右归饮含药血清对人骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的影响

目的：观察右归饮对体外人骨髓分化成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞的培养体系,采用细胞形态学观察、MTT法及细胞内ALP含量检测反映其促进成骨的功能。结果：形态学观察及椰法表明,右归饮对成骨细胞的增殖起促进作用,钙结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．05）。结论：右归饮对人骨髓基质干细胞诱导分化的成骨细胞的成骨起促进作用。     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

右归饮对模拟人体内应力环境中成骨细胞碱性磷酸酶分泌的影响

目的该文对采用右归饮含药血清对大鼠成骨细胞进行牵张应力的刺激后形成的骨细胞以及分泌的碱性磷酸酶的影响进行评价,重点论证了在模拟的人体应力环境中使用右归饮进行治疗后,促进了骨细胞增殖分化的作用。方法将随机选择的40只SD大鼠分为两组一组为右归饮组,每天进行灌胃治疗,右归饮的含生药量为20 g/kg,一组为生理盐水组,每天进行灌胃,生理盐水组的灌胃量等同于右归饮组~([1])。两组均进行连续灌胃1周。末次灌胃后2 h,采用常规麻醉心脏取血的方法,将血清分离出来,在-20℃进行保存。骨细胞的培养采用序列酶消化法,将细胞进行等量分组,共分为6组,每组6孔,标注为:右归饮含药血清牵张形变组、生理盐水血清组、右归饮含药血清组、无血清培养基对照组、无血清牵涨形变组、生理盐水血清12牵张形变组。进行血清同步培养24 h,生成各组细胞,采用0.5 Hz PINLV、12%形变量的牵张力对相应的右归饮血清组、无血清组细胞等进行力学记载。采用ALP定量测定的方法检测各组的细胞ALP活性,分别于12、24 h进行加力,使用显微镜进行镜检和拍照,监测成骨细胞胞浆内的CAKP颗粒书目。使用统计学软件进行分析。结果在0.5 Hz、12%牵张应力条件下,采用常规培养条件和无血清细胞进行细胞培养的比较,前者的ALP表达受到限制,右归饮血清培养液在力学环境下的ALP比另一组要高,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论在无血清条件下,右归饮能够促进模拟人体牵张应力环境下的骨细胞的分化的增值。     

仙鹿活骨丸对成骨细胞生物学功能的影响

目的探讨仙鹿活骨丸含药血清对大鼠成骨细胞生物学功能的影响。方法采用仙鹿活骨丸含药血清体外培养大鼠成骨细胞,测定成骨细胞增殖、周期、ALP表达、细胞凋亡,以及基因Bax、Bcl-2的mRNA表达。结果与对照组相比,实验组成骨细胞的增殖能力增强,处于S期的成骨细胞数量增多,ALP表达升高,成骨细胞凋亡数量减少,Bax基因表达降低、Bcl-2表达升高。结论仙鹿活骨丸可以促进成骨细胞增殖,促进成骨细胞周期由G0/G1期进入S期,增强ALP的表达,促进成骨细胞分化成熟,抑制成骨细胞凋亡,抑制成骨细胞Bax基因的表达、增强Bcl-2基因的表达。     

右归饮诱导胎兔骨髓基质细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的探讨中药复方右归饮体外诱导骨髓基质细胞分化为软骨细胞的可行性。方法采用机械分离法从胎兔的双侧股骨髓腔中分离出骨髓基质细胞,传代培养。取第3代细胞,培养24h,换含药培养液,继续培养72h。应用MTT法、HE染色及免疫组织化学染色方法观察右归饮含药血清对骨髓基质细胞体外培养的增殖及向软骨细胞诱导分化的影响。结果不同浓度右归饮含药血清对培养骨髓基质细胞均显示增殖刺激作用(P<0.05),其中10%含药血清组的增殖刺激作用较为显著;经右归饮含药血清诱导后,HE染色后见细胞形态由原先的长梭形,纺锤形逐渐变为圆形,椭圆形。Ⅱ型胶原免疫组化染色显示呈现阳性,可见棕黄色的颗粒分布于细胞胞浆内。结论右归饮可以有效地诱导骨髓基质细胞定向分化为软骨细胞。     

四种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化功能的影响

目的:观察中药海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响。方法:应用MTT法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞增殖功能的影响,ELISA法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞ALP含量的影响。结果:在成骨细胞的增殖方面,海螵蛸、三七含药血清对成骨细胞增殖有抑制作用,骨碎补、阿胶对成骨细胞增殖没有明显促进作用。在对成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)的作用方面,海螵蛸、骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞内ALP的合成有抑制作用;三七没有明显作用;阿胶有明显的促进作用。结论:4种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响各不相同。海螵蛸对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、分化功能有抑制作用;骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无明显作用,对其分化功能有抑制作用;三七对体外培养大鼠成骨细胞的增殖有抑制作用,对其分化功能作用不明显;阿胶对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无促进作用,但能促进体外培养大鼠成骨细胞的分化功能。     

壮骨颗粒含药血清对兔骨髓基质干细胞体外增殖及分化影响

目的:研究壮骨颗粒含药血清对骨髓基质干细胞体外成骨活性的影响。方法:采用体外细胞培养技术,用壮骨颗粒对细胞进行体外诱导培养建立实验组,并设置空白血清对照组,进行MTT、免疫组织化学染色及ALP测定,观察壮骨颗粒对骨髓基质细胞的诱导作用。结果:在促细胞增殖方面,实验组作用最显著(P<0.01),在第3天开始增殖,第6天达到平台期,而对照组对数增殖期明显延长(P<0.01);在促细胞分化方面,常规形态学观察,壮骨颗粒组诱导的细胞在形态上类似于成骨细胞,免疫组化染色提示诱导细胞具有骨细胞表型。结论:壮骨颗粒可促进细胞增殖,并诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。     

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。     

骨碎补总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化、周期及调亡的影响

目的:观察含骨碎补总黄酮大鼠血清对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、周期及凋亡的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及流式细胞术观察不同浓度的含骨碎补总黄酮大鼠血清在不同时段对体外培养成骨细胞的光密度D(λ)值、碱性磷酸酶(ALP)活性及细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的骨碎补总黄酮大鼠含药血清均可促进成骨细胞增殖、分化,使处于DNA合成期细胞比例增加,使早期和晚期凋亡细胞比例减少,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.05). 结论: 骨碎补总黄酮含药血清具有促进体外成骨细胞增殖、分化,抑制成骨细胞凋亡的作用,即具有抗骨质疏松活性.     

骨康方对大鼠MSCs体外向成骨细胞分化和ALP的影响

目的:观察骨康方对大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)体外增殖并向成骨细胞分化和其对碱性磷酸酶(ALP)活性的作用。方法:用流式细胞仪鉴定第3代MSCs表面抗原,采用不同浓度的含骨康方药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线,检测ALP活性。结果:CD34表达为阴性,CD44表达为阳性。原代MSCs及诱导后形态正常。细胞生长曲线示各组MSCs数量均随时间延长增加,联合使用高、中浓度骨康方药加诱导剂可显著提高MSCs增殖,并向成骨细胞增殖。联合使用高、中、低不同浓度骨康方药加诱导剂均可显著提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性。结论:骨康方能促进大鼠体外MSCs增殖,并向成骨细胞分化。且能提高成骨细胞的ALP活性,从而增强其成骨能力。     

健骨康胶囊配方血清药理学筛选研究

目的:研究健骨康胶囊不同配方不同浓度含药血清对体外培养大鼠成骨细胞活性和及成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以健骨康胶囊不同配方口服吸收后的血清,加入体外培养大鼠成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞活性,比色法测定培养ALP活性。结果:健骨康胶囊不同配方中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,以配方2药物灌胃后10%药物血清浓度最佳。结论:健骨康胶囊药物血清体外具有抗骨质疏松症作用;健骨康胶囊配方2为优选方。     

制何首乌对成骨细胞的作用及其作用机理的研究

目的:探讨制何首乌单味药含药血清对成骨细胞(Ob)功能的影响,并探讨其作用机理。方法:通过血清药理学制备制何首乌单味药含药血清,采用SD新生大鼠头盖骨分离诱导成成骨细胞,应用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)法,检测制何首乌含药血清对Ob增殖和分化的功能,同时通过RT-PCR方法检测含药血清对Ob成骨相关基因表达的影响。结果:制何首乌含药血清能促进Ob增殖,浓度10%、20%、30%促增殖作用显著(P<0.01),组间无浓度相关性;5%和10%的含药血清能下调翻译后水平ALP,但高浓度无此作用。同时,制何首乌含药血清上调成骨相关基因(OC、ALP、Cbfα1)mRNA表达(P<0.05)。结论:制何首乌单味药含药血清具有刺激体外培养Ob的增殖作用,其作用机理可能与上调Ob成骨相关基因的表达有关。     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

【目的】观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。【方法】取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40％的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。【结果】成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。【结论】壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

不同浓度右归饮对OC形成分化的影响

目的：探讨不同浓度右归饮对体外培养破骨细胞形成分化的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以地塞米松组、地塞米松组＋不同浓度右归饮的培养液培养破骨细胞,用RT—PCR测定ATPae a3基因相对表达变化,分析破骨细胞骨吸收性。结果：两组间对比,地塞米松组＋30％右归饮组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0．05,P〈0．01）,地塞米松组＋30％右归饮组的ATPase a3基因表达量与其他对照血清组相比明显减少（P〈0．01）.结论：30％右归饮合药血清抑制破骨细胞的形成和分化,抑制破骨细胞的骨吸收活性能力最强。     

补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响

目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.     

骨质疏松肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路的研究

该文研究骨质疏松(OP)肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达及对成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin,ERK1,ERK2 mRNA及蛋白表达的作用。采用手术去卵巢法造成大鼠骨质疏松模型,并在手术10周后,分别注射氢化可的松、灌胃甲状腺素造成大鼠OP肾阳虚及OP肾阴虚模型;用新生24h乳鼠颅骨体外培养得成骨细胞,以碱性磷酸酶和茜素红染色进行鉴定,分别用OP肾阳虚、OP肾阴虚及OP组(对照组)所得的左归丸含药血清、空白血清干预成骨细胞,采用MTS法检测细胞增殖情况,ELISA法检测ALP表达,RT-PCR法检测ERK1/2,β-catenin mRNA的表达,Western blot法检测ERK1/2,β-catenin蛋白表达。结果表明:OP肾阴虚证型下左归丸含药血清在促进成骨细胞增殖、ALP表达、成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin,ERK1,ERK2 mRNA及蛋白表达方面比OP肾阳虚证型下左归丸含药血清的作用更强。这与"左归丸滋肾阴"的中医理论相吻合,为临床辩证治疗骨质疏松症提供科学依据。左归丸通过ERK1/2和Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞的增殖与分化,可能是左归丸防治骨质疏松肾阴虚证的机制之一。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

松果菊苷含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨分化及BMP2表达的研究

目的:探讨松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制。方法:大鼠用松果菊苷(16mg/kg)灌胃4天后,取血清备用。采用全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为8组:空白对照组、松果菊苷含药血清组(2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%)、经典成骨诱导组(10%FBS+10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠+10-8mol/L地塞米松+50μmol/L维生素C)。ELISA测定碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的表达;免疫荧光细胞化学染色和Western blot检测BMP2蛋白的表达,RT-PCR检测BMP2mRNA的表达。结果:与经典成骨组相比,10%松果菊苷含药血清使BMSCs表达ALP(80.16U/L)和BGP(150.79 U/L)增强,BMP2免疫荧光、BMP2蛋白表达及BMP2mRNA的表达也明显增强。结论:松果菊苷含药血清可以诱导体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,10%松果菊苷含药血清组的效果最佳,其作用机制与BMP2表达增加有关。     

补肾益精中药调控体外培养成骨细胞IGF-Ⅰ分泌与表达的研究

目的 观察补肾益精中药对体外培养成骨细胞类胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)分泌和表达的影响,探讨补肾益精中药调节骨重建的作用机理.方法 采用连续酶消化法培养大鼠颅盖骨成骨细胞,观察补肾益精药物血清对成骨细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节数目以及成骨细胞不同分化时期IGF-Ⅰ分泌和mRNA表达的影响.结果 与对照组比较,补肾益精中药能明显增加成骨细胞增殖率,提高成骨细胞ALP分泌量,增加矿化结节数;中药组IGF-Ⅰ的分泌在第7d、第21d时与对照组比较无差异,但在第14d时IGF-Ⅰ的分泌量明显高于对照组,同时其成骨细胞IGF-Ⅰ mRNA表达下调.结论 补肾益精中药可能通过调控细胞因子IGF-Ⅰ的表达与分泌发挥促进骨形成的作用.