原位分子杂交技术的几点体会

非同位素标记探针应用于原位分子杂交,虽取得了很大进展,但因其操作步骤较多,时间较长等因素,仍存在一些问题有待克服。以下介绍我们在实际操作中得到的一点初步体会。 1 减少或避免组织掉片的方法 除非蛋白性防脱片胶外,还需注意以下几点:(1)载玻片一定要干净,其预处理包括     

原位分子杂交技术一些体会

原位分子杂交技术一些体会贺占国，江泓，张文，郭宏原位分子杂交技术是近几年来发展起来的一项新技术。在基础研究和临床诊断上已开始广泛应用。在临床病理诊断中可为早期诊断、鉴别诊断、判断预后提供重要依据。与免疫组织化学相比，其特异性更强，敏感性更高，已受到病...     

一种新原位分子杂交技术

原位分子杂交技术已开展多年 ,但至今尚未找到能应用到石蜡切片中效果理想的杂交方法。我们通过反复摸索 ,多次实践 ,总结出一种新的原位分子杂交技术。它不仅能很好地应用于石蜡切片 ,而且可应用于冰冻切片和培养的组织细胞 ,极大地方便了实验研究工作 ,报道如下。１材料和方法１．１材料０．２ｇ／ＬＤＥＰＣ ;４０ｍＬ／Ｌ多聚甲醛（ｐＨ７．４） ;２ｇ／Ｌ甘氨酸 ,２ｇ／Ｌ醋酸酐（用０．１ｍｍｏｌ／ＬｐＨ８．０三乙醇胺配制） ;含０．３ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺的０．５,０．７,０．９和１Ｌ／Ｌ酒精 ;２０×ＳＳＣ（ｐＨ７．５） 〔１〕 …     

原位分子杂交中载玻片包被法的改良

随着生物科学技术的发展,核酸分子原位杂交技术在各形态学研究领域得到了广泛的应用,成为续组织化学和免疫组织化学之后一项十分重要的技术手段,为进一步在分子水平上研究正常及病理组织内特定基因的变化提供了可能.原位分子杂交大多是在载玻片上进行的,由于实验时程长,中途又需经多种缓冲液的洗涤、孵育,载玻片处理不当,很易引起组织切片在实验不同时期脱落,造成不必要的人力、物力损失,因此我们摸索并改进了几种载玻片的包被方法.1 材料和方法 (1)载玻片包被前的处理 截玻片经洗涤液浸泡过夜,流水冲洗后,1mol/L HCl浸泡1～3h或泡酸4～8h,流水冲洗,而后用双蒸水冲洗2～3     

慢性活动性肝炎HBV DNA原位分子杂交研究

对50例慢性活动性乙型肝炎肝组织进行了原位杂交及免疫组化研究；部分作了上述两法的双标记。发现HBV DNA阳性物质在肝细胞内的分布方式可分为全浆型、膜下型、核型和膜间型4种。后者提示HBV DNA有可能通过肝细胞膜直接传播至邻近的肝细胞。双标记显示，大多数HBV DNA强阳性肝细胞并不同时含有HBcAg或HBsAg；反之亦然。此外，少数病例见胆小管上皮和窦内皮细胞胞浆内亦呈HBV DNA阳性。     

原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变HPV感染

目的:观察宫颈鳞状上皮病变过程中HPV6/11、HPV16/18的表达,探讨其测定的临床意义.方法:选择病理诊断为宫颈慢性炎症50例、鳞状上皮乳头状瘤样增生30例、尖锐湿疣30例、上皮内瘤变89例、鳞癌50例共249例石蜡包埋标本,应用原位核酸分子杂交技术对其进行HPV6/11,HPV16/18检测.结果:慢性炎症组HPV6/11阳性表达4%,HPV16/18阳性表达0%;乳头状瘤样增生组HPV6/11阳性表达10%,HPV16/18阳性表达3.3%;尖锐湿疣组HPV6/11阳性表达93.3%,HPV16/18阳性表达23.3%;CIN组中Ⅰ级HPV6/11阳性表达48.9%,HPV16/18阳性表达42.2%;Ⅱ级HPV6/11阳性表达39.1%,HPV16/18阳性表达69.6%;Ⅲ级HPV6/11阳性表达9.5%,HPV16/18阳性表达66.7%;鳞癌组HPV6/11阳性表达6%,HPV16/18阳性表达82%.结论:应用原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变细胞的HPV6/11、HFV16/18,为临床早期诊断、鉴别诊断及评估预后提供可靠的理论依据.     

丁型病毒性肝炎的原位分子杂交及免疫组化研究

利用原位分子杂交和免疫组化方法对１４２例乙型肝炎活检肝组织进行丁型肝炎病毒ＲＮＡ及其抗原的定位研究。２８／１４２例丁型肝炎病毒标记阳性。其中慢性重症型６例；慢性活动性１７例；慢性持续性５例。慢性活动性乙肝重叠丁型肝炎病毒感染组发生早期肝硬变的比例明显高于无重叠感染组（Ｐ＜０．０５）。２８例丁型肝炎病毒感染肝组织１９例ＨＢｃＡｇ阳性，并以核浆型为主，提示活动性ＨＢＶ复制与ＨＤＶ感染的正相关性，两者相加作用导致肝损害加重并加速发展为肝纤维化。ＨＤＶＲＮＡ在肝细胞内大量蓄积，ＨＤＡｇ在碎屑状坏死边缘肝细胞或气球样变肝细胞内呈浆膜型分布，提示ＨＤＶ直接细胞毒在丁型肝炎发病学中的作用。     

一种基于流式细胞仪分选后的细胞原位分子杂交

原位分子杂交是从组织细胞原位显示特定核酸序列存在的技术 ,它对一些异质性的细胞群体如血液 ,脑组织等 ,常不能准确阐明特定核酸序列表达于何种类型的细胞 ,或在某一细胞群体是否有特定基因的表达。在对中枢神经系统 (CNS)胶质细胞的研究中 ,参考相关报道[1 ,2 ] ,我们将流式细胞仪技术与原位分子杂交结合 ,对经分选的小胶质细胞进行细胞原位分子杂交分析 ,取得了满意结果。1　材料与方法1 .1　主要试剂及材料　小胶质细胞标记物同工凝集素GSA IB4 (FITC标记 )、2 0×SSC购自Sigma公司 ,诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)与肿瘤坏死因子 …     

小波变换方法对原位分子杂交中银粒的检测和增强

0　引言用同位素标记分子探针做原位分子杂交 ,细胞上标记的银粒数目往往相对地反映细胞中某种物质的ｍＲＮＡ含量。在对不同生理或病理条件下同一组织或细胞中某种物质基因表达改变进行分析时 ,对细胞上银粒数目进行统计比较是阐明其基因表达改变的关键方法。直接在显微镜下对     

原位DNA杂交和单克隆抗体染色法对离心培养的临床标本中巨细胞病毒的检测

一种巨细胞病毒(CMV)的原位DNA杂交检测盒用以捡测离心培养物中的CMV，对其检测效果进行了评价。61份临床标本，以单克隆抗体染色法有17份CMV阳性(27．8％)．而DNA杂交法对17份阳性标本中有15份显示阳性(24．5％)。早期检出的比较中，离心后DNA杂交法需要58h，而作为对照的单克隆抗体染色法只需16h。虽然DNA杂交法对CMV感染的研究和捡测是一种好方法，但对离心培养物的检测，现在DNA杂交技术还不能完全取代单克隆抗体的应用。