金丝桃素光动力学疗法与其诱导细胞凋亡、抗凋亡信号转导系统

金丝桃素在光诱导下产生活性氧，利用其光动力学治疗(PDT)在肿瘤细胞中显示出细胞毒作用，能以浓度和光依赖的方式诱导肿瘤细胞产生凋亡与坏死；通过细胞凋亡、抗凋亡信号转导通路调节细胞死亡程序。临床上利用PDT的金丝桃素被认为是安全、有效的新型抗肿瘤药物。     

两种不同的贯叶金丝桃提取物多次口服对健康人的光毒性作用

金丝桃属植物提取物中的金丝桃素和伪金丝桃素被认为是强的光敏剂，食草动物超量服用、人服用高浓度该植物提取物后可引起光毒性反应。作者研究了2种不同的贯叶金丝桃提取物STW3和STW3-Ⅵ对健康参试者的光敏性。     

光对贯叶金丝桃开花的顶部和提取物中金丝桃素类物质的影响

贯叶金丝桃 Hypericum perforatum L.是目前治疗中度抑郁症的重要植物药之一。该植物有多种次生代谢产物,主要有黄酮类、呫吨酮类、鞣质、间苯三酚类、萘并二蒽酮类     

高效液相色谱法测定贯叶金丝桃中金丝桃素和伪金丝桃素的含量

目的建立贯叶金丝桃提取物及其原料中金丝桃素和伪金丝桃素的含量测定方法.方法高效液相色谱法,其色谱条件是HypersilC18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为磷酸盐缓冲溶液-甲醇(35∶65,pH6.0);流速为0.8ml/min;检测波长为590nm,用外标法计算.结果在0.06～0.3μg范围内金丝桃素和伪金丝桃素都呈线形关系(r＞0.999),金丝桃素和伪金丝桃素的回收率分别是98.6%(RSD＝0.81%,n＝5)和97.9%(RSD=1.02%,n=5).结论建立的含量测定方法可用于贯叶金丝桃提取物整个生产过程中的质量控制.     

金丝桃甙对大鼠缺血后脑细胞凋亡的影响

目的 研究金丝桃甙（Hyp)对脑缺血诱发细胞凋亡的抑制作用。方法 采用双侧颈总动脉（CCA）结扎法造成大鼠不完全脑缺血；采用TUNEL法和电镜法观察细胞凋亡；用二苯胺试剂法测定DNA片端含量。结果 结扎双侧CCA可显诱导脑皮质细胞凋亡；Hyp 100mg/kg可显改善凋亡细胞超微结构变化，并减少脑皮质中细胞凋亡数；Hyp50、100mg/kg可抑制脑缺血诱导DNA片端的增多。结论 Hyp对缺血诱导的脑皮质细胞凋亡有抑制作用。     

金丝桃素介导的光动力学疗法对K562细胞活性与自噬的影响

目的：观察金丝桃素介导的光动力学疗法（Hyp-PDT）对慢性髓性白血病细胞（K562细胞株）活性与自噬的影响。方法：体外培养K562细胞株经过含金丝桃素（0.4 μg/mL）的培养液避光孵育后,采用0.3 mW/cm2光强度及照射4 min实施Hyp-PDT,CCK-8法测定细胞活性。收集照射前,照射后4、8、16 h的细胞悬液,分别在光镜和电镜下观察细胞形态学及自噬体数量,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、p-Akt、Akt的表达水平。结果：金丝桃素组光照后细胞活性随时间延长逐渐降低,与光照前比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,且与正常细胞组、DMSO细胞组比,所有时间点的细胞活性均显著降低（均P＜0.01）。Hyp-PDT干预后,金丝桃素组光照后部分细胞出现细胞肿胀变性甚至溶解破裂。透射电镜显示K562细胞照射前即存在自噬体,照射后8 h DMSO组中的自噬体数量开始增多,但金丝桃素组的自噬体数量明显减少。Western blot结果显示：照射后8 h和16 h时金丝桃素组LC3蛋白表达量减少,而DMSO组LC3蛋白含量呈上升趋势;照射后16 h,与DMSO组比,金丝桃素组的Beclin-1蛋白含量明显下降,p-Akt蛋白表达量明显减少（均P＜0.01）。结论：Hyp-PDT可能通过抑制p-Akt磷酸化,影响PI3K-Akt通路,减少K562自噬,促进细胞死亡,起到杀伤白血病肿瘤细胞的作用。     

泰山照山白金丝桃苷诱导人乳腺癌细胞的细胞周期阻和凋亡的机制研究

目的 观察泰山照山白金丝桃苷（Hyperin）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期及凋亡影响及其机制.方法 体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,加入不同金丝桃苷浓度处理,运用MTT法检测细胞生长、流式细胞术PI染色检测细胞周期,western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）、细胞周期蛋白A （Cyclin A）及caspase3的表达.结果 与对照组相比,经金丝桃苷处理后细胞生长呈时间及浓度依赖性抑制;MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,该期细胞比例增多;CDK2、Cyclin A蛋白水平的表达与对照组相比明显下降而caspase3蛋白水平的表达明显升高.结论 通过细胞周期的G2/M期阻滞诱导细胞凋亡可能是金丝桃苷发挥抗肿瘤作用的可能机制之一.     

蛇床子素诱导Hela细胞凋亡及其机制研究

目的：探讨蛇床子素诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制。方法：采用MTT法检测各浓度蛇床子素对Hela细胞增殖的抑制作用;光学显微镜观察细胞的形态学变化;凝胶电泳分析DNA的片段化改变;采用RT-PCR检测Hela细胞fas和bcl-2基因mRNA的表达水平。采用10μg/mL的蛇床子素作用于Hela细胞24h后的培养上清称为ost-La;洗去蛇床子素,用新鲜培养液进行24h再培养的Hela细胞培养上清称为ost-Lb;不经蛇床子素处理的Hela细胞同步培养上清作为对照,称为control-L;定量Elisa法测定各上清中TGF-β1含量。结果：蛇床子素可显著抑制Hela细胞的体外增殖,诱导Hela细胞的凋亡,且均呈剂量依赖性。RT-PCR：凋亡相关基因fas的表达量升高,而bcl-2的表达量下降,表达量的变化与蛇床子素的浓度有关。Elisa：TGF-β1的含量在ost-La中为16.732±3.068 ng/mL（P〈0.01）;在ost-Lb中为2.031±0.112 ng/mL（P〈0.01）;在control-L中为385.282±42.613 ng/mL。结论：子素可诱导Hela细胞的凋亡,其机制可能与促进Fas基因表达,抑制Bcl-2基因表达和TGF-β1含量改变有关。     

贯叶金丝桃不同器官的分泌细胞团分布密度与金丝桃素含量的相关性研究

目的 研究贯叶金丝桃不同器官的分泌细胞团分布密度和金丝桃素含量及其相关性，为选择药用成分高的品种和合理的采收部位提供依据。方法 在显微镜下观察透明装片，统计叶、花萼和花瓣中分泌细胞团的分布密度，用HPLC法分析各器官中金丝桃素含量。结果 根、茎、果实和叶的中部不含金丝桃素类物质，叶缘部分含金丝桃素0.1456％，花萼含0.0653％，花瓣含1．2682％。结论 具有分泌细胞团的器官或部位含有金丝桃素类物质，且与其分布密度成正相关；而不具分泌细胞团的器官或部位，则不含有金丝桃素类物质。     

细胞凋亡和线粒体凋亡途径在糖脂毒性导致胰岛β细胞功能衰竭中的作用

目的 探讨糖脂毒性引起高脂肥胖大鼠胰岛β细胞功能障碍的可能机制.方法 将高脂肥胖雄性Wistar大鼠18只分为3组.对照组6只经颈静脉插管输入生理盐水;高游离脂肪酸组(FFA组)6只输入脂肪乳+肝素:高糖高FFA组(GS-FFA组)6只输入葡萄糖液及脂肪乳+肝素.输注持续时间48 h.于输液前及输液结束时经颈动脉采血测定血β-羟丁酸(β-HBA)水平.输液结束后,采用静脉葡萄糖耐量试验(PCGTT)评价3组动物胰岛B细胞分泌功能.IVGTT后处死动物,留取胰尾组织病理标本,采用TLFNEL技术检测胰岛细胞凋亡水平,采用免疫组化技术测定胰岛细胞Cvt C、凋亡诱导因子、caspase-9和caspase-3表达水平.结果 (1)静脉输液结束时,3组大鼠血β-HBA水平均较基础值升高,其中GS-FFA组血p-HBA生成显著增加(P<0.05).(2)GS-FFA组大鼠ⅣGTT时胰岛素分泌指数(AI/AG)较对照组、FFA组明显减低(P<0.05).(3)3组大鼠中,GS.FFA组胰岛细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),同时GS-FFA组胰岛细胞CytC、凋亡诱导因子、caspase-9及caspase-3表达水平显著增高(P相似文献   

芹菜素选择性抑制人胃癌细胞活力和诱导细胞凋亡

目的:对比研究芹菜素对人胃癌BGC-823细胞和永生化人胃粘膜上皮GES-1细胞活力和细胞凋亡的影响。方法:体外培养BGC-823和GES-1细胞。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:芹菜素对BGC-823细胞活力有显著抑制作用(P<0.05),呈浓度依赖性,其IC50是22μmol/L;然而,对GES-1细胞活力抑制作用弱,其IC50达到77μmol/L;选择指数是3.5(77/22)。芹菜素选择性诱导BGC-823细胞Sub G1百分率增高(P<0.05),同时,活化BGC-823细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:芹菜素具有选择性抑制人胃癌BGC-823细胞活力和诱导细胞凋亡作用。     

紫花牡荆素通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其诱导凋亡机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片;碘化丙啶染色流式细胞术定量分析Sub-G1细胞百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.caspase比色试剂盒检测caspase-3/-9活性;Rh123探针染色FCM检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达.结果:不同浓度的CAS处理48h后,HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加、Sub-G1细胞百分率显著增高、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到典型的DNA梯形条带;CAS处理组caspase-3/-9活性明显升高、线粒体膜电位降低、细胞色素c、Bax显著升高,而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低.结论:CAS通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡.     

重组凋亡素真核表达载体诱导人卵巢癌细胞凋亡

目的 观察凋亡素基因（VP3）在卵巢癌细胞株CoCl中诱导凋亡的情况。方法 用Kpn Ⅰ、Xba Ⅰ分别双酶切pMD18-CAVP3和pcDNA3．1（＋），分别回收365bp和5．0kb大小的片断，然后常规行连接反应，构建重组凋亡素真核表达栽体pcDNA3．1-VP3。采用Lipofectamine^TM 2000介导的基因转染法，在体外将pcDNA3．1-VP3转染入卵巢癌细胞株CoCl中，RT—PCR检测凋亡素在细胞中的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 酶切鉴定及测序结果表明重组凋亡素真核表达载体pcDNA3．1-VP3构建成功。RT—PCR证实VP3基因在COCl中存在并在转录水平表达。转染pcDNA3．1-VP3细胞凋亡率明显高于转染空质粒组（P〈0．01）。结论 凋亡素可有效诱导卵巢癌细胞COCl凋亡。     

川楝素提取物诱导 K562 细胞凋亡的实验研究

目的 探讨川楝素提取物对人白血病 K562 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法 采用 MTT 法检测川楝素提取物对 K562 细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI 双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA 琼脂糖凝胶电泳观察 DNA 片段化;比色法检测 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 相对活性的改变;RT-PCR 检测凋亡相关基因 p21、bcr/abl、H-ras mRNA 表达水平的改变。结果 川楝素提取物显著抑制 K562 细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用 72 h 的 IC50值为 20 nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和 Annexin V/PI 双标记检测表明川楝素提取物可诱导 K562 细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞 DNA 琼脂糖凝胶电泳出现明显的 DNA ladder;处理组细胞 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA 表达上调,bcr/abl mRNA 表达下调。结论 川楝素提取物对 K562 细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与 Caspase 信号途径的活化有关。     

氨基酮戊酸光动力作用诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的实验研究

目的:探讨光动力疗法(PDT)对体外培养的人宫颈癌细胞系Hela的杀伤效应。方法:将经不同浓度5-氨基酮戊酸(ALA)处理的Hela细胞照射不同剂量的激光,用MTT法测定OD492值,细胞染色观察形态学改变,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率。结果:ALA10-1mM和激光剂量20J/cm2是PDT对Hela细胞杀伤作用的最佳参数。流式细胞术显示PDT组发生了G0-G1期生长停顿,凋亡率为(22.6±4.56)%,显著高于对照组。结论:ALA-PDT通过诱导凋亡对体外培养的Hela细胞产生杀伤作用。     

雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡研究

目的：了解雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡的发生。方法：体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶（PI）联合标记,流式细胞仪检测,观察雷公藤甲素诱导细胞凋亡的特征。结果：雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0、12．5、25、50、100和200μg／L雷公藤甲素处理细胞2h,凋亡率分别为1．67％、16．54％、32．53％、47．62％、57．12％72．77．45％;100μg／L雷公藤甲素染毒0、0．5、1、2、3和4h,细胞凋亡率分别为1．12％、14．37％、35．26％、4975％、62．65％及78．46％。结论：雷公藤甲素可诱导肾上腺皮质细胞凋亡。     

纳米二氧化硅颗粒对血管内皮细胞的毒性及其凋亡诱导作用

目的:研究纳米二氧化硅(SiO₂)颗粒的血管内皮细胞毒性和可能的作用机制,为探讨纳米SiO₂颗粒毒性效应及安全性评价提供参考依据。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为对照组和不同浓度纳米SiO₂颗粒暴露组,暴露浓度分别为12.5、25.0、50.0及100.0 mg·L^-1。采用透射电镜(TEM)观察纳米SiO₂颗粒粒径、形貌及分散性。细胞处理24 h后,电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法测定细胞中硅水平;MTT法测定细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞膜的完整性;DCFH-DA荧光探针标记激光共聚焦显微镜观察细胞中活性氧(ROS)水平;DAPI染色荧光显微镜下观察细胞核形态;Annexin Ⅴ/PI双染标记流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;罗丹明123线粒体试剂盒检测细胞线粒体膜电位。结果:TEM观察,纳米SiO₂颗粒分布均匀,大小一致,颗粒呈球形,分散性好,未发生聚集。用Image J 软件计算得到颗粒平均粒径为(57.66 ± 7.30)nm。与对照组比较,纳米SiO₂颗粒作用于HUVECs后,细胞活力下降(P<0.05),细胞中硅水平和培养液中LDH活性增加(P<0.05),细胞中ROS水平升高,线粒体膜电位下降,甚至发生细胞凋亡。上述细胞效应均表现为随颗粒作用浓度的增加而逐渐明显,呈现一定的剂量依赖关系。结论:纳米SiO₂颗粒具有血管内皮细胞毒性,可诱导ROS生成和氧化应激,从而破坏细胞膜、损伤线粒体,最终引发细胞凋亡。     

凋亡信号调节激酶1在紫花牡荆素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的:研究紫花牡荆素诱导人结肠癌细胞凋亡作用及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞。碘化丙啶(P)I染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。荧光探针二氯荧光素(DCFH-DA)标记FCM测定细胞内活性氧的含量。Western blot和小干扰RNA转染用于探索其分子机制。结果:紫花牡荆素以浓度依赖性的方式诱导结肠癌HT-29细胞系细胞凋亡。紫花牡荆素引起活性氧(ROS)的产生,并激活HT-29细胞的凋亡信号调节激酶1(ASK1)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HT-29细胞有效地抑制ASK1活性,减弱紫花牡荆素处理引起的细胞凋亡。ASK1特异小干扰RNA能显著减弱紫花牡荆素诱导HT-29细胞凋亡作用。结论:紫花牡荆素通过刺激活性氧形成活化ASK1诱导结肠癌HT-29细胞凋亡。