Ag85B真核表达载体的构建及其生物活性的研究

目的:研究Ag85B蛋白促PPD 人外周血单个核细胞的增殖活性。方法:用PCR技术扩增Ag85B基因,构建重组pcDNA3-Ag85B,并将其转染B16细胞株,用RT-PCR鉴定阳性细胞克隆,用Westernblotting鉴定其在阳性细胞克隆内的表达,用3H-TdR掺入法来检测Ag85B的促增殖活性。结果:获得了阳性B16细胞克隆,并鉴定在阳性细胞克隆内有Ag85B成熟蛋白表达;此阳性细胞克隆对PPD 人的PBMC具有较明显地促PBMC增殖活性。结论:转染了pcDNA3-Ag85B的B16阳性细胞克隆对PPD 人的PBMC具有较明显地促PBMC增殖活性,为Ag85B诱发抗肿瘤免疫应答及其机制的研究奠定了基础。     

紫外线所致皮肤鳞状细胞癌小鼠模型的建立

目的 应用日光模拟器模拟日光照射SKH-1无毛小鼠,建立皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）动物模型,探讨其生物学特性。方法 将91只SKH-1无毛小鼠随机分成7个实验组（每组10只）和7个对照组（每组3只）。实验组每天给予红斑量日光紫外线照射,对照组不做任何处理;在第4、8、12、16、20、24、28周分别处死小鼠行病理检查。实验过程中观察小鼠一般状态和照射区域皮肤变化,分析各期小鼠皮损特点及组织学变化。结果 10周后实验组部分小鼠陆续出现直径≥1 mm的丘疹,紫外线照射20周开始实验组剩余小鼠中39.3%出现肿瘤（11/28）,照射28周后成瘤率达100%（10/10）,累计UVB剂量约为26.99 J/cm2,UVA剂量约为242.91 J/cm2。对照组未见肿瘤形成。照射各时期组病理显示,12周30%、16周33.3%、20周60%、24周87%、28周100%的小鼠具有鳞癌特征。结论 紫外线照射可诱导SKH-1无毛小鼠皮肤组织增生,并随照射时间延长产生皮肤鳞癌。     

钙网蛋白基因120片段和人乳头瘤病毒6bE7基因诱导的小鼠细胞免疫反应

目的研究嵌合DNA疫苗钙网蛋白基因120片段(CRT120)和人乳头瘤病毒6b型E7基因(HPV6bE7)的免疫学特性。方法克隆、构建重组质粒即嵌合DNA疫苗pcDNA3．1-GFP-CRT120／ HPV6bE7、pcDNA3．1-GFP-HPV6bE7、pcDNA3．1-GFP-CRT120;经脂质体转染获得HPV6bE7转染阳性 B16细胞株;用肌内注射法对C57BL/6小鼠进行重组质粒DNA疫苗免疫;检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群变化、小鼠脾细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性以及与靶细胞共孵育后白介素2和干扰素γ的分泌水平。结果获得构建正确的嵌合DNA疫苗pcDNA3．1-GFP-CRT120／HPV6bE7以及稳定表达HPV6bE7 的阳性细胞株。CRT120／HPV6bE7较之HPV6bE7能引起免疫小鼠外周血中CD8 T淋巴细胞亚群分化和 TCRγδ T细胞上调(P<0．05),脾淋巴细胞与靶细胞共孵育上清液中白介素2和干扰素γ的浓度也明显高于HPV6bE7和CRT120组(P<0．05);CRT120／HPV6bE7免疫的小鼠淋巴细胞对靶细胞B16／HPV6bE7 有明显的杀伤活性。结论 CRT120／HPV6bE7嵌合DNA疫苗能够诱导免疫小鼠的病毒抗原特异性细胞免疫。     

益气败毒汤对B16黑素瘤肿瘤转移抑制基因表达的影响

目的观察益气败毒汤对B16黑素瘤小鼠肿瘤肺转移及肿瘤转移抑制基因表达的影响。方法将60只C57BL/6近交系小鼠分为3组,每组20只,均予B16黑素瘤细胞经尾静脉注射,建立B16黑素瘤小鼠肺转移模型。分别设益气败毒汤56g生药/kg组、环磷酰胺(CTX20mg/kg,连用3天)组和生理盐水对照组,3组均连续胃管给药20天,停药次日经股动脉放血处死,压片法计数肺组织肿瘤转移灶,免疫组化法观察肿瘤组织中肿瘤转移抑制基因nm23和E-cad-herin的表达,ELISA法检测治疗后小鼠血清中S100B蛋白的变化。结果CTX组小鼠肺转移的肿瘤数为52±22个,益气败素汤组为79±20个,生理盐水组为108±26个,与生理盐水对照组相比,益气败毒汤治疗组小鼠肺转移的肿瘤数明显减少,差异有统计学意义(t=3.89,P<0.05);CTX及益气败毒汤经胃管给药治疗后,小鼠肺肿瘤组织中肿瘤转移抑制基因nm23的表达强度明显增强,差异亦均有统计学意义(P均<0.05),但CTX组和益气败毒汤组间nm23表达强度比较,差异无统计学意义(P>0.05);而E-cadherin在所有组织中均不表达;与生理盐水对照组相比,CTX和益气败毒汤经胃管给药治疗后,小鼠血清中S100B蛋白的值虽有所减少,但差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论益气败毒汤具有抑制B16小鼠黑素瘤肺转移的作用,其分子机制可能与调节nm23基因的表达有关。     

皮肤肿瘤

20 0 0 1880　围冷冻手术期施行免疫疗法的抗肿瘤作用/张保宁 (中国协和医大肿瘤研究所肿瘤医院 )…∥中华肿瘤杂志 .- 1999,2 1( 6) .- 4 2 7～ 4 2 9将接种黑色素瘤 B16的荷瘤小鼠 C57BL/ 6随机分为冷冻免疫治疗组 (实验组 )、冷冻对照组、免疫对照组、盐水对照组。实验组冷冻手术期 ,去除免疫抑制 ,配合生物免疫治疗 ,强化抗肿瘤免疫作用 ;其他 3个对照组分别进行冷冻、免疫治疗、注射生理盐水。结果 :肿瘤接种后第 35天 ,实验组原肿瘤部位组织切片经光镜、电镜检查均未见肿瘤细胞 ,疗效明显优于其他各组 ( P<0 .0 5)。提示单纯冷冻或…     

羊胚素对小鼠黑色素瘤生长抑制作用的研究

目的 研究羊胚素对黑色素瘤生长的影响.方法 选择C57BL/ 6小鼠20只,皮下接种小鼠黑色素瘤细胞B16,随机均分成2组：给药组（接种当天开始每天腹腔注射羊胚素0.15 mg连续17 d）和对照组（不作处理）.试验期间2次/d观察肿瘤生长情况,1次/3 d称量体重、测量肿瘤大小.结果 接种后第4 d、7d、10 d、13 d,给药组分别有2、7、9、10只动物有肿瘤长出,对照组分别有1、4、8、和10只大鼠有肿瘤长出.首次给药0～7 d,给药组动物平均瘤体积增长略快;首次给药后7～16 d,给药组除肿瘤形成较晚的两只大鼠瘤体积增长较快以外,其余大鼠瘤体积均增长缓慢.试验期间,对照组于接种后16 d、17 d、19 d分别发现2（2/10）、1（1/8）、1（1/7）只动物死亡,给药组于接种后16 d、19 d各有一只大鼠死亡.结论 腹腔注射羊胚素,在有肿瘤细胞存在条件下能够刺激形成肿瘤;在肿瘤生长期间能够抑制肿瘤的生长,并延长动物存活期.     

小鼠注射α-促黑素对翠绿宝石激光脱毛的影响

目的 探讨在毛发生长期局部注射α—促黑素(α—MSH)，再行翠绿宝石激光照射，观察激光脱毛后的疗效及副反应。方法 用C57BL6小鼠建立动物模型，将60只小鼠随机分成A、B、C、D4组，用蜡／松香混和物脱毛，诱导毛发从休止期进入生长期，其中A组、B组为实验组，分别用α—促黑素0．5mg／kg、0．25mg／kg每天于背部分点均匀注射，C组、D组为对照组，C组用生理盐水等量注射，D组不做任何处理。存毛发生长期Ⅳ亚期，A、B、C3组小鼠背部行翠绿宝石激光照射，于术前、术后0．5h、2d、28d分别取材，术前及术后28d组织用F—M染色，术后组织用HE染色，术后观察皮肤反应，术后28d观察脱毛疗效。结果 术前毛囊黑素平均灰度值实验组高于对照组，术后毛囊损伤程度、术后皮肤副反应及术后28d脱毛疗效实验组较对照组强，术后28d实验组色素沉着明显，3组均未见有瘢痕形成。结论 激光脱毛术前在C57BL6小鼠毛发处于生长期时外用α—促黑素，促使毛发进一步变黑，可以增加激光脱毛疗效，但术后副反应及色素沉着也增加。     

氨基酮戊酸光动力疗法治疗前后SKH-1小鼠皮肤鳞状细胞癌组织中免疫细胞亚群变化

【摘要】 目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对小鼠皮肤鳞状细胞癌（cSCC）的免疫效应。方法 建立紫外线诱导的SKH-1无毛小鼠cSCC模型,进行ALA-PDT治疗,在治疗前及治疗后1、3、6、12、24 h和3 d、7 d各取5 mm3大小皮肤组织,采用免疫组化及流式细胞仪检测不同时间点小鼠肿瘤组织免疫细胞浸润情况,包括中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤细胞和树突细胞。采用SPSS16.0软件进行两样本均数t检验。结果 与治疗前相比,小鼠cSCC肿瘤局部中性粒细胞和巨噬细胞数量及比例在ALA-PDT治疗后1 h增高最明显［免疫组化结果（每400倍视野细胞数量）：61.22 ± 6.65比22.56 ± 4.13,59.67 ± 4.30比21.89 ± 3.26,均P＜0.05;流式细胞仪结果：（35.64 ± 15.33）%比（5.46 ± 2.44）%,（12.15 ± 4.86）%比（1.98 ± 1.49）%,均P＜0.05］。同时,免疫组化和流式细胞仪检测均显示肿瘤局部T细胞、B细胞、自然杀伤细胞及树突细胞在治疗后6 h表达显著增高（均P＜0.05）。达峰后,肿瘤组织中上述细胞数量和比例下降,但仍高于治疗前,并持续至本研究终点（治疗后第7天）。结论 ALA-PDT通过招募免疫细胞发挥抗肿瘤作用,其中以中性粒细胞和巨噬细胞最为明显。     

抑制树突细胞MMP-13基因对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症模型的影响

目的：明确抑制树突细胞MMP-13基因对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样炎症模型的影响。方法：构建树突细胞MMP-13基因特异性敲除的小鼠模型（MMP-13^LOX/LOX）,应用咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损的发生。将小鼠分为野生型对照组、MMP-13^LOX/LOX对照组、咪喹莫特诱导的野生型实验组和咪喹莫特诱导的MMP-13^LOX/LOX实验组,分析不同组别小鼠皮损临床表现并记录PASI评分,检测各组小鼠皮损中IL-1β、IL-6、IL-23和IL-17A表达。结果：与咪喹莫特诱导的野生型实验组小鼠比较,咪喹莫特诱导的MMP-13^LOX/LOX实验组银屑病皮损表现相比更加温和,仅有轻度的棘层肥厚和真皮细胞浸润,皮损中IL-1β、IL-6表达下调,而IL-23和IL-17A表达无明显改变。结论：抑制树突细胞MMP-13基因可降低炎症因子IL-6、IL-1β的表达及减弱小鼠皮肤银屑病炎症反应。     

人乳头状瘤病毒16 E6/E7基因稳定表达的永生化角质形成细胞的建立及鉴定

【摘要】 目的 构建人乳头状瘤病毒（HPV）16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞（KC），为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法 两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞（HFK），利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染HPV16 E6/E7基因，连续培养30代以上，筛选出永生化KC，分为3组：①空白对照组：传代2次的原代HFK；②实验组：传代2次的原代HFK感染LV5-HPV16 E6/E7，感染细胞记录为A0代，感染后以传代次数记录（A1、A2……）；③阳性对照组：HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹实验分别检测空白对照组、实验组、阳性对照组HPV16 E6/E7 mRNA、蛋白及CK14蛋白的表达，CCK-8及Transwell Insert方法检测细胞的增殖及侵袭能力。裸鼠致瘤实验检测实验组A30、阳性对照组SiHa细胞的致瘤能力。结果 成功分离原代HFK。LV5-HPV16 E6/E7重组质粒感染原代HFK后，空白对照组细胞无荧光表达，连续传代后出现衰老表现，实验组A30细胞体积、形态较原代HFK无明显变化，且荧光表达率为100%。与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E6 mRNA表达水平显著升高（t值分别为7.12、8.07、6.53、5.66；P值分别 < 0.001、 < 0.001、 = 0.001、 = 0.005）；与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E7 mRNA表达水平也显著升高（t值分别为3.20、4.29、3.75、4.22；P值分别为0.024、0.008、0.013、0.014）。空白对照组未见HPV16 E6/E7蛋白的表达，而A30及SiHa细胞可见HPV16 E6/E7蛋白的表达。CCK-8实验显示，实验组A10、A20、A30细胞增殖水平显著高于空白对照组（t值分别为6.49、7.55、9.43；P值分别为0.003、0.002、0.001），而A1的增殖水平与空白对照组比较，差异无统计学意义（t = 2.40，P = 0.074）。Transwell Insert侵袭实验显示，A30不能穿过基底膜，SiHa细胞可穿过基底膜被染成蓝色。裸鼠接种A30细胞2个月后无肉眼可见肿瘤，组织学亦显示无肿瘤形成，裸鼠接种SiHa细胞后可于皮下形成肿瘤。结论 通过采用慢病毒技术转染HPV16 E6/E7基因成功建立人永生化角质形成细胞，可作为HPV相关研究中的理想细胞模型。     

Heat-killed bacillus Calmette-Guérin and Mycobacterium kansasii antigen 85B combined vaccination ameliorates dermatitis in a mouse model of atopic dermatitis by inducing regulatory T cells

Background Atopic dermatitis (AD) is a recurrent inflammatory skin disease characterized by dominant T‐helper (Th) 2 cytokine response. Bacillus Calmette–Guérin (BCG) has been used for preventing tuberculosis, and is regarded as a strong Th1 cytokine inducer. Antigen (Ag) 85B is a secretory protein present in Mycobacterium species that induces Th1 cytokine production. Objectives We investigated the effects of combined vaccination of heat‐killed BCG (hkBCG) and Mycobacterium kansasii Ag85B in an AD mouse model. Methods For the AD model, keratin 14 promoter‐derived caspase‐1 overexpressing mice (KCASP1Tg) were used. The mice received a combination therapy of hkBCG at age 3 weeks and Ag85B twice weekly for 11 weeks from the 4th week; Ag85B monotherapy from the 4th week; hkBCG monotherapy at the 3rd week; or control saline. Areas of skin lesions, cytokine mRNA expression and serum interleukin (IL)‐18 and immunoglobulin (Ig) E levels were analysed. Inducible Foxp3+ regulatory T cells (iTreg), IL‐10‐producing T cells (Tr1), and interferon (IFN)‐γ/IL‐4/IL‐17‐producing T cells were evaluated in the spleen. Results Saline‐treated mice and hkBCG monotherapy mice spontaneously developed severe dermatitis. However, combined therapy with hkBCG and Ag85B significantly suppressed the development of skin lesions and mast cell infiltrations. Elevations of the serum IgE and IL‐18 levels were significantly suppressed with combined therapy. Mice treated with hkBCG and Ag85B had a normal number of iTreg in the spleen, and decreased number of both IL‐4‐ and IL‐17‐producing CD4+ T cells. The effect of Ag85B monotherapy was limited. Conclusions Combined vaccination with hkBCG and Ag85B decreases AD skin lesions by inducing regulatory T cells, suggesting that this vaccination is a potent and novel therapeutic strategy for AD.     

Cidofovir inhibits growth of B16 melanoma cells in vivo

BACKGROUND: Cidofovir [(S)-1-(3-hydroxy-2-phosphonyl-methoxypropyl) cytosine] is a commercially available nucleotide analogue that has antiviral activity against a broad range of DNA viruses and is effective against human cytomegalovirus infection. OBJECTIVES: We aimed to study the effect of cidofovir on growth of the highly aggressive melanoma tumour arising from mouse melanoma B16 cells grafted subcutaneously in C57B16/J mice. METHODS: Mice were treated daily with systemic cidofovir at several doses. In treated and control groups, tumour growth was measured using a calliper, and histological studies were performed. RESULTS: In untreated mice, massive invasive melanoma tumours were observed on day 5 after tumour cell grafting. Cidofovir treatment gave a dose-dependent reduction in tumour size. Tumour growth was inhibited by 62% at a dose of 37.5 mg kg(-1) three times weekly, as compared with control mice treated with saline alone. At 67 mg kg(-1) three times weekly, tumour growth was inhibited by 90%. Increasing the cidofovir dose to 50 or 100 mg kg(-1) daily resulted in a gradual increase in the antitumoral effect of the compound. In one experiment, cidofovir was administered at 100 mg kg(-1) five times weekly from the eighth day after the injection of tumour cells, when the tumour already had a volume of approximately 100 mm(3). In the treatment group, on the 14th day the tumour volume was approximately 200 mm(3), while in the control group it had increased to 750 mm(3). CONCLUSIONS: Although the mechanism is unknown, an antitumoral or antiangiogenic effect may be the reason for the activity of cidofovir in this model. In view of our findings, use of cidofovir should be further explored in the treatment of neoplastic diseases.     

Tumor regression of human and murine melanoma after intratumoral injection of IL-12-encoding plasmid DNA in mice

DNA coding for murine interleukin 12 (IL-12) prevents the formation of B16-melanoma metastasis when administered intramuscularly. Here, the antitumor effect of IL-12-encoding DNA on established mouse B16 melanoma and human melanoma tumors was investigated in vivo using two animal models: B16 melanoma in C57B/6 mice and human melanoma in nude mice. In B16 melanoma, intratumoral injections of IL-12-encoding DNA resulted in highly significant growth retardation when compared with mice injected with control vector. In the case of the human melanoma model, treatment with DNA coding for IL-12 induced regression of tumors in all cases, with complete disappearance of the tumor in two out of five animals. DNA treatment did not induce systemic side-effects. In the animals injected with control vector the human melanoma tumors grew expansively. The therapeutic effect of the DNA injection was mediated in part by natural killer (NK) cells as shown by NK-depletion experiments. An antivascular effect of IL-12 treatment was evident in histological examination with endothelial thickening and abrupt changes in vessel diameters. These results suggest that intratumoral plasmid DNA coding for IL-12 holds some promise as a new therapeutic tool for accessible melanoma lesions and should be tested in clinical trial.     

CDK2基因沉默联合达卡巴嗪对B16-F1黑素瘤的生长抑制作用

目的 探讨CDK2基因沉默后对达卡巴嗪(DTIC)治疗B16-F1黑素瘤抑瘤效应的影响.方法 实验设对照组、CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组,MTT法检测各组细胞生长抑制情况,计算药物相互作用指数(CDI值),AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况.建立C57 BL/6小鼠B16-F1细胞移植瘤模型,分组实验,持续观察18d,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组在72h的细胞相对存活率分别为(40.6±2.8)％、(45.2±3.7)％、(28.7±2.1)％,细胞凋亡率分别为(25.1±3.3)％、(15.6±2.2)％和(45.6±3.5)％,细胞相对存活率显著降低(F=458.04,P＜ 0.05)而细胞凋亡率显著升高(F=115.46,P＜0.05),其中CDK2-shRNA+ DTIC组比DTIC组的细胞相对存活率显著降低(P＜0.01),而细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);两药相互作用指数(CDI值)＜0.7.治疗第6天,对照组、CDK2-shRNA组、DTIC组及CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤体积分别为(185.44±68.97) mm3、(83.91±14.33)mm3、(123.70±20.85) mm3、(34.54±10.72) mm3.从治疗的第6天开始,与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组及CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长速度明显降低(F=11.819,P＜0.05),而CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长速度明显低于DTIC组(P=0.04);与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长抑制率分别为52.2％、41.2％、86.4％,组织细胞凋亡指数分别为(32.93±3.72)％、(21.62±3.54)％、(63.29±4.74)％,组织细胞凋亡指数显著升高(F=222.25,P＜0.05),其中CDK2-shRNA+ DTIC组的组织细胞凋亡指数显著高于DTIC组(P＜0.01).结论 沉默CDK2基因的表达可以增加DTIC对黑素瘤的生长抑制作用,二者体外有协同效应,通过增加肿瘤细胞的凋亡是其机制之一.     

紫外线和人乳头状瘤病毒16 E6协同诱导、促进裸鼠皮肤鳞状细胞癌的机制研究

【摘要】 目的 构建裸鼠皮肤鳞状细胞癌（CSCC）移植瘤模型,探讨紫外线（UV）损伤及人乳头瘤病毒（HPV）感染诱导、促进CSCC的协同作用机制。方法 将人CSCC细胞A431分成3组,即用 HPV16 E6腺病毒转染的HPV16 E6 过表达组,空白腺病毒转染的空白载体组（简称空载组）,未进行腺病毒转染的空白对照组。使用无血清DMEM培养基将空载组及HPV16 E6过表达组（LV-OE-HPV16 E6组）A431细胞制成单细胞悬液,分别接种于SKH-1裸鼠左侧臀部皮下作为空载组（n = 16）和LV-OE-HPV16 E6组（n = 16）。每3天观察并记录小鼠肿瘤生长情况,当瘤体达到150 mm3时,视为建模成功。建模成功后,每组取8只小鼠进行UV照射,分为4组,即空载组、空载 + UV组、LV-OE-HPV16 E6组、LV-OE-HPV16 E6 + UV组,UV照射剂量为1 440 mJ/（cm2·d）,每次12 min,持续4周后处死裸鼠,测量瘤重及体积,绘制肿瘤生长曲线,免疫组化、Western印迹和qRT-PCR检测验证Wnt1、β联蛋白mRNA及蛋白在裸鼠CSCC中的表达。数据若符合正态分布,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;数据若不符合正态分布,采用秩和检验对数据进行统计分析。结果 空载 + UV组瘤重为（2.90 ± 0.36） g,LV-OE-HPV16 E6组（3.19 ± 0.32） g,LV-OE-HPV16 E6 + UV组（4.41 ± 0.18） g,与空载组（2.20 ± 0.24） g比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.39、6.77、20.11,均P＜0.001）;空载 + UV组瘤体积为（1 033.12 ± 400.15） mm3,LV-OE-HPV16 E6组（1 119.21 ± 447.57） mm3,LV-OE-HPV16 E6 + UV组（1 464.29 ± 409.98） mm3,与空载组（688.94 ± 319.31） mm3比较差异均有统计学意义（t值分别为1.90、2.21、4.22,均P＜0.001）。免疫组化显示,4组间Wnt1、β联蛋白表达水平差异无统计学意义（F值分别为0.76、0.71,均P > 0.05）;Western印迹显示,4组间Wnt1、β联蛋白水平差异有统计学意义（F值分别为16.74、49.90,均P＜0.05）,且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1、β联蛋白水平高于空载组、空载 + UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均P＜0.05）。mRNA水平分析显示,4组间组织中Wnt1、β联蛋白mRNA水平差异均有统计学意义（F值分别为7.77、8.38,均P＜0.05）,且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1 mRNA水平高于空载组、空载 + UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均P＜0.05）。结论 UV和HPV感染在诱导、促进CSCC中具有协同作用。     

Immunomodulatory effects of ultraviolet B irradiation on atopic dermatitis in NC/Nga mice

BACKGROUND: Atopic dermatitis (AD) is a common pruritic inflammatory skin disease, which occurs primarily in childhood. Recently, narrow-band ultraviolet B (UVB) phototherapy has been used to treat AD, but the mechanism involved is unknown. In this study, we investigated whether UVB irradiation influences AD in the NC/Nga mouse. METHODS: The mice were separated into three groups: control, AD-control (immunized with mite antigens), and AD+UVB-irradiated (immunized with mite antigens and UVB irradiation) groups. The mice in the irradiation group were exposed to 1 kJ/m(2)/day twice a week from 6 to 12 weeks of age. Animals in the control and AD-control groups were shaved, but not irradiated. RESULTS: In the AD+UVB-irradiated group, the atopy score, ear thickness, and total immunoglobulin E (IgE) were increased in comparison with the AD-control group. On day 40, the levels of interleukin (IL)-4, IL-5, and IL-10 in the spleen lymphocytes were significantly increased compared with the AD-control group, resulting in a marked decrease of the interferon (IFN)-gamma/IL-4 ratio compared with the AD-control group. In addition, the levels of IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-alpha, and NO(x) production by peritoneal macrophages were significantly elevated. CONCLUSION: These results indicate that UVB irradiation promotes the development of AD-like skin lesions in NC/Nga mice.     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞裸鼠荷瘤模型的建立

目的 建立一种简单、成功率高的人瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。 方法 27只雌性BALB/c裸鼠随机分为5组,A、B、C组每组5只,在每只裸鼠腋窝下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞和Matrigel胶混悬液0.1 ml,细胞浓度分别为1.0 × 104个/μl Matrigel胶（A组）、3.0 × 104个/μl Matrigel胶（B组）、5.0 × 104个/μl Matrigel胶（C组）。取C组成形瘤块修剪成若干个5 mm × 5 mm × 5 mm大小的组织块移植于D组裸鼠（8只）的腋窝皮下;E组裸鼠（4只）皮下注射100 μl Matrigel胶作为对照组。A、B、C组出瘤后30 d、D组瘤块移植后30 d肉眼观察瘤体的形成过程及变化,并在第31天处死裸鼠进行组织病理学检查,分析其移植后成形的瘤体组织学变化及裸鼠的心、肝、脾、肺、肾组织的变化。 结果 A、B、C组裸鼠成瘤率为100%,出瘤时间分别为（90.20 ± 3.96） d、（61.00 ± 2.92） d、（39.60 ± 3.20） d。出瘤30 d时3组瘤体体积分别为（288.34 ± 25.29） mm3、（1 370.63 ± 105.24） mm3、（1 940.98 ± 184.37） mm3,3组差异有统计学意义（F = 138.74,P < 0.05）。D组裸鼠成形瘤块移植后瘤块体积先略增大后逐渐减小,移植第14天始持续增大,8只中7只成瘤。E组裸鼠未见瘤体形成。组织病理学检查,各组瘤体的组织形态在镜下一致,与人瘢痕疙瘩组织相似,未见其他脏器组织学改变及转移瘤灶。结论 裸鼠皮下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞可建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型,而且已成瘤组织修剪成一定体积再次移植于裸鼠皮下也可以建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。     

大黄素对黑素瘤B16F10细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：明确大黄素对黑素瘤B16F10细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法：10、20、40、60、80 μmol/L的大黄素作用于B16F10细胞24 h后，Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞增殖；倒置显微镜下观察细胞形态及数目变化；细胞划痕实验和Transwell迁移实验分别检测各组细胞划痕愈合率和细胞迁移数目；流式细胞术检测细胞周期；TUNEL法检测细胞凋亡情况；Western blot测定凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果：与空白对照组比较，不同浓度（10、20、40、60、80 μmol/L）的大黄素均可抑制B16F10细胞的增殖（P＜0.05），其抑制率呈浓度依赖和时间依赖关系，并且将细胞阻滞于G2/M期。在显微镜观察下细胞呈现出凋亡状态，不同浓度的大黄素组凋亡相关蛋白caspase-3的表达水平升高。结论：大黄素可有效抑制黑素瘤B16F10细胞增殖，抑制细胞迁移能力，并能促进细胞凋亡。