生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)对急性早幼粒细胞系HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :应用四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;倒置显微镜观察细胞形态学变化 ;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数 (AI) ;流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡 ;RT PCR半定量检测生存素mRNA的表达。结果 :5～ 2 0 μmol·L-1生存素ASODN对HL 6 0细胞增殖均有抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性。ASODN组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论 :生存素ASODN能有效抑制HL 6 0细胞生存素mRNA的表达并诱导细胞凋亡 ,表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS诱导结肠炎小鼠结肠炎症和外周血T细胞及其亚群的影响

目的 探讨核因子(NF)-κB p65反义寡核苷酸(ASODN)对实验性结肠炎裸鼠(BALB/c)结肠炎症、外周血T细胞及其T亚群的影响.方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠造模,并将造模型成功的40只BALB/c小鼠均分为模型对照组(UC组)和NF-κB p65反义寡核苷酸组(ASODN组)、错义寡核苷酸组(MSODN组);另设正常对照组(NC组).于造模后24 h对ASODN组、MSODN组小鼠分别进行ASODN、MSODN灌肠治疗.灌肠后第7天处死小鼠,收集结肠组织进行病理评分,收集外周血于流式细胞仪进行T细胞及其亚群测定.结果 ASODN组小鼠的结肠炎症评分较UC组和MSODN组明显改善[(5.26±0.88)vs.(10.32±1.25)和(10.40±1.28)](P＜0.05),但仍高于NC组的(1.95±0.50)(P＜0.05).(2)ASODN组小鼠T淋巴细胞、Th细胞百分比值、Th/Ts比值较UC组、MSODN组明显升高(P＜0.01),Ts细胞百分比则有降低(P＜0.05).结论 TNBS能损伤小鼠的细胞免疫功能,NF-κB p65 ASODN能修复并建立新的免疫平衡,改善结肠炎症.     

紫杉醇诱导胃癌BGC-823和SGC-7901细胞凋亡作用的比较

目的研究胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞对紫杉醇诱导凋亡的敏感性。方法用0．1～0．5μmol·L^-1紫杉醇作用于BGC-823和SGC-7901细胞,再用0．3μmol·L^-1紫杉醇对BGC-823和SGC-7901细胞分别作用0、6、12、24、36、48h,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果（1）紫杉醇对两种胃癌细胞均有明显诱导凋亡作用,且均呈时间依赖性及剂量依赖性;（2）中分化的SGC-7901细胞株对紫杉醇的敏感性明显高于低分化的BGC-823细胞株。结论不同分化程度的胃癌细胞株对紫杉醇的敏感性不同。     

维甲酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞凋亡的研究

目的　探讨全反式维甲酸 (all- trans retinoic acid,ATRA)和 bcl- 2反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺癌的作用及机制 ,寻找肺癌治疗的新途径。方法　采用不同浓度的 ATRA单用或联用 bcl- 2 ASODN和 bcl- 2无义寡核苷酸 (nonsense oligodeoxynucleotides,NSODN)处理 SH- 77细胞 ,通过苔盼蓝拒染实验检测细胞活力 ,MTT法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡和 BCL- 2蛋白的表达。结果　不同浓度的 ATRA和 bcl- 2 ASODN对 SH- 77细胞均有抑制生长和诱导凋亡作用 ,G1 / G0 期细胞比例升高 ,S期细胞比例降低 ,增殖指数 (PI)降低 ,凋亡指数 (AI)和 AI/ PI比值升高 ;BCL- 2蛋白比例下降明显。 ATRA(10 - 6 m ol/ L)与 bcl- 2 ASODN两者联用与两者分别单用或与对照组比较差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。结论　 ATRA和 bcl- 2 ASODN对 S- 77细胞的生长均有抑制作用 ,同时可诱导其凋亡 ,降低其 BCL - 2蛋白表达 ,两者联用时抗癌作用进一步加强 ,提示分化诱导和基因联合治疗可能成为肺癌治疗的新策略     

三叶青黄酮诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察三叶青黄酮对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的诱导作用，初步探讨其可能的机制。方法：体外培养SGC-7901人胃癌细胞，并用MTT法检测三叶青黄酮对肿瘤细胞生长的抑制作用，流式细胞仪分析细胞周期，光镜和电镜观察细胞形态改变，酶谱分析基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白的表达改变。结果：三叶青黄酮能显著地抑制SGC-7901细胞的生长，并且具有浓度依赖性，且细胞有明显的凋亡特征性改变，并能降低细胞上清液中MMP-2的含量。结论：三叶青黄酮具有抗肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用，有潜在的抗肿瘤价值，值得进一步研究。     

姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的 探讨姜黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人胃癌SGC-7901细胞生长活力;Hoechst 33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;比色法检测Caspase-3、8、9活性.结果 姜黄素(5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)明显抑制SGC-7901细胞牛长并呈剂量依赖关系,48 h的IC50值为(23.65±3.15)μmol/L,细胞核经Hoechst 33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光.与对照组相比,姜黄素处理后凋亡细胞比例增加;姜黄素处理SGC-7901细胞48 h后Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活Caspase级联活化而抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并诱导其凋亡.     

bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡诱导作用

目的探讨bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-ODN)对模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡诱导作用。方法将模拟急性髓性白血病缓解骨髓(正常骨髓与HL-60细胞按1000:1的比例混合)分别与终浓度为10μM的bcl-2反义寡核苷酸(反义组)和bcl-2正义寡核苷酸(正义组)共培养72小时,同时设置空白对照组,观察细胞凋亡现象。结果反义组药物作用48~72小时后,流式细胞仪和DNA电泳检测到反义组出现细胞凋亡现象,而空白对照组和正义组均未检测到细胞凋亡现象。结论bcl-2AS-ODN可诱导模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡,是其应用于体外净化的基本条件。     

平胃汤诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨不同浓度复方平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及可能的机制。方法以细胞超微结构和细胞凋亡情况评价不同浓度(120、240或480 mg/ml)平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞的影响。结果 1与空白组比较,平胃汤组细胞超微结构变化显著(细胞内线粒体数目增加且体积增大、细胞膜较完整),细胞增殖抑制率和凋亡率明显增高,且具有一定的时间及剂量依赖性(P<0.05);2与空白组比较,平胃汤组Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量下调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论平胃汤能促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与Bax表达增高以及Bcl-2表达降低有关。     

c-myc反义寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及增殖作用

目的　探讨c myc反义寡核苷酸 (c mycASON)对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及增殖作用的影响。方法　立体定向法将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾壳核建立鼠脑胶质瘤模型 ,采用人工合成的c mycASON和c myc正义寡核苷酸 (c mycSON)注射于瘤区。按接种后给药的种类、浓度及给药间隔时间将动物随机分成ASON 1组、2组、3组 ;SON 1组、2组、3组 ;生理盐水 1组、2组 (NS1组、2组 )。电镜观察凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果　 (1)反义组出现较多的凋亡细胞 ,正义组与生理盐水组凋亡细胞少。 (2 )各治疗组均显示凋亡峰 ,ASON 1组、2组、3组细胞凋亡率分别为 (18 8± 1 3) %、(2 0 3± 1 4 ) %、(17 8± 1 1) % ,各反义组与各正义组、各生理盐水组分别比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 (3)反义组肿瘤细胞在细胞周期G0 /G1期所占比例较大 ,各反义组差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;各反义组与各正义组、各生理盐水组分别比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　c myc反义寡核苷酸能诱导鼠脑胶质瘤细胞凋亡和抑制细胞增殖。     

白英乙醇提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究白英乙醇提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关基因Fas和caspase-3表达的影响。方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞;实验分正常对照、顺铂及白英乙醇提取物高、中、低剂量(10、5、2.5mg·mL-1)组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR法分析基因Fas和caspase-3 mRNA的表达情况。结果:与正常对照组比较,白英乙醇提取物高、中、低剂量组对SGC-7901细胞增殖抑制均有促进作用(P<0.01),且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡显著增多,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;基因Fas和caspase-3 mRNA表达显著升高(P<0.01或P<0.05),并随白英乙醇提取物浓度增加而加强。结论:白英乙醇提取物能剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用可能与调控Fas和caspase-3 mRNA表达相关。     

Par-4基因在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸的抗凋亡作用

目的研究前列腺凋亡反应基因4(Par4)在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸(ASODN)的抗凋亡作用。方法在正常或缺氧条件下培养PC12细胞,分组将不同浓度Par4反义寡核苷酸转染PC12细胞,吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态,流式细胞分析评价凋亡百分率。Westernblot测定Par4蛋白表达量,比色法检测Caspase3的酶活性。结果缺氧24h,PC12细胞中Par4蛋白表达量上调157.42±7.53,明显高于正常对照组10.51±3.36(P<0.01)。10μmol/L的Par4,ASODN使Par4蛋白降为31.79±3.09,明显低于缺氧组157.42±7.53(P<0.01)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡,10μmol/LASODN使细胞凋亡百分数降为(34.5±3.5)%,明显低于缺氧组的(69.3±5.7)%(P<0.05)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞中Caspase3的酶活性上调,10μmol/LASODN使其活性降为0.549±0.078,与缺氧组0.917±0.051相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论Par4基因可能参与了缺氧诱导的PC12细胞损害。Par4ASODN可拮抗缺氧诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与Caspase3酶活性下调有关。     

秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究

目的:研究秦皮乙素对SGC-7901细胞的作用及其作用机制。方法:首先通过MTT法考察秦皮乙素对胃癌SGC-7901细胞体外抑瘤作用,并用电镜法观察经不同浓度的秦皮乙素作用的SGC-7901细胞的形态特征,最后用流式细胞仪法检测bcl-2、bax蛋白的表达。结果:秦皮乙素具有一定的抗肿瘤作用,随着给药浓度的增加,SGC-7901细胞的生长率也随之降低,且有明显的凋亡形态学特征。药物作用24h后,用FCM法检测到bcl-2的表达随给药浓度的增加而降低,而bax表达呈上升趋势。结论:秦皮乙素对SGC-7901细胞有显著的抑制作用且诱导其凋亡。     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌T24细胞体外增殖的影响

为探讨全硫代修饰的端粒酶反义寡核苷要酸（ASODT－t）抑制人膀胱癌T24细胞增殖并诱导及凋亡的可能性,采用光镜、电镜、四唑盐（MTT）比色法及流式细胞仪等检测不同浓度ASODT－t对T24细胞生长、细胞周期和诱导凋亡的作用。结果表明,不同浓度ASODT－t对T24细胞生长有抑制作用,且具有序列特异性及剂量依赖性。6μmol/L ASODT－t作用细胞72h,电镜观察可见典型凋亡特征,流式细胞仪检测到凋亡峰,凋亡率为10．4％,而无关寡核苷酸（N－ODN）片段则无此作用。结论：ASODT－t对人膀胱癌T24细胞生长有抑制作用,并可诱导其发生凋亡,进一步说明端粒酶与T24细胞恶性增殖有关,抑制端粒酶活性可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。     

鱼腥草地下茎提取物诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制的研究

目的对鱼腥草不同部位提取物诱导SGC-7901细胞凋亡及其机制进行研究。方法将鱼腥草地上茎(AS)、地下茎(SS)、叶(L)的粉末经乙醇提取得浸膏;处理SGC-7901细胞48 h后,采用Alamar blue法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响;筛选出较高活性浸膏,光学显微镜、Hoechst33258染色观察细胞形态;DNA Ladder琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性检测试剂盒测定Caspase-3酶活性。Western blot检测凋亡相关因子的表达;Caspase-9抑制剂(Z-LEHD-FMK)验证浸膏调控的信号转导通路。结果各部位浸膏对SGC-7901细胞均有一定的增殖抑制活性,其中SS提取物活性最强;不同浓度的SS提取物作用SGC-7901细胞48 h后,细胞明显凋亡;DNA ladder条带也明显;Caspase-3的活性明显高于对照组;Bax、Bid、Bak、p53、Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调;Caspase-9抑制剂(ZLEHD-FMK)能够逆转SS对SGC-7901细胞的增殖抑制活性。结论 SS对SGC-7901细胞的增殖抑制作用最强,且是通过Caspase-9介导的线粒体凋亡信号转导通路来调控细胞凋亡的。     

新型bcl-2基因反义寡核苷酸F951诱导人白血病HL60细胞凋亡

目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL60细胞共孵育48h后,线粒体凋亡细胞:未处理组、FNS对照组分别为3.00%、13.57%,F9513个剂量分别为30.95%、38.08%、52.55%;Caspase活性细胞:未处理组、FNS对照组分别为0.08%、0.14%,F9513个剂量组分别为43.68%、60.54%、80.37%。凝胶电泳分析:F951处理组可见典型的DNALadder,且随着药物浓度的提高诱导DNA Ladder的作用更加明显;TUNEL和电镜检查:未处理组与FNS对照组中仅偶见凋亡细胞,F951各剂量组凋亡细胞常见,且随着药物浓度的提高凋亡细胞增多。结论F951具有诱导HL60细胞凋亡的作用;F951诱导肿瘤细胞凋亡的作用是通过抑制bcl-2基因,启动细胞凋亡调控通道而实现的。     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨SW体外诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC7901细胞的作用剂量,通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53、cmyc、Bcl2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式,同时利用激光共聚焦显微镜对细胞内Ca2 浓度的监测,研究SW与细胞内Ca2 超载的关系。结果:SW体外抗SGC7901细胞的完全致死剂量为6.2μg·ml-l,高于0.05μg·ml-l时抑制作用明显(P<0.05),其LC50为0.84μg·ml-l;经SW0.5～1.5μg·ml-l处理24h可引起凋亡抑制基因p53、Bcl2的明显下降、凋亡促进基因cmyc的明显升高以及肿瘤细胞内Ca2 超载,最终诱导SGC7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨苦马豆素(swainsonine,SW)体外诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC-7901细胞的作用浓度;通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53,c-myc,Bcl-2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式;同时利用激光共聚焦显微镜监测细胞内Ca~(2+)浓度,研究SW与细胞内Ca~(2+)超载的关系。结果:SW体外抗SGC-7901细胞的完全致死浓度为6．2μg·mL~(-1),高于0．05μg·mL~(-1)时抑制作用明显(P＜0．05),其IC_(50)为0．84μg·mL～(-1);经SW 0．5,1．5,4．5μg·mL~(-1)处理24h可引起凋亡抑制基因p53和Bcl-2的明显下降,凋亡促进基因c-myc明显升高以及肿瘤细胞内Ca~(2+)超载,最终诱导SGC-7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。     

Livin mRNA的反义核酸诱导MCF-7乳癌细胞凋亡作用

目的：以livin mRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸(PS—ODNs)，探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法：设计以livin mRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF-7乳癌细胞，用MTT、RT—PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果：在设计的一些反义核酸中，YMZ05能够有效地抑制livin基因的表达，增加caspase-3的活性，诱导MCF-7细胞凋亡，明显抑制其生长，结论：通过抑制livin基因的表达能够抑制MCF-7乳癌细胞生长、诱导其凋亡，livin可能会成为抗肿瘤的新靶点。     

雷丸蛋白pPeOp诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制研究

目的探究雷丸蛋白pPeOp诱导人胃癌细胞SGC-7901的凋亡机制。方法采用CCK-8法和流式细胞术检测不同浓度的pPeOp(30、60、90 mg·L~(-1))对人胃癌细胞SGC-7901的活性抑制和凋亡诱导作用;q RT-PCR和Western blot检测死亡受体通路和线粒体通路TNF-R1、Fas/Fas L、Bcl-2、caspase-3、caspase-8的m RNA和蛋白表达情况。结果CCK-8结果显示,与Control组相比,阴性对照聚乙烯吡咯烷酮(PVP)组细胞存活率差异无显著性;阳性对照5-氟尿嘧啶(5-Fu)组细胞存活率为(53.71±7.34)%,存活率明显下降(P<0.05);30、60、90 mg·L~(-1)的pPeOp组细胞存活率分别为(80.95±6.25)%、(53.48±5.70)%、(44.61±6.50)%,存活率降低且与浓度呈负相关(r=0.984,P=0.016)。流式细胞术结果显示,PVP组与Control组相比差异无显著性,5-Fu组细胞凋亡率为(39.30±3.34)%(P<0.05),30、60、90mg·L~(-1)pPeOp组细胞凋亡率分别为(10.90±1.25)%、(28.80±2.70)%、(32.00±3.50)%,差异存在显著性(P<0.05)。TNF-R1、Fas/Fas L、caspase-3及caspase-8的m RNA和蛋白表达水平均上调,差异存在显著性(P<0.05);Bcl-2的m RNA和蛋白表达水平下调,差异存在显著性(P<0.05)。结论 pPeOp能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其凋亡,死亡受体通路和线粒体通路与pPeOp诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡有关。     

NOD2和TLR9激动剂诱导胃癌细胞SGC-7901合成IL-8的研究

目的探讨TLR9和NOD2在胃癌细胞SGC-7901中表达及诱导IL-8合成过程中的相互作用及意义。方法用不同浓度的NOD2激动剂（MDP）和TLR9激动剂（未甲基化的CpG ODN）以不同时间间隔单独或联合作用于体外培养的胃癌细胞SGC-7901,用ELISA法测定上清中的IL-8,用RT-PCR和Western Blot测定TLR9和NOD2的表达。数据采用SPSS13.0进行统计分析。结果相对于未刺激组,MDP和未甲基化CpG ODN能使SGC-7901NOD2和TLR9mRNA和蛋白的表达增强;细胞培养上清中IL-8的分泌增强,并呈现时间依赖性和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）,8h浓度差异无统计学意义,二者共同作用还能协同诱导SGC-7901合成IL-8,也呈现时间和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 NOD2和TLR9在胃癌细胞SGC-7901中有所表达,二者在诱导SGC-7901分泌炎性因子的过程中有协同作用。