分泌抗HLA Class Ⅰ单态性单克隆抗体杂交瘤细胞的建株和鉴定

本文报道了应用杂交瘤技术制备抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,命名为CJH-F6,经流式细胞间接免疫荧光分析,放射免疫沉淀 SDS-PAGE 测定,微量淋巴细胞毒实验和血小板吸收试验均证明为抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,Ig 类别为 IgM,文内讨论了此单抗的应用。     

大鼠肝胞液糖皮质激素受体的高效液相分析

目的：应用高效液相疏水作用层析法（HPHIC）分离并纯化大鼠肝胞液高、低亲和力糖皮质激素受体（GRH和GRL），为临床大剂量糖皮质激素（GC）冲击治疗提供实验依据。方法：超速离心大鼠肝组织，取上清，核素^3H-地塞米松（Dex）标记后，分别行Pseudoscatchard分析及HPHIC分析，SDS-PAGE及Western印迹法鉴定HPHIC分析后所收集的峰值管蛋白的性质。结果：在标准大气压，0～4℃条件下，只出现一个洗脱峰，峰值位置在9～11min。而在标准大气压，25℃且^3H-Dex≥50nmol/L时出现两个洗脱峰，峰值位置在3～7min及9～11min。SDS-PAGE及Western印迹法显示5～7min和9～11min时出现相对分子质量约60000、可与GC单克隆抗体结合的蛋白质分子。结论：提示有两种不同大小的GR分子存在，但是否存在GRH和GRL尚需进一步的实验证实。     

分泌抗人IgMμ链McAb杂交瘤细胞株的建立

本文从正常人（HBSAg阴性）血清中分离纯化人IgM，以此作为抗原免疫BALB／C小鼠，根据kohler和Milstein杂交瘤细胞建株原理，采用本室建立的常规方法，将免疫脾细胞和小鼠SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，建立了分泌抗人IgMμ链单克隆抗体杂交瘤细胞株。经过间接ELISA双向琼脂扩散试验及封闭试验等方法证实，所分泌的抗体为抗人IgMμ链McAb，其中3A4、3D32株杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代，均能分泌高效价抗体，且为IgG1亚类。本实验结果为抗人IgM鼠队嵌合抗体基因的构建奠定了基础。     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

作者用SP2/0骨髓瘤细胞与绿脓杆菌Ⅰ群10115株免疫的BALB/c鼠脾细胞融合获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株C_3、D_1和D_3,对其中C_3杂交瘤株作了PHA、ELISA、IFA检定分析,证明能分泌高效价特异的单克隆抗体。PAGE结果出现一特殊区带。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_1。     

抗人精子单克隆抗体对生殖的影响

本文报告9株抗人精子单克隆抗体在体外对生殖的影响。TAT、SIT、SCMC和精子—地鼠去透明带穿卵实验表明:3株IgM类抗人精子单克隆抗体主要引起精子的头—头凝集,对精子有较强的补体依赖性细胞毒作用;6株IgG类抗人精子单克隆抗体主要引起精子的尾—尾凝集,并能阻止精子在宫颈粘液中的前向性运动;4/9株抗人精子单克隆抗体对精子穿卵有明显抑制作用,且两株联合应用有协同效应,提示有效而可靠的精子避孕疫苗应具有多个抗原决定簇。     

分泌抗人IgMμ链单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用杂交瘤技术建立了6株分泌抗人IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经琼脂糖双扩散试验、双扩散和ELISA封闭试验,以及免疫电泳等方法证实,所分泌的抗体具有抗人IgMμ链特异性.其中4株分泌IgG_1亚类、2株分泌IgG_2a亚类抗体.经一年多的反复冻存和复苏,这6株细胞均能稳定分泌高效价抗体.     

脲变性α-糜蛋白酶的高效液相色谱复性

目的研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPHIC)固定相表面上的保留行为及活性回收率。方法用脲将标准蛋白质α-糜蛋白酶(α-Chy)变性,然后以硫酸铵为流动相,用HPHIC固定相(TSK)对脲变性α-Chy进行复性,并测定复性α-Chy的Z值、质量及活性回收率。结果Z值随脲浓度的增大而减小,变性剂浓度在1.0～3.0mol·L-1范围内时,HPHIC对变性α-Chy有较高的活性回收率。结论HPHIC是变性蛋白复性的有效工具,蛋白质与固定相之间的疏水作用是蛋白折叠的主要驱动力。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备及其对抗原决定簇特异性的研究

用杂交瘤技术建立三株分泌抗甲状腺球蛋白(TG)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所获三种单克隆抗体经兔抗小鼠IgG亚类、IgM及IgA血清鉴定表明,两种为IgG_1,一种为IgA;三种含单克隆抗体小鼠腹水的滴度(ELISA法)均为51200以上;以竞争性固相抗体结合试验测定它们对抗原决定簇的特异性差异,结果发现三种单克隆抗体的抗原结合部位是不同的,但对抗原的结合有一定的相互竞争抑制现象。     

抗人A型红细胞ZMC_9单克隆抗体的纯化及理化性质

本文应用葡聚糖凝胶G-200柱层析和聚丙烯酰胺凝胶板状电泳,将细胞培养上清液及小鼠腹水中的单克隆抗体分离提纯,并对它的理化性质进行了研究.结果表明:①ZMC_9单克隆抗体(小鼠IgM)分子量为871000道尔顿.②纯化单克隆抗体在56℃加热5 min,即失去抗体活性,而未经纯化的单克隆抗体即使加热30min,抗体活性也毫无损失.③纯化单克隆抗体在pH 6～8环境中活性不变,pH超过8.0时活性有所下降,而未经纯化的单克隆抗体在pH 6～10范围内仍表现有活性.④将试剂冻干或加叠氮钠4℃保存,效价至少可维持一年以上.     

抗人IgA单克隆抗体的定鉴

人 IgA免疫的 BALB/C 鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,以ELISA和PHA方法检测抗体,建立了两株对 IgA 的单克隆杂交细胞林39-1,2-9。本株单克隆抗体不与 IgG、IgM、κ及λ抗原反应,是对α链特异的,两株单克隆抗体分别属鼠 IgG2b和 IgG1亚类。     

抗人精子单克隆抗体的制备和特性鉴定

用杂交瘤技术制备了12株稳定地分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接免疫荧光法观察这些抗体分别结合到精子不同部位,有7个抗体使精子产生头—头凝集或尾—尾凝集,有4个抗体使精子制动,只有1个抗体与淋巴细胞有交叉反应。测定了10个单克隆抗体的免疫球蛋白亚类,7个属于IgG,13个属于IgM。     

抗黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体免疫BALB/c/小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,经克隆化获得分泌抗赖型017株钩端螺旋体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光抗体法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的是特异性抗体,注入同系小鼠腹腔可诱生合高效价单克隆抗体的腹水,与杂交瘤细胞培养上清效价相比,增高800倍。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_(2b)。     

RNase等10种标准蛋白质在高效疏水作用色谱上的复性

目的: 研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPHIC)上的保留行为及复性效率. 方法: 分别用盐酸胍(GuHCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将核糖核酸酶(Rnase)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为硫酸铵的条件下,用HPHIC对变性蛋白质进行复性,并测定其保留时间、Z值、质量及活性回收率. 结果: 在10种变性蛋白质中有5种在HPHIC上得到复性,其保留时间、峰形、Z值与天然蛋白基本一致,其中溶菌酶和核糖核酸酶的质量和活性回收率高,复性效果好. 结论: 用HPHIC对变性的标准蛋白质进行复性,得到较好的复性效果.     

抗人β2微球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人β2微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）单克隆抗体并对其进行鉴定。方法：用高纯度的β2-MG免疫BALB／C小鼠，按常规技术制备针对β2-MG不同抗原表位的单克隆抗体，并对其进行纯化，测定抗体亚类、抗原表位分析等。结果：筛选出10株抗人β2-MG杂交瘤细胞株，ELISA间接法证实这组单克隆抗体仅与β2微球蛋白反应，而与其他蛋白无交叉反应，IgG亚类鉴定6株为IgGl，2株为IgG2a，1株为IgA，1株为IgM。结论：获得特异性的抗人β2微球蛋白单克隆抗体，为试剂盒的开发研究奠定基础。     

酶标记抗人IgM单克隆抗体的制备及其初步鉴定与应用

用HRP以改良过碘酸钠法标记了6种国产抗人IgM单克隆抗体并进行了初步鉴定。选用高效价的HRP标记抗人IgM McAb,用ELISA间接夹心法检测病人血清中特异性IgM抗体,其特异性阳敏感性与采用HRP标记羊抗人μ链检测基本相同。     

还原变性核糖核酸酶的高效液相色谱复性

目的:研究还原变性的核糖核酸酶(RNase)在高效疏水作用色谱(HPHIC)及高效离子交换色谱(HPIEC)上的复性及影响因素.方法:在二硫苏糖醇(DTT)存在的条件下用盐酸胍(GuHCl)和尿素(Urea)将RNase变性还原,先在溶液中加入氧化型谷胱苷肽(GSSG)进行氧化,然后在流动相中有低浓度变性剂存在的条件下,用HPHIC,HPIEC及稀释法对其进行复性并测定其生物活性及回收率.结果:HPHIC和HPIEC对RNase的复性效率均高于稀释法,两者的色谱固定相对RNase的复性均有所贡献.在色谱流动相中加入低浓度的变性剂可以提高复性效率,改变GSSG的浓度对复性效率也有影响.结论:用HPHIC,HPIEC对RNase进行复性,不仅复性效率高,而且快速、简便,具有很好的应用前景.     

抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

本文用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫的BALB/c小鼠与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞。该4株荜克隆抗体与华支睾吸虫成虫抗原作ELISA,结果均为阳性。经交叉试验(ELISA法)证明与日本血吸虫成虫抗原,虫卵抗原和卫氏并殖吸虫成虫抗原均呈阴性反应。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定除3F_7株为IgG_1外,其余3株均属IgM。初步试用3F_7株单克隆抗体作ELISA双抗体法检测人体华支睾吸虫循环抗原。     

抗人类疱疹病毒7型南京分离株YY5单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人类疱疹病毒7型(HHV-7)单克隆抗体,应用于临床与科研。方法:用纯化的HHV-7南京株YY5免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选。间接免疫荧光、免疫印迹试验等方法鉴定单抗。结果:获得了3株分泌抗(HHV-7)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为6H9、6C11、4D5。单克隆抗体亚类鉴定表明:6H9为IgG1类,6C11、4D5为IgM类。用间接ELISA方法检测单抗腹水滴度分别为:1:6.40×104,1:1.28×105,1:1.00×103。免疫印迹试验结果表明:6C11能与分子质量约70 ku大小的病毒蛋白结合。结论:成功制备并鉴定3株抗HHV-7单克隆抗体,为进一步研究HHV-7的特性及为临床快速诊断提供可能。     

广州管圆线虫感染致大鼠肺组织病理改变及免疫组化研究

目的观察动物感染广州管圆线虫后肺组织病理改变,以及应用抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体进行感染鼠肺免疫组织化学研究。方法20只大鼠实验室人工感染广州管圆线虫,组织学方法观察肺组织的形态学变化,免疫组织化学方法应用实验室制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体IgG和IgM进行肺组织切片的免疫反应性研究。结果受感染的大鼠肺组织肿胀实变,表面及切面质硬粗糙,有灰白色虫卵结节,病变范围广泛。HE染色镜下观察可见肺组织中有多个圆形、椭圆形的虫卵结节,结节周围组织细胞反应及纤维化,肺泡隔增厚,肺泡轮廓消失。结节内虫卵发育形成桑葚期、仔虫期及一期幼虫。用抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体IgG和IgM分别行免疫组化,结果显示桑葚期虫卵表达IgG,而IgM则在桑葚期、仔虫期及一期幼虫等部位均有显著阳性表达。结论广州管圆线虫感染所致大鼠肺脏病理改变,主要表现在肺内形成多个虫卵结节,并可致肺呈纤维化改变;抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体IgG和IgM在肺组织虫卵结节内的阳性表达有显著差别。     

应用A蛋白分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体

目的 分离纯化鼠源性抗肥大细胞FcεRIα(高亲和力的IgE的Fc段受体)的单克隆抗体。方法 先培养ER-E5.3细胞,获得大量的含抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体的培养上清。然后应用A蛋白-Sphrose CL-4B制备亲和层析柱,分离纯化细胞培养上清中的单克隆抗体。结果分离纯化的单克隆抗体纯度高,活性强。结论应用A蛋白可以很好分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRIα的单克隆抗体。