脐血间质干细胞经肌源性诱导后细胞内游离钙的变化

目的研究3种不同的肌源性诱导方法对脐血间质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）进行诱导后细胞内Ca2＋调控系统分化的影响。方法 2007年1月至2010年4月上海交通大学医学院附属新华医院采用5-氮杂胞嘧啶核苷（5-azacytidine,5-aza）、心肌裂解液和心肌诱导液分别诱导犬脐血MSCs。采用激光共聚焦显微镜检测5-aza、心肌裂解液和心肌诱导液诱导的细胞、心肌细胞和MSCs内Ca2＋荧光探针Fluo-3/AM结合的Ca2＋,每份细胞选取2~5个视野,每一种细胞观察记录30个视野,取每1 min摄得的10张图象的平均荧光强度值,以光密度值（OD）反映细胞内游离Ca2＋浓度;并连续监测细胞内游离Ca2＋浓度的变化。结果经3种方法诱导后细胞内游离Ca2＋浓度均高于心肌细胞内游离Ca2＋浓度（F=59.400,P=0.000）。5-aza、心肌裂解液和心肌诱导液诱导的细胞内游离Ca2＋浓度差异有统计学意义（F=18.988,P=0.000）。5-aza诱导的细胞内游离Ca2＋浓度与心肌裂解液诱导的细胞比较差异无统计学意义（OD 1 076.88±44.65 vs.1 040.90±37.48,P=0.186）,但其浓度高于心肌诱导液诱导的细胞（OD 1 076.88±44.65 vs.973.91±46.49,P=0.001）,心肌裂解液诱导的细胞内游离Ca2＋浓度高于心肌诱导液诱导的细胞（OD 1 040.90±37.48 vs.973.91±46.49,P=0.001）。3种诱导方法诱导后的细胞内游离Ca2＋呈自发性波动,与心肌细胞相似,但其频率和幅度有明显差异。5-aza、心肌裂解液诱导后的MSCs在KCl刺激下能使细胞内Ca2＋瞬时释放,心肌诱导液诱导后的MSCs对KCl也有反应,但不能诱发Ca2＋释放,而是使Ca2＋释放时间延长。结论 5-aza诱导、心肌裂解液和心肌诱导液诱导对MSCs的Ca2＋调控系统有分化作用,3种方法的效果不同,其产生差异的原因和效果的优劣需进一步实验阐明。     

三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721[Ca2＋]i的影响

目的观察不同浓度三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及细胞内Ca2 的影响,探讨其在肝癌化疗中的可能机制。方法MTT法测定不同浓度As2O3对SMMC-7721细胞的抑制作用;Fura2-AM标记细胞内Ca2 ,荧光分析仪测定不同浓度As2O3对SMMC-7721细胞内Ca2 浓度的影响。结果As2O3在0.5～2.0μg/ml的浓度范围内对肝癌SMMC-7721细胞的生长具有抑制趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);As2O3在0.5,1.0μg/ml浓度时,对SMMC-7721细胞内Ca2 浓度的影响,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);当As2O3浓度为2.0μg/ml,作用时间为48h,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),而作用时间至72h,细胞内Ca2 又恢复至正常水平(P>0.05)。结论As2O3对SMMC-7721细胞内Ca2 的影响不仅与浓度有关而且与作用时间有关。     

邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用及机理研究

目的：研究邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素（ODE）抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用及机理。方法：采用MTT比色法测定体外抗骨肉瘤SOSP-9607细胞作用,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态学;采用激光共聚焦显微镜测定SOSP-9607细胞内Ca^2＋、Mg^2＋．pH值和线粒体膜电位（MMP）的荧光强度;免疫细胞化学技术检测细胞内Bcl-2和Bax表达。结果：ODE时间、浓度依赖性地抑制SOSP-9607细胞生长,诱导细胞凋亡具有典型的凋亡形态特征如细胞膜表面微绒毛消失、核固缩、核碎裂等;剂量依赖性地增加SOSP-9607细胞内Ca^2＋,Mg^2＋浓度而降低细胞内pH值和线粒体膜电位;使SOSP-9607细胞内Bcl-2蛋白表达下降而Bax蛋白表达增加。结论：邻-氨基酚去甲表鬼臼毒素在体外实验中能明显抑制骨肉瘤SOSP-9607细胞生长,其作用机制可能与改变细胞内环境稳态及Bcl-2和Bax蛋白表达而诱导细胞凋亡有关。     

Genistein对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1表达及细胞内游离钙的影响

目的 观察5,7,4'-三羟基异黄酮(Genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞TCF-β1的表达及细胞内钙离子浓度的影响,探讨Genistein抗纤维化作用的机制.方法 体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度Genistein(25、50、100μmol/L)处理,RT-PCR法检测药物作用48h后细胞TGF-β1mRNA的表达,Western Blot法检测细胞TGF-β1蛋白表达量的变化;激光共聚焦显微镜动态观测Genistein处理后成纤维细胞内Ca2+浓度以及Genistein预处理后再加bFGF刺激的细胞Ca2+浓度的动态变化.结果 Genistein作用后增生性瘢痕成纤维细胞表达TGF-β1的mRNA与蛋白量均显著下调,并具有剂量依赖性;bFGF可使培养的成纤维细胞内游离Ca2+浓度升高,经Genistein预处理的细胞内Ca2+的浓度明显下降.结论 Genistein能抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1,的表达,拮抗生长因子促细胞内游离Ca2+浓度增加的效应,可能是其抗纤维化作用的机制之一.     

Fibrocystin对常染色体隐性遗传多囊肾病囊肿细胞增殖的影响

目的 研究fibrocystin对表皮生长因子（EGF）诱导的细胞过度增殖的影响并探讨其机制。 方法 通过RNA干扰技术建立PKHD1-沉默细胞株，分别检测EGF诱导的细胞增殖率、ERK1/2磷酸化水平和细胞内Ca2+浓度。通过降低HEK 293细胞和增高PKHD1-沉默细胞内Ca2+浓度，研究Ca2+在其中的可能作用。 结果 与HEK 293细胞比较，PKHD1-沉默 HEK 293细胞对EGF作用高度敏感，增殖率为231.5%，显著高于HEK 293细胞的152.8%(P ＜ 0.01)，细胞内Ca2+浓度也显著降低（P ＜ 0.01）。同时PKHD1沉默可显著增高EGF诱导的ERK1/2信号通路活化。运用Ca2+通道阻断剂维拉帕米降低HEK 293细胞内Ca2+浓度后，与未经维拉帕米处理的细胞比较，细胞增殖率为202.2%，显著增高。维拉帕米处理的HEK 293细胞的ERK1/2磷酸化水平明显高于未处理的细胞。而运用Ca2+通道激活剂Bay K8644增高PKHD1-沉默 HEK 293细胞内Ca2+浓度后，显著降低了EGF诱导的PKHD1-沉默HEK 293细胞的增殖率（135.5%）， Bay K8644处理的PKHD1-沉默HEK 293细胞的ERK1/2磷酸化水平明显低于未处理的细胞。 结论 PKHD1基因的突变导致fibrocystin功能缺失，引起细胞内Ca2+浓度降低，导致EGF诱导的ERK1/2信号通路过度活化，可能是常染色体隐性遗传多囊肾疾病（ARPKD）患者肾囊肿衬里上皮细胞异常增殖导致ARPKD肾囊肿发生的机制之一。     

组织血液灌注与微循环的病理生理(1)——氧的利用障碍

2．细胞钙稳态紊乱：静息状态下，细胞胞浆Ca^2＋浓度约为10^-7mol／L，而细胞外液Ca^2＋浓度约为10-3mol/L，细胞内外Ca^2＋浓度相差10000倍左右。细胞内Ca^2＋浓度的变动可作为细胞内信使影响多种钙依赖性酶的活性而改变细胞的功能状态。细胞一系列的Ca^2＋运转机制失调使细胞内Ca^2＋浓度出现非控制性增高时，则出现细胞钙稳态紊乱。从理论上判断这种钙稳态紊乱是由于①Ca^2＋ -Mg^2＋ -ATP酶（钙泵）活性降低，或Na^2＋／Ca^2＋交换、H^＋／Ca^2＋交换逆转，以致胞内Ca^2＋外流减少；     

尼卡地平对缺氧/复氧心肌细胞损害及细胞内Ca~(2 )的影响

目的 :研究尼卡地平对缺氧 /复氧心肌细胞损害及细胞内Ca2 的影响。方法 :培养 4～ 5天原代SD大鼠心肌细胞分为正常对照、单纯缺氧 /复氧以及低剂量和高剂量 (终浓度分别为 30ng/ml和 2 70ng/ml)的尼卡地平预防用药 2 0分钟后缺氧 /复氧四组。实验结束测定培养液乳酸脱氢氧酶 (LDH)和肌酸激酶 (CK)活性以及细胞内Ca2 含量。结果 :缺氧复氧后 ,心肌细胞内游离Ca2 浓度 ,以及培养液中LDH和CK活性显著升高。高剂量尼卡地平能明显减轻这种升高 ,而低浓度尼卡地平则无明显影响。结论 :高浓度尼卡地平减轻缺氧 /复氧心肌细胞Ca2 超载 ,对心肌细胞产生一定保护作用     

川芎嗪对家兔阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙浓度的影响

目的 :研究中药川芎嗪 (TMP)对体外培养家兔阴茎海绵体平滑肌细胞 (PCSMC)胞质内游离钙浓度([Ca2 + ] i)的影响。　方法 :用新型Ca2 + 荧光染色剂Fluo 3/AM负载家兔PCSMC ,细胞分为氯化钾 (KCl)作用组和去甲肾上腺素 (NE)作用组 ,应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)实时测定胞质内 [Ca2 + ] i的变化 ,分别观察不同浓度的TMP对高钾和NE诱导胞质内 [Ca2 + ] i升高的影响 ,并与经典钙拮抗剂维拉帕米 (Ver)的作用相对比。　结果 :静息状态下 ,TMP对家兔PCSMC胞质内 [Ca2 + ] i无明显影响。 1、1 0、1 0 0 μmol/LTMP能显著抑制高钾诱发的细胞内 [Ca2 + ] i升高 ,抑制率分别为 (38.6± 3 .0 ) %、(44.1± 2 .4) %和 (53 .7± 4 .1 ) % ;也能抑制 1 μmol/LNE诱发钙库释放所致的细胞内 [Ca2 + ] i升高 ,抑制率分别为 (1 3 .9± 2 .7) %、(2 1 .2± 1 .9) %和 (2 9.5± 3 .6) %。　结论 :TMP通过对家兔PCSMC电压依赖性钙通道和细胞内钙库释放的双重抑制作用 ,降低PCSMC胞质内 [Ca2 + ] i水平 ,其作用效果与Ver相似 ,这是TMP治疗阴茎勃起功能障碍的重要机制。     

异丙酚对大鼠海马神经细胞内游离钙和钙调蛋白活性的影响

目的观察一次性注射异丙酚对Wistar＇s大鼠海马神经细胞内游离钙（[Ca^2＋]i）和钙调蛋白（calmodulin，CaM）相对活性的影响。方法40只Wistar＇s大鼠随机分为5组，即对照组、诱导期组、麻醉期组、恢复期组、清醒期组。对照组腹腔注射生理盐水10ml／kg，其余各组注射异丙酚100mg／kg．在不同麻醉时期断头取脑，用流式细胞术测定海马神经细胞内[Ca^2＋]i和CaM相对活性。结果①麻醉诱导后海马神经细胞内[Ca^2＋]i与对照组比较升高有统计学意义（P〈0．01）．②CaM平均荧光强度诱导期与对照组及恢复期比较升高有统计学意义（P〈0．05），恢复期其活性接近对照组水平（P〉0．05）。结论Wistarg大鼠腹腔注射异丙酚100mg／kg即刻可明显影响其海马神经细胞内[Ca^2＋]i和CaM相对活性。CaM作为信号分子在异丙酚全麻作用的分子学机制中发挥了一定作用。     

氯胺酮对荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2+浓度波动方式的影响

目的研究氯胺酮对荷包牡丹碱诱导PCI2细胞内Ca^2＋浓度波动方式的影响。方法使用含25ng／LNGF的DMED培养基在多聚赖氨酸包被的培养皿中培养PCl2细胞；与终浓度10gmol／L的Ca^2＋指示剂Fluo-3 AM ester共孵育30min洗涤后，加入终浓度50gmol／L荷包牡丹碱；在激光共聚焦显微镜选定多个细胞分别测定荧光强度的变化；随后加入氯胺酮，记录细胞荧光强度的改变。在试验结束前依次加入Triton X-100和EGTA分别记录单个细胞最大荧光强度（Fmax）和最小荧光强度（Fmin），以计算细胞内Ca^2＋的相对强度。结果氯胺酮不改变荷包牡丹碱诱导PCl2细胞内Ca^2＋浓度波动的基线，但抑制细胞内Ca^2＋浓度升高的幅度（P〈0．05），缩短相邻波峰间的时间间隙（P〈0．05）。结论氯胺酮不仅改变荷包牡丹碱诱导PCl2细胞内Ca^2＋浓度升高的幅度，而且改变Ca^2＋浓度波动的周期。     

乌司他丁对颅底显微手术患者手术期间免疫功能的影响

近年来研究发现．各种麻醉和手术对患细胞免疫功能具有一定程度的影响。乌司他丁为一种广谱酶抑制剂．具有改善循环．减轻手术对机体的损伤等作用。笔使用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）百分率．研究乌司他丁对神经外科患麻醉和手术期间免疫功能的影响。     

氯胺酮对荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2+浓度波动方式的影响

目的 研究氯胺酮对荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2 浓度波动方式的影响.方法 使用含25 ng/L NGF的DMED培养基在多聚赖氨酸包被的培养皿中培养PC12细胞;与终浓度10μmol/L的Ca2 指示剂Fluo-3 AM ester共孵育30 min洗涤后,加入终浓度50 μmol/L荷包牡丹碱;在激光共聚焦显微镜选定多个细胞分别测定荧光强度的变化;随后加入氯胺酮,记录细胞荧光强度的改变.在试验结束前依次加入Triton X-100和EGTA分别记录单个细胞最大荧光强度(Fmax)和最小荧光强度(Fmin),以计算细胞内Ca2 的相对强度.结果 氯胺酮不改变荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2 浓度波动的基线,但抑制细胞内Ca2 浓度升高的幅度(P＜0.05),缩短相邻波峰间的时间间隙(P＜0.05).结论 氯胺酮不仅改变荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2 浓度升高的幅度,而且改变Ca2 浓度波动的周期.     

普鲁卡因静脉复合麻醉下上腹部手术对人红细胞钙、镁、磷代谢的影响

普鲁卡因静脉复合麻醉下上腹部手术对人红细胞钙、镁、磷代谢的影响屠伟峰林桂芳沈健藩为探讨麻醉和手术创伤对机体组织细胞内电解质水平的影响，本研究拟以人红细胞（ＲＢＣ）为靶细胞，观察在麻醉和手术状态下ＲＢＣ内Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋和无机磷（Ｐｉ）的水平变化。资...     

硝苯地平体外对人精子活力及活动率的影响

在影响精子功能的众多离子中，Ca^2＋的作用最引人注目。在精子成熟、运动、获能和顶体反应等生理过程中，Ca^2＋内流及细胞内Ca^2＋浓度的变化均起着重要作用。大剂量应用二氢吡啶类Ca^2＋通道阻断剂硝苯地平（nifedipine，NIF）可降低雌性大鼠的生殖力，但其对人类生殖力的影响尚不明确。最近有研究表明，     

安氟醚麻醉大鼠不同时期脑Ca2+-ATP酶活性变化

目的动态观察安氟醚吸入麻醉大鼠不同时期各脑区Ca2+-ATP酶活性变化和行为学变化,探讨安氟醚的麻醉作用机制.方法 40只SD雌性大鼠随机均分为五组诱导期组、麻醉期组、恢复期组、清醒期组和对照组.分光光度法测定不同时期大脑皮层、脑干、海马Ca2+-ATP酶活性.结果在诱导期各脑区Ca2+-ATP酶活性即开始下降(P＜0.05);麻醉期降至最低(P＜0.01);恢复期又开始升高,但仍低于对照组水平.其中,仅脑干Ca2+-ATP酶活性降低有显著性差异(P＜0.05);清醒期基本恢复至对照组水平(P＞0.05).且行为学变化与脑Ca2+-ATP酶活性变化有关.结论安氟醚的麻醉效应可能与其抑制脑Ca2+-ATP酶活性相关,麻醉深浅与抑制的程度一致.     

糖皮质激素对大鼠肾上腺嗜铬细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究糖皮质激素 (GC)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞 (AMCC)分泌儿茶酚胺(CA)的作用机制。方法　用 5 μmol/L钙荧光染料fura 2AM负载体外培养的大鼠AMCC ,在激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM )下实时测定地塞米松 (Dex)作用前后 ,KCl和尼古丁 (NIC)诱发细胞内[Ca2 + ] i 的变化。结果　 5 0 μmol/LDex对 60mmol/LKCl诱发大鼠AMCC内 [Ca2 + ] i的变化影响不大 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 5 0 μmol/LDex对 5 0 μmol/LNIC诱发细胞内 [Ca2 + ] i的变化有明显抑制作用 ,在灌洗 5和 10min时峰值抑制率分别为 (3 2 .9± 5 .2 ) %和 (3 5 .4± 6.0 ) %。结论　GC急性作用于大鼠AMCC ,对KCl所诱发的 [Ca2 + ] i升高无明显影响 ,但能明显抑制NIC所诱发细胞内 [Ca2 + ] i的升高 ,提示GC对大鼠AMCC分泌CA的急性效应可能与NIC受体有关     

表皮生长因子对大肠癌细胞游离Ca2+和环磷酸酰苷的影响

目的　探讨表皮生长因子 (EGF)对大肠癌LoVo细胞内Ca2 和环磷酸酰苷 (cAMP)的影响。方法　采用激光扫描共聚焦显微镜图像分析技术测定EGF对LoVo细胞Ca2 的影响 ;放射免疫技术测定EGF对LoVo细胞内cAMP的影响。结果　EGF能非剂量依赖性引起LoVo细胞[Ca2 ]i升高 ,40～ 6 0s达到峰值 ,平均升高分别为 (143± 14) %、(147± 15 ) %、(146± 11) % ;加入EGF后 ,LoVo细胞内cAMP快速下降 ,10～ 2 0min降至最低值 ,然后缓慢回升 ,约 90min恢复至基础水平 ,cAMP基础水平平均值为 (48.0 2± 4.6 1)× 10 -8mol/L。结论　EGF可引起LoVo细胞内Ca2 和cAMP代谢失调。     

异丙酚对上腹部手术病人血小板聚集及凝血功能的影响

目的评价异丙酚麻醉对病人血小板聚集及凝血功能的影响。方法41例择期行上 腹部手术病人,ASA I或Ⅱ级,年龄24-56岁,体重46—75 kg。静脉注射异丙酚、芬太尼、维库溴铵行 麻醉诱导,气管插管后行异丙酚靶控输注(TCI)麻醉,设定效应室靶浓度4μg／ml。分别于麻醉诱导前 (T0)、术前异丙酚TCI 30 min(T1)、术前异丙酚TCI 60 min(T2)、术前异丙酚TCI 120 min(T3)采集静脉 血,比浊法测量血小板最大聚集率,双波长荧光比值法测定血小板内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i),以及测 定血栓弹性描记图参数和凝血四项指标:血浆部分凝血活酶时间、血浆凝血活酶时间、凝血酶原时间、 血浆纤维蛋白原浓度。结果与T0相比,T1-3时血小板最大聚集率及激活后[Ca2 ]i峰值均下降(P <0．01),静息状态[Ca2 ]i差异无统计学意义,凝血功能参数差异无统计学意义(P>0．05)。结论 异丙酚通过抑制Ca2 内流对血小板聚集产生抑制作用,而对凝血功能无明显影响。     

异丙酚对中性粒细胞活性氧生成及细胞内游离Ca~(2 )浓度的影响

目的 :测定异丙酚对中性粒细胞 (PMN)激活后活性氧生成以及细胞内游离Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响 ,探讨异丙酚影响PMN呼吸爆发的内在机制。方法 :利用电子自旋共振 (ESR)技术和自旋捕捉法 ,观察异丙酚对PMN呼吸爆发产生氧自由基 (ROS)的抑制作用 ;同时采用钙荧光指示剂 (Fura 2 /AM)负载离体PMN并行双波长模式测定不同浓度异丙酚对静息和激活状态下PMN细胞内 [Ca2 ]i 的影响。结果 :高浓度 (75 μM)异丙酚可使静息状态下PMN细胞内 [Ca2 ]i升高 ;在有钙基质中 ,异丙酚对趋化三肽 (fMLP)诱发的PMN胞内 [Ca2 ]i 的升高有明显的降调作用 ,而在无钙基质中则不明显。在无钙基质中 ,高浓度 (≥ 5 0 μM )的异丙酚对fMLP诱发PMN呼吸爆发产生ROS有明显的抑制作用 ;而存在胞外钙浓度时 ,2 5 μM异丙酚的抑制程度更为明显。结论 :异丙酚可通过作用于胞外钙内流和胞内储存钙释放影响静息及激活状态下PMN胞内 [Ca2 ]i;异丙酚在有钙基质中对PMN呼吸爆发产生ROS的抑制作用更为明显 ,提示异丙酚影响PMN胞内 [Ca2 ]i,特别是对胞外钙内流的抑制作用 ,可能是其抑制PMN呼吸爆发的内在机制之一。     

ATP激活雪旺细胞内游离Ca2+浓度机制的实验研究

目的　探讨细胞外ATP引起的细胞内游离Ca2 浓度升高的机制。方法　根据细胞内游离Ca2 的来源 ,分别在加入细胞外ATP的雪旺细胞的培养基中加入P2Y受体阻滞剂苏拉明和Ca2 通道阻滞剂异博定作为实验组 ;同时 ,以仅加入细胞外ATP的雪旺细胞的培养基作为对照组。实验组和对照组均使用Fura 2染色剂进行染色。结果　使用P2Y受体阻滞剂苏拉明的雪旺细胞的光反射强度减弱 ;而使用Ca2 通道阻滞剂异博定的雪旺细胞的光反射强度基本不变。结论　细胞外ATP可能是通过P2Y受体介导激活磷脂酶C引起细胞内IP3 增加 ,使Ca2 自储库中释放 ,导致细胞内游离Ca2 浓度升高。