免疫组化技术中抗原修复的应用

目的:本实验通过比较几种不同抗原修复技术在免疫组化中的应用效果,寻求提高不同抗体表达的最佳修复方法.方法:选取32种抗体标记理论上阳性的组织,每种抗体均分别采用不修复及胰蛋白酶、微波炉、胰蛋白酶加微波炉修复.结果:不进行抗原修复有20种抗体阴性,单独胰蛋白酶及微波炉修复分别有6种抗体阴性,胰蛋白酶加微波炉修复全部抗体转阳,并有14种抗体提高了一个( ).结论:抗原修复是必要的,单独应用一种方法修复时,每种抗体表现出不同的敏感程度,联合应用修复技术可提高抗原检出率及染色强度.     

不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用

目的:选择最适宜的抗原修复法.方法:在免疫组织化学染色中,选用鼠抗人5种单克隆抗体,用不同的抗原修复法,对不同染毒剂量、正常对照暴露大脑皮质及海马,石蜡组织切片,依阳性颗粒表达的情况,确定适宜的抗原修复.结果:抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露,高压加热法能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复,使免疫组化的结果更准确可靠,特别是核阳性组织,适用于高压加热法;电炉煮沸法,阳性结果不佳;酶消化抗原修复法,与高压锅加热抗原修复法的阳性结果无区别.结论:核阳性表达的抗体应选用高压锅抗原修复法,推测核阳性表达的抗体也适用于酶消化抗原修复法.     

抗原修复技术方法的应用比较

目的 探讨关于组织抗原修复技术不同的方法在应用中的比较。方法 运用微波炉，高压锅的胰蛋白酶法及柠檬酸盐，EDTA两种缓冲液进行抗原修复，比较了40种抗体的免疫组化染色在不同技术条件下的应用效果。结果 40种抗体中，25种抗体由不处理的（＋）或（－）提高到（＋＋），6种抗原提高到（＋＋＋），微波和高压锅结果相同的有26种，高压加热较微波提高了一个（＋）的有12种。结论 在实际工作中运用不同的抗原修复技术能极大地改善免疫组化结果，提高难以检测的细胞内，细胞核的抗原检出率，缓冲液的使用是关键。     

高压锅和微波炉加热抗原修复方法的比较

免疫组化技术广泛应用于肿瘤病理诊断,其抗原的妥善保存及其恢复是免疫组化染色成败的关键.由于日常工作中所使用的10%福尔马林固定的石蜡包埋组织常产生蛋白交联反应,引起许多抗原决定簇被封闭,因此导致免疫组化染色呈假阴性或表达微弱的结果.要充分暴露抗原决定簇,采用微波炉和高压锅抗原修复是当前常用的方法[1,2].我们比较了两种抗原修复的方法对20种抗体免疫组化标记结果的影响,现总结报告如下.     

抗原修复技术与卵巢癌肿瘤标志物免疫组化染色结果分析

目的了解抗原修复对免疫组化染色结果的影响,分析抗原修复后免疫组化染色P53蛋白和CA-125阳性率的关系。方法卵巢癌标本93例,其中浆液性腺癌47例,黏液性腺癌39例。子宫内膜样癌5例,未分化癌2例,采用高温高压法进行抗原修复,免疫组化Envision法染色检测P53蛋白和CA-125的表达。结果抗原修复后切片背景干净,显色对比鲜明,结构清晰,定位准确,易于观察,P53蛋白阳性率（66．7％比48．4％）和CA-125阳性率（58．1％比40．O％）均高于未修复组,有显著性差异（P〈0．05）。结论抗原修复技术对提高卵巢癌免疫组化染色质量有一定提高。     

两种LsAB染色标记方法及其抗原修复方法的比较

目的 比较两种标记生物素链亲和素法(LsAB),并探讨抗原修复的最佳方法。方法 采用碱性磷酸酶(AP)LsAB法和辣根过氧化物酶(HRP)LsAB法染色肺癌合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织石蜡切片中类胰蛋白酶(tryptase)的抗肥大细胞类胰蛋白酶抗体(AA1,小鼠抗人),并比较染色效果;用高压、胰蛋白酶和微波三种方法进行抗原修复,比较修复效果。结果 AP-LsAB法染色比HRP-LsAB法背景清晰、颜色对比鲜明;高压修复效果优于胰蛋白酶和微波修复。结论 在肺组织免疫组化染色中推荐使用AP-LsAB法,并采用高压修复抗原。     

抗原修复液pH值和抗体浓度对免疫组织化学技术检测PD-L2染色结果的影响

目的:探讨不同浓度抗体和不同pH值的抗原修复液对免疫组织化学反应结果的影响,以提高免疫组织化学染色阳性率.方法:采用3种不同抗体浓度作预处理后,分别在pH值6.0和pH值9.0条件下,进行免疫组织化学SP法检测PD-L2分子在食管磷状细胞癌组织中的免疫组织化学染色效果.结果:PD-L2抗体稀释浓度1∶400的免疫组化染色效果优于抗体浓度1∶800;pH值9.0的抗原修复液处理后的免疫组化染色效果优于pH值6.0的抗原修复.结论:PD-L2抗体稀释浓度1∶400,pH值9.0抗原修复液处理后的免疫组化染色效果最佳,既可提高免疫组织化学反应阳性表达率,又能提高制片质量,是理想的检测PD-L2分子免疫组织化学反应的优化方案.     

高压锅抗原修复与否癌基因蛋白表达的对比定量分析

目的　探讨高压锅抗原修复对P5 3、rasP2 1、PCNA 3种癌基因蛋白免疫组化染色的影响 ,以及不同的附贴剂和封闭用H2 O2 对免疫组化阳性率的影响。方法　利用计算机图像处理系统对高压锅进行抗原修复与不修复免疫组化染色进行对比定量分析并进行统计学处理。结果　对抗原修复与否具有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　经高压锅抗原修复可以有效的提高 3种癌基因蛋白阳性表达率和阳性表达强度。     

抗原修复对乳腺癌组织中雌激素受体与孕激素受体和C-erbB-2蛋白表达的影响

目的:探讨使乳腺癌组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和C-erbB-2蛋白在免疫组化中获得最佳效果的抗原修复条件。方法:对100例乳腺浸润性导管癌石蜡标本分别采用高压抗原修复和微波抗原修复法在不同的修复液、不同的时间检测ER、PR和C-erbB-2蛋白的表达,比较和观察它们各自的最优修复条件。结果:高压修复时,ER和PR最适的条件是采用pH值8.0的EDTA修复液煮沸喷气后持续5min,其染色的背景清晰,无非特异性着色。微波修复ER和PR最适的条件是采用pH值8.0的EDTA修复液15min,其染色的背景不清,有非特异性着色。而在高压和微波修复时C-erbB-2蛋白阳性表达率和表达强度的时间最适的条件是分别采用pH值6.0的枸橼酸盐修复液(CA)5min和10min。结论:高压抗原修复法在乳腺癌组织ER、PR和C-erbB-2蛋白阳性表达率、表达强度、背景和非特异性着色等方面均优于微波修复。高压抗原修复法是一种理想有效的抗原修复法,值得推广应用。     

不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响

目的探讨不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响。方法将10种不同的单克隆抗体在7组不同抗原修复条件下,在同一实验条件、同一时间内运用EliVision免疫组化法进行实验。结果ER、PR、CD3、Bcl-2用pH9.0Tris-EDTA热修复表达效果好;C-erbB-2、PSA、CD117用10mmol/LpH6.0柠檬酸盐缓冲液热修复效果好;CK用0.125%胰蛋白酶修复表达效果好;CD34修复后表达过强;ER、PR、CD3、Bcl-2、C-erbB-2、PSA、CD117用水浴热修复的表达效果均优于微波热修复法。结论免疫组化的染色质量受不同抗原修复方法的影响。掌握抗体最佳的修复方法能极大提高免疫组化结果的阳性率及准确率。     

固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响

目的 :研究固定液pH值和抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响。方法 :取正常皮肤、胃粘膜、子宫肌瘤、乳腺癌组织 ,分别用 pH值 3.0 ,5 .0 ,7.0 ,8.0 ,10 .0的缓冲福尔马林固定液固定。选用EMA、SMA、ER、CK(AE1/AE3 )为一抗 ,Evinsion二步法免疫组化染色。染色时分别用 pH值 6 .0 ,7.0 ,8.0的抗原修复液或用市售pH值 8.0的EDTA作微波抗原修复。结果 :不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化 ,本实验得知CK (AE1/AE3 )、ER是以阳性细胞数目改变为主 ,SMA、EMA是以染色强度改变为主。结论 :(1)使用 10 %中性或微碱性缓冲福尔马林固定液 ,固定效果最佳。 (2 )本实验所用的 4种组织 ,抗原修复液选择pH值 7.0、8.0均优于 pH值6 .0 ,皮肤组织选择EDTA(pH值 8.0 ) ,雌激素受体选择 pH值 8.0时染色效果最佳。 (3)固定液pH值 >8.0容易造成背景染色 ,修复液 >8.0影响切片附着 ,造成脱片     

ER、PR免疫组化染色抗原修复方法探讨

目的 探讨检测ER、PR的最佳抗原修复方法.方法 微波抗原修复和高压加热抗原修复法在不同pH值的缓冲液中对40例乳腺癌组织进行抗原修复,检测ER、PR受体,显微镜观察结果.结果 高压加热高pH值缓冲液抗原修复法在乳腺癌组织ER、PR受体检测中阳性定位准确,着色强度增强,降低免疫组化背景着色.结论 用高压加热高pH值缓冲液进行ER、PR抗原修复免疫组化染色效果最佳.     

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白1表达影响的实验研究

目的观察桥粒芯糖蛋白1（Desmogleinl,Dsg1）在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法用Dsg1抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H．E染色观察皮肤的组织结构变化。结果与新鲜皮片组相比,-196℃条件下皮肤组织结构保存较好,Dsg1含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论皮肤低温保存冷冻损伤可能与桥粒跨膜蛋白Dsg1破坏有关。     

热抗原修复方法的比较

目的 研究免疫组化技术中3种抗原加热修复方法的效果。方法 用免疫组化SABC法检测五种单克隆抗体，分别使用水煮法、微波法、高压法修复抗原，从中选出最佳修复方法。结果 单克隆抗体BCL-2，BAY，P53，BDNF，VEGF、在2种修复液中显色结果相同或相似，而高压法明显优于微波法及水煮法；P53在Tris-EDTA(pH9．0)修复液中效果明显优于柠檬酸盐缓冲液(pH6．0)。结论 Tris-EDTA(pH9．0)高压法的实验重现性与染色强度均优于微波法及水煮法。     

家用微波炉及金属溶液在恢复陈旧石蜡包埋组织抗原性中的应用

应用家用微波炉及饱和硫氰酸铅溶液对３５倒不同陈旧性甲醛固定石蜡包埋组织切片进行免疫组化染色，其中间叶性恶性肿瘤组织５例，流行性出血热肺、肾上腺、甲状腺组织各１０例，分别使用Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ、Ｃ１同相应组织中的抗原反应，同时与常规免疫组化进行对照。结果表明：改良的免疫组化法与常规免疫组化法相比，不需要酶的消化处理，阳性染色强度大，范围广。提示，应用微波炉及金属槽液能促使陈旧性石蜡包埋组织中抗原的恢复，其染色效果明显优于常规酶液处理之方法。     

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响

目的:观察桥粒芯糖蛋白2(desmoglein2,Dsg2)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用Dsg2抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃温度条件下保存皮肤组织结构保存较好,Dsg2含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤可能与Dsg2破坏有关。     

高压锅抗原修复法在免疫组化染色中的应用

免疫组织化学染色技术的出现 ,是病理学发展史上的一次革命。免疫组织化学特异性高、简便易行 ,无论在临床病理诊断 ,还是病理研究领域 ,都起着十分重要的、不可缺少的作用。但日常工作中所使用的 10 %福尔马林固定的石蜡包埋组织常产生蛋白交联反应 ,遮蔽了组织内某些蛋白抗原 ,使抗体不能与抗原结合 ,导致免疫组化染色呈假阴性结果 ,影响了病理诊断的结果及科研的结论。微波加热辅射修复经 10 %福尔马林固定标本的抗原 ,提高免疫组化的染色敏感性的方法已得到证实[1] ,但微波加热修复抗原法 ,常会出现染色结果不一致 ,稳定性差且一次处理…     

抗原修复间接法不同修复时间的效果比较

目的 探讨抗原修复间接法在不同修复时间内的修复效果.方法 采用不同修复时间的间接法对同一组织进行抗原修复,检测15种常用抗体的染色效果并和直接法比较.结果 抗原修复间接法在不同修复时间修复效果存在差异.结论 选择合适的修复时间对抗原进行间接法修复能达到理想效果,可在临床和科研中应用.     

微波抗原修复法在乳腺癌组织雌、孕激素受体检测中的应用

目的 探讨微波抗原修复法在乳腺癌组织雌、孕激素受体检测中的作用。方法 对100例乳腺癌组织进行抗原修复未进行抗原修复检测雌、孕激素受体，显微镜观察。结果 微波抗原修复法在乳腺癌组织雌、孕激素受体检测中可明显提高雌、孕激素受体的阳性率，降低免疫组化染色背景。结论 微波抗原修复法是一种理想有效的抗原修复法，值得推广应用。     

不同热修复抗原方法与胰腺导管腺癌分子标记物CD105免疫组化方法的研究

目的探讨不同热抗原修复方法与CD105染色阳性率的关系。方法病理切片进行不同热抗原修复方法的免疫组化染色。结果免疫组化染色结果显示,热修复能量越高,CD105阳性率越好,但同时非特异性染色的情况会极具增加,使得结果可信度降低;而低能量的热抗原修复会使得染色效果不好。结论对于CD105的染色来说,高温高压抗原修复2分钟,或者普通高温抗原修复6分钟,都能使得抗体特异性和灵敏度达到理想的效果。