弓形虫速殖子与缓殖子体外转化体系的建立

目的 建立弓形虫速殖子与缓殖子体外转化体系.方法 纯化弓形虫RH株速殖子,按一定比例和条件接种于COS-7细胞内进行体外培养.分别在接种后第1、2、3、4、5、6天观察细胞和虫体的形态并提取Total RNA,用RT-PCR的方法检测速殖子期特异性蛋白SAG1基因、缓殖子期特异性蛋白BAG1基因和SAG2C基因的表达.结果 随着速殖子在COS-7细胞中培养时间的延续,虫体的数量逐渐增多,但增殖速度逐步减缓;虫体在细胞内的排列方式也在不断变化,由成对的弧形、玫瑰花形或簇形、变成半圆形最后形成圆形的类包囊样结构.RT-PCR检测显示:速殖子期特异性蛋白SAG1基因在培养的第1～6天均有表达,且表达量呈递增趋势;缓殖子期特异性蛋白BAG1基因从第2天开始出现表达,随时间延续表达量逐渐增加;缓殖子期特异性蛋白SAG2C基因从第5天开始表达,第6天表达量增加.以上结果表明有越来越多的速殖子转化为缓殖子.改变培养条件,缓殖子也能向速殖子转化.结论 成功构建弓形虫速殖子与缓殖子体外相互转化体系,为其转化机制的研究奠定了基础.     

细胞内外弓形虫速殖子的形态观察

目的 观察细胞内（假包囊）、外弓形虫速殖子的形态差异。方法 收集小鼠腹腔内和体外培养中的细胞内、外弓形虫，染色后镜检，观察细胞内、外弓形虫速殖子的形态差异。结果 假包囊内的速殖子明显大于细胞外的速殖子，结构疏松，近圆形和椭圆形。随着繁殖数量的增加，虫体可排列成弧形及花瓣状。结论 细胞内、外弓形虫速殖子的形态差异较大。     

弓形虫速殖子死活快速鉴别的实验研究

目的寻求快速鉴别弓形虫速殖子死活的染色方法。方法用0．1％伊文思蓝、0．4％台盼蓝和0．5％溴酚蓝三种染液分别对死、活弓形虫速殖子进行染色。结果前二种染液均能使死亡弓形虫速殖子在1min内着色,活虫则不着色;后一种染液能使活动弓形虫速殖子在1min内着色,死虫则不着色。结论3种染液染色均可快速鉴别弓形虫速殖子死活。     

尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的影响

目的：观察刚地弓形虫速殖子在来源于安徽省南部地区的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下侵入Hela细胞的数量，探讨尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入Hela细胞的作用。方法：以不同浓度尖吻蝮蛇毒加入分孔培养的细胞中，于不同时间观察感染弓形虫速殖子细胞的数量。结果：尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞有明显的促进作用，弓形虫速殖子在蛇毒的作用下在同一时间内对宿主细胞侵入的数量均高于对照组(P＜0．05——P＜0．01)，但不同剂量的尖吻蝮蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的作用差异无显著性(P＞0．05)。5．0μg/ml和0．25μg/ml的剂量分别比对照组平均提高了125．49％和81．37％。结论：尖吻蝮蛇毒可以明显增加弓形虫速殖子对宿主细胞的感染率。     

常用消毒剂及自来水对弓形虫速殖子活力的影响

目的了解常用消毒剂及自来水对弓形虫速殖子活力的影响。方法将各种消毒剂分别加入等体积含弓形虫速殖子的小鼠腹水中，在不同时间内观察虫体胎盘蓝（trypanblue）着色率及活动率，并将经消毒剂处理不同时间的速殖予接种昆明鼠，观察速殖子能否在接种鼠体内复苏繁殖，导致小鼠死亡。用类似方法观察自来水时速殖子的影响。结果除甲醛个速殖子在常用浓度的不同消毒剂中，lmin月台盘蓝着色率均为100％，活动率为0。经消毒剂处理1min的速殖子接种小鼠后，各组接种鼠（包括甲醛处理组）无一死亡。经自来水处理4h的速殖子接种小鼠后仍能在小鼠体内复苏繁殖，小鼠于接种1wk内全部死亡。结论弓形虫速殖子对常用消毒剂均很敏感；而在自来水中途殖子可保持感染力4h以上。     

激光照射弓形虫诱导的免疫保护力

本实验采用激光致弱弓形虫速殖子接种ＩＣＲ小鼠腹腔,以期提高小鼠抗弓形虫感染的免疫保护力。结果表明：激光照射能够抑制虫体的繁殖和分裂能力。照射虫体免疫小鼠能诱导产生持续升高的ＩgＧ抗体。免疫鼠经弓形虫ＲＨ株攻击后,其发病和死亡时间延长,表现出部分的免疫力。提示：激光对弓形虫速殖子的作用明显,可望在弓形虫形虫病的治疗和预防中得到应用。     

弓形虫速殖子纯化方法的比较

弓形虫速殖子纯化方法的比较寄生虫学教研室刘佩梅，吴增强，武苏平弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）是一种世界性分布专性细胞内寄生的原虫，弓形虫病越来越受到国内外学者的重视。随着诊断学、免疫化学、分子生物学、酶学等研究的不断深入，临床及科研工作为...     

酶联免疫印迹法对弓形虫速殖子功能性抗原分析

目的：研究弓形虫功能性抗原,为开发弓形虫诊断试剂及商苗提供理论基础。方法：采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法,对弓形虫抗原及弓形虫速殖子抗原中能与免疫兔血清和弓形虫抗体阳性人血清起特异性反应的抗原组分进行分析。结果;弓形虫速殖子抗原的蛋白组分在ＳＤＳ－ＡＧＥ中用１２５ｇ／Ｌ的分离胶可产生较好的分辨率,分离出３０多条区带。     

激光照射对弓形虫活力及免疫原性的作用

目的 观察激光照射对弓形虫活力及免疫原性的影响.方法 分别用经2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,5.5,6.0 W/cm2光通量1 min激光照射的RH株弓形虫速殖子常规腹腔内感染BALB/c小鼠,观察存活小鼠体内弓形虫包囊的形成和抗体效价、弓形虫速殖子的活力及繁殖力.结果 4.5-6.0 W/cm2光通量激光照射后的虫体接种小鼠,小鼠全部存活,并能诱导IgG抗体的产生.此外,该光通量激光照射能使弓形虫的分裂繁殖及包囊形成抑制,活力明显减弱,死亡虫数增加.结论 激光照射能有效抑制弓形虫繁殖和分裂能力,照射后的虫体能有效诱导小鼠体液免疫应答.     

酶联免疫印迹法对弓形虫速殖子功能性抗原分析

研究弓形虫功能性抗原,为开发弓形虫病诊断试剂及疫苗提供理论基础。方法：采用十二烷基硫 酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和免疫印迹方法,对弓形虫抗原及弓形虫速殖子抗原中能与免疫兔血清和 弓形虫抗体阳性人血清起特异性反应的抗原组分进行分析。结果：弓形虫速殖子抗原的蛋白组分在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中 用１２５ ｇ／Ｌ的分离胶可产生较好的分辨率,分离出 ３０多条区带。免疫印迹分析表明 ２种抗血清均能特异地识别弓 形虫速殖子抗原,共同识别的抗原组分相对分子质量为 ４３ ０００、３３ ０００、２７ ０００、１４ ０００。结论：这些抗原组分是诱导 宿主产生对弓形虫感染免疫应答的功能性抗原。