兔膝骨关节炎软骨组织损伤及发病机制的探讨

目的：观察兔膝骨关节炎(KOA)的组织病理变化并探讨其发病机制。方法：健康雄性新西兰兔膝关节强迫伸直位制动建立KOA模型,实验设对照组和模型组。4周后造模结束,取膝关节进行组织HE染色和免疫组织化学检测,观察并分析膝骨关节损伤及相关蛋白因子白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)的表达情况。结果：HE染色显示,模型组膝骨关节滑膜组织均存在不同程度增生、纤维化、淤血和炎性细胞浸润;软骨增生、有裂隙,软骨细胞排列紊乱、簇集,细胞形态多样,表层细胞纤维化等。IL-1β、MMP-13、ADAMTS-4在对照组、模型组软骨细胞均有表达,而模型组表达明显高于对照组。结论：关节软骨的退变、滑膜组织的炎症是KOA的病理学特征,其发病机制与软骨细胞IL-1β、MMP-13、ADAMTS-4蛋白表达异常有关。     

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。     

小鼠膝关节骨关节炎细胞因子的表达

目的 初步探讨实验性骨关节炎小鼠不同时间不同免疫应激情况下细胞因子的表达. 方法 8周龄健康清洁级C57小鼠随机分为实验组和对照组2组.实验组小鼠激活免疫系统,1周后实验组和对照组小鼠同时行右侧膝关节DMM手术(即手术部分切除右侧膝关节内侧半月板).分别于术后4,8周取膝关节病理标本,进行关节组织切片番红O快绿染色和mankin评分,免疫组织化学技术检测MMP13表达情况,RT qPCR检测滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子以及X型胶原的表达. 结果 与对照组比较,手术后4,8周,实验组mankin评分、各细胞因子mRNA表达和X型胶原mRNA表达均高于对照组(P＜0.05). 结论 免疫应激条件下,关节组织中胶原及细胞因子呈现差异性表达.     

苍黄散外敷治疗兔早期膝骨关节炎的实验研究

目的观察平乐郭氏正骨苍黄散外敷治疗兔早期膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)滑膜组织的病理改变,以及软骨组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)、金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)的水平变化,探讨经验方苍黄散治疗早期KOA的作用机制。方法将30只新西兰大白兔随机分为3组:平乐正骨苍黄散组(简称经验方组)、扶他林组、模型组,采用木瓜蛋白酶和半胱氨酸混合液兔关节腔内注射完成动物早期KOA造模,经验方组和扶他林组兔分别采用对应药物外敷治疗,治疗时间为20 d。治疗结束后记录每组兔膝关节局部皮肤温度,HE染色法观察关节滑膜组织,用ELISA和Westernblot方法检测软骨组织中IL-1β、TNF-α、MMP13含量及蛋白的表达量。结果治疗结束后,经验方组和扶他林组皮温改善程度优于模型组,差异具有统计学意义(P0.05);病理学观察发现:模型组膝关节滑膜大量增生,并且可见血管增生明显,其他两组中膝关节滑膜组织中血管增生较少,少量炎性细胞浸润;模型组滑膜组织及软骨组织中IL-1β、TNF-α、MMP-13含量及蛋白表达量明显高于另外两组,差异明显(P0.05),经验方组与扶他林组之间IL-1β、TNF-α、MMP-13含量及蛋白表达量,差异无统计学意义(P0.05)。结论平乐郭氏正骨经验方苍黄散外敷能缓解兔早期膝骨关节模型皮温高的症状,同时能降低软骨组织中IL-1β、TNF-α、MMP-13含量,此结果为临床运用提供了实验依据。     

创伤性骨关节炎软骨组织CD11、CD54和TNF-α表达及意义

目的 观察创伤性骨关节炎病人软骨组织中淋巴细胞功能相关抗原-1(CD11)、细胞间黏附分子-1(CD54)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,探讨创伤性骨关节炎的发病机制.方法 随机取20例创伤性骨关节炎手术病人的病变软骨组织(实验组)与非正常死亡人体标本正常软骨组织5例(对照组),应用免疫组织化学方法检测软骨组织中CD11、CD54、TNF-α的表达,经图像分析比较两组的差异.结果 实验组CD11、CD54、TNF-α的表达均较对照组明显增高,差异有显著性(t=2.34～6.46,P<0.05).结论 创伤性骨关节炎的发生与CD11、CD54、TNF-α介导的炎性反应有关.     

脱氢表雄酮对兔骨关节炎软骨和滑膜中MMP-3、TIMP-1和IL-1βmRNA表达的影响

目的观察关节腔内注射脱氢表雄酮(DHEA)对兔骨关节炎软骨和滑膜中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的影响。方法20只新西兰大白兔行单侧前交叉韧带切除术,术后4周后分为实验组和对照组。实验组关节腔内注射100μmolLDHEA(溶于二甲基亚砜),每周1次,连续5周,对照组注射同剂量的二甲基亚砜。术后9周处死兔子,取膝关节行大体观察,用逆转录聚合酶链反应方法检测关节软骨和滑膜中MMP-3、TIMP-1和IL-1βmRNA的表达。结果大体观察显示实验组软骨和滑膜病变程度轻于对照组。实验组软骨和滑膜中MMP-3mRNA的表达水平显著低于对照组(均P<0.05),而TIMP-1mRNA的表达显著高于对照组(均P<0.05)。实验组软骨中IL-1βmRNA的表达与对照组的差异无统计学意义(P>0.05),而滑膜中IL-1βmRNA的表达显著低于对照组(P<0.01)。结论DHEA能有效延缓兔骨关节炎的进展。下调软骨、滑膜中MMP-3和上调软骨、滑膜中TIMP-1的表达及下调滑膜中IL-1β的表达可能是DHEA对骨关节炎的作用机制。     

高脱乙酰度羧甲基壳聚糖对兔骨关节炎软骨MMP-1,3表达的作用

目的 :观察高脱乙酰度羧甲基壳聚糖 (CMCTS)经关节腔注射对实验性兔膝骨关节炎软骨退变的影响。方法 :18只大白兔行右膝关节前交叉韧带切断术 ,随机分为 2组 ,每组 9只 ,实验组于术后第 0 ,2 ,4周经关节腔内注射 3%高脱乙酰度CMCTS 0 .15mg·kg-1,对照组同一时间点注射等容生理盐水 0 .15mg·kg-1。于第 6周全部处死大白兔 ,对比两组大白兔股骨髁关节软骨的大体改变和病理变化 ,并用免疫组化的方法对比两组的基质金属蛋白酶 1(MMP 1)及基质金属蛋白酶 3(MMP 3)的表达情况。结果 :实验组退变软骨的大体评分及病理变化轻于对照组 ,免疫组化方法显示MMP 1,3的表达明显低于对照组。结论 :高脱乙酰度CMCTS能明显降低骨关节炎软骨中MMP 1,3的表达水平 ,延缓软骨的退变程度 ,具有软骨保护作用 ,值得进一步深入研究。     

晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在晚期骨关节炎（OA）患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎（KOA）接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组（磨损较重的股骨内髁）和KOA相对非负重区组（磨损较轻的股骨外髁）;另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为（12.36±0.84）,显著高于KOA相对非负重区组的（7.23±0.32）和对照组的（0.88±0.15）（P＜0.05）.免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组（分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45）（P＜0.05）.结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在晚期骨关节炎(OA)患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎(KOA)接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组(磨损较重的股骨内髁)和KOA相对非负重区组(磨损较轻的股骨外髁);另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为(12.36±0.84),显著高于KOA相对非负重区组的(7.23±0.32)和对照组的(0.88±0.15)(P＜0.05).免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组(分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45)(P＜0.05).结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

参麦注射液关节腔注射对兔膝骨关节炎IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响

目的 研究参麦注射液对兔膝骨关节炎模型的干预作用,并探讨其作用机理.方法 行前交叉韧带切除法(ACLT)复制兔膝骨关节炎模型,予膝关节腔注射参麦注射液、透明质酸钠4周后,取膝关节液及关节软骨组织,用ELISA法检测关节液白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,RT-qPCR检测关节软骨组织IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达.结果 与正常对照组比较,模型组关节液IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均明显升高(P＜0.01),软骨组织IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达均明显升高(P＜0.01);与模型组比较,参麦注射液组和透明质酸钠组关节液IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著降低(P＜0.01),软骨组织IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA均显著降低(P＜0.05).参麦注射液组与透明质酸钠组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 参麦注射液对兔膝关节软骨有一定的保护作用,其作用机制与下调关节液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,降低软骨组织IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达有关.