖增强而且随着ET-1浓度的增加，VSMCs增殖增加。结论ET-1在引起VSMCs增殖的同时，可引起PPAR-γ在mRNA和蛋白水平的表达减低，提示ET—1导致的VSMCs增值可能与PPAR-γ有一定的关系。     

活血潜阳方对自发性高血压大鼠心肌肥厚组织原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

目的：通过分析左心室心肌原癌基因c—fos和c-myc mRNA及蛋白的表达．探讨活血潜阳方改善自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat．SHR）左心室肥厚的作用机制。 方法：以10周龄的SHR为高血压左心室肥厚模型，随机分为SHR模型组．中药大、中、小剂量治疗组，西拉普利治疗组，年龄和性别相匹配的京都（Wistar-Kyoto，WKY）大鼠作为正常对照组，每组5只。灌胃14周后，取大鼠心脏组织，用原位杂交组织化学法和免疫组化法分别检测心肌c—fos和c-myc mRNA及蛋白的表达。 结果：24周龄模型组SHR左心室肥厚心肌的原癌基因c—fos和c—myc mRNA及蛋白的表达与WKY大鼠比较明显增强（P〈0．01）。与SHR模型组比较．大、中和小剂量活血潜阳方组大鼠左心室心肌组织中c—fos和c—myc mRNA的表达下降（P〈0．05）；大、中剂量活血潜阳方可降低c—myc蛋白的表达，但对c-fos蛋白表达的影响与模型组比较，差异未见统计学意义。 结论：活血潜阳方可以下调SHR心肌组织中原癌基因c—myc的表达，可能是改善高血压左心室肥厚的重要机制之一，是否通过对c-fos表达的影响治疗左心室肥厚尚不能确定。     

ox-LDL诱导内皮细胞损伤条件培养基及气血并治方有效组分D、E配伍对平滑肌细胞增殖及c-myc mRNA表达的影响

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞(VEC)损伤条件培养基及气血并治方有效组分D(主要为芍药苷)和E(主要为总黄酮)配伍(重量比为1:2)是否对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖相关基因表达有影响.方法将VSMC正常培养液、ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、辛伐他汀加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基、有效组分D和E配伍加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基等分别作用于VSMC,采用MTT染色法检测VSMC生长活性,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定c-myc mRNA表达.结果 VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与正常培养VSMC相比,细胞生长活性明显增加(P＜0.01),细胞c-myc mRNA表达增强,有效组分D、E配伍与VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与模型组相比,细胞生长活性明显降低(P＜0.01),细胞c-myc mRNA表达减弱.结论气血并治方中有效组分芍药苷和总黄酮配伍可以拮抗ox-LDL诱导VEC损伤条件培养基引起VSMC增殖及c-myc mRNA表达增加,气血并治方防治AS的作用可能与方中有效组分芍药苷和总黄酮配伍抑制VEC损伤条件培养基引起的VSMC增殖相关基因表达增加有关.     

艾灸对实验性类风湿关节炎滑膜细胞原癌基因 c-fos和c-myc mRNA表达的影响

目的观察艾灸对实验性类风湿关节炎滑膜细胞原癌基因c-fos、c-myc mRNA表达的影响,初步探讨艾灸对RA滑膜细胞内分子信号传导的调控.方法在日本大耳白兔右后足踝关节部皮内注射福氏完全佐剂造模,经过艾灸治疗,通过半定量RT-PCR测定c-fos和c-myc mRNA的表达量.结果治疗组c-fos和c-myc mRNA表达量显著低于造模组(P＜0.01).结论艾灸治疗能够降低c-fos和c-myc mRNA的表达,影响生长因子信号传导系统.     

DDPH对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用氚－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）参入、电镜、原位杂交及Northern blot杂交方法，观察了 1－ （2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（DDPH）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：DDPH在降低SHR血压 的同时，能减少VSMC的线粒体、粗面内质网及3H－TdR参入量（P＜0．01），并能逆转c－fos、c－myc、c－sis 原癌基因mRNA表达增强（P＜0．05或＜0．01）以及P53抑癌基因mRNA表达减弱（P＜0．05）。表明： DDPH能抑制SHR的VSMC增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

内皮素-1刺激对血管平滑肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用

目的 研究ET-1对血管平滑肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)表达的影响以及与血管平滑肌增殖的关系。方法 以成年16周Wistar大鼠为研究对象,采用主动脉血管平滑肌原代培养技术,培养大鼠腹主动脉血管平滑肌1~3代,然后加入ET-1进行刺激,使用RT-PCR和Westernblot技术观察ET-1作用后0、12、24、48、72h以及不同浓度ET-1刺激48h后PPAR-γmRNA和蛋白表达变化,同时用MTT法检测血管平滑肌(VSMCs)增殖。结果 ET-1刺激后12h,PPAR-γ在mRNA和蛋白水平表达上未见明显变化(P>0.05),而24h时出现了表达轻度下调,与对照组(无ET-1刺激)差异具有显著性(P<0.05),48~72h下降更加明显,与对照组相比差异具有高度显著性(P<0.01)。不同浓度ET-1刺激48h后,随着浓度的增加,PPAR-γ表达减低,各组相比具有显著性差异(P<0.01)。而血管平滑肌的增殖在12h就出现,且随着时间的延长,增殖增强。而且随着ET-1浓度的增加,VSMCs增殖增加。结论 ET-1在引起VSMCs增殖的同时,可引起PPAR-γ在mRNA和蛋白水平的表达减低,提示ET-1导致的VSMCs增值可能与PPAR-γ有一定的关系。     

原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。     

7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：检测7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮(7-difluoromethoxy-5, 4'-dimethoxygenistein,DFMG)对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能机制。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色检测HeLa细胞凋亡形态学改变;FCM检测HeLa细胞凋亡率;DNA琼脂糖电泳检测HeLa细胞凋亡的DNA条带;RT-PCR和Western 印迹检测DFMG对HeLa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：DFMG在体外呈浓度(0.25~64 μg/mL)和时间(24~72 h)依赖性抑制HeLa细胞增殖,其作用48 h的IC50值为4.62 μg/mL,HeLa细胞出现典型的凋亡形态学改变,典型的凋亡DNA条带,凋亡率呈浓度依赖性增高,伴随c-myc mRNA和蛋白表达增高,其下游蛋白bax,cyto-c,caspase-9表达增高,而bcl-2蛋白表达降低。用siRNA干扰沉默c-myc基因,能部分抵消DFMG对HeLa细胞增殖抑制和凋亡诱导效应,而用c-myc cDNA转染HeLa细胞,则能协同DFMG对细胞增殖的抑制作用及对凋亡的诱导作用。结论：DFMG在体外具有抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与钝化c-myc基因,启动线粒体凋亡途径有关。