肾细胞癌VHL基因改变与VEGF表达的关系及意义

目的：探讨肾细胞癌VHL基因异常与血管内皮生长因子（VEGF）表达的关系及意义。方法：应用聚合酶链反应（PCR）加单链构象多态性分析（SSCP）、多聚合酶链反应（Multiplex-PCR)及免疫组织化学方法检测42例肾细胞癌、18例远离肿瘤的正常肾脏及10例正常肾脏组织中VHL基因突变、异常甲基化及VEGF的表达。结果：肾癌组织中VHL基因改变（61．9％）与正常肾脏组织（3．6％）比较差别有显著性意义（P＜0．005）,VHL基因失活与肾癌组织类型及临床分期相关,与病理分级无关。VEGF在肾癌组织（64．3％）与正常肾组织（21．4％）中的表达差别有显著性意义（P＜0．005）,肾癌组织中VEGF表达与组织类型无关,与病理分级及临床分期相关,随病理分级及临床分期的升高而增高。VHL基因改变与VEGF表达间存在显著的相关性（P＜0．05）。结论：VHL基因在肾细胞癌中具有高频突变率,可负向调节VEGF的表达。     

胃癌组织中Runx3基因启动子甲基化及其蛋白的表达

目的探讨胃癌组织中Runx3基因启动子甲基化与其蛋白表达的相关性，并分析Runx3基因异常甲基化与胃癌临床病理因素的关系。方法分别采用甲基化特异性聚合酶链反应技术及免疫组织化学方法检测40例胃癌及其配对正常胃黏膜组织中Runx3基因启动子区的甲基化状态和Runx3蛋白表达。结果胃癌组织中Runx3基因启动子区甲基化发生频率（55．0％）明显高于正常胃黏膜组织（12．5％）（P〈0．01）；胃癌组织中Runx3蛋白表达阳性率（37．5％）明显低于正常胃黏膜组织（100％）（P〈0．05）；Runx3基因甲基化与肿瘤的组织分化程度、淋巴结转移数目及TNM分期密切相关（P〈0．05，P〈0．01）。结论启动子区高甲基化是胃癌组织中Runx3基因表达失活的主要机制，有望成为胃癌分子诊断和病期评估的标志之一。     

肾细胞癌患者抑癌基因VHL双等位基因失活的测定

目的探讨。肾细胞癌患者中抑癌基因VHL的双等位基因失活发生情况。方法在41例。肾细胞癌患者中提取肿瘤和正常组织DNA。采用单链聚合酶链反应(PCR)和测序法检测肿瘤组织中VHL基因的突变情况。采用PCR限制性片段长度多态性法检测VHL基因内部的2个单核苷酸多态性(SNP)位点，在2个位点的杂合子中通过对比肿瘤组织和正常。肾组织分析VHL基因的杂合性丢失(LOH)情况。结果在。肾细胞癌中51％(21／41)发生VHL基因突变，42％(8／19)发生VHL基因LOH，基因突变和LOH发生具有显著一致性(r=0．78)，在37％(7／19)的。肾细胞癌中发生VHL双等位基因失活。结论。肾细胞癌中存在由VHL基因突变和LOH导致的VHL双等位基因失活现象，VHL双等位基因失活发生率为37％。     

趋化因子受体4在前列腺癌中的表达及其与转移的相关性研究

目的：研究趋化因子受体4（CXCR4）在前列腺癌（PCa）组织中的表达及其与患者血清PSA水平的相关性，探讨CXCR4在PCa转移中的作用。方法：采用EnVision免疫组织化学染色方法检测40例PCa组织（包括15例转移和25例未转移PCa组织）及配对癌旁组织和10例正常前列腺组织中CXCR4的表达情况，统计分析PCa与癌旁和正常组织CXCR4的表达差异，以及CXCR4表达与血清PSA水平及转移的相关性。结果：CXCR4蛋白在PCa中高表达，其阳性表达率为82．5％（33／40）；癌旁组织表达较低，阳性表达率为37．5％（15／40）；而正常前列腺组织中未见CXCR4表达（0／10）。与癌旁及正常组织相比，PCa组织表达CXCR4显著增高，差异有统计学意义（P〈O．01）；而癌旁组织与正常组织CXCR4表达差异则无统计学意义（P〉O．05）。PCa中CXCR4表达与癌转移特征的相关性差异具有统计学意义（P〈O．05），不同血清PSA水平的癌组织CXCR4表达差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论：CXCR4在PCa组织尤其在转移性PCa组织中高表达。CXCR4可能是一个独立的，较有效的转移预测指标，可为临床判断预后提供参考。研究结果为进一步研究CXCR4／SDF1与转移性PCa的关系奠定了基础。     

VHL基因和HIF-1α在大肠癌组织中的表达及临床意义

为探讨VHL基因和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理因素的关系,我们用免疫组织化学SP法检测165例大肠癌和20例癌旁组织中VHL、HIF-1α表达情况,并分析其表达与大肠癌中医证型、分化程度、临床分期、转移及预后的相关性。结果显示,VHL基因在165例大肠癌组织中的阳性表达率为21．8％,在20例癌旁组织中的阳性表达率为75．1％（P〈0．001）;HIF-1α蛋白在165例大肠癌组织中的阳性表达率为75．2％,在20例癌旁组织中的阳性表达率为5．0％（P〈0．001）;VHL基因的阴性表达与HIF-1α蛋白的阳性表达与大肠癌患者的中医证型、肿瘤分期、淋巴结转移、器官转移及预后有关（P〈0．05）。结果表明,VHL基因表达下调和HIF-1α蛋白表达上调在大肠癌的侵袭、转移中发挥重要作用。     

WIF-1基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况,并结合临床病理资料,探讨WIF-1基因甲基化状态与胃癌发生、发展的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specinc PCR,MSP）检测30例胃癌组织、30例癌旁组织及10例正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况。结果胃癌组织、癌旁组织及正常对照组WIF-1基因启动子甲基化阳性率分别为76．6％（23／30）、13．3％（4／30）和0．0％（0／10）,胃癌组织甲基化率明显高于后两组,差异有统计学意义（均P〈0．05）。胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度的WIF-1基因甲基化阳性率差异均无统计学意义;有淋巴结转移组甲基化率（90％）高于无淋巴结转移组甲基化率（50％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;而Ⅲ～Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织中WIF-1基因甲基化阳性率分别为90．5％与44．4％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WIF-1基因启动子区发生高甲基化导致其表达下调或缺失与胃癌的发生、发展以及临床病理特征有着密切的关系,通过MSP法检测胃癌组织及正常组织的甲基化率,为胃癌的早期诊断及综合治疗寻找新的靶点。     

肝细胞癌中SFRP1和APC基因启动子甲基化与其mRNA的表达

目的探讨肝细胞癌（HCC）中SFRP1和APC基因启动子甲基化状态及其mRNA表达的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测30例肝细胞癌（HCC组）及相应的癌旁组织（癌旁组）和10例正常肝组织（正常对照组）中SFRP1及APC基因启动子甲基化状态和mRNA的表达水平，分析甲基化与某些临床参数与mRNA表达的关系。结果HCC组、癌旁组及正常对照组中的SFRP1和APC基因启动子甲基化率分别是11／30，4／30，0／10和14／30，5／30，0／10；HCC组明显高于其余两组（P〈0．05）。SFRP1基因启动子甲基化与临床资料无关（P〉0．05）；APC基因启动子甲基化与年龄（〈60）岁和癌肿无假包膜有关（P〈0．05）。HCC组SFRP1基因mRNA表达明显低于其余两组（P〈0．05），各组APC基因mRNA表达差异无显著性。两基因甲基化之间无相关性。结论SFRP1和APC基因启动子甲基化与HCC的形成和进展有关，但HCC组织中基因甲基化与mRNA表达的关系尚不明确。     

膀胱移行细胞癌中FHIT基因启动子甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）FHIT基因启动子甲基化状态及其与FHIT蛋白表达的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSPCR）方法及免疫组织化学S-P法检测62例BTCC组织和10例正常膀胱组织中FHIT基因启动子甲基化状态及FHIT蛋白表达。结果：BTCC组织、正常膀胱组织FHIT基因启动子甲基化频率分别为19．4％（12／62）,0（0／10）。FHIT蛋白在正常膀胱组织、BTCC中阳性表达率分别为100．0％（10／10）和46．77％（29／62）,肿瘤不同分级中随恶性程度的增高,表达减少,Ⅰ级与Ⅲ级比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,不同临床分期中随分期的增高,表达减少,Tis～T1与T2～T1比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。FHIT基因的启动子甲基化和蛋白阳性表达有相关（P〈0．05）。结论：FHIT基因的启动子甲基化可能是基因失活重要机制之一,FHIT基因启动子甲基化及表达在BTCC的发生、发展中起重要作用。     

趋化因子受体CXCR4在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的观察趋化因子受体CXCR4在结直肠癌组织中的表达及其临床意义,探讨基质衍生因子SDF-1（CXCL12）-CXCR4生物学轴在结直肠癌侵袭转移中的作用。方法免疫组织化学法检测53例结直肠癌组织及27例正常黏膜组织中CXCR4的表达及分布,并分析高表达CXCR4与结直肠癌患者临床病理特征的关系。反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Western印迹方法检测27例结直肠癌肿瘤组织、正常黏膜及5例肝转移灶内CXCR4 mRNA表达及CXCR4蛋白表达水平。结果53例结直肠癌组织中CXCR4表达阳性率为73．6％,高表达率（表达超过50％细胞）为45．3％;有淋巴结转移组CXCR4高表达率（65．4％）明显高于无淋巴结转移组（25．9％）（P〈0．01）。并与肿瘤血管淋巴管浸润有关。随着临床分期的增加,肿瘤组织中CXCR4高表达率有升高趋势,但差异无统计学意义（P〉0．05）。CXCR4的表达与患者肿瘤部位、大小、浸润深度无关（P〉0．05）。27例新鲜结直肠癌组织中CXCR4mRNA及蛋白表达水平明显高于相应的正常黏膜组织（P〈0．01）;5例肝转移灶组织中CXCR4表达显著高于对应的原发灶（P〈0．01）。结论趋化因子受体CXCR4是一类参与结直肠癌病程进展的重要分子,CXCL12-CXCR4信号通路有望成为结直肠癌治疗的新靶点。     

抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 研究抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌中的表达规律及其临床意义。方法 应用RT-PCR和免疫组织化学法对32例结直肠癌组织和正常黏膜组织中KLF-6和APC基因mRNA及蛋白的表达进行检测和分析。结果 KLF-6与APC的mRNA阳性表达率在结直肠癌组织中分别为37、5％和34，3％，明显低于正常结直肠黏膜组织的96．9％和93．8％（P〈0．05）。KLF-6与APC的免疫组化染色阳性表达率在结直肠癌组织中分别为28．1％和25．0％，明显低于正常结直肠黏膜组织的81．3％和84．4％（P〈0．05）。KLF-6与APC在结直肠癌中的表达存在相关性（P〈0．05），并与肿瘤组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均有明显相关性（P〈0．05）。结论 抑癌基因KLF-6和APC的低表达可能与结直肠癌的发生、发展、转移及预后有关，且两者存在相关性。     

散发性肾透明细胞癌组织中希佩尔-林道基因突变与缺氧诱导因子1α、2α的测定

目的探讨散发性肾透明细胞癌(CCRCC)组织中希佩尔-林道(VHL)基因突变、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和HIF-2α的表达及其关系,对肿瘤分期、分级的影响.方法应用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物直接测序和免疫组化等方法,分析77例散发性CCRCC患者癌组织中VHL基因突变、HIF-1α和HIF-2α的表达.其中T1期 55例(71%),T2期7例(9%),T3期14例(18%),T4期1例(1%);病理分级,G115例(19%),G256例(73%),G36例(8%).结果在正常肾组织中无VHL基因突变.散发性CCRCC中VHL基因突变率为52%(40/77),HIF-2α阳性率81% (62/77),高于HIF-1α阳性率66%(51/77)(χ2 =23.310, P<0.01);VHL基因突变者中HIF-1α和HIF-2α的阳性率(98%和93%)均高于无突变者的阳性率(32% 和68%,χ2值分别为36.386,7.617,P均<0.01);HIF-1α和HIF-2α的表达均与VHL基因突变相关(偏回归系数分别为4.481,2.027,P均<0.01);未发现VHL基因突变、HIF-1α和HIF-2α表达与肿瘤病理分级、分期有关(P均>0.05).结论在散发性CCRCC患者中VHL基因突变较广泛,在突变组织中HIF-1α和2α高表达,但VHL基因突变、HIF-1α和2α的表达与患者病理分级、分期不相关.     

von Hipple-Lindau基因突变与散发性肾透明细胞癌患者预后的关系

目的 探讨von Hippel-Lindau(VHL)抑癌基因突变与散发性肾透明细胞癌患者预后的关系. 方法应用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物直接测序分析74例散发性肾透明细胞癌组织标本和相应远离肿瘤的正常组织标本中VHL基因突变情况.74例患者,病理分期为T1 51例(68.9%),T2 9例(12.2%),T3 14例(18.9%);病理分级为G1 15例(20.3%),G2 50例(67.6%),G39例(12.2%).随访其预后并进行统计学分析. 结果 VHL基因突变者40例(54.1%),不同病理分期和分级的肿瘤中VHL基因突变率差异无统计学意义(P值分别为0.915和0.237).随访34~107个月.平均71个月,因肿瘤死亡7例,出现远处肿瘤转移11例,5年无瘤生存率为78%.VHL基因突变组肿瘤死亡或转移等阳性事件发生率(15.0%,6/40)明显低于非突变组(35.3%,12/34,P=0.043).Logistic回归分析表明.患者预后与肿瘤病理分期、分级呈正相关,而与VHL基因是否突变呈负相关,三者的P值分别为0.016、0.024和0.033.对于T3和G3肿瘤患者,VHL基因突变者预后更好.P值分别为0.010和0.048. 结论 散发性肾透明细胞癌患者中VHL基因突变广泛,肾癌的病理分期和分级仍然是评估患者预后的有效指标.VHL基因突变失活可能提示肾透明细胞癌患者预后更好,尤其对于高分期和高分级肿瘤患者.     

S100P蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究S100P蛋白在人肾原发透明细胞癌中的表达情况,并探讨其临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测40例肾透明细胞癌及其癌旁肾组织、10例正常肾组织和8例转移性肾透明细胞癌组织中S100P蛋白的表达情况,结合患者临床病理资料进行分析,并探讨该蛋白在肾透明细胞癌发生发展中的作用。结果:S100P蛋白在正常及癌旁肾组织中呈弱表达且表达率较低,分别为10%和7.5%,而在原发肾透明细胞癌组织中的表达呈明显上调,为77.5%(χ2=45.187,P0.01),阳性表达强度以弱-中度为主。S100P蛋白在转移性肾透明细胞癌组织中表达水平较原发癌显著降低,为12.5%(χ2=12.675,P0.01);在晚期肾透明细胞癌组织中的表达率显著降低,与早期组比较差异有统计学意义(χ2=4.337,P0.05)。结论:在原发性肾透明细胞癌组织中,S100P蛋白表达水平较正常组织明显上调,而在发生其他脏器转移的组织中显著降低。可见S100P蛋白可能在恶性肾肿瘤的发生发展中扮演重要角色,进一步深入研究有助于为肾透明细胞癌的诊疗开辟新思路。     

MMP-2和CXCR4mRNA在人肾透明细胞癌中的表达及意义

目的研究人肾透明细胞癌(ccRCC)组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和CXC趋化因子受体4(CXCR4)的表达情况及相关性,探讨二者与临床病理因素的关系。方法应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测68例ccRCC组织和36例癌旁正常肾组织中MMP-2与CXCR4mRNA的表达水平。结果在ccRCC组织中MMP-2和CXCR4mRNA的半定量值分别为0.848±0.367和0.939±0.336,高于在正常肾组织中的半定量值0.379±0.138和0.418±0.146,差异有统计学意义(t=7.375、8.860,P0.05);在ccRCC中MMP-2和CXCR4mRNA的表达与肿瘤的临床分期、分化程度和淋巴结转移情况有关(t=2.169~3.852,P0.05),而与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关(t=0.201~0.630,P0.05);在ccRCC组织中MMP-2和CXCR4mRNA的表达呈正相关(r=0.832,P0.05)。结论 MMP-2和CXCR4可能共同参与了人ccRCC的发生、发展、侵袭和转移,并且在发挥作用时具有协同作用,联合检测MMP-2和CXCR4可能有助于协助ccRCC的早期诊断和病情评估。     

肾细胞癌患者抑癌基因VHL双等位基因

目的探讨肾细胞癌患者中抑癌基因VHL的双等位基因失活发生情况.方法在41例肾细胞癌患者中提取肿瘤和正常组织DNA.采用单链聚合酶链反应(PCR)和测序法检测肿瘤组织中VHL基因的突变情况.采用PCR限制性片段长度多态性法检测VHL基因内部的2个单核苷酸多态性(SNP)位点,在2个位点的杂合子中通过对比肿瘤组织和正常肾组织分析VHL基因的杂合性丢失(LOH)情况.结果在肾细胞癌中51%(21/41)发生VHL基因突变,42%(8/19)发生VHL基因LOH,基因突变和LOH发生具有显著一致性(r=0.78),在37%(7/19)的肾细胞癌中发生VHL双等位基因失活.结论肾细胞癌中存在由VHL基因突变和LOH导致的VHL双等位基因失活现象,VHL双等位基因失活发生率为37%.     

核转录因子和趋化因子受体-4在肾癌中的表达及意义

目的检测核转录因子（NFκB）和趋化因子受体-4（CXCR4）在肾癌组织中表达情况,探讨两者在肾癌发生和进展过程中的意义。方法运用免疫组织化学方法检测43例肾癌组织和21例癌旁组织标本中NFκB（p65）和CXCR4阳性表达情况,分析两者与临床、病理参数的联系以及两者之间的相关性。结果 NFκB（p65）在33例（76.7%）肾癌组织和10例（47.6%）癌旁组织中表达阳性;CXCR4在29例（67.4%）癌组织和7例（33.3%）癌旁组织中表达阳性。两者于两组织中阳性表达上分别存在显著差异。NFκB（p65）与CXCR4均表达于所有Ⅲ~Ⅳ临床分期肾癌组织（100%）,显著高于Ⅰ~Ⅱ期阳性表达率（66.7%与53.3%）,而阳性表达在肾癌的不同病理分级、年龄、性别上无差异。同时,NFκB（p65）与CXCR4在肾癌中的表达之间存在相关性（r=0.44）。结论 NFκB与CXCR4与肾癌的发生和进展密切相关,两者之间可能存在调节关系。因此,NFκB与CXCR4可成为预防和治疗肾癌及其转移的靶点。     

KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达及临床意义

目的:观察KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达,并探讨其对膀胱癌发生、发展的影响。方法:采用实时定量荧光PCR技术检测49例膀胱癌手术切除标本癌组织与25例正常膀胱上皮组织内KLF4、KLF6mRNA的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:实时定量荧光PCR结果显示KLF4在膀胱移行上皮癌组织中的相对含量为(0.218±0.046),在膀胱正常上皮组织中的相对含量为(0.311±0.056),二者之间差异有统计学意义(P0.05)。KLF6在膀胱移行上皮癌组织中的相对含量为(0.198±0.038),在膀胱正常上皮组织中的相对含量为(0.285±0.043),差异有统计学意义(P0.05)。膀胱移行上皮癌组织中,KLF4与肿瘤的组织学分级、TNM分期及有无淋巴结转移有关(P0.05),与患者的性别、年龄无关(P0.05);而KLF6表达与肿瘤的TNM分期有关(P0.05),与肿瘤组织学分级、淋巴结转移及患者的年龄性别均无关(P0.05)。结论:KLF4和KLF6表达降低可能与膀胱移行上皮癌的发生和浸润密切相关,通过干预KLF4和KLF6的活性可能成为治疗膀胱移行上皮癌的新靶点。     

DLL4与VEGF在膀胱移行细胞癌中的表达和意义

目的：探讨DLL4和VEGF在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达和意义。方法：采用免疫组化（S-P法）结合计算机图像定量分析技术检测50例BTCC组织和10例正常膀胱组织中DLL4和VEGF的表达情况,测定平均光密度（MOD）。结果：BTCC组中DLL4和VEGF阳性表达率分别为90％（45／50）和64％（32／50）,对照组膀胱组织中DLL4无表达,1例VEGF阳性表达,DLL4与VEGF在BTCC组织和正常对照组表达均有统计学意义（P〈O．05）;BTCC组织中DLL4表达与组织学病理分级呈负相关,VEGF表达与组织学病理分级呈正相关（P〈0．05）;BTCC组织中DLL4表达与临床分期呈负相关,VEGF表达与临床分期呈正相关（P〈0．05）;初发性和复发性BTCC组织中DLL4表达量的差异与VEGF表达量的差异均有统计学意义;BTCC组织中DLL4和VEGF之间的表达呈负相关（r=-0．604,P=0．035）。结论：DLL4和VEGF表达与BTCC的分期、分级及肿瘤的预后有关;综合DLL4和VEGF在BTCC组织中的表达情况判断肿瘤预后,从而可以在早期选择更优化的治疗方案,并且靶定DLL4可能成为一个新的抗血管生成的治疗方法。     

Id-1蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨分化抑制因子-1（Id-1）蛋白在肾透明细胞癌（RCCC）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化二步法检测76例RCCC组织、29例癌旁正常组织中Id-1蛋白的表达情况,分析Id-1蛋白与患者临床病理特征及术后生存率之间的关系。结果 Id-1在RCCC组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为90.8%、17.2%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）,且Id-1的表达程度与肿瘤的病理分级、TNM分期相关（P〈0.05）,但与患者性别、年龄、有无复发等无明显相关性（P〉0.05）;生存分析显示Id-1表达阳性和阴性患者的5年生存率分别为23.5%、56.0%,两组生存率差异有统计学意义（P=0.017）。结论 Id-1的表达在RCCC中增高,Id-1阳性患者的预后较差,Id-1可作为RCCC诊断和预后判断的有效辅助指标。