MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨microRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:miR-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;miR-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的改变及意义

目的检测增生性瘢痕（Ｈ）和瘢痕疙瘩（Ｋ）组织中ＴＧＦβ１及Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达,了解其相互关系及意义。方法斑点杂交分析检测Ｈ和Ｋ组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ稳态水平的改变;原位杂交检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ在组织中的空间分布。结果①Ｋ和Ｈ组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ稳态水平明显高于Ｎ组和Ｓ组;②Ｋ选择性Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达增强,而Ｈ组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原ｍＲＮＡ表达均增强。结论ＴＧＦβ１在Ｈ和Ｋ的发病机理中起了重要作用,Ｋ和Ｈ发生发展中具有不同的分子机理。     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中TGF-β_1及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的改变及意义

目的检测增生性瘢痕(H)和瘢痕疙瘩(K)组织中 TGF-β_1及Ⅰ、Ⅲ型前胶原 mRNA的表达,了解其相互关系及意义。方法斑点杂交分析检测 H 和 K 组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原及 TGF-β_1mRNA 稳态水平的改变;原位杂交检测 TGF-β_1 mRNA 在组织中的空间分布。结果①K 和 H 组织中 TGF-β_1 mRNA 稳态水平明显高于 N 组和 S 组;②K 选择性Ⅰ型前胶原 mRNA 表达增强,而 H 组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原 mRNA 表达均增强。结论 TGF-β_1在 H 和 K 的发病机理中起了重要作用,K 和H 发生发展中具有不同的分子机理。     

反义TGF-β1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的研究

目的 应用反义技术抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）体外增殖,为应用基因治疗手段改善创伤愈合提供实验依据。方法 应用脂质体将反义TGF－β1转染至KF,通过细胞计数绘制细胞生长动力学曲线,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 ①转染反义TGF－β1的KF体外增殖明显降低。②与未转染反义TGF－β1的KF相比,转染反义TGF－β1的KF凋 亡发生率明显增高（差异有显著性意义,P＜0．05）。结论 反义TGF－β1可抑制体外培养的KF增殖,并促进KF的凋亡。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子 -βⅠ、Ⅱ型受体的表达及调控

目的：了解瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子(Transforming growth factor,TGF)－βⅠ、Ⅱ型受体的表达及TGF－β1,β3对其的影响。方法；体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）和正常皮肤成纤维细胞（NFB），利用免疫组化及计算机图像分析系统测定TGF-βⅠ、Ⅱ型受体含量。结果：KFB胞浆内阳性信号明显强于NFB（P＜0．05）；经TGF－β1,β3处理组胞浆内阳性信号差别均不明显（P＞0．05）。结论：KFB存在高表达的TGF－βⅠ、Ⅱ型受体；TGF－β1,β3均能促进KFB TGF－βⅠ、Ⅱ型受体的表达。     

抗转化生长因子β1预防和治疗瘢痕疙瘩的研究

目的探讨anti-TGF-β1在体外及动物模型实验中对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义.方法用电镜观察anti-TGF-β1作用后体外培养及动物模型成纤维细胞的形态学变化,用MTT法和3H-脯氨酸掺入等方法,检测anti-TGF-β1对体外培养的成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成的影响;用免疫组化技术观测anti-TGF-β1对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响.结果 anti-TGF-β1能明显影响成纤维细胞的超微结构及抑制其增殖和胶原蛋白的合成(P＜0.01).抑制作用在10 μg/ml时最大,抑制率达72%.对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白有明显的抑制作用,胶原高表达率实验组为33.3%,对照组为88.9%(P＜0.01).结论在体外及动物模型实验中,anti-TGF-β1均能中和TGF-β1促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用,提示anti-TGF-β1将来可应用在临床预防治疗过度增生的瘢痕.     

NF-1在瘢痕疙瘩中表达的研究

目的：通过比较人瘢痕疙瘩与正常皮肤组织中NF-1（nulear factor 1）在mRNA水平的表达量,来研究该基因在瘢痕疙瘩中发生的变化,并探讨其意义。方法：收集了3例正常皮肤标本和3例瘢痕疙瘩标本,用荧光定量PCR分别检测两种组织中NF-1在mRNA水平的表达量。结果：正常皮肤组和瘢痕疙瘩组中NF-1在mRNA水平的表达差异显著（P〈0．05）,正常皮肤组中NF-1的表达量是瘢痕疙瘩组的35倍。结论：NF-1 mRNA的高表达可能与瘢痕疙瘩疙瘩的发生相关,具体机制尚需进一步研究。     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达的影响

研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3、7mRNA表达的影响。方法：用RT-PCR法分别检测TGF-β1不同浓度(0，5，50，500pmol／1：Smad3 mRNA 24h，smad7 mRNA 90min)和TGF-β1(500pmol／1)作用不同时间(Smad3 mRNA：1，2，4，24，48h；Smad7 mRNA：0．5，1，1，5，2，4，24h)对Smad3、7mRNA表达的影响。结果：Smad3 mRNA水平随TGF-β1浓度的增加而呈浓度依赖性下降；5pmol／lTGF-β1就能使Smad7 mRNA水平明显地升高，并随TGF-β1浓度加大而略有改变；随作用时间延长，Smad3mRNA水平逐渐下降，在作用48h后下降到最低，呈时间依赖性。而Smad7 mRNA水平在细胞受到TGF-β1刺激后l20min即达到最高值。结论：TGF-β1能使KFB细胞Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调，而使Smad7 mRNA表达迅速增加。     

直肠癌P27基因表达及血清转化生长因子β1水平的变化

目的 探讨直肠癌中p27的表达和血清转化生长因子β1(TGF-β1)的水平。以及TGF-β1对p27的调控关系。方法 对37例直肠癌、22例直肠腺瘤和19例正常对照者用免疫组化二步法检测其p27的表达情况。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TGF-β1水平。结果 p27在正常直肠组织和直肠腺瘤组织中呈高表达。其表达阳性率分别为89．47％和90．91％，阳性表达定位于细胞核；直肠癌组织中p27表达阳性率降为64．87％，与前两者比较，差异有统计学意义(P=0．025)，且伴有p27细胞浆表达者占45．83％。血清TGF-β1在正常对照组的表达阳性率为21．05％，直肠腺瘤组为27．27％，而直肠癌组则升至51．35％(P=0．045)。p27的表达与直肠癌的分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关；血清TGF-β1表达水平与直肠癌的淋巴结转移、浸润深度和CEA水平有关。血清TGF-β1阴性组中p27表达阳性率为88．89％，血清TGF-β1阳性组中p27表达阳性率降为42．11％。差异有显著性意义(Mantel-Haenszel χ^2=6．755，P=0．009)。结论 p27对于判断直肠癌的恶性程度和预后有指导作用，血清TGF-β1可作为直肠癌的辅助诊断指标，TGF-β1可下调直肠癌中p27的蛋白表达。     

Analysis of differences of gene expressions in keloid and normal skin with the aid of cDNA microarray

Background: Microarray analysis is a popular tool to investigate the function of genes that are responsible for the phenotype of the disease. Keloid is a intricate lesion which is probably modulated by interplay of many genes. We ventured to study the differences of gene expressions between keloids and normal skins with the aid of cDNA microarray in order to explore the molecular mechanism underlying keloid formation. Methods: The PCR products of 8400 human genes were spotted on a chip in array. The DNAs were then fixed on the glass plate by a series of treatments. Total RNAs was isolated from freshly excised human keloids and normal skin, and then was purified to mRNA by Oligotex. Both the mRNA from keloids and normal skin was reversely transcribed to cDNAs with the incorporations of fluorescent dUTP, for preparing the hybridization probes. The mixed probes were then hybridized to the cDNA microarray. After highly stringent washing, the cDNA microarray was scanned for the fluorescent signals to display the differences between two kinds of tissues. Results: Among 8400 human genes, there were 402 genes (4.79%) with different expression levels between the keloids and normal skins in all cases, 250were up-regulated (2.98%) and 152 down-regulated (1.81%). Analyses of collagen, fibronectin, proteoglycan,growth factors and apoptosis related molecule gene expression confirmed that our molecular data obtained by cDNA microarray were consistent with published biochemical and clinical observations of keloids. Conclusions: DNA microarray technology is an effective technique in screening for differences in gene expression between keloid and normal skin. Many genes are involved in the formation of keloids. Further analysis of the obtained genes will help understand the molecular mechanism of keloid formation.     

TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成

目的对近年TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成的相关研究作一综述。方法广泛查阅国内外近年有关TGF-β1/Smad3信号转导通路及与创伤后瘢痕形成的文献,并进行综述。结果 TGF-β1是纤维化疾病的重要影响因子,通过TGF-β1/Smad3信号通路转导产生其生物学效应。该途径受多种因子调控并在细胞及分子水平与其他信号通路串话。该途径参与创伤后早期炎性反应、创面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干预转导途径的各个环节,可以影响纤维化及细胞外基质沉着的进程。结论 TGF-β1/Smad3信号转导途径是影响创伤后瘢痕形成及细胞外基质沉着的重要途径。对该途径进行深入研究,可为临床促进创面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理论基础。     

反义寡核苷酸对人瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子基因表达和胶原合成的作用

目的　研究结缔组织生长因子 (CTGF)在人瘢痕疙瘩发病机制中的作用。　方法　体外分离、培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (HKF)。在脂质体介导下 ,将异硫氰酸荧光素标记的硫代磷酸化CTGF反义寡核苷酸 (ASODN)转染至HKF中 ,设为CTGFASODN治疗组 (AT组 ) ,同时设脂质体对照组 (LC组 ,仅加入脂质体 )和空白对照组 (C组 ,不加脂质体和ASODN)。于荧光显微镜下观察CT GFASODN在各组细胞中的分布 ;通过逆转录聚合酶链式反应检测细胞中CTGFmRNA指数 (RI);采用3 H 脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。　结果　转染后 12h,AT组细胞胞浆内可见大量荧光 ,LC、C组HKF内无此现象。AT组转染后 4 8hRI值为 0 .12± 0 .6 2 ,明显低于LC组值 0 .5 1± 0 .18及C组值 0 .5 4± 0 .35 (P <0.0 1)。AT组的3 H 脯氨酸掺入率为 10 8.96± 79.0 5 ,较LC组值 171.2 4± 14 .99及C组值 16 5 .38± 4 3.6 1低 (P <0.0 1)。　 结论　CTGFASODN能够抑制体外培养的HKF中CTGF基因表达和胶原合成 ,表明CTGF在人瘢痕疙瘩纤维化进程中发挥了一定作用。     

转化生长因子β对人颈椎关节突关节软骨细胞基质金属蛋白酶13基因表达的调节作用及意义

目的 探讨转化生长因子β（TGF-β）对人的颈椎关节突关节透明软骨细胞基质金属蛋白酶13（MMP-13）基因表达的作用，旨在阐明颈椎退行性变的相关发生机理。方法 应用逆转录方法PCR及实时荧光定量方法，检测不同浓度TGF-β作用传代培养人的透明软骨细胞MMP-13mRNA的含量。另外3种不同浓度分别与10ng／ml IL-1β组成联合作用组，共计6个实验组及1个正常对照组。结果 正常对照组中透明软骨细胞仅见MMP-13mRNA扩增产物，实验组TGF-β1、10和100ng／ml作用12h后，MMP-13mRNA表达逐渐增强；而联合作用组中，随着TGF-β1浓度的升高，MMP-13mRNA表达逐渐降低，并且各组之间存在明显的差异（P〈0．05）。结论 TGF-β可按剂量依赖方式调节颈椎关节突关节软骨细胞MMP-13mRNA的表达。     

携带Fas基因重组腺病毒治疗瘢痕疙瘩的体内实验研究

目的 研究携带人Fas基因的两种重组腺病毒对瘢痕疙瘩的体内治疗效果。方法 构建瘢痕疙瘩裸鼠模型,应用携带Fas基因的常规腺病毒Ad—Fas（T）和细菌内重组腺病毒Ad—Fas（B）注射及Fas单克隆抗体（FasMcab）辅助对植入裸鼠皮下的瘢痕疙瘩组织进行治疗。通过大体观察、常规病理及电镜观察检测瘢痕疙瘩组织的变化。结果 单纯使用腺病毒注射的瘢痕疙瘩组织块体积仅轻度缩小。前期注射Ad—Fas（B）或Ad—Fas（T）后,应用FasMcab作为后续治疗,瘢痕疙瘩组织块均明显缩小,HE染色证实瘢痕疙瘩组织结构遭到破坏,电镜观察发现细胞凋亡证据。结论 重组腺病毒Ad—Fas（B）及Ad—Fas（T）的瘢痕疙瘩基因治疗效果令人满意。为瘢痕疙瘩的治疗提供了新途径。     

病理性瘢痕中原癌基因c-myc和c-fos的表达

目的　探讨原癌基因的表达与病理性瘢痕形成的相关性。方法　应用免疫组化SP法 ,检测c -myc和c -fos蛋白在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中的表达和分布 ,并用图像定量分析比较其差异。结果　在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的成纤维细胞中c-myc、c -fos呈强阳性表达 ,两组间无明显差异 ,而与正常皮肤对照组均有显著性差异。结论　增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中c -myc、c -fos蛋白表达升高 ,存在c -myc和c -fos原癌基因的激活 ,可能参与了成纤维细胞的分化增殖或表型转化、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控 ,并导致瘢痕增生。     

耳垂瘢痕疙瘩分泌型卷曲相关蛋白2的表达及意义

目的 探讨分泌的卷曲相关蛋白2(SFRP2)在耳垂瘢痕疙瘩发生发展过程中的表达及作用,为瘢痕疙瘩的基因治疗提供新的线索.方法 利用原位杂交和Western Blot检测伤后3、6、12、24个月耳垂瘢痕疙瘩组织边缘区和中央区SFRP2的表达变化.结果 在耳垂瘢痕疙瘩组织中,边缘区伤后12个月组SFRP2的表达显著高于3、6个月组(P＜0.01),而24与12个月组比较,差异无统计学意义.中央区伤后12个月SFRP2的表达出现下降(P＜0.01);边缘区SFRP2的表达均高于同一时期中央区的表达(P＜0.05,P＜0.01).瘢痕疙瘩表皮和血管内皮及周围组织SFRP2的表达也增强.SFRP2 mRNA和蛋白质的变化相似,只是中央区SFRP2蛋白质的衰减较SFRP2 mRNA延后.结论 SFRP2的高表达可能参予了瘢痕疙瘩的生长发展,而且瘢痕疙瘩表皮及边缘区SFRP2的高表达对其浸润性、持续性生长作用强于中央区.血管内皮细胞及周围组织SFRP2的高表达也发挥了作用.降低SFRP2的表达可能是基因治疗瘢痕疙瘩的新途径.     

Blocking transforming growth factor- receptor signaling down-regulates transforming growth factor-β1 autoproduction in keloid fibroblasts

Objective: To study transforming growth factor-β1(TGF-β1) autoproduction in keloid fibroblasts and theregulation effect of blocking TGF-β intracellular signalingon rhTGF-β1 autoproduction.Methods: Keloid fibroblasts cultured in vitro weretreated with either rhTGF-β1 (5 ng/ml ) or recombinantadenovirus containing a truncated type II TGF-β receptorgene (50 pfu/cell ). Their effects of regulating geneexpression of TGF-β1 and its receptor I and II wereobserved with Northern blot.Results: rhTGF-β1 up-regulated the gene expressionof TGF-β1 and receptor I, but not receptor II. Over-expression of the truncated receptor II down-regulated thegene expression of TGF-β1 and its receptor I, but notreceptor II.Conclusions: TGF-β1 autoproduction was observed inkeloid fibroblasts. Over-expression of the truncated TGF-βreceptor H decreased TGF-β1 autoproduction via blockingTGF-β receptor signaling.