抗CD4单克隆抗体可变区基因克隆及测序

目的：获取抗ＣＤ４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因，为构建抗ＣＤ４嵌合抗体打下基础。方法 从分泌抗人ＣＤ４ ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系中提取总ＲＮＡ，用家族特异性引物进行逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分别扩增出重链可变区（ＶＨ）基因及轻链可变区（ＶＬ）基因。将ＰＣＲ产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体，然后转化ＪＭ１０９细菌。并用全自动 ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ及ＶＬ基因序列进行测定。结果：ＶＨ基因为３５１     

抗HSV—糖蛋白（gp30）单克隆抗体重键可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序分析。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与？…

获得抗血管内皮生长因子１６５抗体的轻重链可变区基因。方法从分泌具有中和抗血管皮生长因子１６５活性的单抗杂交瘤细胞株Ｖｍｄ１１中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆该单抗的轻，重链可变区基因并进行序列分析。     

抗人黑色素瘤单抗HB8759轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

获得新的鼠抗人黑色素瘤单Ｒ抗ＨＢ８７５９轻，重链可变区基因，以便对其进行基因工程改造。方法：采用反转录－ＰＣＲ从杂交瘤细胞中扩增抗体轻，重链可变区基因，测定ＤＮＡ序列，输入计算机分析，并在大肠杆菌中表达。结论：ＶＨ，ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．     

人黑色素瘤单抗VH—TNF融合蛋白基因的构建和表达

在大肠杆菌中表达人黑色素瘤单抗ＶＨ－ＴＮＦ融合蛋白基因。方法；在人肿瘤坏死因子基因上游插入了抗黑色素瘤单抗Ｍｅｌ３的重链可变区基因，将此融合基因插入大肠杆菌表达系统ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，ＩＰＴＧ诱导表达，表达产物经凝血酶消化后，测定其对Ｌ９２９细胞的杀伤活性，并进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，用抗ＴＮＦ抗体进行蛋白印迹分析。     

抗HEV ORF2单链可变区抗体的筛选和鉴定

目的：筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读码框架２（ＯＲＦ２）的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法：以大肠杆菌表达的重组ＨＥＶ ＯＲＦ２多肽做为固相包被抗原,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过４轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、ＤＮＡ序列分析鉴定,获得抗原结合活性较强的抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体,并以间接酶标法用该抗体对戊型肝炎患者石蜡包埋肝组织中的ＨＥＶ ＯＲＦ２抗原进行免疫组织化学鉴定。结果：筛选到的抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２的单链可变区抗体基因。酶切和序列分析表明,该抗体基因由７９５ｂｐ组成：ＥＬＩＳＡ和免疫组织化学结果显示,抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２人源化噬菌体单链可变区抗体能与重组ＨＥＶ ＯＲＦ２抗原特异性结合,并能够特异性识别戊型肝炎患者肝组织中的ＨＥＶ抗原。结论：此法     

抗癌胚抗原单区抗体的质粒构建及表达

目的 对抗癌胚抗原单区抗体进行表达研究。方法 采用ＰＣＲ技术将已获得的抗癌胚抗原（ＣＥＡ）原单克隆抗体Ｅ７Ｂ１０重，轻链可变区基因（ＶＨ、ＶＫ）进行改造后分别克陲是大肠杆菌表达质粒ＰＥＴ－２４α（＋）中，并进行表达，结果 显示重、轻链可变区在大肠杆菌中获得高铲表达，基力体总蛋白的２０％与２５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ图谱显示表达产物分子量为１３ＫＤ、１２ＫＤ，与其基因编旧白 理     

肝癌单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析

目的：获取抗人原发性肝癌单克隆抗体重、轻链可变区基因。方法：从分泌高亲和力的抗人原发性肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＳＭ８．１１中提取细胞的总ＲＮＡ，以随机引物反转录合成ｃＤＮＡ，以特异引物进行ＰＣＲ，扩增了单抗的重链可变区（ＶＨ）及轻链可变区（ＶＬ）基因，并进行了序列分析。结果：ＶＨ基因片段长度为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸残基；ＶＬ基因片段长度为３２４ｂｐ，编码１０７个氨基酸残基。两者均有４个     

鼠抗人TNF-α单域抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

ＲＴ－ＰＣＲ法获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体Ｅ６轻,重链可变区基因序列,分别构建融合表达载体ｐＧＥ６ＶＨ和ｐＧＥ６ＶＬ,利用大肠杆框图 系统表达ＶＨ和ＶＬ单域抗体蛋白。方法：将ＲＴ－ＰＣＲ法获得的Ｅ６ＶＨ和Ｅ６ＶＬ基因分别克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中,使它们受控于Ｐｔａｃ启动子,转化大肠杆菌ＤＨ５α,经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导,１００ｇ／ＬＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达     

抗人C1q轻链可变区基因在DH5α中的表达及序列同源性分析

利用基因工程技术在大肠杆菌中表达抗人Ｃ１ｑ轻链可变区基因Ｃ１ｑＶＬ。将质粒ｐＧＥＭ－Ｃ１ｑＶＬ中的Ｃ１ｑＶＬ基因克隆进表达载体ｐＢＶ２２０中，在大肠菌中成功地表达出抗人Ｃ１ｑ轻链可变区片段（ｐＣ１ｑＶＬ），并利用计算机分析软件进行了氨基酸序列同源性分析。本研究为进一步抗人Ｃｑ１ＦＶ抗体的研制及用于自身免疫性发病机制的研究打下了一定基础。     

特异性抗鼠IgD单链抗体基因的构建及序列测定

获得特异性抗鼠ＩｇＤｍＡｂ４１４／ＤＦ的单链抗体基因,方法：在获得高亲和力抗鼠ＩｇＤ特异性ｍＡｂ重,轻链可变区基因的基础上,采用酶连法将二者拼成单链抗体基因。结果所构建的单链抗体基因为ＶＨ－Ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬ结构,长７２９ｂｐ,其中包含重链可变区基因３５７ｂｐ,可编码１１９个氨基酸,连接肽基因４５ｂｐ,可编码     

抗人肿瘤坏死因子—α单链抗体基因的构建及序列测定

目的：构建鼠抗人肿坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）单链抗体基因。方法：从分泌ｈＴＮＦ－α单抗的小鼠杂交瘤细胞株Ｅ６中获得抗中变区基因的基础上，采用限制性内切酶酶切拼接法，并按ＶＨ－Ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬ的结构将轻，重链可变区基因拼接单链抗体（ＳｃＦｖ）基因，荧光标记测序引物分析其核苷酸序列。结果：构建成长７４７ｂｐ的单链抗体基因。其中连接钛基因长４５ｂｐ，经序列测定和分析表明为拼接正确，完整的抗ｈＴＨＦ０     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

一株抗独特型人单抗轻链可变区基因的克隆及序列测定

目的：探索抗独特型抗体模拟抗原的分子机理。方法：利用反转录－ＰＣＲ方法，从分泌肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗的杂交瘤细胞系（Ｃ８），成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ Ｉｄ人单抗轻链可变区基因，并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中，测定了此轻链可变区基因全序列。结果：经计算机分析，基因全长共３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，氨基酸序比较性分析发现所得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋     

γ-seminoprotein单链抗体/突变型人羧肽酶A融合基因的构建

目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因后进行了定点突变，并将突变型人羧肽酶A基因与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合。方法 应用重叠延伸法将突变型人羧肽酶A与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合，并在大肠杆菌中进行表达。结果 序列分析表明：我们得到大约为1980bp的基因，其5'端为抗精浆蛋白单链抗体基因，3'端为人羧肽酶A突变体基因，抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧伏酶A基因成功地融合为一条基因，应用pGEX-4T-1表达载体原核表达得到-Mr约为97000的特异蛋白。结论 抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶A基因成功的融合为一条基因并进行了原核表达。     

人精子包被抗原的提取法研究

人精子经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理，冷冻高速离心后，制成人精子膜蛋白粗制品，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５抗人精浆亲和层析柱提取精子膜蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳呈单一区带，分子量为５２ｋｕ，用其免疫新西兰兔产生具有精子凝集和制动活性的特异性抗血清，以其作为抗原，经ＥＬＩＳＡ间接法测定不育国子精浆中抗精抗体，结果，２０例生育男子组和５０例不育男子组精浆中抗精抗体ＩｇＧ，ＩｇＡ分别为１０％，５％和３８％     

抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因克隆及序列分析

目的：获得抗人视网膜母细胞瘤（RB）单克隆抗体轻链可变区基因序列，为进一步构建抗RB基因工程抗体奠定基础。方法：用扩增小鼠κ轻链可变区基因的一对引物，从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株3C6中提取细胞总RNA，经RT－PCR扩增出3C6VL的cDNA片段，并将其克隆人pGEM -T Easy测序载体，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因由321bp组成，编码了107氨基酸残基，含有4个框架区及3个抗原互补决定区，并含有抗体特性的两个半胱氨酸残基，在基因数据库（Gene Bank 2000,4)中，未发现相同的基因。结论：从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体杂交瘤细胞中成功克隆了抗人网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因，为抗RB基因工程抗体研究及新一代抗RB肿瘤导向药物的研究奠定了坚实的基础。     

出血热病毒抗原与其抗独特型抗体基因的研究

为了解抗独特型抗体与抗原的基因特征和相互关系。方法采用基因工程方法，从分泌肾病综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单克隆抗体杂交瘤细胞系（Ｃ８），克隆获得的抗ＨＦＲＳＶＩｄ人单克隆抗体重链和轻链可变区基因，并与出血热病毒基因进行了比较。结果抗Ｉｄ人单克隆抗体重链可变区第４５～５５位氨基酸序列和轻链可变区第５８～６８位氨基酸序列，均与出血热病毒Ｇ２膜蛋白的第４４７～４５７位氨基酸序列高度同源，而且同源区域具有相似的蛋白质二级结构。结论抗Ｉｄ人单克隆抗体模拟抗原具有一定的分子基础。