外周血中CD4~+CD25~+与CD8~+CD28~-调节性T细胞与Graves病的关系研究

目的分析Graves病(GD)患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-调节性T(Tr)细胞的变化。方法选择该院内分泌科门诊或住院部43例GD患者为研究对象,其中内分泌科门诊确诊的19例GD患者为试验初发组。接受治疗且甲状腺功能恢复正常的24例GD患者为治疗缓解组;选择同期健康体检者20例为健康对照组。采用流式细胞术检测3组外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr细胞水平。结果试验初发组外周血CD4+CD25+Tr细胞水平为(4.56±4.14)%,明显低于健康对照组的(8.84±4.45)%,差异有统计学意义(P0.05),CD8+CD28-Tr细胞水平为(14.95±5.38)%,与健康对照组的(10.65±6.37)%比较,差异无统计学意义(P0.05)。治疗缓解组外周血中CD4+CD25+Tr细胞水平为(6.99±6.35)%,与健康对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),但其CD8+CD28-Tr细胞水平为(20.48±6.07)%,高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 CD4+CD25+Tr细胞水平可能与GD发病有关,CD8+CD28-Tr细胞可能与GD病程发展有关。     

RA患者外周血CD4/CD8 T细胞比值及CD4+ CD25+ T细胞的检测及其临床意义

目的 观察活动期类风湿性关节炎（RA）患者外周血T细胞CD4／CD8比值及CD4^＋ CD25^＋T细胞（Tn细胞）的数量,探讨其在RA诊治中的价值。方法 用流式细胞术检测CD4^＋ CD25^＋T细胞及TR细胞的数量。结果 49例急性期RA患者的CD4／CD8比值和TR细胞数量显著高于正常人群组。28例RA患者治疗后的TR细胞数量显著高于治疗前,而CD4／CD8比值的变化无统计学意义。结论 RA治疗后症状改善患者,TR细胞数量明显上升,RA的发病和发展与该细胞数量密切相关。     

PACAP对创伤性脑损伤大鼠CD4+/CD8+T细胞水平的影响

目的 观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activiting polypeptide,PACAP)对大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)的影响及对血液和脾脏CI4+、CD8+T细胞数量的影响.方法 所有实验均在在江苏省麻醉学重点实验室内完成.将雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(n=6)、生理盐水+ TBI组(n=6)、PACAP+TBI组(n=6),采用大鼠创伤性脑损伤模型,于创伤前20min侧脑室微量注射PACAP 1μg/5μl,创伤后24h取材,采用HE染色方法观察脑组织损伤程度,采用流式细胞术检测各组大鼠血液及脾脏中CI4+、CD8+T细胞的数量.实验结果采用完全随机设计方差分析法.结果 与假手术组比较,TBI大鼠创伤周围皮层神经元水肿、坏死,海马神经元排列紊乱,血液和脾脏CI4+T细胞的数量减少(P=0.000,P =0.005),CD8+T细胞的数量增加(P=0.01);侧脑室内微量注射PACAP后,能明显减轻TBI大鼠皮层和海马的神经元损伤,增加血液和脾脏CD4+T细胞的数量(P=0.019,P=0.839),降低CD8+T细胞的数量.结论 侧脑室微量注射PACAP能减轻大鼠创伤性脑损伤,可能与其对T细胞影响有关.     

急性髓细胞性白血病细胞培养上清对CD4+和CD8+T细胞增殖和凋亡的影响

为了研究不同的急性髓细胞性白血病（AML）细胞株培养上清对CD4^＋和CD8^＋T细胞增殖以及凋亡的影响,探讨AML的免疫抑制的形成机制,将3种AML细胞株（HL-60、NB4和U937）培养上清和普通培养液按不同比例混合,用于培养CFSE染色的淋巴细胞.抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激3天后,标记7AAD和相应荧光抗体.利用流式细胞术检测不同T细胞亚群CFSE荧光强度和7AAD表达率的变化,分析其增殖和凋亡变化情况.结果表明：3种AML细胞株中有2种（HL-60和NB4）培养上清可显著抑制CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的增殖,并随浓度增加而增强.同样,HL-60和NB4细胞株培养上清亦可抑制刺激后的CD4^＋T细胞的凋亡,但对刺激后的CD8^＋T细胞的凋亡并无明显影响.相反,HL-60和NB4细胞株培养上清可显著增加增殖的CD8^＋T细胞的凋亡.结论：AML细胞株培养上清液对CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞增殖的抑制以及对增殖的CD8^＋T细胞凋亡的诱导作用,可能是AML患者免疫功能缺陷的机制之一.     

Essential roles of CD8+CD122+ regulatory T cells in the maintenance of T cell homeostasis

Regulation of immune system is of paramount importance to prevent immune attacks against self-components. Mice deficient in the interleukin (IL)-2/IL-15 receptor beta chain, CD122, are model animals of such immune attacks and characteristically have a high number of abnormally activated T cells. Here, we show that the transfer of CD8+CD122+ cells into CD122-deficient neonates totally prevented the development of abnormal T cells. Furthermore, recombination activating gene-2-/- mice that received wild-type mice-derived CD8+CD122- cells died within 10 wk after cell transfer, indicating that normal CD8+CD122- cells become dangerously activated T cells in the absence of CD8+CD122+ T cells. CD8+CD122+ cells could control activated CD8+ or CD4+ T cells both in vivo and in vitro. Our results indicate that the CD8+CD122+ population includes naturally occurring CD8+ regulatory T cells that control potentially dangerous T cells.     

类风湿关节炎继发肺间质病变患者激素冲击治疗前后 CD8+CD28-T 细胞的变化及意义

目的探讨类风湿关节炎（RA）继发肺间质病变（ILD）患者激素冲击治疗前后CD8+CD28-T细胞的变化与意义方法共入选23例RA-ILD患者（A组）,选取同期就诊的RA患者25例（B组）、非RA致ILD患者25例（C组）、25例健康人（D组）作为对照。对以上具有甲泼尼龙冲击适应症的A组患者进行治疗,治疗前后采用流式细胞术检测上述4组外周血CD8+CD28-T细胞及其细胞因子白介素10（IL-10）和转化生长因子β1（TGF-β1）的百分含量变化。结果与D组比较,A、B及C三组的CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均明显升高,含量由高至低均表现为A>C>B>D,且四组间任意两组上述三项指标均有统计学差异（P&;#60;0.05）。治疗后A组患者CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均较治疗前明显降（P&;#60;0.05）。结论CD8+CD28-T细胞在类风湿关节炎继发肺间质病变发病过程可能起到重要作用,而甲泼尼龙可显著抑制该细胞活性,有望作为结缔组织病致肺间质病变的病情观察及疗效评价指标。     

卡介苗免疫大鼠的抗结核发病和CD4^＋CD8^＋双阳T细胞

目的：探讨卡介苗（BCG）对大鼠结核感染及CD4^＋CD8^＋双阳（DP）T细胞的影响。方法：60只PPD皮试阴性SD大鼠随机分成（1）卡介苗免疫（BCG）组、（2）BCG免疫后结核分枝杆菌（Mtb）攻击（BCG-TB）组、（3）Mtb攻击后不化疗（TB）组。BCG组、BCG-TB组于观察开始接种BCG。BCG-TB组、TB组于3个月末接受Mtb攻击。比较全部大鼠接种Mtb后的死亡率；实验开始和其后3、4、5、6、8个月末检测外周血中T细胞亚群。结果：BCG组、BCG-TB组无死亡；TB组感染后5个月内死亡率45％（9／20）。TB组死亡率高于BCG组和BCG-TB组，P〈O．01。实验开始时3个组组间对应参数比较差异均无显著性（P〉0．05）；3个月末BCG组、BCG-TB组之间各对应参数比较差异均无显著性（P〉O．05）；BCG组和BCG-TB组第3个月末与接种前比较，CD8^＋、DP升高，且显著高于TB组（Mtb干预之前），P〈0．01或P〈0．05。BCG组DP细胞于接种BCG后第6个月后开始回落，但仍显著高于接种前；BCG-TB组于Mtb攻击1个月后CD8^＋、DP继续升高，观察的第8个月CD8^＋、DP回落，但仍显著高于BCG接种前；TB组Mtb攻击后1个月末CD8^＋、DP有升高但低于BCG组和BCG-TB组，同时伴有CD3^＋、CD4^＋降低，差异均有显著性，P〈0．05或P〈0．01，此后维持在相近水平。Mtb攻击2个月末BCG-TB组DP高于BCG组和TB组，P〈0．05或P〈0．01。Mtb攻击5个月后3个组间DP差异无显著性（P〉0．05）。结论：BCG预防接种可保护Mtb感染宿主免于发病和死亡，增强抗结核保护性细胞免疫力表现之一为DP细胞升高，DP细胞是抗结核保护性免疫相关T细胞。DP细胞的形成与CD4^＋SP细胞上CD8^＋抗原表达有关。     

扁桃体和外周血CD8+T细胞表达CXCR5和IL-21水平对比分析

目的 对比分析扁桃体和外周血单个核细胞(PBMC8)中CD8+T细胞表达CXCR5和IL-21的水平是否存在差异.方法 分离扁桃体和正常人PBMCs,四色流式细胞术(FCM)检测扁桃体单个核细胞和PBMCs中CD8+T细胞表达CD69和CXCR5 的水平.采用佛波酯(PMA)和离子霉素(Ionomycin)刺激扁桃体单个核细胞和PBMCs后,流式细胞术检测CD8+T细胞表达IL-21的水平.结果 与PBMCs中CD8+T细胞相比,扁桃体组织中CD8+T细胞高表达CD69和CXCR5(P＜0.05),经PMA+Ionomycin刺激后,扁桃体CD8+T细胞可检测到IL-21的表达,而PBMCs中CD8+T细胞基本不产生IL-21.结论 CD8+T细胞的表型和功能在扁桃体组织和PBMCs中存在差异,扁桃体中CD8+CXCR5+和CD8+IL-21+T细胞的免疫功能有待进一步研究.     

胃癌组织中驻留CD8+T细胞的浸润程度及其意义

目的研究组织驻留CD8~+T细胞(CD103~+CD8~+T细胞)在胃癌组织中的浸润程度及分布特征,并分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法采用组织芯片技术和免疫荧光染色法分别检测90例胃癌及相应癌旁正常组织中CD8~+T细胞及CD103~+CD8~+T细胞的浸润分布特征及程度,采用Wilcoxon秩和检验比较胃癌及癌旁正常组织中CD8~+T细胞、CD103~+CD8~+T细胞浸润程度及CD103~+CD8~+T细胞占CD8~+T细胞比率的差异,χ~2检验分析胃癌组织中CD8~+T细胞、CD103~+CD8~+T细胞浸润程度及CD103~+CD8~+T细胞占CD8~+T细胞比率与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存分析法分析CD8~+T细胞、CD103~+CD8~+T细胞浸润程度及CD103~+CD8~+T细胞占CD8~+T细胞比率与患者预后的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果胃癌组织CD103~+CD8~+T细胞浸润程度与癌旁正常组织比较,差异无统计学意义(P0.05)。Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者中CD103~+CD8~+T细胞高度浸润的比率(69.09%,38/55)显著低于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者(91.43%,32/35),差异有统计学意义(χ~2=6.175,P=0.013)。CD103~+CD8~+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征相关性无统计学意义(P0.05)。Kaplan-Merier生存分析显示,CD103~+CD8~+T细胞高度浸润的患者总生存期较CD103~+CD8~+T细胞低度浸润的患者显著延长(HR=2.187,95%CI:1.062～4.500,P=0.033 6);多因素Cox比例风险模型显示,肿瘤直径(HR=2.031,95%CI:1.163～3.546,P=0.013)和CD103~+CD8~+T细胞浸润程度(HR=0.516,95%CI:0.285～0.934,P=0.029)均可作为胃癌患者的独立预后因素。结论 CD103~+CD8~+T细胞在胃癌组织中与良好预后有关,提示其在抑制胃癌发生发展过程中发挥重要作用,可作为胃癌患者预后评估的指标。     

慢性乙肝患者外周血CD4+细胞HLA-DR、CD8+细胞CD28表达的检测及其意义

目的 检测乙肝患者外周血CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR和CD8^＋淋巴细胞表面CD28的表达情况,评价乙肝患者的细胞免疫状态。方法 荧光抗体CD4-PECY5、HLA-DR-FITC和CD8-PE、CD28-FITC标记淋巴细胞,流式细胞仪分别测定患者CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR和CD8^＋淋巴细胞表面CD28表达的百分率,并与HBV-DNA结果比较。结果 ①与正常对照组比较,乙肝患者组外周血CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR的表达显著升高（P〈0.001）,CD8^＋淋巴细胞表面CD28的表达显著降低（P〈0.01）;②乙肝患者DNA阳性（〉4000拷贝/ml）与阴性（〈4000拷贝/ml）组CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR和CD8^＋淋巴细胞表面CD28的表达比较均无显著性差异（P〉0.1）。结论 乙肝患者外周血CD4^＋细胞的免疫活化增强,CD8^＋细胞与抗原递呈细胞结合的作用减弱;淋巴细胞的活化情况与病毒复制情况及含量多少无关。     

骨髓增生异常综合征患者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞、调控基因FOXP3的表达及意义

目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞）和调控基因FOXP3的表达及意义。方法分离22例MDS患者[MDS组,根据MDS分型标准分为：难治性贫血组（RA组）6例、难治性血细胞减少伴有多系发育异常组（RCMD组）11例、难治性贫血伴原始细胞增多组（RAEB组）5例]和8例正常健康者骨髓单个核细胞,采用免疫荧光标记和流式细胞仪检测CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞占CD4^＋ T细胞比例;提取骨髓单个核细胞RNA,采用RT-PCR检测FOXP3基因的表达水平。结果MDS组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与正常对照组比较,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;RA组、RAEB组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）;RCMD组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与正常对照组比较,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;RCMD组、RAEB组CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞比例、FOXP3基因表达水平与RA组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）;RA组、RCMD组CD4^＋ CD25^＋ Treg比例、FOXP3基因表达水平与RAEB组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论MDS患者CD4^＋ CD25^＋ Treg占CD4^＋ T细胞比例及FOXP3基因表达水平随预后危险级别的升高而升高,提示免疫异常是MDS疾病的发生、发展的一个促进因素。     

CD4+CD25+CD127Low调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血的表达及临床意义

目的观察原发性肝癌患者经治疗前、后外周血CD4+CD25+CD127(CD127Low)调节性T细胞(Treg)的数量变化。方法采用流式细胞术检测30例原发性肝癌患者外周血CD4^+CD25^+CD127^LowTreg在CD4+T细胞的比例,以180例体检健康者作为健康对照组,分析肝癌患者治疗前、后CD4^+CD25^+CD127^Low Treg细胞表达的变化。结果原发性肝癌治疗前CD4^+CD25^+CD127^LowTreg细胞百分比为(6.21±1.53)%(<50岁)和(6.68±1.53)%(≥50岁),均显著高于健康对照组(同年龄段),差异有统计学意义(P=0.001、0.000),原发性肝癌患者治疗1个月有效者CD4^+CD25^+CD127^LowTreg细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P=0.001)。结论CD4^+CD25^+CD127^LowTreg水平异常增高可能与原发性肝癌免疫功能调节紊乱有关,且其变化水平与临床病情的进展存在一定的相关性。     

CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞在重型乙型肝炎发病中的作用

目的探讨CD4＋、CD25＋调节性T细胞（CD4＋、CD25＋ Tr）在重型乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测重型乙型肝炎病人及对照组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的水平及应用PCR测定重型乙型肝炎病人及对照组外周血中HBVDNA滴度。结果重型乙型肝炎组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的百分率为（2.63±0.83）%,较慢性乙型肝炎组的（4.15±1.17）%差异有显著性（P〈0.05）,较无症状HBV携带者组及健康对照组差异有非常显著性（P均〈0.01）;重型乙型肝炎组外周血HBVDNA滴度为1.2×10^4copies/ml,较慢性乙型肝炎组（2.3×10^6copies/ml）和无症状HBV携带者（7.8×105copies/ml）差异有非常显著性（P均〈0.01）;不同乙型肝炎病人外周血CD4^＋、CD25^＋ Tr的百分率与HBVDNA滴度正相关。结论CD4^＋、CD25＋^ Tr能抑制T细胞对HBV的免疫反应;重型乙型肝炎患者发病与CD4^＋、CD25^＋ Tr表达过低有关。     

阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者CD4~+ CD25~+调节性T细胞表达水平的影响

目的:观察阿德福韦酯对慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者血清CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Treg)表达水平的影响,揭示CD4+CD25+Treg在慢乙肝患者免疫发病机制中的作用,及阿德福韦酯治疗对机体的免疫调节机制的临床价值。方法:采用流式细胞术对66例慢乙肝患者(HBeAg阳性慢乙肝患者36例,HBeAg阴性慢乙肝患者30例)阿德福韦酯治疗前和治疗12、24、36及48周外周血CD4+CD25+Treg进行检测。同时采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测相应时间点的血清HBVDNA。结果:外周血清CD4+CD25+Treg治疗前为(4.05±2.39)%,明显高于正常对照组的(2.26±1.42)%(P<0.01);治疗后CD4+CD25+Treg为(2.38±1.75)%,明显低于治疗前(P<0.01),与正常对照组相当(P>0.05)。CD4+CD25+Treg水平与病毒定量呈正相关。结论:阿德福韦酯抗病毒治疗后能使病毒载量下降,导致CD4+CD25+Treg下降,使免疫功能恢复。     

异基因骨髓间充质干细胞移植对小鼠胶原性关节炎CD4＋CD25＋调节性T细胞表达的影响

目的：探讨异基因骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对小鼠胶原性关节炎 CD4＋、CD25＋调节性 T 细胞表达的影响。方法选取40只 C57BL/6（H-2b）小鼠,随机分为正常对照组、Ⅱ型胶原性关节炎（CIA）模型组、MSCs 移植治疗组、甲氨蝶呤治疗阳性对照组,每组10只小鼠。除正常对照组外,其余各组弗氏完全佐剂＋Ⅱ型胶原诱导小鼠建立 CIA 小鼠模型。分离骨髓单个核细胞后,进行 MSCs 细胞分选及鉴定。美国 BD 公司 FAcscal-iburTM 型流式细胞分析仪对小鼠骨髓 MSCs 进行分选和鉴定。 MSCs 移植采用尾静脉注射,所含细胞数为2×106。移植后第42天全部处死动物观察不同分组小鼠的关节症状及肿胀度,采用流式细胞术检测 CD4＋ CD25＋浓度,收集数据并做统计分析。结果 MSCs 移植治疗组小鼠关节的肿胀度,与正常对照组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。 MSCs 移植组 CD4＋ CD25＋调节性 T 细胞的表达,与甲氨蝶呤治疗阳性对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）;与正常对照组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 MSCs 移植治疗小鼠 CIA ,能显著改善关节的肿胀度,并明显上调 CD4＋ CD25＋表达,故 MSCs 可作为一种新的替代细胞来源用于类风湿性关节炎的移植治疗。     

Development of CD8alpha/alpha and CD8alpha/beta T cells in major histocompatibility complex class I-deficient mice.

Peripheral CD8(+) T cells mainly use CD8alpha/beta, and their development is mainly dependent on the major histocompatibility complex (MHC) class I proteins K(b) and D(b) in H-2(b) mice. In this report, we have shown that the development of CD8alpha/beta TCR-alpha/beta cells in lymphoid organs as well as in intestinal intraepithelial lymphocytes (iIELs) is dependent on the MHC class I K(b) and D(b) proteins. In contrast, TCR-alpha/beta CD8alpha/alpha cells are found mainly in iIELs, and their numbers are unaffected in K(b)D(b) double knockout mice. Most of the TCR-gamma/delta cells in the iIELs also bear CD8alpha/alpha, and they are also unaffected in K(b)D(b) -/- mice. In beta2-microglobulin (beta2m)-deficient mice, all of the TCR-alpha/beta CD8alpha/alpha and CD8alpha/beta T cells disappear, but TCR-gamma/delta cells are unaffected by the absence of beta2m.     

Effects of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide on CD4+/CD8+ T cell levels after traumatic brain injury in a rat model

BACKGROUND:

The effect of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) during traumatic brain injury (TBI) and whether it can modulate secondary injury has not been reported previously. The present study evaluated the potential protective effects of ventricular infusion of PACAP in a rat model of TBI.

METHODS:

Male Sprague Dawley rats were randomly divided into 3 treatment groups (n=6, each): sham-operated, vehicle (normal saline)+TBI, and PACAP+TBI. Normal saline or PACAP (1 μg/5 μL) was administered intracerebroventricularly 20 minutes before TBI. Right parietal cortical contusion was produced via a weight-dropping method. Brains were extracted 24 hours after trauma. Histological changes in brains were examined by HE staining. The numbers of CD4⁺ and CD8⁺ T cells in blood and the spleen were detected via flow cytometry.

RESULTS:

In injured brain regions, edema, hemorrhage, inflammatory cell infiltration, and swollen and degenerated neurons were observed under a light microscope, and the neurons were disorderly arrayed in the hippocampi. Compared to the sham group, average CD4⁺ CD8^– lymphocyte counts in blood and the spleen were significantly decreased in rats that received TBI+vehicle, and CD4^– CD8⁺ were increased. In rats administered PACAP prior to TBI, damage was attenuated as evidenced by significantly increased CD4⁺, and decreased CD8⁺, T lymphocytes in blood and the spleen.

CONCLUSION:

Pretreatment with PACAP may protect against TBI by influencing periphery T cellular immune function.KEY WORDS: Traumatic brain injury, Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, CD4⁺ T lymphocyte, CD8⁺ T lymphocyte, Rat, Spleen, Blood, Flow cytometry     

人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA与T细胞CDA^＋CD25^＋Treg表达相关性探讨

目的探讨人外周血单个核细胞中FOXP3mRNA的表达与CD4^＋CD25^＋Treg表达的相关性。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录成mRNA,以β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4^＋CD25^＋Treg的比例。结果哮喘患儿组CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P〈0.01;FOXP3mRNA的表达也显著降低,P〈0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物。结论应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4^＋CD25^＋Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4^＋CD25^＋Treg发育障碍的重要因素。     

原发性胆汁性肝硬化患者调节性T细胞及其与肝功能损伤的研究

目的检测原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者外周血CD4^＋ CD8^＋ T、CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞亚群，探讨其与肝功能损伤、抗AMA—M2抗体产生的关系。方法采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊PBC患者（n=27）外周血CD4^＋ CD8^＋ T细胞、CD4^＋ CD25^＋ T细胞群比例，以26例其他肝脏疾病患者作为疾病对照组，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与患者的肝功能指标及自身抗体如AMA—M2、ANA的关系。结果PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋ T细胞比例与正常对照组比较结果差异无统计学意义（P〉0．05），但显著高于其他肝脏疾病组（P〈0．05）。CD4^＋ CD8^＋细胞群与正常人相比结果差异无统计学意义，其他肝病组明显高于正常对照组（P〈0．05）。PBC患者外周血NK细胞比例显著低于正常对照组（P〈0．05）。肝功严重损伤的PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋ T细胞比例明显高于肝功能轻度损伤者（P〈0．05）。PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋ T细胞数量与肝功能损伤指标ALB呈负相关（r=－0．338，P〈0．05），与TBIL、DBIL呈正相关（r分别为0．362，0．386，P〈0．05）。CD4^＋ CD25^＋ ／CD4^＋比例与GGT呈负相关（r=－0．335，P〈0．05），与TBIL、DBIL呈正相关（r分别为0．333，0．339，P〈0．05）。抗AMA—M2抗体阳性患者外周血CD4^＋ CD25^＋细胞比例明显高于AMA—M2阴性患者（P〈0．01）。未发现CD4^＋ CD25^＋ T、CD4^＋ CD8^＋T细胞比例在ANA^＋和ANA—PBC患者之间差异有统计学意义。结论PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋T细胞群比例与肝功能损害和抗AMA—M2抗体的产生密切相关，因此推测CD4^＋ CD25^＋T细胞的变化可能是导致病情发展以及肝脏损伤的关键环节之一。