多株创伤弧菌的基因分型和药敏试验

目的 了解海产品中分离的创伤弧菌的基因分子流行病学特征和药敏试验结果,为进一步研究创伤弧菌和临床用药提供依据。 方法 以聚合酶链反应(PCR)方法对海产品中分离的创伤弧菌进行核酸检测与基因型分型,用ATB细菌鉴定仪配套的药敏卡对创伤弧菌进行药敏试验。 结果 海产品中分离的创伤弧菌均为溶血素A基因(vvhA)核酸阳性,vcgC/E和16S rRNA A/B分型结果显示,共有5种基因型别,分别为CB型、CAB型、EA型、CA型和EAB型。共检测出1株BT2核酸阳性,1株SerE核酸阳性。药敏试验显示,该菌对氨基糖苷类和头孢菌素类抗生素有耐药株。 结论 海产品中的创伤弧菌基因型呈多样性,以CB型为主,EAB型和CAB型同为国内首次报道的基因型。应加强对海产品中创伤弧菌的监测和耐药分析,预防创伤弧菌感染的暴发。     

腹泻样本中创伤弧菌的检测分析

目的 了解浙江省部分地区腹泻患者创伤弧菌的感染情况。 方法 对2010年6-10月采集的标本,经3%氯化钠碱性蛋白胨水于37 ℃增菌后,划线纤维二糖多粘菌素E平板于40 ℃培养18~24 h,挑取可疑菌落进行分子生物学鉴定。 结果 在144份腹泻患者粪便样本中检测分离到2株创伤弧菌,阳性率为1.39%(2/144);均为生物Ⅰ型,其基因型为vcgC/16S rRNA B型。药敏结果显示分离的创伤弧菌对氨基糖苷类抗生素耐药如阿米卡星、庆大霉素。 结论 在监测的腹泻样本中分离到具有较强致病能力的创伤弧菌,且氨基糖苷类抗生素耐药,应加强对海水产品和腹泻样本中创伤弧菌的检测及耐药分析,预防创伤弧菌的感染暴发。     

浙江省舟山市海产品中副溶血性弧菌的定量检测

目的　调查舟山市海产品中副溶血性弧菌（VP）的污染情况。方法　分3个季度，从舟山市不同的农贸市场采购鱼类、虾类等海产品作为检测对象，采用稀释培养计数（MPN）法对其中所含的VP进行定量检测，同时对分离到的VP进行毒力基因检测。结果　不同月份VP在鱼、虾等海产品中的含量呈明显的波动，分离到的33株VP中有2株副溶血性弧菌耐热溶血素阳性。结论　舟山市海产品中VP污染严重，应引起足够的重视。     

三起食物中毒来源副溶血弧菌毒力基因检测分析

目的分离3起食物中毒患者粪便及食物加工工具样本中的病原菌,对分离菌株进行表型和毒力基因鉴定。方法可疑病原菌的分离与鉴定按照国标GB/T 4789-2003和GB/T 4789.7-2008规定的方法进行;用PCR方法对检出的副溶血弧菌(IVibrioparahaemolyticus,/IVp)进行Vp种属特异基因(320 bp)和毒力基因Itdh/I( 耐热溶血素434 bp)、Itrh/I( 耐热相关溶血素250 bp) 检测;用环介导恒温扩增(LAMP)方法对分离株Itlh/I( 不耐热溶血素229 bp)基因进行检测。结果从3起食物中毒的患者、厨师粪便和食品加工环节共27件样品中检出7株Vp,其中加工环节熟食冷菜间刀具涂抹物中检出1株,患者粪便中检出6株。3起食物中毒7株菌血清型分属为O10∶K66、O2∶K3、O1∶K33, 每起食物中毒分离株的生物学性状、血清型和药敏试验结果均一致。7株Vp均产生神奈川现象（KP）、出现相同Vp种属特异基因条带、均检出Itlh/I毒力基因,但Itdh/I、Itrh/I基因则检测为阴性。结论3起食物中毒均为Itlh/I+/Itdh/I-/Itrh/I-不同血清型Vp污染引起。     

基于vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR快速检测创伤弧菌的研究

目的建立基于溶细胞毒素基因vvhA检测创伤弧菌（Vibrio vulnificus）的TaqMan实时荧光定量PCR。方法采用Primer Express软件,设计位于vvhA基因序列保守区的PCR引物和TaqMan探针,建立检测创伤弧菌vvhA基因100bp扩增产物的TaqMan实时荧光定量PCR。采用基因克隆技术,构建作为阳性对照的pMD19-vvhA100重组质粒。以最低扩增循环数（Ct值）、荧光强度增加值（△Rn）为观察指标,对vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR条件进行优化。以不同浓度的创伤弧菌及其它8种细菌DNA和pMD19-vvhA100为模板,对vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR的特异性、敏感性和重复性进行验证。创伤弧菌经腹腔和皮下注射及灌胃感染ICR小鼠,验证vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR对感染小鼠血液、皮下感染组织和肠内容物的检测效果。结果所建立的vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR仅对创伤弧菌DNA或pMD19-vvhA100呈现阳性检测结果,其检测灵敏度可达0．01ng创伤弧菌DNA或10^3个拷贝的pMD19-vvhA100,不同浓度pMD19-vvhA100三次检测结果的SD≤0．79,对腹腔和皮下感染创伤弧菌的小鼠血液、皮下组织标本检测结果均为阳性。结论所建立的创伤弧菌vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR具有快速、稳定、敏感、特异等优点,适合用于临床实验室进行创伤弧菌引起的败血症和创口感染快速诊断。     

一株死亡患者分离的致死创伤弧菌菌株的耐药表型与分子特征

目的 对培养分离的创伤弧菌菌株(2014-DJH)进行耐药表型与分子特征分析。方法 采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行生化鉴定和耐药分析;采用PCR方法检测vvhA基因和pilF基因,及vcg和16S rRNA基因分型;应用多位点序列分析进行分子分型。结果 分离菌株2014-DJH经生化鉴定为革兰阴性的生物1型创伤弧菌;对大多数常用抗生素都敏感,对妥布霉素中度敏感;PCR检测vvhA和pilF阳性,为vcgC-16S rRNA B(CB)基因型;菌株的多位点序列型为glp 5、gyrB 3、mdh 32、metG 68、purM 21、dtdS 39、lysA 115、pntA 4、pyrC 42、tnaA 75。结论 菌株2014-DJH为新ST型菌株,命名为ST 289,注册号为id-389。基因分型结果表明该菌具有较强的致病能力,加强创伤弧菌感染的监测与预警具有重要的意义。     

创伤弧菌所致败血症的报道

创伤弧菌所致败血症起病急,进展快,死亡率高,近年来已引起美国、韩国、日本等沿海国家和地区的重视。我国除浙江沿海一带陆续报道数起死亡病例外,其他地区少见。     

创伤弧菌所致败血症的报道

创伤弧菌所致败血症起病急,进展快,死亡率高,近年来已引起美国、韩国、日本等沿海国家和地区的重视。我国除浙江沿海一带陆续报道数起死亡病例外[1,2],其他地区少见。今午6月,我院连续发生2例创伤弧菌引起的败血症并导致患者死亡,引起临床医生和微生物实验室的高度重视。其主要     

创伤弧菌感染的流行病学及临床特点

创伤弧菌 (vibriovulnificus)为非霍乱弧菌 ,以前称贝内克菌属 (beneckeavulnifica) ,是嗜盐性海生G 杆菌属 ,Roland[1] 在1970年首先报道由创伤弧菌感染引起小腿坏疽和内毒素性休克。Hollis等[2 ] 在 1976年随后报道从血液中培养分离该细菌 ,并且鉴定为乳酸阴性嗜盐弧菌。 1979年Farmer[3] 将它再命名为创伤弧菌。从那时起 ,美国、荷兰、丹麦、西班牙、以色列、土耳其、我国台湾等一些沿海城市相继有创伤弧菌感染的临床报告。国外有关创伤弧菌感染的临床报道以及研究逐渐增多 ,然而 ,在国内大陆沿海关于创伤弧菌感染的病例报道十分罕见。…     

浙江省宁波地区腹泻患者中副溶血性弧菌检测与分析

目的 了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)携带、消长情况,建立分子溯源方法,发现流行优势型,分析疾病诱发因素,为控制副溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。 方法 腹泻患者中副溶血性弧菌分离采用筛检法;采用API生化鉴定系统进行菌株鉴定;用血清凝集试验对菌株进行血清分群;药敏试验采用K-B法;利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细菌毒力基因。 结果 从6216份腹泻患者标本中检出副溶血性弧菌901株,占检出致病菌的63.45%。副溶血性弧菌生物学性状典型,对氨苄西林等青霉素类抗生素的耐药率高,但对其他大多数抗生素敏感。480株副溶血性弧菌分成6个血清群,O∶3血清群占72.71%,为流行优势群。根据PFGE图谱带型变化可分为19个不同的型别,其中食物中毒来源的菌株PFGE带型集中。tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌396株,阳性率为70.71%;trh毒力基因阳性的副溶血性弧菌79株,阳性率为14.11%;tdh、trh毒力基因均阳性的副溶血性弧菌18株,阳性率为3.21%;tdh阳性的副溶血性弧菌中有365株神奈川试验阳性,占73.14%。 结论 宁波地区腹泻患者由副溶血性弧菌引起的比例较高,O3血清群为优势血清群。PFGE分型方法准确性、特异性高、重复性好、结果容易判读,分型效果更为明显,食物中毒来源的菌株带型集中,可用于确定菌株间的聚集性关系,提示传染源和传播途径,明确食物中毒是否为同一起暴发事件。患者中分离到的副溶血性弧菌大多数为带毒株,具有致病能力,与海产品和环境株不同,可用-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素作为临床治疗用药。     

Atypical manifestation of Vibrio vulnificus septicaemia

Vibrio vulnificus is a Gram‐negative marine bacterium that may cause local wound infection, gastroenteritis, or septicaemia. Fatal septicaemia usually presents with fever, shock, and large haemorrhagic bullae on the legs. This report is about a man who had severe V. vulnificus septicaemia but presented with atypical features of leg pain and diffuse purpuric skin lesions. V. vulnificus septicaemia should be suspected if the following are present: septic shock, leg pains associated with diffuse purpuric skin lesions, recent consumption of raw seafood, and a past medical history of liver cirrhosis.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝细胞Fas mRNA表达的动态变化研究

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV) 脓毒症时肝细胞Fas mRNA表达量的动态变化情况。 方法制作大鼠VV 脓毒症模型(VV 组), RT-PCR法测定染菌后各时间点大鼠肝细胞Fas mRNA表达量。结果VV模型组感染创伤弧菌后大鼠肝细胞Fas mRNA其表达量明显增加 (P﹤0.05)，染菌后2 h、6 h的表达量最高，9 h后开始降低，但在染菌16 h的表达量仍明显高于正常对照组(P﹤0.05)。结论VV脓毒症可致肝组织中Fas mRNA表达量增加，早期明显增高，并持续维持在高水平。     

创伤弧菌脓毒症患者的预后影响因素分析

目的:探讨创伤弧菌脓毒症患者的预后影响因素。方法:回顾性分析温州医科大学附属第一医院2008年1月至2019年12月67例创伤弧菌脓毒症患者的病例资料,采用单因素分析比较死亡组和治愈组在一般资料、临床表现、入院实验室指标、抗菌药物和外科手术的差异。然后将单因素分析差异有统计学意义的指标纳入多因素分析,最终得出影响患者预...     

Sensitively and quickly detecting Vibrio vulnificus by real time recombinase polymerase amplification targeted to vvhA gene

Vibrio vulnificus (V. vulnificus) is a Gram-negative bacterium living in warm and salty water. This marine bacterium could produce hemolysin (VVH), which often causes serious gastroenteritis or septicemia when people contact to seawater or seafood containing V. vulnificus. Timely diagnosis is regard as essential to disease surveillance. In this paper, we aimed at developing a quick and sensitive method for the detection of Vibrio vulnificus using real time recombinase polymerase amplification (real time RPA). Specific primers and an exo probe were designed on the basis of the vvhA gene sequence available in GenBank. Target DNA could be amplified and labeled with specific fluorophore within 20 min at 38 °C. The method exhibited a high specificity, only detecting Vibrio vulnificus and not showing cross-reaction with other bacteria. The sensitivity of this method was 2 pg per reaction (20 μL) for DNA, or 200 copies per reaction (20 μL) for standard plasmid. The detection limit (LOD) stated as the target level that would be detected 95% of the time and estimated was 1.58 × 10² copies by fit of the probit to the results of 8 replicates in different concentration. For quantitative analysis of the real time RPA, the second order polynomial regression was adopted in our study. The results showed the correlation coefficients were raised above 0.98, which suggested this model might be a better choice for the quantitative analysis of real time RPA compared to the routine linear regression model. For artificially contaminated plasma samples, Vibrio vulnificus could be detected within 16 min by real time RPA at concentration as low as 1.2 × 10² CFU/mL or 2.4 CFU per reaction (20 μL). Thus, the real time RPA method established in this study shows great potential for detecting Vibrio vulnificus in the research laboratory and disease diagnosis.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达的动态变化研究

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症时肝细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达量的动态变化情况。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组),RT-PCR法测定染菌后各时间点大鼠肝细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达量。结果感染创伤弧菌后大鼠肝细胞Bcl-2 mRNA表达量明显下降(P﹤0.05);Bax mRNA其表达量明显增加(P﹤0.05),染菌后2 h明显增高,在染菌16 h的表达量仍明显高于正常水平(P﹤0.05)。结论创伤弧菌脓毒症可致肝组织中Bcl-2 mRNA表达量下降,Bax mRNA表达量增加,早期明显增高,并持续维持在高水平。     

酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症凝血因子的动态变化

目的探讨酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症凝血因子的变化及意义。方法制作酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型,观察脓毒症组大鼠在染菌后2、6、12、24 h各时间点脓毒症表现,并检测各时间点大鼠血浆FIG、AT:A、tPA、PAI-1水平。结果脓毒症组大鼠染菌后6 h开始出现较明显的毒血症状,并随时间的延长而加剧,24 h达高峰,濒临死亡。脓毒症组大鼠血浆FIG在染菌后呈进行性升高,6 h始明显高于正常对照N组及酒精肝对照A5组(P<0.01),12 h达高峰,24 h FIG有下降趋势,但与12 h组相比,两者差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠AT:A在染菌后呈进行性下降,6 h即显著低于A5及N组(P均<0.01)。tPA在染菌后2 h第1次达高峰(P<0.05),下降至正常水平后于24 h再次显著升高(P<0.01),PAI-1于2 h显著升高(P<0.01),而tPA/PAI值2 h显著降低,24 h显著高于对照组(P均<0.05)。结论酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症早期即可出现明显的凝血紊乱,动态检测FIG、AT:A、tPA、PAI-1水平可反映创伤弧菌脓毒症病情严重程度。