蟾酥灵对HL-60/ADR作用的研究

目的 :探讨中药蟾酥灵对HL -60 /ADR耐药细胞在抑制生长、诱导凋亡方面的作用和影响。方法 :①MTT比色法观察对细胞的抑制 ;②流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :①蟾酥灵抑制HL -60 /ADR耐药细胞的生长 ,药物浓度与HL -60 /ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系 ;②随着药物浓度的增加 ,HL -60 /ADR细胞凋亡率也增加。结论 :蟾酥灵可抑制HL -60 /ADR细胞生长 ,促进细胞凋亡呈剂量依赖性     

五味子乙素对MRP介导的肿瘤多药耐药逆转作用的研究

目的探讨五味子乙素（SchB）对表达MRP1的肿瘤耐药细胞株的逆转耐药作用及相关机制。方法噻唑蓝（MTT）法测定不同浓度SchB对柔红霉素（DNR）抑制HL60／ADR生长及同一浓度SchB对不同化疗药物抑制HL60／ADR和HLJ60/MRP细胞生长的影响；流式细胞仪检测SchB作用前后，HL60／ADR和HLJ60/MRP细胞内化疗药物DNR和MRP1特异性底物CFDA积聚的变化。结果4～25μM Sch B作用范围内浓度依赖性下降，逆转倍数显著上升；SchB可有效降低HL60／ADR、HL60／MRP对DNR、长春新碱（VCR）和VP16的IC50，逆转倍数2倍到20倍不等；SchB能够增加DNR和MRP1特异性底物CFDA在细胞内的积聚。结论SchB对同一细胞MDR的逆转与浓度相关，在一定浓度范围内，依浓度增加而增加；SchB可以逆转不同化疗药物对MRP1介导的耐药，其逆转机制与增加化疗药物的积聚能力有关。     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7作用机制的初步研究

目的：测定抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7体外抗肿瘤谱,初步研究其抗肿瘤机制。方法：用MIT法测定PHⅡ－7体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪,电子显微镜和琼脂糖凝胶电泳观察PHⅡ－7对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。用Northern印迹分析检测PHⅡ－7对耐药相关基因mdr 1和sorcin的影响。结果：PHⅡ－7对多种人肿瘤细胞的生长有抑制作用,IC50为0．34－18．61μmol/L,更为突出的是,对于MDR类抗肿瘤药无效的多药耐药肿瘤细胞,PHⅡ－7同样具有生长抑制作用;1μg/mlPHⅡ-7诱导HL60,HL60／ADR细胞凋亡,PHⅡ－7可抑制K562／A02细胞中耐药相关基因的表达。 结论：PHⅡ－7是一种有较好前景的抗耐药肿瘤新药,其可能通过抑制耐药相关基因mdr1和sorcin的表达而提高多药耐药细胞内药物浓度,从而引起肿瘤细胞凋亡。     

姜黄素逆转HL60/ADR 及MCF-7/ADR的多药耐药研究

目的观察姜黄素对HL60/ADR以及MCF-7/ADR多药耐药(MDR)的逆转。方法用MTT法观察细胞的生长抑制效应,流式细胞仪检测凋亡以及细胞内阿霉素浓度,RT-PCR以及Western Blot检测Mdr1、MRP基因和Bcl-2蛋白表达。结果加入姜黄素后耐药细胞系逆转指数分别为4.18(HL60/ADR)和3.39(MCF-7/ADR),与单纯应用阿霉素相比差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示有明显的促凋亡作用,耐药细胞系内的ADR浓度明显升高;RT-PCR以及Western Blot检测发现姜黄素对上述耐药细胞系的MRP以及Bcl-2表达有抑制作用。结论姜黄素可能作为多药耐药的逆转剂应用于MDR逆转。     

植物多酚类化合物逆转肿瘤多药耐药的筛选

目的：研究槲皮素，小檗碱，黄芩甙，芦丁，牛蒡子甙逆转肿瘤多药耐药（MDR）的作用及机制。方法：MTT法检测槲皮素，小檗碱，黄芩甙，芦丁，牛蒡子甙的细胞毒性作用及耐药逆转效果。流式细胞术检测槲皮素作用前后MCF-7/ADR细胞P-糖蛋白（Pgp)表达的变化。结果：小檗碱能显著抑制MCF-7/ADR及MCF-7细胞的增殖，槲皮素，黄岑甙，芦丁能显著抑制MCF-7细胞增殖，槲皮素能提高MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性，逆转倍数为3.19，并能降低MCF-7/ADR细胞Pgp的表达。结论：槲皮素能够部分逆转多药耐药，其逆转机制与下调Pgp表达有关。     

耐药肿瘤细胞β-1整合素表达及对细胞凋亡的影响研究

目的：探讨耐药肿瘤粘附分子β－1整合素的表达以及其对细胞凋亡的影响。并寻找逆转耐药的途径。方法：采用人肺腺癌细胞株A549及耐阿霉素细胞株A549－ADR，免疫组化方法检测耐药细胞β－1整合素的表达；TUNEL法检测其对细胞凋亡的影响。结果：耐药细胞β－1整合素表达水平高于敏感细胞（P＜0．01）；敏感细胞及耐药细胞FN后其凋亡率较未结合FN细胞明显降低（P＜0．01）；用抗β－1整合素抗体阻断与FN结合耐药细胞株β－1整合素，其凋亡率与未阻断β－1整合素，但与FN结合的耐药株相比，有显著差异（P＜0．001）。结论：耐药肿瘤细胞β－1整合素表达增加，成为耐药表型；其机制主要通过抑制细胞凋亡产生耐药；阻断其作用可以逆转肿瘤耐药。     

葡萄籽多酚对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR的体内外耐药逆转作用

目的：研究葡萄籽多酚(grape seed polyphenol，GSP)对人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7／ADR的体内外耐药逆转作用。方法：采用MTT法检测1．2mg/L和2．4mg/L GSP对MCF-7／ADR的体外耐药逆转倍数。建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型，实验分为4组：对照组，GSP组，阿霉素(adriamycin，ADR)组和ADR GSP组，观察GSP对肿瘤细胞的体内耐药逆转作用；采用流式细胞术测定不同用药组P-糖蛋白(Pgp)表达变化。结果：体外1.2mg／LGSP即可有效逆转耐药，2．4mg／LGSP的逆转倍数为9．44；体内裸鼠抑瘤实验显示，GSP有一定抑瘤作用，联用ADR可显著抑制肿瘤生长，20mg/kg GSP可有效逆转CF-7／ADR细胞的耐药性，抑瘤率为54．64％。流式细胞术结果显示，联用GSP与ADR组肿瘤细胞Pgp表达明显低于单独使用ADR组。结论：GSP能在体内外逆转MCF-7／ADR细胞的耐药性，此作用可能是通过抑制Pgp表达实现的。     

解毒化瘀药对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药细胞凋亡的影响.方法:应用流式细胞仪检测解毒化疼药含药血清处理后的各组HL60/ADR细胞凋亡的情况.结果:解毒化瘀药中药复方能促进白血病耐药细胞HL60/ADR早期凋亡率,并呈浓度相关性.结论:解毒化瘀药含药血清能够促进HL60/ADR细胞凋亡.     

姜黄素对人急性髓性白血病细胞的作用及机理的初步探讨

目的：探讨姜黄素对急性髓性白血病（HL－60）增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对HL－60的抑制作用；流式细胞仪分析细胞周期分布；透射电镜观察细胞的超微细胞变化。结果：姜黄素可抑制HL－60细胞的生长，其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系；中效浓度（IC50）为24．8μmol/L时，流式细胞仪分析证实姜黄素能使HL－60细胞聚积在S期、G2／M期；电镜观察发现姜黄素可使HL－60细胞超微结构发生改变。结论：姜黄素可干扰HL－60细胞的周期分布，具有抗细菌增殖及诱导细胞凋亡的作用。     

全反式维甲酸与紫杉醇、阿霉素联合诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)分别与紫杉醇(Taxol)、阿霉素(ADR)单独或联合孵育HL-60细胞株能否增强凋亡诱导作用,并进一步研究bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因在此过程中的作用。方法:1用台盼兰拒染法观察细胞生长活力;2在光镜和电镜下观察细胞形态变化;3用流式细胞仪(FCM)检测药物孵育前后细胞凋亡率(AP)的变化;4用RT-PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因及其家族bax、bcl-x基因的表达水平。结果:1ATRA能增强Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用;2ATRA能增强HL-60细胞对Taxol和ADR诱导的细胞凋亡;3在ATRA与Taxol、ADR联合诱导的HL-60细胞凋亡中,bcl-2、bcl-xl基因表达下降,bax、bcl-xs基因表达增加。结论:ATRA能增加Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用及凋亡诱导作用,bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因参与了ATRA与Taxol、ADR联合诱导细胞凋亡的调控。     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷抗白

目的:研究甲基转移酶抑制荆5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60生长、分化、凋亡的影响,初步探讨其抗白血病作用的可能机制.方法:不同浓度和时间的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用MTT比色试验检测5-aza-2dC对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞周期及分化的影响;采用Hochest33342染色和流式细胞术检测5-aza-2dC时HL-60细胞凋亡的影响;采用RT-PCR法检测药物处理对S100A8和S100A9基因mRNA表达水平的影响.结果:(1)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞的生长,并使HL-60细胞周期阻滞于G2/M期;(2)5-aza-2dC处理使HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,在低浓度(0.5 μmol/L)时其促分化作用最明显;(3)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地诱导HL-60细胞凋亡,在高浓度(5.0μmol/L)时诱导凋亡的作用最明显;(4)5-aza-2dC能明显上调S100A8和S100A9基因mRNA的表达.结论:5-aza-2dC能抑制HL-60细胞生长,阻滞HL-60细胞于G2/M期,促进HL-60细胞分化和诱导其凋亡,并能上调S100A8和S100A9基因的表达,这些作用可能是5-aza-2dC抗急性髓系白血病的重要机制.     

干扰素—α与蟾蜍灵、槲皮素、砷剂联合逆转HL—60／ADR耐药的初步研究

目的：探讨用干扰素－α（TNF-α、IFN）分别与蟾蜍灵（Bufalin,Buf),槲皮素（Quercetin,Que)、砷剂（Arsenic Trioxide,As2O3)联合或单独孵育耐药细胞株HL－60／ADR对ADR有无增敏及逆转耐药作用。方法：用MTT法检测IFN与Buf,Que,As2O3孵育后增敏作用。结果：IFN,Buf单独应用无增敏作用,但两者联合有增敏作用。Que,As2O3单独应用有增敏作用,但分别与IFN联用后增敏作用不增强。结论：Que,As2O3能增加HL－60／ADR对阿霉素的敏感性、逆转其耐药,IFN与Buf联合亦能增敏及逆转耐药。     

黄荆子乙酸乙酯提取物对HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制人急性髓性白血病HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。方法:体外培养HL-60细胞和人外周血单核细胞(PBMC),MTT法测定细胞增殖;软琼脂培养集落形成法检测细胞生长;PI染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果:EVn-50对HL-60细胞增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性;而对PBMC的增殖活性影响小。EVn-50对HL-60细胞集落形成有抑制效应,呈浓度依赖性。EVn-50有效诱导HL-60细胞凋亡。结论:EVn-50具有抑制HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞生长抑制和凋亡

目的:研究8-硝基白杨素(8-nitrochyrsin,NOChR)对HL-60细胞生长和凋亡的影响。方法:MTT法检测HL-60细胞增殖活性;台盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;PI染色流式细胞术分析细胞周期和凋亡率。结果:NOChR呈浓度依赖性对HL-60细胞增殖具有抑制作用;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;PI染色流式细胞术结果表明以浓度依赖方式诱导HL-60细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期。结论:NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关。     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡

目的：探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞的凋亡作用和机制。方法：用二甲氧唑黄（XTT）细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase3活性变化。结果：双氢青蒿素对HL-60细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,并能诱导HL-60细胞凋亡,使线粒体膜去极化,增强Caspase3活性。结论：双氢青蒿素能抑制人急性髓系白血病HL-60细胞生长,并诱导细胞凋亡,可能和线粒体凋亡通路有关。