TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨

本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响;用AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降。此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达。结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平。TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡。在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性。     

β-榄香烯增强阿克拉霉素对HL-60细胞诱导凋亡作用及其机制研究

目的 研究β-榄香烯增强阿克拉霉素对白血病细胞系HL-60细胞的诱导凋亡作用,探讨β-榄香烯联合阿克拉霉素抗白血病的作用机制.方法 以不同浓度阿克拉霉素(0.05、0.10、0.25 μg/ml)单独作用HL-60细胞,和以不同浓度β-榄香烯(10、20、40 μg/ml)联合小剂量阿克拉霉素(0.10 μg/ml)作用20 h,分别用流式细胞术、Western blot法、竞争ELISA法等检测细胞凋亡率,环氧化酶(COX)-2、NF-κB和前列腺素E2(PGE2)的表达.结果 小剂量的阿克拉霉素(0.05～0.10 μg/ml)对HL-60细胞的凋亡及其COX-2、NF-κB和PGE2的表达均无明显影响.小剂量的阿克拉霉素与β-榄香烯联合作用后,可促进HL-60细胞的凋亡,β-榄香烯10～40 μg/ml联合阿克拉霉素0.10 μg/ml处理后,HL-60细胞凋亡率为(8.97 ± 0.14)%～(34.90 ± 2.72)%,明显高于40 μg/ml β-榄香烯单独作用组的(8.07±0.36)%,并抑制COX-2、NF-κB和PGE2的表达,这种作用与β-榄香烯浓度呈正相关.结论 β-榄香烯可增强阿克拉霉素对HL-60细胞的诱导凋亡作用,并抑制COX-2和PGE2的表达,这种作用可能是通过抑制NF-κB活性而实现.     

自噬调节药物对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况。结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RPMI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用。MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少。Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响。结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大。     

木犀草素对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖与程序性死亡的影响

目的:探讨木犀草素对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖、死亡的影响,并分析其作用的分子机制。方法:用CCK-8法检测木犀草素对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖的影响,同时得出有效抑制细胞增殖的最低浓度,并用于处理RPMI-8226细胞。使用Western blot法检测木犀草素和氯喹对RPMI-8226细胞Cleaved-caspase3以及LC3蛋白表达影响。结果:木犀草素对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有明显抑制作用,且呈计量依赖性; 24h时40-80μmol/L以及48 h时20-80μmol/L木犀草素可显著抑制骨髓瘤细胞增殖,这种抑制作用随药物浓度而递增(24 h,r=-0. 983; 48 h,r=-0. 985); 20μmol/L木犀草素作用RPMI-8226细胞48 h后,Cleavedcaspase3的表达与LC3Ⅱ/Ⅰ的比值显著增加,使用氯喹后,Cleaved-caspase3的表达与LC3Ⅱ/Ⅰ的比值均显著降低。结论:木犀草素通过激活细胞程序性死亡的两条途径即细胞凋亡与细胞自噬来有效抑制骨髓瘤细胞增殖,且引起的凋亡和自噬之间存在互相合作或/和互相推动的关系。     

大黄素联合AZT对白血病KG-1a细胞的增殖及BCL-2、NF-κB、TGF-β表达的影响

目的:探讨中药大黄素(Emodin)和端粒酶抑制剂AZT(3'-azido-3'-deoxythymidine)联合应用对浓集白血病干细胞(concentrated leukemia stem cells,CLSC)的急性髓系白血病KG-1a细胞增殖及BCL-2、NF-κB、TGF-β表达的影响。方法:应用5-FU富集白血病KG-1a细胞中肿瘤样干细胞亚群并采用流式细胞术检测富集后CD34+CD38-亚群细胞;采用MTT法检测大黄素和AZT单用及联合应用对CLSC的生长增殖的影响;采用流式细胞术检测药物诱导CLSC的凋亡情况;采用RT-PCR及Western blot法分别检测NF-κB、BCL-2、TGF-βmRNA和蛋白表达变化。结果:大黄素和AZT联合后,细胞生长抑制明显大于大黄素和AZT单药组(P0.01),具有一定的时间和浓度依赖性;细胞凋亡比例均较各单药组增多,差异具有统计学意义(P0.01);NF-κB、BCL-2、TGF-βmRNA及蛋白表达在联合组比在各单药组表达量下降。结论:大黄素联合AZT具有协同抑制CLSC增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与抑制BCL-2活化及降低NF-κB、TGF-β表达有关。     

多西他赛对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究旨在观察多西他赛对人骨髓瘤细胞系RPM18226增殖和凋亡的影响,探讨其作用的分子机制。采用MTT法检测骨髓瘤细胞增殖抑制率,光学显微镜及电子显微镜观察多西他赛对骨髓瘤细胞形态的影响,Annex-in-VFITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,PI染色流式细胞术检测骨髓瘤细胞周期分布情况,半定量RT-PCR检测多西他赛对B观-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达影响,Westernblot法检测多西他赛作用前后骨髓瘤细胞BCL-2蛋白表达变化。结果显示：0．25-8．0μg／ml终浓度的多西他赛均可抑制RPM18226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．927）和浓度（r=0．726）依赖性;多西他赛处理组光学显微镜下可见细胞数量明显减少,排列紊乱,高倍镜可见凋亡细胞,偶见坏死细胞;电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变以及少数坏死细胞;多西他赛可明显诱导骨髓瘤细胞凋亡（P〈0．01）,主要将细胞阻滞于G2／M期（P〈0．01）,作用48h时BCL-2mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0．05）,caspase-8、caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：多西他赛通过诱导细胞凋亡可抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡通路有关。     

丙戊酸钠联合三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡及其机制研究

本研究旨在探索丙戊酸钠联合三氧化二砷对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制.利用CCK-8法检测不同浓度的丙戊酸钠、三氧化二砷单药和两药联合应用对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.半定量RT-PCR和Western blot分别检测各组BCL-2、BAX、caspase-8及caspase-9的mRNA和蛋白表达水平的变化.结果表明：丙戊酸钠及三氧化二砷均可抑制RPMI 8226细胞增殖,两者联合应用有协同作用（Q值大于1.15）.联合用药组RPMI 8226细胞凋亡率较单药组明显增加（P＜0.05）.与丙戊酸钠或三氧化二砷单药组相比,联合用药组RPMI 8226细胞BCL-2 mRNA及蛋白表达水平下降,BAX、caspase-8及caspase-9mRNA及蛋白表达水平上调.结论：丙戊酸钠和三氧化二砷有协同抑制RPMI 8226细胞增殖和诱导凋亡的作用,这可能与BCL-2表达下调,BAX、caspase-8及caspase-9表达上调有关.     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

si RNA干扰β-catenin基因对多发性骨髓瘤细胞耐药性的影响

目的:探讨小片段RNA(siRNA)干扰β-catenin基因表达对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226耐药性的影响。方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226,通过药物浓度梯度递增法建立马法兰耐药细胞模型;β-catenin-siRNA瞬时转染耐药细胞株,采用CCK-8法检测转染前后细胞对马法兰的敏感性变化,应用qRTPCR、Western-blot法分别检测β-catenin基因和蛋白表达水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:耐药骨髓瘤细胞经β-catenin-siRNA转染后对马法兰的IC50值由(5.29±0.19)μmol/L降至(1.88±0.64)μmol/L。Western-blot法检测显示,瞬时转染β-catenin-siRNA后β-catenin蛋白表达水平明显较转染前降低;转染后马法兰诱导细胞凋亡率由(35±0.5)%升高到(54±0.4)%,提示β-catenin基因可能与细胞耐药性相关,干扰β-catenin基因表达可提高耐药骨髓瘤细胞对于马法兰的敏感性。结论:β-catenin-siRNA干扰可抑制Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin基因表达,抑制细胞增殖,增强马法兰对耐药骨髓瘤细胞株RPMI-8226毒性,增加细胞凋亡率。     

米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0.924）和浓度（r=0.947）依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期（P〈0.05）,在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0.05）,BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。     

姜黄素联合硼替佐米对骨髓瘤H929细胞增殖抑制与凋亡诱导作用及其机理

本研究旨在探讨姜黄素(curcumin)联合硼替佐米(bortezomib)对人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系H929细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用的相关机理。采用MTT法检测不同浓度的姜黄素和硼替佐米单用或联合应用对H929细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术(FCM)分析单用和联合用药时细胞的凋亡比率;采用RT-PCR法分析凋亡相关基因BCL-2、BAX及细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达变化;采用免疫荧光染色法测定不同处理组NF-κB P65蛋白的分布变化。结果表明:姜黄素和硼替佐米单用及联合应用时均可抑制H929细胞的生长,呈剂量依赖性,联合用药在一定浓度范围内有协同效应;联用组细胞凋亡的比例明显高于单用组及对照组;与单用组相比,联用组cyclin D1,BCL-2基因表达下降,BAX升高。核因子NF-κB P65在单用组的胞核内的表达减弱,联合应用组NF-κB P65蛋白分布于胞浆。结论 :姜黄素与硼替佐米均可抑制H929细胞的生长增殖、促进凋亡,联合应用有协同效应。抑制核因子NF-κB的转录及影响其调节凋亡相关基因可能是作用机制之一。     

阿扎胞苷诱导多发性骨髓瘤细胞株的凋亡及其机制的研究

目的:探讨阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株U266和H929的抑制增殖、诱导凋亡的作用及其机制。方法:采用CCK-8分析阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株的增殖的抑制作用,应用吖啶橙染色和流式细胞术分析细胞DNA含量以判断阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株诱导凋亡作用,流式细胞术分析细胞周期以判断阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株细胞周期的影响,RT-PCR检BCL-2、BAX的表达,Western blot检测caspase-3和p-ERK1/2性以分析阿扎胞苷诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制。结果:阿扎胞苷抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,导致多发性骨髓瘤细胞BCL-2/BAX比例下降,caspase-3和p-ERK1/2活性增高,使多发性骨髓瘤细胞周期停止在G_2/M期,诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡且呈剂量依赖性。结论:阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与BCL-2/BAX比例下降,caspase-3活化以及影响细胞周期有关。     

异硫氰酸苯已酯抑制骨髓瘤细胞Notch信号表达的研究

为了研究异硫氰酸苯已酯(phenylhexyl isothiocyanate,PHI)在体外对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的分子机制,用不同浓度PHI与RPMI8226细胞共同孵育,用MTT比色法检测PHI处理后细胞增殖抑制;用DAPI染色观察PHI处理后细胞凋亡;Western blot检测PHI处理后瘤细胞Notch1、Jagged2、BCL-2和p-Akt蛋白表达变化。结果显示,PHI在一定浓度范围内能抑制瘤细胞增殖,诱导瘤细胞凋亡,其抑制效应具有时间和浓度依赖性。PHI可以下调瘤细胞中Notch1和Jagged2蛋白的表达并呈时间和浓度依赖性,同时降低BCL-2和p-Akt的表达。结论:PHI在体外能够抑制骨髓瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;细胞凋亡的发生与PHI抑制Notch信号及其下游靶基因p-Akt和BCL-2的表达有关,PHI可能成为新一代的Notch信号抑制剂,是一种潜在的骨髓瘤治疗药物。     

土木香内酯对RPMI-8226细胞的增殖抑制作用及其相关机制研究

目的:探讨土木香内酯(alantolactone)对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:使用浓度为1、2.5、5、7.5及10μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h,应用CCK-8检测细胞活力,并计算其半数抑制浓度(IC50)值;使用浓度为2.5,5及7.5μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h后,应用AnnexinV/PI双标记法分析细胞凋亡;Western blot方法检测呈切割的caspase-3及ERK信号通路的变化;裸鼠荷瘤并给予土木香内酯以进一步验证其对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡作用。结果:土木香内酯可抑制RPMI-8226细胞活力,并呈现剂量依赖效应(r=-0.9784,P=0.0007);RPMI-8226细胞48 h的IC50为4.32±0.15μmol/L;流式细胞术分析凋亡结果显示,随着土木香内酯浓度的增高,细胞早期凋亡率显著增加(r=0.9601,P0.05);Western blot结果显示,土木香内酯处理RPMI-8226细胞后,活化了caspase-3,降低ERK磷酸化水平;体内结果显示,给药组小鼠瘤体积明显小于对照组(P0.05);免疫组织化学检测结果显示,与对照组相比,实验组瘤内细胞核增殖相关抗原Ki67及p-ERK的水平降低。结论:土木香内酯可有效地抑制多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制ERK信号通路的活性,抑制裸鼠皮下多发性骨髓瘤的生长。     

Apogossypolone诱导骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

本研究探讨棉酚衍生物apogossypolone（ApoG2）对多发性骨髓瘤细胞系的抑制增殖、诱导凋亡的作用及其作用机制。应用台盼蓝染色、Hoechst 33258染色、透射电子显微镜检、DNA凝胶电泳法、流式细胞仪分析细胞DNA含量等来判断ApoG2对多发性骨髓瘤细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。以caspase-3、caspase-9以及BCL-2、BCL—XL分析ApoG2诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制。结果表明：ApoG2对多发性骨髓瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,IC50值在U266细胞和Wusl细胞（48小时）分别为0．1、0．2μmol／L。ApoG2可以诱导骨髓瘤细胞凋亡且呈时间和剂量依赖性。ApoG2可以使骨髓瘤细胞周期停止在G2期,U266细胞G2期比例从9．7％增至19．6％。Wusl细胞从9．8％增至31．7％。ApoG2能导致U266、Wusl细胞caspase-9、caspase-3活性增高。U266细胞和Wusl细胞经ApoG2 25μmoL／L作用24小时后,BCL—XL表达分别下降（7．3±1．4）％和（11．2±6．2）％,Wusl细胞BCL-2表达下降84．4±3．4％。结论：ApoG2对多发性骨髓瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能和下调BCL-2／BCL—XL表达以及影响细胞周期有关。     

Ad-NK4增强人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞对硼替佐米化疗敏感性的作用

目的:观察Ad-NK4能否增强RPMI 8226细胞对硼替佐米(BOR)的化疗敏感性。方法:细胞-基质粘附实验和RPMI 8226细胞-ECV 304细胞粘附实验检测Ad-NK4对RPMI 8226细胞粘附的影响;Western blot检测粘附和侵袭相关蛋白MMP2、MMP3、MMP7、VEGF表达的变化;MTT法检测Ad-NK4对细胞增殖的影响;PI流式细胞术检测Ad-NK4对细胞凋亡的影响;Western Blot检测Cleaved caspase-3、BAX和BCL-2蛋白表达水平的变化。结果:两种细胞粘附实验均显示Ad-NK4可显著抑制RPMI 8226细胞粘附,且与Erk信号通路和JAK/STAT信号通路显著相关(P0.05);Ad-NK4能明显降低RPMI 8226细胞MMP-2、MMP-3和VEGF蛋白的表达水平(P0.05),但对M M P-7的蛋白表达水平无明显影响(P0.05)。Ad-NK4和BOR联用的细胞抑制率和诱导凋亡比例均显著高于单用Ad-NK4或BOR。同样,Ad-NK4和BOR联用组Cleaved caspase-3和BAX蛋白水平均明显高于单独作用组,而BCL-2蛋白水平却相反,同时在联用组BAX/BCL-2比率增加。结论:通过活化Caspase-3和上调BAX/BCL-2比率的途径,Ad-NK4可增强BOR体外抗骨髓瘤RPM I 8226细胞作用。     

膜联蛋白A2基因对多发性骨髓瘤细胞的诱导凋亡作用及相关机制研究

本研究探讨膜联蛋白A2（AnxA2）基因诱导骨髓瘤U266、RPMl8226细胞凋亡的作用及相关机制。采用AnxA2siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMl8226细胞,应用实时PCR和Westernblot检测AnxA2基因和蛋白的表达。应用流式细胞术检测细胞凋亡,应用实时PCR检测凋亡相关基因的表达水平。结果表明,AnxA2siRNA转染U266和RPMl8226后,AnxA2基因和蛋白表达水平均明显下调;细胞凋亡率增高（P〈0．05）,同时降低凋亡相关基因p65NF-κB、儿_2、IL-6的表达（P〈0．05）,增强P53基因的表达（P〈0．05）。结论：AnxA2基因沉默在骨髓瘤细胞U266和RPMl8226凋亡中起促进作用。     

槲皮素对多发性骨髓瘤的抗肿瘤作用及其相关机制

目的:研究槲皮素对多发性骨髓瘤细胞NCI-H929增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:常规培养NCI-H929细胞,取对数生长期的细胞进行实验。用不同浓度槲皮素(50、100、200μmol/L)处理NCI-H929细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;用槲皮素100、200μmol/L处理NCI-H929细胞24 h后,使用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平,采用PI标记流式细胞术分析细胞周期的变化;采用Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP、BCL-2和细胞周期相关蛋白P53、P21、P27、CDK4蛋白的表达水平,并检测ERK和AKT的活化情况。结果:不同浓度的槲皮素可显著抑制NCI-H929细胞的增殖,抑制效应随时间的延长和剂量的增大而增强。流式细胞术分析结果显示,槲皮素可显著诱导NCI-H929细胞凋亡,并诱导细胞发生G_2/M期阻滞。Western blot实验结果显示,槲皮素能够活化caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,进而抑制BCL-2的表达,促进P53、P21、P27蛋白的表达和抑制CDK4蛋白的表达,并降低ERK、AKT磷酸化水平。结论:槲皮素可有效发挥对骨髓瘤细胞NCI-H929的抗肿瘤作用,该作用可能是通过诱导细胞凋亡、促进细胞周期阻滞和下调ERK/AKT通路实现的。     

罗格列酮与全反式维甲酸联合对骨髓瘤细胞增殖抑制作用及其机制探讨

目的 探讨罗格列酮(RGZ)与全反式维甲酸(ATRA)在体内外对骨髓瘤细胞生长的影响及其作用途径.方法 用RG2和ATRA单独或联合处理多发性骨髓瘤细胞系U266和RPMI 8226细胞,采用3H-TdR掺入法检测细胞增殖变化;Annexin-V和PI双染后采用流式细胞术检测细胞凋亡;用半定量RT-PCR方法检测凋亡抑制基因FLIP、XIAP及survivin mRNA表达变化;采用荧光CaspACE试剂盒检测caspase-3活性变化;采用裸鼠体内成瘤试验观察骨髓瘤细胞在动物体内生长情况.结果 RGZ对骨髓瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系(U266组r=0.991,P<0.01;RPMI8226组r=0.961,P<0.01);与RGZ单用组比较,ATRA与RGZ联合对骨髓瘤细胞的增殖抑制作用更明显(U266组P<0.001;RPMI8226组P<0.01);10μmol/L的RGZ处理组U266细胞凋亡率为(9.8±1.7)%,RPMI8226细胞凋亡率为(10.7±3.3)%,且诱导凋亡作用呈时间、剂量依赖性,ATRA与RGZ联合应用时,凋亡细胞的比例较相应的RGZ单独处理组显著升高(P值均<0.01);RGZ能抑制FLIP、XIAP及survivin mRNA的表达,ATRA能协同RGZ进一步抑制FLIP、XIAP及survivin mRNA的表达;经RGZ处理的骨髓瘤细胞caspase-3活性显著增加,RGZ与ATRA联合处理后caspase-3活性较RGZ处理组显著增加(P<0.01);RGZ可明显抑制骨髓瘤细胞在裸鼠体内的生长(P<0.001),并且ATRA与RGZ联合能增强RGZ在裸鼠体内对骨髓瘤细胞生长的抑制作用(P<0.01).结论 RGZ能通过抑制FLIP、XIAP及survivin的表达、促进caspase-3的活化从而诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖.ATRA能增强RGZ对骨髓瘤细胞的上述作用,两者联合具有协同效应.     

MicroRNA-15a抑制骨髓瘤细胞生长及其机制研究

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。