反义蛋白激酶Cξ下调角质形成细胞中增殖相关基因的表达

自从1997年发现蛋白激酶C（PKC）以来，研究证明PKC信号转导通路在细胞生长、分化等功能的调节中起关键的作用，我们以往的研究已证明细胞的增殖与增殖相关基因的表达密切相关。我们在以前研究的基础上，从细胞增殖相关基因的角度，进一步探讨了反义PKCξ抑制Colo16角质形成细胞增殖的机制，为弄清PKCξ在角质形成细胞增殖调控中的作用提供实验依据。     

反义蛋白激酶Cζ对角质形成细胞增殖的影响

目的 研究蛋白激酶C(PKC)ζ亚类在角质形成细胞增殖中的作用.方法 采用基因转染的方法将PKCζ基因导入角质形成细胞株Colo16中,初步研究了表达反义PKCζ对Colo16角质形成细胞增殖的影响.结果 表达反义PKCζ的角质形成细胞形态发生改变,生长速率明显减慢,被阻抑在G1期.结论 反义PKCζ抑制Colo16角质形成细胞的增殖.     

人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞对蛋白激酶C激活的不同生物学效应

细胞信号传导调节通路主要包括蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸激酶等酶系统。它们广泛参与细胞的各种生物学过程如增殖、分化、基因的表达和功能蛋白的合成等^[1,2]。PKC是其中重要的调节通路。已发现人角质形成细胞和真皮成纤维细胞中均有PKC的多种亚型,但是对这两种细胞在PKC激活后生物学效应的比较研究甚少。我们通过体外实验,观察了PKC激活剂乙酸肉寇佛泊酯(PMA)刺激后角质形成细胞和真皮成纤维细胞在形态学、细胞增殖以及细胞因子产生等方面的变化,发现这两种细胞在PKC激活后生物学效应存在差异。     

一氧化氮对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的 :　研究一氧化氮 (NO)对角质形成细胞 (KC)增殖和凋亡有何影响。方法 :　体外培养人皮肤角质形成细胞株Colo- 16 ,应用结晶紫比色法、吖叮橙染色和片段化DNA含量测定 ,观察Colo- 16细胞在不同浓度的NO供体 (硝普盐 ,SNP)作用下 ,其增殖活性和凋亡情况。结果 :　较低浓度的SNP( 10 μmol L～2 0 0 μmol L)能促进Colo- 16KC增殖 ,对其凋亡无影响 ;高浓度SNP抑制Colo - 16KC增殖 ,促进其凋亡。结论 :　SNP对Colo- 16KC具有双向性影响。本结果支持皮肤中合成的NO对KC具有调节作用 ,但有赖于局部的NO浓度     

超抗原对银屑病患者外周血单一核细胞和Colo 16细胞株的细胞动力学影响

目的:探讨超抗原在银屑病发病中的作用。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测进行期寻常型银屑病患者和正常对照外周血单一核细胞(PBMC)和角质形成细胞Colo 16细胞株经葡萄球菌肠毒素B(SEB)体外刺激48 h的细胞增殖和凋亡。结果:进行期寻常型银屑病患者和正常人PBMC经SEB刺激,其细胞增殖和凋亡与空白组比较差异有显著性(P<0.01);角质形成细胞(Colo 16细胞株经SEB刺激,其细胞增殖和凋亡与空白组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:超抗原可能是通过刺激PBMC的活化,引发银屑病皮损的发生,而对角质形成细胞没有直接作用。超抗原活化的PBMC迅速进入凋亡,提示超抗原刺激PBMC活化增殖和凋亡是自身稳定的调控,使PBMC数量和质量恢复正常。     

芦荟对银屑病患者外周血单核细胞和角质形成细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨芦荟对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)和角质形成细胞增殖和凋亡影响.方法选择寻常性银屑病患者PBMC,共20例,正常人16例,及角质形成细胞株Colo-16细胞.采用MTT方法检测细胞增殖,ELISA方法检测细胞凋亡.结果芦荟对正常人和银屑病患者PBMC增殖均有抑制作用(P＜0.01),无促进细胞凋亡作用,对角质形成细胞株Colo-16细胞有明显的抑制增殖和促进凋亡作用(P＜0.01).结论芦荟抑制银屑病患者PBMC的增殖和诱导角质形成细胞凋亡可能是芦荟治疗银屑病的重要药理作用之一.     

大黄素和大黄酸对Colo－16细胞株的影响

大黄的有效成分蒽醌衍生物具有较强的抗癌活性。有文献报道大黄素和大黄酸具有抑制肿瘤细胞 DNA模板、干扰 DNA模板功能，从而使人肝癌细胞的生长受到明显抑制 [1,2]。我们观察了大黄素和大黄酸对培养的角质形成细胞凋亡的影响，进一步探讨大黄蒽醌衍生物的药理机制。 一、材料与方法 (一 )材料：人表皮角质形成细胞株 Colo 16(鳞状细胞癌细胞株 )：美国科内尔大学医学院 Elkon教授惠赠。大黄素和大黄酸： 北京医科大学药学院提供的标准品 (纯度为 100％ )。主要试剂和仪器： RPMI1640培养基，碘化丙啶 (PI)， TritonX 100等购…     

反义PKCζ对角质形成细胞增殖的调节

目的:探讨角质形成细胞中,反义蛋白激酶Cζ与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶ERK1/2信号转导网络以及与核因子NF-κB的相互作用关系。方法:通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法,研究反义PKCζ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果:表达反义PKCζ的角质形成细胞中,PI3K的基因表达显著下调,ERK1/2和NF-κB的核内表达水平以及ERK1/2的激酶活性明显降低。结论:表达反义PKCζ可通过下调PI3K和ERK1/2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

反义PKCξ对角质形成细胞增殖的调节

目的：探讨角质形成细胞中，反义蛋白激酶Cξ与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外信号调节激酶ERK1／2信号转导网络以及与核因子NF-kB的相互作用关系。方法：通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法，研究反义PKCξ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果：表达反义PKCξ的角质形成细胞中，PI3K的基因表达显著下调，ERK1／2和NF-kB的核内表达水平以及ERK1／2的激酶活性明显降低。结论：表达反义PKCξ可通过下调PI3K和ERK1／2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

大黄素和大黄酸对角质形成细胞体外培养细胞周期的影响

研究大黄蒽醌衍生物对细胞增殖动力学的影响已有文献报告[1] ,但关于大黄蒽醌衍生物对细胞周期的影响 ,尚未见报告。本文通过体外培养细胞的方法 ,采用流式细胞分析仪检测细胞周期变化 ,观察大黄蒽醌衍生物 (大黄素和大黄酸 )对角质形成细胞株ｃｏｌｏ 16的细胞周期影响 ,进一步探讨大黄蒽醌衍生物的药理作用。1　材料和方法1 1　细胞和药物来源 :选用的人表皮角质形成细胞株ｃｏｌｏ 16 (属鳞癌细胞株 ) ,由美国康奈尔大学医学院Ｅｌｋｏｎ ＫＢ教授惠赠。大黄素和大黄酸 ,由北京医科大学药学院郑俊华教授提供的标准品 (纯度 10 0 % )。1 2…     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人角质形成细胞促增殖作用

表1MTT测定牛碱性成纤维细胞生长因子对人角质形成细胞增殖的影响表2MTT测定牛碱性成纤维细胞生长因子对人角质形成细胞促增殖作用的最低有效浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的主要作用是促进成纤维细胞的增殖。有文献报道bFGF可以促进角质形成细胞(KC)的生长和分化过程^[1],且在伤口愈合过程中出现bFGF和角质形成细胞生长因(KGF)的表达^[2,3]。噻唑蓝(MTT)染色光吸收实验法是近年来在国内外广泛用于分析药物对细胞作用的方法,具有简便、准确和快速等优点^[4]。我们用体外培养正常人KC,MTT法和细胞直接计数法观察了基因重组牛bFGF对体外培养正常人KC增殖作用的影响。     

银屑病患者皮损表皮p16INK4amRNA表达与启动子甲基化的相关性

银屑病斑块形成反映了角质形成细胞增殖和凋亡的异常,p16INK4a作为一种重要的抗凋亡基因,其蛋白表达在银屑病患者皮损中异常,可能与银屑病斑块的形成有关[1-2].基因启动子甲基化可以在转录水平抑制基因表达,进而影响蛋白表达[3-4].研究发现,银屑病患者表皮p16INK4a基因甲基化存在异常,并与皮损的活动性有关[5].我们对p16INK4a基因甲基化在银屑病患者斑块形成机制中的作用进行探讨.     

皮肤科学基础

970573 重组人IL-6对角阮细胞体外增殖分化影响的研究/魏志平…∥临床皮肤科杂志._1996,25(5)._257～260为寻找对角朊细胞增殖分化具有调节作用的细胞因子,作者以人表皮角朊细胞株Colo-16细胞为模型,利用活细胞计数、~3H-TdR掺入法、细胞因子生物活性检测、电镜及免疫组化法研究了IL-6对角朊细胞体外增殖、细胞因子产生、超微结构及角蛋白表达的影响.结果为:IL-6对角朊细胞的体外增殖DNA合成具有双向调节作用,大剂量的IL-6能减少角朊细胞肿瘤坏死因子-a、IL-6的产生;对角朊细胞胞膜、线粒体有直接损伤作用;并抑制角阮细胞角蛋白表达.作者从细胞、亚细胞及细胞因子水平上研究了IL-6对角朊细胞体外增殖分化的影响,认为IL是角朊细胞体外增殖分化的一种强有力免疫调节因子.图2表2参11(张志灵)     

性传播疾病

20 0 1342 0　 HPV感染阳性角朊细胞的原代培养及生物学特性研究 /严泉剑 (四军大全军基因诊断研究所 )…∥第四军医大学学报 .- 2 0 0 1,2 2 (2 ) .- 171～ 173为了研究人原代乳头瘤病毒 (HPV)感染阳性皮肤角质形成细胞 (角朊细胞 ) ,观察其生物学特性。作者取患者新鲜疣体及正常包皮组织 ,用胰酶消化法培养角质形成细胞 ,观察其生长情况 ,并用 PCR及原位杂交方法检测上述细胞。结果发现 HPV阳性角质形成细胞 (PK)在 16 4 0液中生长情况良好 ,增殖速度较正常角质形成细胞快 ,适合作为 HPV感染的动物模型用于进一步研究。图 1表 1　 …     

自噬在银屑病角质形成细胞中的水平及病理意义

自噬是真核细胞中普遍存在的现象,自噬水平的异常已被证明与诸多疾病存在关联.研究表明,自噬水平下降与细胞异常增殖、分化及炎症密切相关,而银屑病皮损中存在细胞增殖、分化与免疫调节异常,表明银屑病发病机制与角质形成细胞自噬水平异常可能存在一定的联系.近年来的研究提示,银屑病角质形成细胞中自噬的水平异常可能参与了银屑病病理机制的形成.概述自噬与细胞增殖、分化及炎症的关系、银屑病角质形成细胞的病理状态以及正常角质形成细胞与银屑病角质形成细胞中的自噬的相关研究.     

中药凉血活血汤对角质形成细胞增殖的影响

凉血活血汤是张志礼教授治疗寻常型进行期银屑病的方剂,临床证明疗效较好^[1]。为进一步探讨该方剂治疗银屑病的机理,我们观察了凉血活血汤对角质形成细胞(KC)增殖的影响。     

蛋白激酶Cζ在银屑病发病中的意义

目的 探讨蛋白激酶Cζ在银屑病发病中的作用.方法 通过原位杂交和免疫组化的方法,研究了12例寻常型银屑病患者皮损区、非皮损区和5例正常人表皮中蛋白激酶Cζ的mRNA和蛋白的表达及分布特点.结果 银屑病皮损区表皮中PKCζ的mRNA和蛋白表达均较非皮损区和正常表皮中的表达明显增强,正常人表皮中PKCζ的mRNA表达分布于表皮上层,而银屑病皮损区PKCζ的mRNA表达几乎分布于表皮全层.结论 PKCζ在银屑病表皮中的过表达提示,PKCζ可能与银屑病表皮细胞的过度增殖相关.     

银屑病患者表皮细胞增殖与cyclinD1的关系研究

银屑病是一种良性增生性皮肤病 ,其病理特征为表皮过度增殖 ,伴角化及真皮淋巴细胞浸润。银屑病角质形成细胞动力研究发现表皮内角质形成细胞增生周期变短 ,进入增生的细胞增多1 。银屑病表皮细胞增殖较正常皮肤表皮细胞强 ,与增加循环干细胞数量以加强角质形成细胞向外生长能力有关2 。为了探讨其细胞增殖能力与细胞循环周期的关系 ,我们选择了在分别细胞增殖周期G1调控作用期和S期表达增高的PCNA及细胞周期素D(cyclinD1)作为检测指标 ,分别检测二者在银屑病皮损处和正常表皮中的表达 ,现报道如下。1　材料与方法1.1　材料　 2 7例寻常…     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人角质形成细胞保 …

表1 MTT测定牛碱性成纤维细胞生长因子对人角质形成细胞增殖的影响 表2 MTT测定牛碱性成纤维细胞生长因子对人角质形成细胞促增殖作用的最低有效浓度 碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的主要作用是促进成纤维细胞的增殖。有文献报道 bFGF可以促进角质形成细胞（ KC）的生长和分化过程 [1],且在伤口愈合过程中出现 bFGF和角质形成细胞生长因（ KGF）的表达 [2,3]。噻唑蓝（ MTT）染色光吸收实验法是近年来在国内外广泛用于分析药物对细胞作用的方法,具有简便、准确和快速等优点 [4]。我们用体外培养正常人 KC, MTT法和细胞直接…     

角朊细胞基因表达的转录调控

角朊细胞的增殖和分化是一个受到精细调节的过程,并伴随着一系列形态学和生化改变,最终形成角质细胞,这就必然涉及到许多结构基因的同时活化与灭活,即基因表达的调控,而转录水平的调控尤为重要。现已发现许多转录因子如AP1、AP2、Spl、POU结构域及C/EBP等可调节角朊细胞基因的表达。