小鼠放射状胶质细胞和小脑皮质的发育

目的探讨小鼠小脑皮质发育过程中放射状胶质细胞的分化。方法应用免疫荧光及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)检测技术,标记小鼠胚胎8d至生后180d小脑(57例,分为19组,每组3只)的神经干细胞、放射状胶质细胞、普肯耶细胞及颗粒细胞。结果放射状胶质细胞于胚胎13d的神经上皮出现,尔后该细胞分化为各种神经元和贝格曼胶质细胞,并在小脑皮质层状结构的形成中起着重要作用。结论放射状胶质细胞来源于神经上皮细胞,是神经细胞和神经胶质细胞的前体细胞。在小脑皮质的发育过程中,放射状胶质细胞能分化为普肯耶细胞和颗粒细胞,并为神经细胞的迁移提供路径和支架。     

人胚胎海马发育的形态学研究 Ⅴ.室管膜的发生

运用HE和Nissl染色、免疫组织化学法、透射电镜及扫描电镜，对60例6周至足月的人胚胎海马室管膜上皮变化进行了观察。发现胚胎发育过程中室管膜发生了剧烈变化。最早室管层神经上皮细胞为假复层柱状，随着未分化细胞向外迁徙，海马室管膜层神经上皮细胞迅速增殖，形成复层上皮。当室管膜层细胞停止迁徙时，室管膜开始向假复层柱状及单层柱状上皮转变。电镜观察，胚胎早期神经上皮细胞由未分化细胞构成；其特点是，细胞质内各种特化细胞器匮乏，但糖原丰富。15周左右未分化细胞开始向长突细胞及室管膜细胞分化。长突细胞电子密度高，底部有细长突起，表面有微绒毛，胞质内微丝丰富；而室管膜细胞电子密度低，底部无突起，但表面有丰富的纤毛。对长突细胞及免疫组化染色的GFAP阳性细胞进行形态和发育特征的比较，提示两者属同一类细胞。扫描电镜下，15周前室管膜表面微绒毛较多，以后纤毛逐步发育，大量密集纤毛布满于室管膜表面。此外，还能见到一类接触脑脊液神经元，这类神经元可为多极或双极，并有突起伸入室管膜上皮内。     

人胚胎海马发育的形态学研究──Ⅰ．一般结构观察

利用Ｎｉｓｓｌ染色及体视学方法，对６０例６周至足月人胚胎海马进行了研究。根据海马形态变化及锥体细胞分化特征，将海马发育分为三个阶段．第一期以海马外形及内部结构建立为主；第二期以锥体细胞的形成和海马外形、内部结构进一步完善为特征；第三期锥体细胞日趋成熟．在胚胎早期，锥体层和颗粒层由大量未分化细胞构成，细胞为球状，体积小，胞质少，染色深，以后逐步分化为锥体细胞及颗粒细胞．体视学资料表明，颗粒细胞、锥体细胞的数密度及细胞核体密度随胎龄增长而降低，而细胞算术平均体积则逐步增加。上述参数变化因其部位不同而有所差异，说明锥体细胞分化、发育是不均匀的。ＣＡ２区分化快，发育好，颗粒细胞分化最迟缓。     

成人海马内Nestin免疫阳性细胞的分布

为探讨成人海马内 Nestin免疫阳性细胞的分布 ,本实验采用 331B、10 C2、Rat40 1、NSE、GFAP、Vimentin抗体对成人海马了进行免疫组织化学研究。结果显示 ,海马内 Nestin免疫阳性细胞可分为三类 :一类细胞位于门区及齿状回颗粒下层 ,胞体为卵圆形 ,无突起 ,胞浆深染 ,此类细胞不与 NSE呈交叉反应 ;第二类细胞也位于门区及齿状回颗粒下层 ,胞体较小发出少量放射状突起 ,与 GFAP及 Vimentin抗体无交叉反应 ,在海马裂及海马伞中也存在少量的此类神经细胞 ;第三类为 Nestin免疫阳性细胞 ,体积较大 ,形态与星形胶质细胞相似 ,并分别位于齿状回分子层及颗粒层 ,其突起常常跨越齿状回颗粒细胞层。Nestin免疫阳性神经细胞不被 GF AP抗体标记。成人海马内未见 Vimentin免疫阳性细胞。结论 :人海马内存在神经前体细胞及放射状胶质样Nestin免疫阳性细胞     

胎儿侧脑室室管膜发育的免疫组织化学和电镜研究

目的：探讨胎儿脑发育过程中出现的放射状胶质细胞、伸展细胞和普通室管膜细胞之间的关系。方法：运用HE染色、免疫组化染色和电镜观察胎儿侧脑室室管膜组织。结果：12w时可见放射状胶质细胞和位于室管膜层的神经干细胞样细胞。少数放射状胶质细胞有单纤毛；20w时室管膜胶质纤维酸性蛋白(GFAP)呈阳性，伸展细胞出现在室管膜层；28w大量GFAP阳性的星状胶质细胞位于室管膜下层和中间层；以后GFAP阳性强度和细胞数开始下降。39w时GFAP阴性，无法见到伸展细胞。结论：放射状胶质细胞主要转变为星状胶质细胞，少量转化为普通的室管膜细胞。伸展细胞可能来源于神经干细胞，部份转化为普通室管膜细胞；部分可能转化为其他细胞，可能是室管膜瘤中伸展细胞的来源。     

Reeler小鼠皮质片层化及细胞极性化

目的 探讨 Reelin 在皮质片层化形成及细胞分化、极性化中的作用及相关机制。 方法 取 reeler 小鼠和野生型（WT）小鼠受孕17 d（E17）至出生21d（P21）各年龄点脑部共96例。免疫荧光标记技术与 5’-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）法检测两组小鼠大脑发育中放射状胶质细胞、增殖的神经干细胞及极性蛋白的表达,并使用 Nissl 染色技术及 DiI 示踪技术分别对新皮质分子层发育、海马 CA1 区锥体细胞极性方位以及皮质锥体细胞极性程度进行统计。 结果 Reeler 小鼠大脑发育中齿状回内放射状胶质细胞数量减少,极性紊乱,BrdU阳性细胞散在分布,数量减少;由于极性细胞未得到适当的终止信号越过皮质Ⅱ层进入分子层,皮质片层化紊乱;大脑皮质及海马锥体细胞极性发生改变。 结论 Reelin 在神经细胞迁移、神经元增殖和皮质片层化的过程中发挥重要作用,尤其对锥体细胞极性起着至关重要的影响。     

海马去神经支配损伤后放射状胶质细胞表达RUNX1T1的变化及向神经元分化的影响

目的 观察海马去神经支配损伤后,海马放射状胶质细胞表达RUNX相关转录因子1转位1（RUNX1T1）和向神经元分化的情况。方法 取6只大鼠,采用物理切割大鼠穹隆海马伞术制备海马去神经支配损伤模型,并制备海马提取液,海马放射状胶质细胞体外培养,培养液中加入海马提取液。实验分为去神经支配组、正常组和空白对照组,共6块24孔板,每组各48孔。采用Real-time PCR、Western blotting及免疫荧光技术检测各组放射状胶质细胞表达RUNX1T1 mRNA和蛋白的变化,以及分化成微管相关蛋白 2（MAP-2）阳性神经元比例。结果 体外培养的海马放射状胶质细胞具有细而长的突起,且表达RUNX1T1,去神经支配组中RUNX1T1阳性细胞的荧光强度高于正常组和空白对照组约1.8倍,细胞突起也较后两组长。去神经支配组RUNX1T1 mRNA和蛋白表的表达量各上调2.9倍和2.4倍,且39.33%细胞表达MAP-2,与正常组和空白对照组相比,阳性细胞数比例明显增高。结论 海马去神经支配损伤后海马放射状胶质细胞上调表达RUNX1T1,并可更多地向神经元分化。     

胚胎时期大鼠海马结构的发育

为研究胚胎时期大鼠海马结构的发育状况,用浸泡固定、石蜡切片、混合尼氏染色方法,观察了Ｅ１４、Ｅ１６、Ｅ１８、Ｅ２２天大鼠胚胎海马结构的发育过程。结果：Ｅ１４天基本上能区分出海马原基。Ｅ１６天海马原基背侧与下托部神经上皮延续,腹侧与隔区神经上皮及脉络丛基质相连续;此时海马原基可区分出３部分,即背侧的阿蒙角神经上皮,其下的原始齿状回神经上皮,腹侧的伞部胶质上皮。Ｅ１８天海马裂形成,将阿蒙角神经上皮与齿状回生发基质区分开来;ＣＡ１区锥体层和海马伞开始出现,齿状回外臂和门也开始形成并第一次见向齿状回迁移的细胞。Ｅ２２天海马裂消失,阿蒙角分子层与齿状回分子层贴在一起;ＣＡ１区锥体层增厚,ＣＡ３区锥体层出现并穿透门区;阿蒙角神经上皮变成单层结构,中间层变薄,仍见大量逗留的锥体细胞,海马槽形成;齿状回外臂轮廓出现,颗粒细胞呈单层排列,内臂起始部开始形成;ＣＡ３区中间层周围及个部附近见大量的细胞正朝门区迁移。研究表明：出生前阿蒙角ＣＡ１、ＣＡ３区锥体层已经形成,齿状回外臂的轮廓已形成,内臂刚开始出现,其轮廓将于出生后形成。     

神经干细胞在海人酸毁损大鼠海马中的迁移和分化(英文)

本研究旨在观察胎鼠神经干细胞移植入海人酸毁损成年大鼠海马中的迁移和分化情况。立体定位注射海人酸毁损大鼠海马CA1区锥体细胞,毁损一周后,将Hoechst33342标记的神经干细胞移植毁损区,分别于术后1、2、4、8周取材,利用荧光技术和免疫组织化学方法,追踪移植的神经干细胞在毁损侧海马中的存活、迁移和分化情况。结果显示,移植的神经干细胞在海马锥体层呈链状迁移,并分化为MAP2阳性细胞和GFAP阳性细胞。这些结果提示移植的神经干细胞在海马锥体层呈链状迁移,大部分分化为胶质细胞,部分分化为神经元。     

人胚胎海马发育的形态学研究Ⅲ．肽能神经元的发生

利用Ｇｏｌｇｉ镀银法、免疫组织化学法，对不同胎龄人肛胎海马的肽能神经元进行了研究．发现ＳＳ阳性神经元于胚胎１９周出现，ＳＰ阳性神经元、ＮＰＹ阳性神经元于１７周出现，ＧＡＢＡ阳性神经元在１６周即已显示。随胎龄增加，肽能神经元不断增多．肽能神经元广泛分布于海马的各区，但以多形层最为多见．和锥体细胞及颗粒细胞相比，肽能神经元有下列形态特点：（１）细胞形态和大小差异较大；（２）细胞突起多少不一，出现部位也无一定规律；（３）轴突投射范围小，但分枝多．Ｇｏｌｇｉ可以同时显示多种不同肽能神经元．ＧＡＢＡ阳性细胞与ＳＳ阳性细胞在发生时间和形态特点方面具有高度一致性，说明ＳＳ可与ＧＡＢＡ共存。     

耳蜗提取液诱导海马神经干细胞分化的实验研究

为探讨新生鼠耳蜗提取液对于诱导海马神经干细胞分化为内耳毛细胞的影响,采用无血清和单克隆培养方法,将新生鼠耳蜗部位的提取液加入离体的海马神经干细胞的培养液中。应用nestin、BrdU、NF200、GFAP、MyosinⅦA和P27KIP1免疫荧光染色,观察神经干细胞的形态及分化而来的神经元、神经胶质细胞、内耳毛细胞和内耳支持细胞的形态,并检测由海马神经干细胞分化而来的细胞数量。结果表明海马神经干细胞在无血清培养下,可形成nestin阳性细胞球。但在诱导液中加入耳蜗提取液后,免疫荧光染色可见NF200、GFAP、MyosinⅦA和P27KIP阳性细胞。结果提示在耳蜗微环境的作用下海马神经干细胞除了向神经元和神经胶质细胞方向分化外,还可向内耳毛细胞和支持细胞方向分化。     

海马神经元和神经递质衰老性变化的年龄指征研究：Ⅰ海马神经元…

应用Ｇｏｌｇｉ法成人海马皮质内的神经细胞类型进行了观察，结果发现了五种不同形状的神经细胞：（１）锥体细胞，（２）异位颗粒细胞，（３）齿状锥体篮细胞，（４）卵圆形细胞，（５）锥体样星形细胞。     

不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞比率的研究

目的 比较不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例.方法 取胎龄8～12 周的人胚胎脑海马,机械分离成单细胞悬液,以2×106 个细胞/ml接种到含h-EGF、h-bFGF和h-LIF的DMEM/F12培养液中.用1?S诱导神经干细胞球分化,12 h后行RNA-结合蛋白(musashil)免疫细胞化学鉴定,分别在2、5、7、14和23 d时行β-Ⅲ微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin/Tuj1)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(galc)免疫细胞化学鉴定.结果 诱导分化12 h时细胞球中绝大部分细胞为Musashil阳性细胞,第2 d时有少量的β-ⅢTubulin和GFAP阳性细胞,未见galc阳性细胞;第7 d时β-Ⅲ Tubulin阳性细胞数目最多,约为细胞总数的48.2%,以后逐渐下降,而GFAP阳性细胞数目在第2～23 d内呈逐渐增加趋势,到第23 d时达细胞总数的65.3%;随分化时间延长,只能检测到极少量的galc阳性细胞.结论 1?S可促使人神经干细胞分化为中枢神经系统的3种主要细胞类型,且其分化为神经元和胶质细胞的比例在不同时间点上有显著差异.     

人胎肺神经内分泌细胞的发育及其作用

目的：探讨胎肺生长发育中神经内分泌细胞的表达及其功能意义。方法：检测３０例人胎肺组织,采用组织化学Ｇrimelius嗜银反应、免疫组织化学、透射电镜技术及显微图像分析。结果：神经内分泌细胞最早在胚胎第１２周胎肺出现,主要为分泌ＧＲＰ细胞,其分布与细支气管发育分化密切相关;ＣＴ阳性细胞在胚胎１６周胎肺出现;分泌ＣgＡ细胞在２０周 出现。随胎龄增长,神经内泌细胞数量递增,胚胎２４周达高峰。此后细胞数量递减,出生     

Reelin在中枢神经系统进化过程中的作用

目的探讨Reelin在中枢神经系统进化过程中所起的作用及其调节机制。方法取Reelin基因缺失小鼠(Reeler)和野生小鼠(WT),胚龄16d(E16)至出生30d(P30)各年龄点,共192例。利用免疫荧光技术与5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)法,检测两组小鼠中大脑皮质、海马、脊髓发育过程中放射状胶质细胞、神经干细胞、增殖细胞及星形胶质细胞的表达,并使用Nissl染色技术,分别对脊髓、海马、大脑皮质的组织学特征进行观察。结果脊髓发育过程中,神经细胞仅发生1次迁移,并形成套层,套层进而衍变成呈H型脊髓灰质。与野生型小鼠相比,同年龄Reelin基因缺失小鼠(Reeler小鼠)在形态结构、细胞迁移方面与野生型小鼠基本类似,但增殖的神经细胞数目明显减少。在第1次迁移的基础上,海马的形成还需经历第2次神经细胞迁移,最终形成了双"C"字型结构的锥体细胞层和颗粒细胞层;与野生型小鼠相比,在形态上Reeler小鼠锥体细胞层明显扩散劈裂为两层,齿状回颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移以致颗粒层与门区的界限消失,形成鼓槌状结构;同时,增殖的神经细胞数目减少,放射状胶质细胞排列紊乱。新皮质的形成也需经历两次迁移,但第2次神经细胞迁移所形成的皮质板按照由内向外的迁移方式继续发育为界限清晰的6层结构;与野生型小鼠相比,同年龄点Reeler小鼠新皮质片层化结构紊乱,增殖的神经细胞和放射状胶质细胞数目均有所减少,并且放射状胶质细胞排列紊乱。结论脊髓、海马和新皮质分别代表了进化过程中的管状神经、古皮质和新皮质,Reelin可能是皮质进化的关键分子。Reelin参与了第2次迁移以及新皮质皮质板的继续分层,Reelin缺失可以引起上述皮质形态和结构的变化,尤其是古皮质和新皮质。     

Jagged1对海马放射状胶质细胞增殖和向神经元分化的影响

目的探讨Jagged1在体外培养的海马放射状胶质细胞增殖和向神经元分化中的作用。方法体外培养海马放射状胶质细胞,在培养液中加入Notch信号通路的激动剂Jagged1和(或)抑制剂{氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯,DAPT},将细胞分为空白对照组、Jagged1组、Jagged1联合DAPT组、DAPT组;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞活力;免疫荧光法检测脑脂结合蛋白(BLBP)/Ki67双标阳性细胞数及分化所得的微管相关蛋白-2(MAP-2)阳性细胞数。结果 Jagged1组中细胞活力明显高于其他各组,并且Jagged1组中BLBP/Ki67双标阳性细胞及分化所得的MAP-2阳性细胞数也多于其他各组。结论 Jagged1能够促进体外培养的海马放射状胶质细胞增殖,并且能够促进其更多地向神经元分化。     

神经细胞和胶质细胞的分化

中枢神经系统的发育起源于神经干细胞,该细胞在内、外信号调控下能自我更新,分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞相当于放射状胶质细胞,该细胞多年来被认为是胶质细胞的特殊形式,并且支持、引导新生神经细胞的放射状迁移。所以,若能很好地理解神经干细胞的特性,将有助于了解神经系统的发育和发育相关的疾病,同时为中枢神经系统的退行性疾病、损伤及肿瘤的临床治疗提供思路。     

海马区星形胶质细胞的活化状态与缺血耐受性关系的研究

目的：观察海马区星形胶质细胞的活化与缺血耐受性的关系。方法：钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型,尼氏染色及免疫荧光法染色,观察海马锥体细胞迟发性神经元坏死及抗胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）染色的改变。结果：脑缺血组,ＣＡ１区锥体细胞几乎全产中丧失,只见很量少的细胞残存,零星散在分布;预缺血组,ＣＡ１区锥体细胞少部分丧失,大部分幸存。对照组有少量微弱的ＧＦＡＰ染色阳性细胞;脑缺血组有些ＧＦＡＰ染色     

大鼠脑源性神经干细胞的分离培养

目的 探讨大鼠不同年龄组来源的神经干细胞体外培养和诱导分化的最佳条件。方法 分离12～15d大鼠胚胎、1～2d新生鼠的脑组织和成年大鼠脑的海马区和嗅球，在条件培养基(包含生长因子)中增殖培养，用神经干细胞的特异性单克隆抗体巢蛋白(nestin)鉴定克隆细胞；去除生长因子，降低血清浓度到2％后，诱导细胞分化，用神经细胞的特异性单克隆抗体鉴定分化细胞。结果 获得了大量可自我增殖并分化为3种神经细胞(神经元，星形胶质细胞，少突胶质细胞)的神经前体细胞。结论 在适当的分离培养条件下，可以获得大量的神经前体细胞，为神经干细胞的基础和临床研究提供细胞基础。     

神经干细胞与脊髓损伤的修复研究现状与展望

神经干细胞在哺乳动物中枢神经许多区域存在,已经从胚胎、胎儿和成人脑组织的不同部位,包 括海马、脑室/室管膜以及从皮质分离出来,能够在体外或体内扩增、分化为神经元和神经胶质。利用神经干 细胞进行细胞替代治疗和基因治疗有很好的临床应用前景,为治疗和修复脊髓损伤带来了希望。移植神经干 细胞或它们的分化产物至宿主脑,继而分化为内生干细胞是很多神经退行性变疾病的潜在治疗方法。