鸡屎藤抑制丁酰胆碱酯酶活性及活性部位的UPLC-Q-TOF-MS分析

应用高通量药物筛选技术,筛选发现具有丁酰胆碱酯酶(BuChE)抑制活性的中药提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对其活性部位进行分析和鉴别。药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位。采用5,5’-二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法检测BuChE活性,于412 nm波长处检测吸收度,计算提取物对BuChE的抑制率。采用ACQUITY UPLC BEH C1 8色谱柱,以水-甲醇为流动相梯度洗脱,200～400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据。结果显示,57种中药提取物中,鸡屎藤的乙酸乙酯部位显示较强的BuChE抑制活性,并从其活性部位中分析鉴定出9个化合物,主要成分为环烯醚萜苷类化合物,分别是鸡屎藤苷、鸡屎藤苷酸、甲基鸡屎藤苷、咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖-鸡屎藤苷B和4个未知的环烯醚萜苷类,以及1个黄酮类成分蒙花苷。表明鸡屎藤乙酸乙酯提取部位具有较强的BuChE抑制活性,IC50为12.415μg/mL,Q-TOF-MS测定的相对分子质量及正离子信息鉴定鸡屎藤乙酸乙酯提取物中主要为环烯醚萜类成分,说明其含有的环烯醚萜苷类为抑制BuChE活性的主要成分,为进一步研究鸡屎藤活性成分奠定基础。     

大孔吸附树脂纯化栀子中总环烯醚萜苷和栀子苷的研究

目的建立栀子中总环烯醚萜苷测定方法,研究HPD 450大孔吸附树脂纯化栀子总环烯醚萜苷、栀子苷的工艺条件。方法采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定目标成分,考察HPD 450大孔吸附树脂对栀子总环烯醚萜苷、栀子苷的吸附和洗脱条件。结果栀子总环烯醚萜苷最大吸收波长为238 nm,与栀子苷一致,栀子苷在9.36~21.84μg/mL与吸光度呈良好线性关系,平均回收率为98.37%;HPD 450大孔吸附树脂可以将提取物中总环烯醚萜苷由45.45%提高到83.72%,栀子苷由24.46%提高到62.28%。结论HPD 450大孔吸附树脂能有效富集并纯化栀子总环烯醚萜苷、栀子苷;紫外分光光度法测定栀子总环烯醚萜苷具有快速、准确的特点。     

RP-HPLC法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量

目的建立反相高效液相色谱法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量的方法,为完善山茱萸环烯醚萜总苷的质量评价提供依据。方法色谱柱:Lichrosphere C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-水梯度洗脱(0~12min,乙腈比例由10%增加到55%);流速1.0mL/min;柱温30℃;检测波长240nm。结果马钱苷和莫诺苷分别在0.088~0.528μg(r=0.999 8)和0.088~0.352μg(r=0.999 5)之间范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为98.7%(RSD=1.3%)、98.6%(RSD=0.8%)。结论所建立的方法简便、准确、分离效果好、重复性好,可以用于控制山茱萸环烯醚萜总苷的质量。     

RP-HPLC同时测定不同产地独一味药材中4种环烯醚萜苷

目的 建立RP-HPLC同时测定不同产地独一味药材中4种环烯醚萜苷单体量的方法。方法 采用Symmetry C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：0～11 min乙腈-水(11∶89),11~35 min乙腈-水(11∶89~15∶85)。体积流量：1.0 mL/min,检测波长：235 nm。结果 山栀苷甲酯在5.0～100 μg/mL线性关系良好,加样回收率为103.1%,RSD为2.0%。螃蟹甲苷Ⅱ(phloyosideⅡ)在1.0～50 μg/mL线性关系良好,加样回收率为97.2%,RSD为1.3%。番木鳖苷甲酯在1.0～50 μg/mL线性关系良好,加样回收率为101.3%,RSD为1.5%。8-O-乙酰山栀苷甲酯在5.0～100 μg/mL线性关系良好,加样回收率为102.8%,RSD为1.2%。10批不同产地独一味药材中山栀苷甲酯量为0.3%～1.41%,螃蟹甲苷Ⅱ量为0.0%～0.45%,番木鳖苷甲酯量为0.02%～2.3%,8-O-乙酰山栀子苷甲酯量为1.05%～2.95%。结论 实验建立的环烯醚萜苷测定方法准确可靠,适于独一味药材中环烯醚萜苷类量的测定。不同产地独一味药材中环烯醚萜苷量存在较大差异。     

超声提取素馨花总环烯醚萜苷的单因素实验研究

素馨花药材又名耶悉茗花,为木犀科茉莉属植物素馨花(Jasminum officinale L.var.grandiflorum)的干燥花蕾具有疏肝解郁、行气止痛之功效,在我国民间用于治疗消化不良、十二指肠球部溃疡及慢性肝炎、肝硬化等症[1]。素馨花主要化学成分为环烯醚萜苷类、黄酮类和三萜皂苷类化合物[2-3],其中环烯醚萜苷类化合物主要为橄榄苦苷,且具有抗     

基于HPLC法测定秦艽-威灵仙药对水煎液的环烯醚萜苷类成分

目的:借助高效液相色谱法验证通过网络药理学预测的秦艽-威灵仙药对水煎液中环烯醚萜苷类成分的结果,并检测药对水煎液中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量。方法:通过中药系统药理学分析平台查询秦艽-威灵仙药对活性成分并从中筛选环烯醚萜苷类成分。采用安捷伦883975-902 ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相A为0.04%磷酸水溶液(0～28 min,85%A→77%A;28～35 min,77%A→65%A);流动相B为甲醇,色谱柱采用梯度洗脱(0～28 min,15%B→23%B;28～35 min,23%B→35%B);流速设置为0.8 mL/min,柱温设置为30℃,检测波长设置为245 nm,进样量设置为5μL。结果:秦艽-威灵仙药对共检索得到13个活性成分,其中属于环烯醚萜苷类成分3个,分别是:獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷。獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷分别在0.021 0～1.056 0μg、0.036 5～11.720 0μg和0.016 2～1.142 0μg范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.64%(RSD=2.33%,n=6)、100.20%(RSD=0.64%,n=6)和101.11%(RSD=3.59%,n=6),在药对水煎液中的含量分别为2.13 mg/g、28.36 mg/g和4.51 mg/g。结论:通过HPLC法验证了网络药理学预测的秦艽-威灵仙药对水煎液中环烯醚萜苷类成分并测定了其含量。     

左归丸水提液中总环烯醚萜苷含量测定

目的:建立左归丸水提液中总环烯醚萜苷含量测定的方法。方法:水提液通过醇沉后经大孔树脂D101对环烯醚萜苷进行分离纯化,蒸干后加香草醛和高氯酸水浴显色后用紫外可见分光光度计进行含量测定。结果:大孔树脂D101对环烯醚萜苷的分离纯化效果良好,左归丸中环烯醚萜苷以马钱苷含量较高,故选马钱苷为对照品,显色后在24.96μg~99.84μg范围内线性关系良好。结论:该方法可用于左归丸水提液中总环烯醚萜苷的含量测定。     

正交试验优选龙胆中总环烯醚萜苷的提取工艺研究

目的优选龙胆中总环烯醚萜苷的提取工艺。方法以总环烯醚萜苷的含量为指标,采用紫外分光光度法进行含量测定。对于冷浸法、超声提取法、回流提取法和索氏提取法提取龙胆中总环烯醚萜苷的工艺进行了比较,并采用L9（34）正交试验设计确定最佳提取工艺。结果回流提取法提取效果最佳,最终优化的提取工艺为：提取溶剂为70%乙醇,提取时间为2.0 h,料液比为1∶15。在此条件下,龙胆总环烯醚萜苷的含量为7.15%。结论该提取工艺具有效率高、时间短、能耗低、环保等优点,可为龙胆总环烯醚萜苷的工业化生产和新药开发提供依据。     

环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠NO、NOS和ET的影响

目的 探讨环烯醚萜总苷对NO、NOS、ET的影响，以了解其对糖尿病血管并发症大鼠的作用及作用机理。方法 用STZ60mg／kg一次给大鼠腹腔注射。若1周后大鼠血糖值高于16．7mol/L则纳为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠随机分为模型组、环烯醚萜总苷I组(0．5g／kg，ig．)、环烯醚萜总苷Ⅱ组(1．0g／kg，ig．)和氨基胍组(0．1g／kg，ig．)，同期另设一组正常组。各组连续灌胃给药12周。实验结束后取血，测定大鼠血清NO、NOS和血浆ET。结果 模型组与正常组比较，NO、NOS含量显著降低，ET含量显著升高；而环烯醚萜总苷组与氨基胍组均能显著升高糖尿病血管并发症大鼠血清NO、NOS的含量，并降低血浆ET含量。结论 环烯醚萜总苷可部分恢复NO和ET的动态平衡，保护血管内皮细胞，对糖尿病血管并发症具有改善作用。     

不同产地巴戟天及不同炮制品中总环烯醚萜的含量测定

目的建立巴戟天总环烯醚萜含量测定方法,并测定不同产地巴戟天及不同炮制品中总环烯醚萜的含量。方法采用紫外-可见分光光度法,以水晶兰苷为对照品,经酸水解,0.1%2,4-二硝基苯肼乙醇溶液和1mol/L NaOH溶液为显色剂,455nm为检测波长,对20个不同产地巴戟天及4种不同炮制品进行总环烯醚萜含量测定。结果水晶兰苷在0.01～0.06 mg/mL(R2=0.9987)浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.85%,RSD=2.99%(n=9)。不同产地23个巴戟天样品中总环烯醚萜含量差异较大,其范围为16.67%～30.06%;巴戟天经不同方法炮制后,其总环烯醚萜含量变化不明显;巴戟天须根及木心均含有较高的环烯醚萜类成分。结论所建立的含量测定方法简便、准确、重复性好,可为完善巴戟天质量控制标准提供科学依据。不同生长环境对巴戟天中总环烯醚萜含量影响较大,作为废弃物的须根及木心具有一定的利用价值。     

Box-Behnken效应曲面法优选栀子总环烯醚萜苷的提取工艺

目的:优选栀子总环烯醚萜苷提取的工艺条件。方法:结合单因素实验结果,采用Box-Behnken效应曲面法,考察乙醇浓度、溶剂量、水浴温度、提取时间4个因素对提取工艺的影响。结果:确定栀子总环烯醚萜苷的提取工艺为:乙醇体积分数为50%,乙醇体积为35 m L,水浴温度为90℃,提取时间为1 h。在此条件下提取总环烯醚萜苷含量为16. 42%。结论:Box-Behnken效应曲面法用于提取栀子总环烯醚萜苷的优化筛选是可行的。     

从藏边大黄根中分得一新的蒽醌苷硫酸酯

马鞭草属植物V．littoralis H．B．K．是生长在巴拉圭的多年生药用植物。作者从该植物的地上部分分得一新的环烯醚萜苷类化合物gelsemiol-6’-trans-caffeoyl-1-glucoside(1)，4个已知的苯乙醇苷类化合物洋丁香酚苷(2)、2’-乙酰洋丁香酚苷(3)、焦地黄苯乙醇苷(4)和异洋丁香酚苷(5)。     

橄榄苦苷提取分离和药理活性的研究进展

橄榄苦苷（Oleuropein）,是一种无毒的裂环烯醚萜苷类化合物。裂环烯谜萜（secoiridoids）是环戊烷单萜衍生物中的一类化合物,是由环烯谜萜类化合物裂环而成,只占环烯谜萜类的很少一部分。     

龙胆总裂环环烯醚萜苷质量标准研究

目的：建立总裂环环烯醚萜苷（龙胆）的质量标准.方法：采用TLC（薄层色谱）法对提取物中的龙胆进行了定性鉴别;用紫外分光光度法测定了有效部位总裂环环烯醚萜苷的含量;用高效液相色谱法测定了龙胆苦苷的含量.结果：在TLC图谱中可检出龙胆的特征斑点;龙胆苦苷在7.187～35.94μg/ml间线性关系良好,r=0.9992,平均回收率为96.8%,RSD=1.06%（紫外分光光度法）;龙胆苦苷在0.8488μg～4.244μg间线性关系良好,r=.9997,平均回收率为97.3%,RSD=0.7%（高效液相色谱法）.结论：所建立的方法可行、重现性好,能有效地控制提取物中龙胆总裂环环烯醚萜苷的质量.     

薰衣草水苏苷的药理作用

作者首次从欧益母草变种 Leonurus car-diaca var.vulgaris[Moenoh] Briquet 地上部分分得一苯丙烷苷类化合物薰衣草水苏苷(lavandulifolioside),并研究了其药理作用。该植物地上部分风干后用氯仿和甲醇提取。甲醇提取物溶于水中,用乙醚、乙酸乙酯和正丁醇分配提取。正丁醇部位进一步层析得薰衣草水苏苷。药理实验显示,丁醇提取物在1～20μg 时对大鼠离体心脏的心率无明显影响,50～2000μg 时降低心率25%～     

栀子环烯醚萜苷的大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的 研究大孔吸附树脂纯化栀子环烯醚萜苷类成分的工艺条件及参数。方法 采用UV法和HPLC法分别测定栀子总环烯醚萜苷和栀子苷的量;采用静态吸附和动态吸附考察大孔吸附树脂的吸附、解吸性能和纯化效果。结果 综合考虑生产成本及纯化效果,D-101大孔吸附树脂纯化效果较好,最佳工艺条件：柱高径比3∶1,上样液质量浓度为1.0 g/mL、吸附体积流量为0.5 BV/h、树脂吸附量为生药2.5 g/g、洗脱溶媒为50%乙醇、洗脱体积流量为2 BV/h,洗脱溶媒用量2 BV。结论 D-101大孔吸附树脂对栀子环烯醚萜苷纯化效果较好,工艺稳定可行,可用于工业化生产。     

反相高效液相色谱法制备桃叶珊瑚苷标准品

利用反相高效波相色谱结合大孔吸附树脂柱色谱和硅胶干柱色谱法，从车前草的70％甲醇提取物中纯化制备了环烯酸醚萜苷类化合物——桃叶珊瑚苷的标准品，纯度达到98％以上。该方法为桃叶珊瑚苷及其他环烯醚萜苷类化合物的制备提供了参考。     

四妙勇安汤不同配伍组合中环烯醚萜苷类成分肠吸收研究

目的考察四妙勇安汤水提物中环烯醚萜苷类成分在不同肠段中、不同配伍组合时的肠吸收情况。方法建立大鼠在体单向肠灌流模型,采用UPLC-MS^n法测定不同肠段灌流液中哈巴苷、当药苷、马钱苷和哈巴俄苷4种环烯醚萜苷类成分的含量,计算其在不同肠段中的吸收速率常数(Ka)和表观渗透系数(Papp),并以此为指标评价环烯醚萜苷类成分肠吸收情况。结果四妙勇安汤不同配伍组合中环烯醚萜苷类成分在回肠和十二指肠中的吸收情况较空肠和结肠好(P<0.05)。回肠中4种环烯醚萜苷类成分的肠吸收参数均在金银花-玄参-当归3药配伍时最高。十二指肠中马钱苷、当药苷在金银花-当归配伍时表现出较高的肠吸收参数;而哈巴苷、哈巴俄苷在复方中肠吸收参数最高,单味药中最低。结论环烯醚萜苷类成分在配伍组合时的肠吸收参数(Ka、Papp值)较所含该类成分的单味药材高。在一定程度上表明复方配伍可促进环烯醚萜苷类成分的吸收,改善其口服生物利用度低的问题。     

大孔树脂分离纯化川西獐牙菜中环烯醚萜苷类和口山酮类成分的工艺研究

目的 研究大孔吸附树脂分离纯化川西獐牙菜中环烯醚萜苷类和口山酮类成分的工艺。方法 考察了HPD-300、HPD-400、HPD-600、AB-8、DM-301及D-101Ⅰ等6种吸附树脂对环烯醚萜苷类和口山酮类的指标成分獐牙菜苦苷和当药醇苷的动态吸附及洗脱性能,从中筛选出效果较好的树脂完成实验研究。结果 HPD-300用于同时分离纯化环烯醚萜苷类和 口山酮类成分,吸附洗脱性能良好,其吸附过程上样量为0.9 g生药/mL树脂,上柱液pH值约为8,体积流量为2 BV/h;洗脱过程采用水洗除杂,7 BV 20%、5BV 70%乙醇梯度洗脱,洗脱率都在90％以上,所得2个固体样品中两类成分质量分数均可达50%以上。结论 HPD-300用于同时富集环烯醚萜苷类和口山酮类成分效果最佳,是一种理想的分离纯化介质。      

对马鞭草中环烯醚萜苷类生物合成路径的探讨

目的：探讨马鞭草中环烯醚萜苷类的生物合成路径。方法：分析马鞭草中环烯醚萜苷类化合物结构并与其生物合成路径对照。结果：新化合物3，4－二氢马鞭草苷的结构不符合这一生物合成路径。结论：马鞭草中环烯醚萜苷类的生物合成可能存在其它路径。