微小RNA-340对肝细胞癌细胞转移和侵袭力的影响

目的探讨高表达微小RNA-340(miR-340)对肝细胞癌(HCC)细胞转移和侵袭力的影响。方法采用LipofectamineTM2000试剂盒进行miR-340转染,Transwell侵袭实验评价侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定HCC细胞株miR-340、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定MMP-2和MMP-9蛋白水平,用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测核转录因子κB1(NF-κB1)蛋白水平。结果与HepG2相比miR-340在HCC细胞系中表达水平降低,高表达miR-340的HepG2细胞、MHCC-97L细胞侵袭能力下降。高表达miR-340的HepG2细胞和MHCC-97L细胞E-钙黏蛋白mRNA表达上调,N-钙黏蛋白mRNA水平下调,波形蛋白mRNA水平下调。miR-340使HepG2细胞和MHCC-97L细胞中MMP-2和MMP-9的表达下降;与HCC细胞系比较,高表达miR-340的HepG2细胞NF-κB1表达量下降40%、MHCC-97L细胞下降66%,差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学分析预示NF-κB1是miR-340的潜在靶基因且萤光素酶报告分析又进一步证实了miR-340可以直接作用于NF-κB1的3′端非编码区。结论 miR-340在抑制细胞迁移、侵袭和上皮细胞间质转化中起着重要的作用,提示miR-340表达水平降低是HCC发生的重要环节,基于miR-340的治疗方法可用于HCC诊治。     

酶耦联法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的研究

目的建立葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的酶耦联测定法。方法用葡萄糖-6-磷酸作为底物启动酶促反应,340nm连续监测NADPH生成速率。结果此酶的反应的最适pH9．0,方法线性可达1000U／L,批内变异系数（CV）为3％～8％,回收率为98．9％～101.5％。结论葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的酶耦联测定法与既往所述的单机法比较具有良好的相关性,相关系数（r）=0．99,y=0．989X＋0．03,     

酶偶联速率法测定血清尿素在AA—800型自动分析仪上的应用

速率法测定血清尿素具有简单、快速、准确、特异性强等特点,适合于自动化分析。我们在从一800全自动生化分析仪上用酶偶联速率法(以下称速率法)测定血清尿素,经一年多的临床应用,结果满意。一、材料和方法1.试剂:血清尿素酶法试剂盒及标准液均为科华试剂仪器厂出品(批号910301)。2.仪器:AA-800全自动生化分析仪。3.仪器参数:波长340nm,检测温度30℃,延迟时间40秒,比     

连续监测法测定乙醇脱氢酶及其对肝脏疾病的诊断意义

目的探讨用改良方法测定乙醇脱氢酶(ADH)诊断肝脏疾病的意义。方法用生化自动分析仪、酶速率法测定各类肝损坏患者的血清ADH变化。结果用空白吸光度A:340nm<0.5,精密度(正常水平4.2U/L)CV:4.68%,线形0~100U/L,对临床各类肝病176例作测定,其中急性病毒性肝炎阳性率100%,一氧化碳中毒性肝坏死阳性率100%。ADH与肝细胞损坏之间有高度的相关性。结论改良后的酶速率法检测ADH临床试验效果理想。     

酶偶联法测定腺苷脱氨酶

本文介绍一种测定腺苷脱氨酶的新的动力学方法.酶促反应生成的氨在偶联的谷氨酸脱氢酶作用下,使还原型辅酶Ⅰ氧化,同时用自动生化分析仪动态监测340nm 处吸光度的下降。作者对方法的最适条件进行了讨论,方法特异,简单快速,精密度好,适用于常规分析。与氨试剂Berthelots 法比较,相关系数r=0.96.     

湖南:新农合筹资标准提至340元

据悉,湖南省将全省新农合筹资标准提高到340元每人,其中政府补助标准由2012年的240元每人提高到280元每人,个人筹资标准由2012年的50元每人提高到60元每人。湖南省卫生厅规定,湖南省本年度人均340元的新农合     

血清钾的色氨酸酶法测定

本文介绍了一种用色氨酸酶法测定血清中钾离子浓度的新的酶学方法。首先用谷氨酸脱氢酶(GLDH)、NADPH 和2-氧戊二酸盐消除内生的胺离子。然后色氨酸、5-磷酸吡哆醛,在钾离子存在下经色氨酸酶作用生成氨离子。生成的氨离子与NADPH 和2-氧戊二酸盐经GLDH 催化生成NADP~+,在340nm 处测定反应液吸光度的下降值,表示NH_4~+的生成量,此量与钾离子浓度成比例,从而推算血清中钾离子的量。将15μl 标准液或血清标本与250μl 试剂Ⅰ(NA-DPH,0.41mmol/L;2-氧戊二酸盐,18.6mmol/L;色氨酸,18.6mmol/L;GLDH55.8KU/L;氯     

精氨琥珀酸酶可作为新的肝病诊断酶

作者用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了精氨琥珀酸酶(ASS)的血中浓度,获得了有价值的结果,可用于肝病诊断.特报告如下.对象与方法: 从人肝脏按saheki等的方法用精制的Ass使家兔免疫,将所得的抗血清精制为IgG,用Ishikawa等的方法在Fab片段标记过氧化物酶(POD),用所得的Fab-POD经ELISA法测定血清Ass蛋白量.标准用精制Ass.以88名健康人,11例急性肝炎、54例慢性肝炎,     

不同方法清洗金属宫腔吸引器效果的观察

目的 比较2种不同方法清洗金属宫腔吸引器的效果.方法 将1000件同质污染的金属官腔吸引器随机分成实验组和对照组各500件.2008年1月～2008年12月用超声震荡加酶清洗法,再用自制的1.5～2 mm不绣钢条做棉技按照标准人工流程进行清洗(设为实验组).2007年1月～2007年l2月用传统手工加酶浸泡5 min,再用目前购买的试管毛刷,按照标准人工流程清洗(设为对照组).结果 超声震荡加酶清洗组对金属宫腔吸引器的清洗质量合格率明显优于传统手工加酶清洗组(P＜0.0001).结论 超声震荡加酶清洗法能有效清除金属宫腔吸引器管腔内壁的血液污垢,可以取代传统手工加酶清洗法.     

手术后器械不同清洗方法的效果比较

目的 探讨夜间急诊手术器械的清洗方法,评估效果,以选择最佳方法.方法 取夜间急诊手术器械1 220件,分为两组.对照组610件,自来水冲淋后直接用全自动清洗消毒机标准程序清洗 实验组610件,自来水冲淋后用1∶150多酶清洗液浸泡10 min,用尼龙刷刷洗齿槽、关节等处后,再用全自动清洗消毒机按标准流程清洗.用目测法进行清洗效果判断.结果 使用多酶清洗剂浸泡、刷洗后再用全自动清洗消毒机清洗方法其效果明显优于直接采用全自动清洗消毒机清洗的方法差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 采用多酶清洗剂浸泡、刷洗后再用全自动清洗消毒机清洗、能有效提高夜间急诊术后手术器械的清洗效果.     

凝血活酶参考品国际敏感度指数的标定

目的标定出凝血活酶参考品（ＷＲＰ），为国内凝血活酶产品国际敏感度指数（ＩＳＩ）的标定提供依据。方法以凝血活酶国际参考品为标准（ＩＲＰ），按照世界卫生组织（ＷＨＯ）推荐的凝血活酶国际参考品的使用方法进行测定，计算出被标定凝血活酶参考品的ＩＳＩ值和标定ＩＳＩ值的变异系数（ＣＶ）。结果标出的凝血活酶参考品的ＩＳＩ值为１．３５，标定ＩＳＩ值的ＣＶ为４．３％。符合ＷＨＯ的要求（ＣＶ≤５％）。结论用ＩＲＰ标定的凝血活酶参考品可作为国内凝血活酶试剂ＩＳＩ值标定的标准。     

耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

目的为耐核糖核酸酶(RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供一个通用载体平台。方法将MS2噬菌体基因组中包括的成熟酶蛋白和包膜蛋白的基因编码序列的1.7kbcDNA目的片段,用HindⅢ和EcoRI酶切后,与用相同内切酶酶切的表达载体质粒pET28b,在T4DNA连接酶的存在下连接,构建一新的表达载体pINCCL,再转化BL21-DE3E.Coli进行原核表达。结果成功构建得到了新的表达载体pINCCL,经原核表达为耐RNase的病毒样颗粒。结论本研究得到的pINCCL表达载体及原核表达系统,可作为一个耐RNase的RNA标准品和质控品的构建和制备表达通用载体平台,将促进有关标准品和质控品的研究。     

用纸片双抑制剂平行抑制试验分析阴沟肠杆菌AmpC酶

目的建立一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。方法分别以大肠埃希菌(ATCC 25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)、阴沟肠杆菌(029、029M和1194E)为β-内酰胺酶阴性对照、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、普通型阴沟肠杆菌、持续高产型AmpC酶、高诱导型AmpC酶标准菌株,用纸片双抑制剂平行抑制试验(DDIST)对华山医院连续的不重复的58株阴沟肠杆菌临床菌株进行AmpC酶分析,用三维试验检测高产AmpC酶以验证：DDIST。结果三维试验法从58株阴沟肠杆菌中检出持续高产型AmpC酶产株21株,DDIST检出持续高产型AmpC酶产株18株、高诱导型AmpC酶产株6株。结论DDIST是一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。     

用纸片双抑制剂平行抑制试验分析阴沟肠杆菌AmpC酶

目的　建立一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。方法　分别以大肠埃希菌(ATCC25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC700603)、阴沟肠杆菌(029、029M和1194E)为β内酰胺酶阴性对照、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、普通型阴沟肠杆菌、持续高产型AmpC酶、高诱导型AmpC酶标准菌株,用纸片双抑制剂平行抑制试验(DDIST)对华山医院连续的不重复的58株阴沟肠杆菌临床菌株进行AmpC酶分析,用三维试验检测高产AmpC酶以验证DDIST。结果　三维试验法从58株阴沟肠杆菌中检出持续高产型AmpC酶产株21株,DDIST检出持续高产型AmpC酶产株18株、高诱导型AmpC酶产株6株。结论　DDIST是一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。     

液相放大酶免疫法检测血清总免疫球蛋白

我们用液相放大酶免疫分析法（ＬＢＡＥＩＡ）［１］检测血清总ＩｇＥ,并与传统ＢＡ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法进行了比较。一、材料和方法（１）总ＩｇＥ工作标准：标准液浓度为：０,１０,２５,１００,２５０和５００ＩＵ／ｍｌ（ＷＨＯ７５／５０２）...     

OLYMPUS AU 640全自动生化分析仪理论K值的检查与校正

介绍用己糖激酶法测定葡萄糖标准溶液校正仪器的理论K值和用NADH直接校正仪器的理论K值的二种方法实验测得NAD(P)H在OLYMOPUSAU640上的摩尔吸光系数,单波长测定λ340nm为5.81×10     

酶免疫法检测粪便幽门螺杆菌抗原

目的 探讨酶免疫测定法检测幽门螺杆菌粪便抗原（ＨｐＳＡ）在诊断幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染中的价值。方法 用酶免疫测定法检测６３例患者粪便标本ＨｐＳＡ,其中６１例同时进行＾１３Ｃ－尿素呼气试验（＾１３Ｃ－ＵＢＴ）,且３１例患者也采用组织学方法进行检查。以＾１３Ｃ－ＵＢＴ作为金标准,对酶免疫测定法和组织学方法进行初步评价。结果酶免疫测定法的敏感性为９４．７％,特异性为９５．７％,准确性为９４．１％,阳性预     

头孢西丁纸片扩散法筛选耐甲氧西林葡萄球菌

目的:评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的方法.方法:采用2004年NCCLS推荐的30μg/片头孢西丁纸片法检测MRS,以PCR方法检测mecA基因为"金标准".结果:在60株临床分离的葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌36株,凝固酶阴性葡萄球菌24株.用PCR方法检测mecA基因阳性43株(金黄色葡萄球菌25株,凝固酶阴性葡萄球菌18株),阴性17株(金黄色葡萄球菌11株,凝固酶阴性葡萄球菌6株);用头孢西丁纸片法筛查MRS耐药(+)41株(金黄色葡萄球菌23株,凝固酶阴性葡萄球菌18株),敏感(-)19株(金黄色葡萄球菌13株,凝固酶阴性葡萄球菌6株).以PCR检测mecA基因法为"金标准",头孢西丁纸片法的敏感度和特异度分别为95.3%(41/43)、100%(17/17).准确度为96.7%(58/60).结论:头孢西丁纸片法筛查MRS与mecA基因检测法具有很好的一致性,该方法适合在临床微生物实验室中推广使用.     

耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

目的 为耐核糖核酸酶(RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供一个通用载体平台.方法 将 MS2 噬菌体基因组中包括的成熟酶蛋白和包膜蛋白的基因编码序列的1.7kb cDNA目的 片段,用Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶切后,与用相同内切酶酶切的表达载体质粒pET28b,在T4 DNA连接酶的存在下连接,构建一新的表达载体pI NCCL,再转化BE21-DE3 E.Coli进行原核表达.结果 成功构建得到了新的表达载体pI NCCL,经原核表达为耐RNase的病毒样颗粒.结论 本研究得到的pI NCCL表达载体及原核表达系统,可作为一个耐RNase的RNA标准品和质控品的构建和制备表达通用载体平台,将促进有关标准品和质控品的研究.