miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增值的研究

目的 探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白（STAT3）在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法 对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果 寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达（P＜0.05）。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%（37/45）高于正常皮肤组织（P＜0.01）。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低（F=48.632, P＜0.01）。结论 miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增值活性     

miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达及对其增殖和侵袭性影响

目的：探讨miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达及对其细胞增殖和侵袭性的影响。方法：应用RT-PCR检查激素非依赖前列腺癌细胞系PC3在转染miRNA-21抑制剂后miRNA-21的表达情况;用CCK-8和Transwell小室分别检测转染miRNA-21抑制剂后PC3细胞的增殖与侵袭能力。结果：RT-PCR显示,转染组miRNA-21的表达低于空白转染对照组（ P＜0．05）;CCK-8和Transwell小室检测结果显示,转染组PC3细胞体外增殖及侵袭力明显降低（ P＜0．01）。结论：降低miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达可抑制其增殖及侵袭力,这个发现为临床治疗非依赖性前列腺癌增殖及侵袭提供了新思路和方法。     

前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系

[摘要] 目的 研究前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系。方法 通过免疫细胞化学和Western Blot检测三种常见前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、DU145基础STAT3的活性,选取激素非依赖性细胞系PC3、DU145分别加入不同浓度顺铂检测细胞增殖抑制情况,蛋白印迹法检测低浓度顺铂作用DU145后STAT3的活性变化。结果STAT3活性在激素非依赖性前列腺癌细胞系PC3、DU145中较激素依赖性细胞系LNCaP高,且STAT3活性较低的PC3较DU145对顺铂更敏感,低浓度长时间作用DU145后可引起STAT3活性上调。结论 STAT3可能参与调节前列腺癌细胞对顺铂的敏感性。     

TCP1-β在雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖中的作用

目的:探讨TCP1-β在雄激素非依赖性前列腺癌细胞(AIPC)增殖中的作用?方法:选择雄激素依赖性的前列腺癌细胞系LnCap和雄激素非依赖性的前列腺癌细胞系PC3作为模型,用不含酚红的培养基和活性炭吸附过的血清培养LnCap和PC3细胞,检测其对雄激素的依赖性;采用RNA干扰(RNAi)技术抑制PC3-Ad和LnCap细胞的TCP1-β表达,Q-PCR?Western blot方法检测TCP1-β的表达变化;MTT方法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;并用生物信息学方法探讨可能参与TCP1-β调控AIPC增殖的信号通路?结果:① 撤除雄激素后,LnCap细胞增殖受到显著抑制,而PC3细胞增殖未受明显影响;② 转染TCP1-β的siRNA后,PC3-Ad和LnCap细胞的TCP1-β表达受到显著抑制(P = 0.002,P = 0.006);③ PC3-Ad的TCP1-β表达受到显著抑制后,细胞的增殖受到抑制(P = 0.015),但是细胞没有出现明显凋亡;TCP1-β表达抑制对LnCap 细胞的增殖和凋亡都没有产生显著影响;④TCP1-β可能参与了PI3K/Akt信号通路对AIPC增殖的调控作用?结论:TCP1-β过表达可能参与了AIPC细胞的增殖调控?     

过表达miR-140-5p促进前列腺癌细胞凋亡抑制其增殖

［摘要］ 目的研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的表达情况,探讨 miR-140-5p在前列腺癌细胞中的生物学功能。 方法RT-qPCR方法检测前列腺癌细胞株PC3细胞及DU145细胞中miR-140-5p表达;PC3细胞中转染miR-140-5p模拟物或抑制物,CCK-8及AnnexinV/PI双染流式细胞学检测细胞活力及细胞凋亡。TCGA数据库分析高表达miR-140-5p与前列腺癌患者总生存率的关系。 结果miR-140-5p在DU145及PC3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,miR-140-5p在PC3细胞中的表达明显低于DU145细胞（P＜0.05）。转染miR-140-5p模拟物的 PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显高于阴性对照组（P＜0.05）。miR-140-5p的模拟物转染PC3细胞48 h,过表达组细胞增殖率低于阴性对照组,凋亡率高于阴性对照组（P＜0.05）。转染miR-140-5p抑制物的PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显低于阴性对照组（P＜0.05）。敲低miR-140-5p表达组细胞增殖率明显高于阴性对照组,凋亡率明显低于阴性对照组（P＜0.05）。低表达miR-140-5p组患者总生存率低于高表达miR-140-5p组患者（P＜0.05）。 结论miR-140-5p在前列腺癌细胞株低表达,低表达miR-140-5p前列腺癌患者预后不良;过表达miR-140-5p可促进前列腺癌细胞凋亡,抑制其增殖。     

miRNA-29a调控H3K4甲基化在前列腺癌病理机理中的作用

目的 探讨在前列腺癌中miR-29a与H3K4特异性去甲基化酶—KDM5B之间的关系,验证miR-29a通过调控KDM5B的表达来抑制前列腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。方法 将miR-29a模拟物(miR-29a mimic)片段和含野生型KDM5B基因3′-非翻译区的荧光素酶报告载体(KDM5B-wt)共转染至前列腺癌PC3和Lncap细胞后,进行荧光素酶活性检测。采用脂质体转染法将miR-29a mimics转染入人前列腺癌PC3和Lncap细胞中,MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Real-Time PCR和Western印迹法检测KDM5B表达水平。结果 转染miR-29a mimics后,KDM5B的表达被明显抑制 (P<0.01),蛋白表达水平也明显低于NC组。与NC组相比,转染miR-29a mimics组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在S/G2期,细胞凋亡率较NC组增加(P<0.01)。结论 miR-29a可以通过调控H3K4特异性去甲基化酶-KDM5B的表达而抑制前列腺癌PC3和Lncap细胞的增殖。miR-29a有希望成为诊断和治疗前列腺癌新的分子标记和靶点。     

前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系

目的 研究前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系.方法 通过免疫细胞化学和蛋白质印迹法(Western blotting)检测3种常见前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、DU145基础STAT3的活性;选取激素非依赖性细胞系PC3、DU145,分别加入2 ng/ml、20 ng/ml、200 ng/ml、2μg/ml、20 μg/ml顺铂检测细胞增殖抑制情况,蛋白质印迹法检测低浓度顺铂作用DU145后STAT3的活性变化.结果 激素非依赖性前列腺癌细胞系PC3、DU145中STAT3的活性较激素依赖性细胞系LNCaP中的高,且STAT3活性较低的PC3细胞较DU145细胞对顺铂更敏感,低浓度顺铂长时间作用DU145后可引起STAT3活性上调.结论 STAT3可能参与调节前列腺癌细胞对顺铂的敏感性.     

miR-210通过下调JAK-STAT信号通路抑制胆囊癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-210抑制胆囊癌细胞系GBC-SD增殖的机制是否与下调JAK-STAT通路有关。方法:Real-time PCR法检测10例胆囊癌与癌旁组织中miR-210、STAT3、STAT5的表达;采用Lipofectamine~(TM)2000将miR-210-mimic转染至胆囊癌GBC-SD细胞以及JAK-STAT信号通路特异性阻滞剂AG490处理GBC-SD细胞后,分别检测细胞内miR-210、STAT3、STAT5表达的变化,通过MTT实验、流式细胞仪检测miR-210对GBC-SD细胞增殖、细胞周期的影响。结果:胆囊癌组织中miR-210的表达低于癌旁组织,STAT3、STAT5的表达高于癌旁组织(P<0.05);miR-210转染、AG490处理后GBC-SD细胞内STAT3、STAT5的表达下降;miR-210将GBCSD细胞阻滞于G_0/G_1期并抑制细胞增殖。结论:miR-210下调GBC-SD细胞内STAT3、STAT5的表达,通过阻滞JAK-STAT信号通路从而抑制GBC-SD细胞增殖。     

miR-33调控单核细胞系炎症因子TNF-α及IL-6表达的研究

目的研究microRNA-33（miR-33）靶向人核受体相互作用蛋白1（NRIP1）负性调控脂多糖（LPS）诱导的人单核细胞（THP-1）巨噬细胞炎症反应。方法体外培养THP-1,设立:1)空白对照组（等量磷酸盐缓冲液）;2)miR-33 mimics转染对照组（转染模拟miR-33 mimics）;3)miR-33 mimics转染组（转染miR-33 mimics）;4)miR-33 inhibitor转染对照组（转染模拟miR-33 inhibitor）;5)miR-33 inhibitor转染组（转染miR-33 inhibitor）。采用10.0 ng·mL-1 LPS刺激各组细胞24 h;实时荧光定量PCR法检测细胞miR-33表达;Western印迹法检测细胞NRIP1蛋白表达;ELISA法检测细胞TNF-α、IL-6含量。结果 miR-33 mimics转染组细胞NRIP1蛋白表达显著减少,TNF-α、IL-6分泌也显著降低（P<0.05）;miR-33 inhibitor转染组细胞NRIP1蛋白表达显著增加,TNF-α、IL-6含量也显著增加（P<0.05）。结论 miR-33可能通过下调NRIP1而抑制单核细胞TNF-α、IL-6产生负性调节炎症反应。     

miR-98靶向EZH2调控下咽癌细胞转移及其上皮-间充质转化的作用机制研究

目的 探讨miR-98在下咽癌Fadu细胞中的表达及其调控癌细胞转移及其上皮-间充质转化（EMT）的作用机制。方法 收集我院2016年10月~2021年1月临床确诊下咽癌患者的35例下咽癌组织及其28例癌旁正常组织,利用实时荧光定量PCR检测miR-98、EZH2其mRNA表达。通过转染技术下调miR-98表达,分别利用CCK-8法、Transwell和Western blot实验检测人下咽癌Fadu细胞的增殖、侵袭和上皮-间质质转化能力。通过生物信息学软件TargetScan分析miR-98的下游调控靶点,双荧光素酶报告基因实验进一步检测miR-98和EZH2之间的关系。通过转染技术下调EZH2表达,分析下调EZH2对Fadu细胞增殖、侵袭和EMT的影响。同时上调miR-98与EZH2表达,检测过表达miR-98通过EZH2对Fadu细胞转移及EMT的影响。下调或过表达EZH2后,Western blot检测Fadu细胞内JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白表达量。利用抑制剂AG490作用Fadu细胞,通过转染技术上调EZH2表达,检测Fadu细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果 与癌旁正常组织相比,下咽癌组织中miR-98表达明显降低（P<0.01）,EZH2表达明显上升（P<0.01）。下调miR-98促进了Fadu细胞的增殖、侵袭与EMT;miR-98靶向EZH2,和EZH2具有负调控关系;上调miR-98通过EZH2抑制了Fadu细胞的增殖、侵袭与EMT;下调EZH2抑制了Fadu细胞转移和EMT;上调EZH2激活了Fadu细胞内JAK/STAT3通路,且抑制剂AG490作用Fadu细胞能明显抑制过表达EZH2对Fadu细胞增殖、侵袭和EMT的上调作用。结论 miR-98靶向EZH2激活JAK/STAT3通路调控下咽癌细胞转移及其上皮-间充质转化。     

人前列腺不同生长发育期雄激素受体表达变化

目的检测雄激素受体(AR)在人前列腺不同生长发育时期表达的变化,探讨它们变化的病理意义。方法采用免疫组化两步法检测10例胎儿前列腺(EP)、10例正常前列腺(NP)、20例前列腺增生(BPH)、20例雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)和15例激素非依赖性前列腺癌(AIPC)组织的AR表达。结果 EP细胞浆和细胞核均有AR表达,且间质细胞AR表达先于腺上皮AR表达。NP组织的AR表达主要集中在上皮细胞核,与EP相比,基底细胞和间质细胞AR表达明显减少,而BPH组织的腺上皮细胞和间质细胞均有AR的较强表达。AR在前列腺癌(Pca)的表达位于癌细胞核,AIPC的AR表达比ADPC明显增强。结论 AR表达的变化与人前列腺不同生长发育时期和前列腺癌的发生发展密切相关。     

Androgen receptor functioned as a suppressor in the prostate cancer cell line PC3 in vitro and in vivo

Background Prostate cancer is one of the most common urogenital tumors in the world with an increasing incidence in China. Androgen deprivation therapy is the major therapeutic option for advanced prostate cancer. However, the role of androgen receptor （AR） in hormone-refractory prostate cancer still remains unclear. This work aimed to investigate the role of AR in an androgen independent prostate cancer cell line by in vitro and in vivo studies.
Methods The role of AR in the proliferation and invasion/metastasis ability of PC3-AR9 （a PC3 stable clone expressing human AR driven by natural human AR promoter） were examined with M-IF assay, soft agar assay, chamber invasion assay, wound healing assay, and also with orthotopic xenograft mouse model. Results Restoring androgen receptor in PC3 cells resulted in decreased proliferation and invasion/metastasis ability in MTT, soft agar, chamber invasion and wound healing assay. In the mouse orthotopic xenograft model, PC3-AR9 resulted in smaller primary tumors and metastasis tumors, with a lower proliferation rate and higher apoptosis rate.
Conclusion The AR might function as a tumor suppressor in PC3 cells both in vitro and in vivo.     

Expression change of nuclear receptor corepressor （NCoR） in androgen independence prostate cancer and its clinical significance

Objective：To explore the expression of nuclear receptor corepressor （NCoR） in androgen independence prostate cancer （AIPC） and its clinical significance. Methods：The expression of NCoR and androgen receptor （AR） in prostatie tissues, from 15 cases with AIPC, 20 cases with androgen dependence prostate cancer （ADPC） and 20 cases with benign prostatic hyperplasia （BPH）, was detected by immunohistoehemistry respectively. Results：The expression of NCoR was observed mainly in the nucleus and slightly in the nucleus. The positive cell percentage of NCoR in AIPC was significantly lower than that in ADPC and BPH （P〈0. 01）. The NCoR expression was significantly lower in low differentiation prostate cancer （Pca） than that in high differentiation Pca （P〈0. 05）. The rate of NCoR expression was significantly higher in low stage Pca than that in high stage Pca （P〈0. 05）. AR, expressing in the nucleus, was found to be negative in one case of AIPC, while was strongly expressed in other cases of AIPC, and all eases of ADPC and BPH. Conclusion： The transition to AIPC of Pea may be correlated with the decrease of NCoR protein.     

去除雄激素对前列腺癌中凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-XL表达的影响

目的：探讨去除雄激素对人前列腺癌（PCa)细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达的影响。方法：采用雄激素依赖PCa细胞株LNCaP为研究对象,雄激素非依赖PCa细胞株PC－3为对照;以Western印迹法检测去除雄激素后Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达。结果：在LNCaP中去除雄激素12h后Bcl-2蛋白的表达开始升高,到24h最明显,而去除雄激素10h后Bcl-XL蛋白表达开始降低,在24h达最低,而在PC－3中去除雄激素前后未见Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达改变,结论：去除雄激素可促PCa细胞中Bcl-XL蛋白表达降低,可能是手术或药物去势治疗前列腺癌的机制之一,Bcl-2蛋白的表达升高可能和后期PCa雄激素非依赖性生长有关。     

前列腺癌根治术后HMGB1表达的意义

目的调查HMGB1在人类前列腺癌细胞链中的表达及对前列腺癌根治术预后的影响。方法通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测前列腺癌细胞株DU-145、PC-3以及LNCaP和正常前列腺细胞株RWPE-1中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平。免疫组化法测定168例前列腺癌患者标本中的HM GB1蛋白表达水平。比较前列腺癌患者中HMGB1表达阳性和阴性组间的临床指标。探讨HMGB1蛋白的表达是否可以预测前列腺癌根治术后患者生化复发的危险性。结果三个前列腺癌细胞株DU-145、PC-3以及LNCaP与正常前列腺细胞株RWPE-1相比较,HM GB1的mRNA和蛋白表达水平都较高。前列腺癌根治术后患者的HM GB1蛋白表达阳性比率为60.1%（101/168）。标本中HMGB1蛋白表达阳性与患者的病理分期、Gleason评分、术前PSA和生化复发等因素相关。前列腺癌患者中HMGB1蛋白表达阳性相比于阴性其无生化复发生存时间较短（23.1 months vs.15.6 months）（P〈0.001）。HM GB1蛋白表达可以预测前列腺癌根治术后患者无生化复发的生存时间（hazard ratio=2.348,95%CI=1.373,6.361,P=0.001）。结论前列腺癌细胞株中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平都较高,可能和前列腺癌的发病有关,可能作为一种新的瘤标预测前列腺癌根治术后生化复发的危险性。     

NKX3.1与PTEN在前列腺癌组织表达及NKX3.1转染对PC3细胞效应的研究

目的 探讨前列腺癌组织中前列腺特异性同源框基因NKX3.1及抑癌基因PTEN(MMAC1/TEPI)蛋白的表达，相关性及意义；NKX3．1对其表达缺失株前列腺癌PC3细胞生长的影响效应。方法 对30例前列腺腺癌，1例前列腺肉瘤。10良性前列腺增生(BPH)进行组织X3．1与PFEN蛋白表达的免疫组化研究；稳定转染PC3细胞，研究NKX3．1对PC3细胞形态、细胞周期、增殖速率等影响。结果 (1)31例前列腺恶性肿瘤组织NKX3．1蛋白阳性表达率48．39％，PTEN蛋白阳性表达率29．03，良性前列腺增生中分别为70％、50％；未发现NKX3．1蛋白表达强度与PTEN蛋白表达存在相关性；(2)稳定转染NKX3．1基因的PC3细胞形态明显改变。细胞从G1期到S期发生抑制，MTT检测示细胞增殖活性明显降低。提示转染外源性NKX3．1基因可阻滞PC3细胞由G1期进入S期，并抑制肿瘤细胞增殖。结论 NKX3．1与PTEN基因失活在前列腺肿瘤发病中有重要作用，NKX3．1对其表达缺失的雄激素非依赖性细胞株PC3有生长抑制效应。     

尿液中miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p检测在前列腺癌中的诊断及临床意义

目的:建立尿液miRNA检测板,作为诊断前列腺癌（PC）的无创性生物标志物。方法:采用miRNAs芯片分析对照1组（6名）及PC1组（18例）中miRNAs表达,并进一步利用qRT-PCR对20名对照2组及59例PC2组（GS2 6组22例,GS2 7组19例,GS28组18例）尿液、血清标本进行差异基因的进一步验证。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析组合诊断模型的准确真实性。结果:获得在PC1组中20个miRNAs差异表达谱,与对照1组相比,miRNA-24-3p及miRNA-222-3p显著表达下调（T=5.79、4.59,均P＜0.05）,用于PC诊断检测。在扩大样本量的PC患者尿液及血清样本中,根据GS分组的GS26、GS27及GS28组中,与对照2组相比,miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p表达水平也都显著下调（t=3.89,P＜0.05）,ROC分析联合诊断模型具有较高的准确度（曲线下面积为0.93,OR=1.37,95% CI:0.92~1.76,P＝0.02）。结论:在尿液、血清样本中建立了miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p组合模型,可作为诊断PC的无创性生物标志物。     

pSilencer4.1-cmv-TrkC质粒对前列腺癌细胞株PC3增殖的影响

[目的]通过pSilencer4.1-cmv-TrkC siRNA干涉质粒转染下调人前列腺癌细胞系PC3中酪氨酸激酶受体C(tyrosine lcinase C,TrkC)的表达,观察TrkC在前列腺癌细胞中的作用.[方法]根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒.用脂质体将pSilencer/TrkC和对照空载体pSilencer转染人前列腺癌细胞系PC3,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测TrkC对细胞周期及凋亡的影响.[结果]成功利用脂质体转染PC3细胞后,Western blotting 鉴定结果显示:TrkC的表达水平显著降低,细胞生长曲线及流式细胞仪检测结果显示pSilencer4.1-cmv-TrkC脂质体转染的PC3细胞出现生长抑制及凋亡增加.[结论]下调TrkC表达可以抑制前列腺癌细胞PC3增殖,TrkC可能参与了前列腺癌的发生发展过程.