SIRT1对软骨细胞保护作用的研究进展

沉默信息调节因子2相关酶类1(silent information regulator 2homolog 1,SIRT1)是Sirtuins家族成员之一,属于Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,可对组蛋白和非组蛋白发挥去乙酰化作用。近年来关于SIRT1在骨关节炎中的研究日益增多,尤其是SIRT1对骨关节炎软骨细胞的保护作用倍受关注。本文对SIRT1的生物学特点及其通过抗氧化应激、抗凋亡、抗炎以及调控软骨细胞的分化等途径发挥对软骨细胞的保护作用进行综述,旨在为骨关节疾病的防治提供新的思路。     

人胚肺成纤维细胞衰老过程中P66Shc启动子区组蛋白修饰变化

目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰。结果与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。在P66Shc IP1启动子区(-1 641～-1 392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰。结论在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

Sirtuin1功能及调控研究进展

Sirtuin1(SIRT1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)的去乙酰化酶(Sirtuins,SIRTs)家族7个成员中最大的一个,是近年来研究最为广泛的长寿因子。SIRT1除了对组蛋白赖氨酸残基去乙酰化修饰调节表观遗传外,SIRT1还可以调节细胞其他关键蛋白活性,控制细胞增殖、分化和细胞凋亡等生理功能。最近研究发现,SIRT1调控细胞功能除了与其酶活性水平有关,也可能与其在细胞中的定位有关。SIRT1在细胞核质之间穿梭和SIRT1活性水平及其相对应的生理功能仍需深入研究.     

铜蓝蛋白/PTEN在石英致组蛋白修饰改变中的作用

目的探讨铜蓝蛋白(Cp)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)组蛋白修饰改变中的作用以及人第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)在其中的影响。方法不同浓度的石英(50、100、200μg/ml)和不同浓度的Cp(10、20、30μg/ml)作用HELF细胞24 h,用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测蛋白质赖氨酸乙酰化(acety-lys)水平以及组蛋白H2B、H3、H4乙酰化和H3甲基化水平。200μg/ml石英作用于HELF细胞和转染PTEN shRNA的HELF细胞(PT)1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h,用Western blot检测acety-lys水平,组蛋白H2B、H3、H4乙酰化和H3甲基化水平。结果石英暴露可诱导蛋白质acety-lys水平的增高,组蛋白H2B(lys5/12)、H3(lys9/14)、H4(lys12)乙酰化水平增加,组蛋白H3的2位精氨酸的甲基化水平降低。Cp可以逆转石英暴露所致的蛋白质acety-lys水平的增加,组蛋白H3、H4赖氨酸乙酰化水平的增加和组蛋白H3甲基化水平的减少。抑制PTEN的水平后,观察不到Cp对上述现象的逆转。结论 Cp可以逆转石英暴露诱导的组蛋白乙酰化和甲基化改变,PTEN参与了Cp对石英诱导的组蛋白修饰作用的改变。     

Alteration of Histone Modifications for P66Shc Promoter during Cellular Senescence of Human Embryonic Pulmonary Fihroblast Cells

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化.方法 按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(pretnature senescence,PS)组.检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在P66Shc IPI启动子区(-1641-1392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰.结论 在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.     

细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用.方法 在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/L H2O2处理,每天用H2O2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol,L H2O2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组.荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其肩动子区-846～-639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lvs4)及H4(Lvs20)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).在P16启动子区,第一外显子上游-1 000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-84～-639 bp之间,长度为208 bp.中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、0.47,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79.在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16 IP2启动子区(-229～-60bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.     

SIRT1在卵巢衰老方面的研究进展

正卵巢是重要的生殖内分泌器官,随着人类寿命的明显延长和婚育年龄的推迟,如何延长卵巢寿命和保护卵巢功能是人们越来越关注的问题。沉默信息调节因子Sir 2在哺乳类动物中有7个同源基因,其中与酵母菌Sir 2相似度最高的就是SIRT 1。依赖NAD+的组蛋白去乙酰化酶SIRT 1在调节细胞的代谢、分化与衰老等方面都有着关键的影响与作用[1],并且近年也成为越来越多人研究的热点。     

IL-10基因启动子区单核苷酸多态性和吸烟交互作用与膀胱癌的关联研究

目的探讨IL-10基因启动子区单核苷酸多态性和吸烟的交互作用与膀胱癌的关系。方法以医院资料为基础,采用病例对照研究方法,应用AS．PCR法对400例膀胱癌病例和400例健康对照者进行IL-lo基因启动子区单核苷酸多态性检测和分析,探讨膀胱癌的遗传和环境因素。结果IL-10基因启动子区单核苷酸多态性与膀胱癌易感性相关,-1082、-819及-592位点的纯合突变型可能增加膀胱癌发病风险(OR值分别为2．058、1．979及1．979);IL-10基因启动子区单核苷酸多态性在膀胱癌不同临床分期和病理分级间差异无统计学意义(均P>0．05);IL-10基因启动子区-082A/A、-819T/T和-592A/A与吸烟均存在正向交互作用(OR=2．264,y=10．213;OR=2．438,y=6．750;OR=2．438,y=6．750)。结论IL-10基因启动子区-1082A/A、-819T/T和-592A/A与吸烟的交互作用可能增加膀胱癌的发病风险。     

细胞外信号调节激酶1/2表达与HPV16感染及其交互效应在子宫颈癌变中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶（p-ERK）1/2表达与HPV16感染在子宫颈癌变中的作用及其交互效应。方法 选取2013年9月至2014年3月在山西省肿瘤医院、山西省妇幼保健院、山西省晋煤集团总医院经组织病理学确诊的正常子宫颈（NC）女性34例、低度子宫颈上皮内瘤变（CINⅠ）患者26例、高度子宫颈上皮内瘤变（CINⅡ/Ⅲ）患者57例和子宫颈鳞状细胞癌（SCC）患者59例为研究对象。采用调查问卷收集研究对象的人口学特征和子宫颈癌相关因素等资料,并采集子宫颈组织标本。采用PCR法检测HPV16感染状况,应用免疫组化法检测子宫颈组织中磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白的表达情况。同时使用ERK抑制剂U0126对子宫颈癌细胞Siha（HPV16阳性）和C33A（HPV阴性）进行抑制,比较抑制前后细胞的增殖、凋亡情况。结果 随着子宫颈癌变的进展,HPV16感染率（趋势χ²=17.99,P<0.001）和p-ERK1/2的表达率（趋势χ²=10.58,P=0.001）均逐渐升高,HPV16感染与p-ERK1/2蛋白表达在CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ、SCC组中均存在正相加交互作用。细胞实验结果显示,ERK抑制后,Siha和C33A细胞均表现为增殖能力降低（Siha：t=6.863,P<0.001;C33A：t=7.092,P<0.001）、凋亡率增高（Siha：t=-5.201,P=0.006;C33A：t=-4.335,P=0.005）。ERK抑制后HPV16阳性Siha细胞较HPV阴性C33A细胞增殖指数高（t=7.066,P<0.001）、凋亡率低（t=-2.431,P=0.057）。结论 p-ERK1/2高表达和HPV16感染均可增加子宫颈癌变风险,两者在子宫颈癌变中存在正相加交互作用。在子宫颈癌细胞增殖凋亡过程中,ERK1/2的活化可能对HPV16感染细胞的作用更为显著。     

穿心莲内酯减轻脂多糖诱导的肾小管上皮细胞铁死亡机制

目的 探讨穿心莲内酯(AG)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肾小管上皮细胞(HK-2细胞)铁死亡的影响及其作用机制。 方法 采用LPS处理HK-2细胞, 模拟脓毒症HK-2损伤体外模型, 进一步用5、10、20、40 μmol/L的AG进行干预, 将细胞随机分为对照组(Control)、LPS组、LPS+二甲亚砜(DMSO)组、AG组。采用CCK-8法检测细胞活力, 筛选出最适LPS和AG浓度; 比较各组中细胞形态变化, 肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子-1(KIM-1)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平, 以及铁死亡调控蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白(Ferritin)的表达水平, 评估AG处理对细胞的保护作用。 结果 与Control组相比, 10 μg/mL LPS诱导的HK-2细胞中细胞活力及GSH含量下降, 细胞皱缩、贴壁能力差, 氧化产物MDA和ROS含量以及肾损伤标志物NGAL和KIM-1水平明显升高, SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低, Ferritin蛋白表达水平增高, 差异均有统计学意义(均P＜0.05)。而在使用AG干预后, 与LPS组相比, 细胞活力升高, GSH含量、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平升高, 而Ferritin蛋白表达水平降低, 差异均有统计学意义(均P＜0.05);MDA含量和ROS荧光强度以及肾损伤标志物NGAL和KIM-1水平下降, 差异均有统计学意义(均P＜0.05)。 结论 AG对LPS诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用, 其机制可能是激活SLC7A11/GPX4通路, 减少氧化应激, 上调抗氧化酶活性, 减轻细胞铁死亡。     

白细胞介素-28B和平衡性核苷转运载体1基因多态性与HIV/HCV合并感染者HCV自发清除的关系研究

目的 分析湖南省HIV/HCV合并感染者的白细胞介素-28B(IL-28B)和平衡性核苷转运载体1(ENT1)基因多态性与HCV自发清除的关系。方法 对湖南省107例HIV/HCV合并感染者的IL-28B和ENT1基因位点(rs12980275、rs12979860、rs8099917和rs760370)进行分型, 比较其在慢性肝炎组和自发清除组的基因多态性分布。结果 在HIV/HCV合并感染者中, IL-28B基因rs12980275、rs12979860和rs8099917位点的主要基因型分别为AA、CC和TT型, 均占84.1%。3个位点高度连锁不平衡(r²>0.94), 慢性肝炎组和自发清除组基因型分布差异有统计学意义(P<0.05), 携带IL-28B主要基因型的感染者更易发生HCV自发清除。ENT1基因的rs760370位点基因型分布在两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-28B基因AA、CC和TT型与HCV自发清除有关。     

白藜芦醇通过上调沉默信息调节因子1调节香烟提取物诱导心肌线粒体产生活性氧簇的机制

目的探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）调节香烟提取物（CSE）诱导心肌线粒体产生活性氧簇（ROS）的机制及白藜芦醇（Res）心肌保护作用。方法 H9C2细胞分5组：C组（对照组）、二甲亚砜组（DMSO溶剂对照组）、CSE组（CSE刺激组）、CSE＋Res组、Res组。采用Taqman探针荧光定量PCR检测各组SIRTI的mRNA表达、Weston Blot检测各组细胞SIRTI蛋白表达、荧光分光光度计检测细胞线粒体膜电位、荧光微量平板法检测不同浓度CSE刺激H9C2细胞产生ROS的变化、特异性荧光探针CM-H2DCFDA检测活细胞内ROS变化。结果与C组相比,CSE组SIRT1mRNA及蛋白质表达显著降低,ROS表达显著增强。与CSE组相比,CSE＋Res组SIRT1mRNA及蛋白质表达升高,ROS表达显著减少。随CSE刺激浓度增加,线粒体膜电位降低,ROS产生增加。提前给予Res可使线粒体膜电位升高,ROS产生减少。结论 Res可通过刺激SIRT1的表达而抑制CSE诱导的心肌细胞线粒体功能受损、ROS的释放,这可能是其吸烟相关慢性阻塞性肺疾病诱导的心脏氧化应激损伤中发挥心脏保护作用的机制之一。     

沉默信息调节因子 1 与急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征

沉默信息调节因子1(Sirtuin1,silent information regulator 1,SIRT1)是与酿酒酵母沉默信息调节器2(Sir2)同源的去乙酰化酶家族。SIRT1通过介导多条细胞信号通路,在细胞生物学功能和疾病发生机制中发挥关键作用,调节各种疾病的病理进展。在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的动物模型中,SIRT1表达异常,且表达水平与模型的疾病严重程度密切相关,可能成为早期诊治ALI/ARDS新的生物学指标。本文简要综述了SIRT1通过抗炎、抗氧化应激、调节细胞凋亡及自噬、改变血管内皮细胞通透性等途径发挥其减轻ALI/ARDS的作用,探讨SIRT1在ALI/ARDS防治中的潜在价值。     

视网膜色素上皮氧化损伤SIRT1表达改变

目的明确氧化应激对视网膜色素上皮细胞(RPE)中去乙酰化酶1(SIRT1)表达的影响。方法以人RPE细胞为实验对象,不同浓度H_2O_2(0、200、300μmol/L)处理RPE细胞,观察处理后24 h细胞形态的改变情况,检测处理后24 h与72 h细胞中SIRT1的mRNA与蛋白表达情况。结果 H_2O_2作用后,随H_2O_2浓度的增加,RPE细胞的形态受损,有凋亡小体的出现;在氧化应激24 h后细胞内SIRT1的转录水平增加,而在氧化应激72 h后SIRT1的蛋白表达显著下降。结论氧化应激可导致RPE细胞形态改变,SIRT1在RPE细胞内维持着氧化与抗氧化应激系统平衡,因此将SIRT1可作为临床上年龄相关性黄斑变性病(AMD)治疗的靶点。     

云南省边境地区禽流感H5N1亚型病毒遗传多样性分析

目的 了解云南省边境地区禽流感H5N1亚型病毒遗传多样性.方法 2009-2011年7月在云南省边境地区采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品,经H5/Nl亚型特异性多重RT-PCR检测,阳性样品进行病毒HA基因扩增,克隆至pMD 18-T载体测序,并与已知参考毒株进行序列比对及系统发育分析.结果 36份阳性样品病毒HA基因测序获得15种HA序列,存在2个不同进化分支(2.3.2、2.3.4),2.3.2进一步可划分为3个进化小分支(Ⅱ-1～Ⅱ-3),2.3.4进一步可划分为2个进化小分支(Ⅰ-1和Ⅰ-2).2.3.2Ⅱ-1、Ⅱ-2毒株是新出现的H5N1亚型病毒变异株.结论 2009- 2011年7月云南省边境地区H5N1亚型病毒具有遗传多样性,病毒经历了多分支(2.3.2、2.3.4)至单一支(2.3.2)的进化过程.     

七味白术散对抗生素相关性腹泻小鼠肠道糖苷水解酶活性的影响

目的 探究七味白术散对抗生素相关性腹泻(AAD)小鼠肠道β-D-葡萄糖苷酶和β-D-葡萄糖醛酸酶活性的影响, 从肠道糖苷水解酶角度阐释七味白术散治疗AAD的机制。 方法 采用混合抗生素灌胃制备AAD小鼠模型, 予七味白术散汤剂干预, 分别于造模和治疗后采集小鼠小肠内容物(SC)、小肠黏膜(SM)、结肠内容物(CC)、结肠黏膜(CM)标本检测糖苷水解酶活性, 采集血液与肝脏标本检测琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH), 氧化应激功能相关指标丙二醛(MDA), 以及炎症相关指标白细胞介素-17(IL-17)和脂多糖(LPS)。 结果 AAD小鼠SC、SM及CC中β-D-葡萄糖苷酶和β-D-葡萄糖醛酸酶活性均明显下降(均P＜0.05), CM中两种糖苷水解酶活性均明显升高(均P＜0.05)。七味白术散治疗后, 小鼠各肠段的糖苷水解酶活性均较正常组和自愈组高, 血中MDA、LDH、IL-17和LPS含量较自愈组降低, SDH较自愈组升高。 结论 抗生素导致小鼠SC、SM和CC中糖苷水解酶活性下降, CM中糖苷水解酶活性升高, 七味白术散能较好地调节AAD小鼠肠道糖苷水解酶活性及小鼠能量代谢、氧化应激和炎症因子, 恢复小鼠的代谢能力, 改善小鼠肠道环境, 从而治疗腹泻。     

脂多糖干预对军团菌肺炎作用的实验研究

目的 探讨脂多糖干预对军团菌肺炎的作用。方法 以C3H/HeN小鼠（6～8周龄）为实验动物,每组8只,雌雄各半。设立脂多糖干预染菌组、脂多糖未干预染菌组和对照组,每组各设12、24和48 h 3个时间点组。首先对脂多糖干预组小鼠利用大肠埃希菌脂多糖（100 ng/只）行腹腔注射干预,其余组腹腔注射生理盐水。24 h后与脂多糖未干预组一起气管注射军团菌悬液染菌,对照组给予等量的生理盐水,分别于12、24和48 h处死小鼠。解剖小鼠,分离肺脏称重,计算脏器系数（小鼠肺脏重量/体重）。眼眶采血1 ml,流式细胞术检测各组外周血单个核细胞Toll样受体4（TLR4）水平,取左肺上叶采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的含量。结果 脂多糖未干预染菌组的肺脏脏器系数高于脂多糖干预染菌组和对照组（P<0.05）,脂多糖干预染菌组与对照组间差异无统计学意义。脂多糖干预染菌组与脂多糖未干预染菌组TLR4蛋白均在12 h达到高峰,且脂多糖干预组TLR4水平高于脂多糖未干预组（P<0.05）,在24、48 h两染菌组TLR4表达水平差异无统计学意义。脂多糖干预染菌组TNF-α、IL-1β浓度与对照组间差异无统计学意义,脂多糖未干预染菌组各个时间点TNF-α、IL-1β的分泌水平均高于脂多糖干预染菌组。结论 脂多糖干预引起的脂多糖耐受可能会减轻军团菌感染的炎性症状。     

细胞色素氧化酶基因CYP1A1多态性与新疆维吾尔族人群冠心病相关性研究

目的 探讨新疆地区维吾尔(维)族人群细胞色素氧化酶基因CYP1A1多态性与冠心病的关联性。方法 使用实时PCR对293例冠心病患者(病例组)和408名健康体检者(对照组)CYP1A1基因单核苷酸多态性(SNPs:rs4886605, rs12441817, rs4646422, rs1048943)进行基因型鉴定。结果 维族人群病例组和对照组rs4886605的基因型及等位基因分布的差异均有统计学意义(均P<0.05)。病例组rs4886605显性模型(CC vs. CT+TT)基因型频率明显低于对照组。调整混杂因素后logistic回归分析表明, 维族人群rs4886605的CC基因型者患冠心病风险明显低于CT+TT基因型者(总体:OR=0.368, 95%CI:0.185～0.530, P=0.018;男性:OR=0.350, 95%CI:0.235～0.568, P=0.015)。病例组和对照组rs12441817的基因型及等位基因分布差异均有统计学意义(均P<0.05)。病例组的rs12441817显性模型(TT vs. CT+CC)基因型频率明显低于对照组。调整混杂因素后logistic回归分析表明, 维族人群rs12441817的TT基因型者患冠心病风险明显低于CT+CC基因型者(总体:OR=0.253, 95%CI:0.231～0.546, P=0.016;男性:OR=0.241, 95%CI:0.132～0.478, P=0.002)。结论 新疆维族人群CYP1A1基因多态性rs4886605、rs12441817的2个位点与发生冠心病相关。rs4886605的CC基因型、rs12441817的TT基因型可能是该人群发生冠心病的保护因素。     

细胞复制衰老与H2O2诱导细胞早衰过程中P66SHC基因表达谱及组蛋白修饰研究

目的研究细胞复制衰老与H2O2诱导细胞早衰过程中P66SHC基因表达变化及复制衰老过程中组蛋白修饰改变。方法人胚肺成纤维细胞固定传代直至停止增殖以制备复制衰老模型,过氧化氢诱导细胞早衰模型。采用Q-PCR方法动态观察细胞复制衰老与早衰过程中P66SHC以及组蛋白乙酰化酶EP300和去乙酰化酶HDAC1的基因表达,采用染色质免疫沉淀技术观察年轻细胞与衰老细胞P66SHC基因启动子区的组蛋白修饰情况。结果 P66SHCmRNA表达与染毒剂量正相关(R=0.909,P=0.000),EP300表达与染毒剂量负相关(R=-0.922,P=0.000),HDAC1与染毒剂量不相关(R=-0.066,P=0.839)。P66SHC表达与群体倍增代数正相关(R=0.743,P=0.006),EP300表达和HDAC1表达与群体倍增代数负相关(R=-0.709,P=0.010;R=-0.599,P=0.040)。与复制衰老组相比,早衰组细胞P66SHC、EP300及HDAC1的基因表达量均有显著性差异(t=-19.733,P=0.000;t=11.103,P=0.000;t=9.728,P=0.001)。老年细胞的P66SHC基因调控区的H3组蛋白修饰丰度均降低;在转录起始点上游3.0kb处抑制基因转录的H3K9-tri-Me修饰几乎为零,选择启动子(转录起始点下游3.8kb)处的组蛋白修饰以活化转录的修饰为主。结论 P66SHC、EP300和HDAC1均可能参与细胞衰老和氧化应激诱导的细胞早衰,早衰组细胞P66SHC基因表达与复制衰老组不同;组蛋白修饰参与P66SHC的基因表达调控。