小活络丸的免疫抑制、抗氧化及抗炎镇痛作用

背景:小活络丸具有祛风除湿、活络通痹等功效,用于治疗风寒湿痹、肢体疼痛,麻木拘挛等症。目的:观察小活络丸对小鼠再次免疫应答、特异性免疫(包括细胞免疫和体液免疫)、非特异性免疫(包括补体C3、单核-巨噬细胞系统和红细胞黏附功能)和自由基损伤,以及对疼痛及多种炎症模型的药理作用。设计:随机对照,分层实验。单位:广州市中医中药研究所和广州市中医医院药剂科。材料:选用NIH小鼠和ICR小鼠共628只,鼠龄6～8周。小活络丸(成分:胆南星、制川乌、制草乌、地龙、乳香(制)等;广州陈李济药厂生产,生产批号:19980612)。兔抗小鼠IgG和补体C3抗血清试剂盒,由广州市医药卫生研究所药物室提供;超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量测定试剂盒,南京建成生物工程研究所产品。方法:实验于1998-09/1999-12在广州市中医中药研究所药理研究室和广州市医药卫生研究所药物研究室动物室完成。①观察小活络丸抑制鸡红细胞诱导小鼠再次免疫应答作用:取ICR小鼠84只,雌雄各半,取出20只作为空白对照组;其余均腹腔注射环磷酰胺0.2g/kg,1次/d,1d。第4和12天,共2次腹膜内注射鸡红细胞诱导免疫增强病理模型探讨再次免疫应答。空白对照组(20只)腹腔注射等量生理盐水;动物于加强免疫后,按随机抽签法分为3组:环磷酰胺组20只(灌胃环磷酰胺40mg/kg),小活络丸组21只(灌胃小活络丸混悬液5.54g/kg),模型组20只(灌胃等量蒸馏水);均1次/d,连续灌胃给药7d。19d后分别按单向免疫扩散法测定血清IgG,补体C3含量,采用聚乙二醇沉淀法测定循环免疫复合物含量变化。②观察小活络丸抑制小鼠迟发型超敏反应作用:取ICR小鼠54只,雌雄各半。第1天皮下注射10g/L2,4-二硝基氟苯50μL/只致敏,第4天,将处理后动物按随机抽签法分为3组:泼尼松组(灌胃泼尼松0.01g/kg),小活络丸组(灌胃小活络丸混悬液5.54g/kg),模型组(灌胃等量蒸馏水),每组18只。均1次/d,连续灌胃给药7d。11d后各组小鼠均涂10g/L2,4-二硝基氟苯25μL/右耳,24h后计算肿胀度(右、左耳质量差值)。③观察小活络丸抑制小鼠红细胞免疫黏附功能:取NIH小鼠36只,雌雄各半,按随机抽签法分为3组:环磷酰胺组(灌胃环磷酰胺20mg/kg),小活络丸组(灌胃小活络丸5.54g/kg),空白对照组(灌胃等量蒸馏水),每组12只。均1次/d,连续灌胃给药7d。7d后取小鼠眼眶血,计算红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率。④观察小活络丸抑制小鼠碳粒廓清作用:取ICR小鼠33只,雌雄不拘,将其按随机抽签法分为3组:泼尼松组(灌胃泼尼松20mg/kg),小活络丸组(灌胃小活络丸混悬液5.54g/kg),空白对照组(灌胃等量蒸馏水);均1次/d,连续灌胃7d。于给药第7天末次给药后2h,进行碳粒廓清试验,计算廓清指数K(K值=(LogA1-LogA2)/(T2-T1),式中A1和A2分别表示2和10min所取血样的吸光度,T1和T2表示给碳粒后5和10min取血时间;以K值高低,评价碳粒廓清作用。⑤观察小活络丸对鸡红细胞免疫小鼠溶血素、C3和丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性的影响:取ICR小鼠80只,雌雄各半,取20只小鼠作为空白对照组,其余均腹腔注射2×108L-1鸡红细胞15mL/kg作免疫诱导,空白对照组均以等量生理盐水代替鸡红细胞,灌胃蒸馏水,1次/d,连续灌胃7d。按随机抽签法将免疫处理的动物分为3组:免疫对照组(灌胃给予蒸馏水),环磷酰胺组(灌胃环磷酰胺20mg/kg),小活络丸组(灌胃小活络丸混悬液5.54g/kg);均1次/d,连续灌胃7d;于第7天末次给药后2h,计算IgM型溶血素半数溶血值[(样品吸收度/鸡红细胞半数溶血时的吸收度)×稀释倍数]。按相应试剂盒操作说明书方法测定血清C3含量及丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。⑥观察小活络丸抑制小鼠琼脂肉芽组织增生作用:取NIH小鼠59只,皮下注射20g/L琼脂0.5mL/只,24h后,按随机抽签法分为3组:双氯芬酸组(灌胃双氯芬酸10mg/kg),小活络丸组(灌胃给予小活络丸混悬液5.54g/kg),模型组(灌胃等量蒸馏水);均1次/d,连续灌胃给药7d;第8天处死小鼠,以每千克体质量琼脂肉芽克数表示抑制增生作用。⑦观察小活络丸抑制小鼠醋酸性扭体反应作用:取NIH小鼠63只,按随机抽签法分为3组:双氯芬酸组(灌胃双氯芬酸50mg/kg),小活络丸组(灌胃小活络丸混悬液5.54g/kg),模型组(灌胃等量蒸馏水);均1次/d,连续灌胃给药2d。末次给药后2h,腹腔注射0.1mol/L醋酸0.2mL/只,计数20min内小鼠的扭体次数。⑧观察小活络丸对二甲苯、巴豆油和角叉菜胶诱发急性渗出性炎症及炎症渗出液中前列腺素E含量的影响:取NIH小鼠219只,双氯芬酸组(灌胃双氯芬酸50mg/kg),小活络丸组(灌胃小活络丸混悬液5.54g/kg),模型组(灌胃等量蒸馏水);均1次/d,共2d。末次给药后2h,①涂二甲苯25μL/右耳,20min后;②涂巴豆油25μL/右耳,4h后;计算耳肿胀度(右耳片重-左耳片重)。③用10g/L角叉菜胶20μL/右足皮内注射致炎,3h后,计算肿胀度(右足和左足间重量差值);并测致炎足渗出液中前列腺素E含量。组间计量资料差异比较采用t(方差不齐用t’)检验。主要观察指标:小活络丸对小鼠再次免疫应答、特异性免疫、非特异性免疫和自由基损伤,以及对疼痛及多种炎症模型的药理作用。结果:NIH小鼠和ICR小鼠628只均进入结果分析。①模型组小鼠IgG、循环免疫复合物含量明显高于其他3组(P<0.01),C3含量明显低于其他3组(P<0.05～0.01)。②泼尼松组和小活络丸组小鼠耳肿胀度明显低于空白对照组(P<0.01)。③空白对照组红细胞C3b受体花环率明显高于其他2组(P<0.01),红细胞免疫复合物花环率明显低于其他2组(P<0.01)。④泼尼松组和小活络丸组吞噬指数(K值)明显低于空白对照组(P<0.01)。⑤环磷酰胺组和小活络丸组IgM型溶血素半数溶血值和血清丙二醛含量明显低于免疫对照组(P<0.01),C3含量明显高于免疫对照组(P<0.01),血清超氧化物歧化酶活力与免疫对照组比较,差异不明显(P>0.05)。⑥双氯芬酸组和小活络丸组小鼠琼脂肉芽组织质量与体质量比值明显低于模型组(P<0.01)。⑦双氯芬酸组和小活络丸组小鼠20min内扭体次数明显少于模型组(P<0.01,0.05)。⑧双氯芬酸组二甲苯炎症模型和巴豆油炎症模型耳肿胀度、角叉菜胶急性炎症模型足肿胀度、炎症渗出液中前列腺素E含量明显小于或低于模型组(P<0.05～0.01),小活络丸组炎症渗出液中前列腺素E含量明显低于模型组(P<0.01)。结论:小活络丸既有免疫抑制的药理作用,又有抗增殖性炎症、镇痛、抗氧化药效学效应。     

佛甲草抗疲劳作用的动物实验

目的：观察佛甲草提取液对小鼠综合体能及其小鼠血清、肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶的影响，从而探讨该提取液的抗疲劳作用。方法：①实验于2005—04／05在赣南医学院机能实验室完成。选用昆明种小鼠100只，雌雄不拘，体质量（20&;#177;2）g。②观察佛甲草提取液（由佛甲草提取所得）对小鼠耐寒能力的影响：取雄性小鼠20只，随机分成2组：空白对照组和佛甲草实验组，每组10只。空白对照组腹腔注射生理盐水10mL／kg；佛甲草组腹腔注射佛甲草提取液5g／kg。给药后1h，将小鼠置于-20℃低温冰箱中，记录小鼠存活时间。（④观察佛甲草提取液对小鼠耐热能力的影响：取雌性小鼠20只，随机分为2组，每组10只。空白对照组腹腔注射空白对照10mL／kg；佛甲草组腹腔注射佛甲草提取液5g／kg。给药后1h，将小鼠置于50℃恒温箱中，记录小鼠存活时间。④观察佛甲草提取液对小鼠负重游泳时间的影响：取雄性小鼠20只，随机分为2组：空白对照组和佛甲草组，每组lO只。空白对照组腹腔注射空白对照10mL／kg；佛甲草组腹腔注射佛甲草提取液5g／kg。给药后1h，小鼠按体质量的5％尾根铜丝负重，置25℃恒温水箱中，记录小鼠从入水至沉入水中不再浮出水面为止所需时间，即为小鼠游泳时间。⑤观察佛甲草提取液对小鼠血清、肝组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性的影响：将其余40只小鼠随机分为4组：空白对照对照组、维生素E对照组，佛甲草低剂量组和佛甲草高剂量组，每组10只。空白对照组小鼠灌胃空白对照10mL／（kg&;#183;d）；维生素E对照组灌胃维生素E2．5g/（kg&;#183;d）；佛甲草低剂量组：灌胃佛甲草提取液5g/（kg&;#183;d）；佛甲草高剂量组：灌胃佛甲草提取液10g／（kg&;#183;d），连续14d。末次给药后2h，将各组小鼠断头取血，1500r／min，离心5min，取血清；取适量肝组织，用冰冷空白对照在冰浴中制成10％组织匀浆，4℃，3500r／min，离心10min，取上清液。均采用硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化酶法分别测定血清、肝组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶的活性。⑥组间计量资料差异比较采用双侧t检验。结果：小鼠100只均进入结果分析。①耐寒存活时间：佛甲草组明显长于空白对照组【（58．30&;#177;6．88），（48．40&;#177;7．93）min，t=2．9819，P〈0．Ol】。②耐热存活时间：佛甲草组明显长于空白对照组[（35．60&;#177;6．38），（22．80&;#177;6．30）min，t=4．507，P〈0．011。③负重游泳时间：佛甲草组明显长于空白对照组【（74．10&;#177;15．47），（43．60&;#177;13．62）min，t=4．6779，P〈0．Ol】。④血清、肝组织丙二醛含量：佛甲草提取液低剂量和高剂量组明显低于空白对照组【血清：（8．41&;#177;1．45），（7．65&;#177;1．32），（10．05&;#177;1．59）μmol／L；肝组织：（334．12a&;#177;58．48），（315．13a&;#177;55．65）。（407．82&;#177;60．29）nmol／g．t=2．41,3．6923，2．7748，3．5719，P〈0．05-0．011；与维生素E的作用效果基本一致。⑤血清、肝组织超氧化物歧化酶活性：佛甲草提取液低剂量和高剂量组明显高于空白对照组【血清：（287．63&;#177;23．33），（300．86&;#177;26．35），（262．52&;#177;29．47）kNU／L；肝组织：（783．59&;#177;27．07），（810．30&;#177;38．72），（741．04&;#177;45．92）kNU／g，t=2．112，3．0672，2．5237，3．6472，P〈0．05～0．011；与维生素E的作用效果基本一致。结论：佛甲草提取液具有增强机体活力和适应能力及对抗机体疲劳的作用。     

清热解毒剂对小鼠免疫功能的调节

目的：观察经灌胃给予清热解毒颗粒后小鼠免疫功能的变化情况。 方法：实验于2004-03／07在泰山医学院分析实验室完成。选择昆明种小鼠70只，随机分为7组，即清热解毒颗粒3．0g／kg，1．5gag，0．75g／kg组、免疫低下模型高、中剂量组、免疫低下模型对照组及空白对照组，每组10只。清热解毒颗粒3．0g／kg，1．5g／kg，0．75g／kg组、免疫低下模型高、中剂量组小鼠分别给予10mL/kg清热解毒颗粒3．0g／kg，1．5g/kg,0．75g／kg，3．0g／kg，1．5g／kg灌胃，1次／d，连续14d，空白对照组每日给予等量的生理盐水。免疫低下模型高、中剂量组及免疫低下模型对照组小鼠于给药后第3，3，5天腹腔注射75mg／kg环磷酰胺1次。通过巨噬细胞吞噬功能试验、定量溶血分光光度计测定法、淋巴细胞转化试验，观察不同剂量的清热解毒颗粒对小鼠免疫功能的影响。 结果：纳入小鼠70只，全部进入结果分析，无脱失。①各组小鼠的巨噬细胞吞噬率比较：清热解毒颗粒3．0g／kg，1．5g／kg，0．75g／kg组小鼠的巨噬细胞吞噬率与空白对照组相近（P〉0．05）。免疫低下模型高、中剂量组小鼠的巨噬细胞吞噬率均显著高于免疫低下模型对照组[（29．90&;#177;13．62）％。（23．67&;#177;10．62）％．（10．00&;#177;4．22）％（t=22．01，15.30，P〈0．01，0．05）]。②各组小鼠血清溶血素水平（吸光度413）的比较：清热解毒颗粒3．0g/kg，1．5g／kg，0．75g／kg组小鼠的吸光度。13均显著高于空白对照组（t=21．92，22．13，23．02，P〈0．01）。免疫低下模型高、中剂量组小鼠的吸光度413均显著高于免疫低下模型对照组（t=22．96，23．14，P〈0．01）。③各组小鼠脾淋巴细胞转化率（吸光度570-630）的比较：清热解毒颗粒3．0g／kg，1．5g/kg，0．75g/kg组小鼠的吸光度㈣与空白对照组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。免疫低下模型高、中剂量组小鼠的吸光度570-630均显著高于免疫低下模型对照组（t=21．98，22．33，P〈0．01）。 结论：不同剂量的清热解毒颗粒能完全或部分对抗免疫抑制剂的抑制作用，对小鼠细胞和体液免疫均有一定保护和促进作用。     

肝复康影响小鼠免疫功能的特点

目的：探讨具有补益元气、疏肝升阳、安神益智功效的肝复康对小鼠免疫功能的影响。 方法：实验于2004-03／10在泰山医学院分析实验室完成。①选用成年昆明种小白鼠70只，雌雄各半。按随机抽签法将小鼠分为7组．每组lO只：高、中、低剂量肝复康组、高、中剂量肝复康＋环磷酰胺组、正常对照组、模型组。高、中、低剂量肝复康组：按3．0，1，5．0．75g／（kg&;#183;d）剂量灌胃肝复康混悬液10mL／kg；高、中剂量肝复康＋环磷酰胺组：按3．0,1．5g／（kg&;#183;d）剂量灌胃肝复康混悬液10mL／kg；模型组和正常对照组：灌胃等量生理盐水。模型组及高、中剂量肝复康＋环磷酰胺组在给药后第3，5天腹腔注射环磷酰胺（75mg／kg）1次。②于给药后第15天通过巨噬细胞吞噬功能试验（计数巨噬细胞吞噬率）、溶血紊测定【以上清液吸光度似值）表示】、淋巴细胞增殖实验（记录A570-630值），观察肝复康对小鼠免疫功能的影响。⑧计量资料差异比较采用t检验。 结果：小鼠70只均进入结果分析。①高剂量肝复康组巨噬细胞吞噬率明显高于正常对照组（P〈0.05），高、中剂量肝复康＋环磷酰胺组明显高于模型组（P〈0．01）。②高、低剂量肝复康组溶血素水平明显高于正常对照组（P〈0.01），高、中剂量肝复康＋环磷酰胺组明显高于模型组（P〈0．01）。⑧各种剂量肝复康组脾淋巴细胞增殖作用明显强于正常对照组（P〈0．01），高、中剂量肝复康＋环磷酰胺组明显强于模型组（P〈0．01）。 结论：肝复康对小鼠细胞和体液免疫均有一定保护和增强作用。     

温肾方药对甲状腺功能减退症大鼠甲状腺素代谢和性激素水平的调节

目的：观察温肾方药对甲状腺功能减退症大鼠甲状腺功能及血清性激素水平的影响，并分析该影响是否有剂量依赖性，该方药与西药甲状腺片合用是否效果更好。 方法：实验于2005—04／05在上海中医药大学附属龙华医院科技实验中心完成。①选用清洁级健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半。②取10只为正常对照组正常饲养。给予其余50只大鼠每天灌胃0．4g／L他巴唑混悬液1．35mL（2．7mg/kg），持续45d。第46天。将造模后大鼠50只随机分为5组：模型组、甲状腺片组、温肾方小剂量组、温肾方大剂量组、温肾方合甲状腺片组，每组10只。③模型组：灌胃9．0mL／kg生理盐水；甲状腺片组：灌胃9．0mL／kg甲状腺片混悬液（上海市实业联合集团长城药业有限公司生产，批号20051001，40mg／片；用生理盐水配成0．4g／L混悬液）；温肾方小剂量组：灌胃9．0mL／kg半硫丸悬液（半硫丸，主要成分为硫磺；将硫磺和豆腐以1：1．5的比例进行炮制；由上海中医药大学附属龙华医院药剂科制为胶囊，用生理盐水配成30g／L混悬液）；温肾方大剂量组：18．0mL／kg半硫丸胶囊混悬液；温肾方＋甲状腺片组：灌胃9．0mL／kg甲状腺片混悬液和9．0mL／kg半硫丸悬液，1次／d，共15d。④15d后取大鼠颈部血液，采用放射免疫法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、促甲状腺激素、促卵泡激素、促黄体生成素、雌二醇、孕酮水平。⑤各组计量结果差异比较采用方差分析和q检验。 结果：大鼠60只均进入结果分析。①温肾方对甲状腺功能减退症大鼠甲状腺功能的影响：各治疗组血清游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素水平明显高于模型组（P〈0．05-0．01），血清促甲状腺激素水平明显低于模型组（P〈0．05～0．011）。温肾方大剂量组、甲状腺片组、温肾方＋甲状腺片组血清游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素水平明显高于温肾方小剂量组（P〈0．01），血清促甲状腺激素水平明显低于温肾方小剂量组（P〈0．05—0．01）。温肾方＋甲状腺片组血清游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素水平明显高于其他治疗组及模型组（P〈0．01），血清促甲状腺激素水平明显低于其他治疗组及模型组（P〈0．05—0.01）。②温肾方对甲状腺功能减退症大鼠血清性激素水平的影响：除温肾方小剂量组对雄性大鼠促黄体生成素、雌性大鼠促卵泡激素外，各治疗组大鼠血清性激素水平明显高于模型组（P〈0．01）；除温肾方大剂量组雌性大鼠促黄体生成素、孕酮外，温肾方大剂量组、甲状腺片组、温肾方＋甲状腺片组大鼠血清促卵泡激素、促黄体生成素、雌二醇、孕酮水平均明显高于温肾方小剂量组（P〈0．05-0．01）；其中温肾方＋甲状腺片组与其他治疗组比较，均差异明显（P〈0．05～0.01）。 结论：温肾方可调节甲状腺功能减退症血清性激素水平，改善甲状腺功能，且该作用存在剂量依赖性，温肾方与甲状腺片合用效果更好。     

不同剂量活血祛瘀剂对小鼠免疫功能影响的差异

目的：分析活血祛瘀剂对小鼠细胞及体液免疫功能的影响。方法：实验于2005—01／06在泰山医学院分析实验室完成。选择昆明种小白鼠80只，按随机抽签法分为8组，即活血祛瘀剂3．0g/kg，1．5g/kg，0．75g/kg组、通塞脉片组、活血祛瘀剂3．0g/kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组、免疫低下模型组及正常对照组，每组10只。（D活血祛瘀剂3．0g／kg，1．5g/kg，0．75g／kg组及活血祛瘀剂3．0g／kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组小鼠分别给予10mL／kg的活血祛瘀剂（主要有黄芪、丹参、葛根等组成）3．0g/kg，1．5g/kg，0．75g／kg，3．0g／kg，1．5g/kg灌胃，1次／d，连续14d。其中后两组小鼠均于给药后第3天腹腔注射环磷酰胺（75mg／kg）1次。②通塞脉片组给予1．05g/kg通塞脉片灌胃，1次／d，连续14d。③免疫低下模型组于实验第5天腹腔注射环磷酰胺（75mg／kg）1次，制备免疫低下模型。④正常对照组每日给予等量的生理盐水。通过巨噬细胞吞噬功能实验、溶血素水平（以吸光度413表示）测定及淋巴细胞转化率（以吸光度。表示）实验，观察活血祛瘀剂对小鼠免疫功能的影响。结果：纳入80只小鼠全部进入结果分析，无脱失。①各组小鼠巨噬细胞吞噬率比较：活血祛瘀剂3．0g／kg组显著高于正常对照组[（29．40&;#177;11．510）％，（19．10＋9．231）％，（P〈0．01）1。活血祛瘀剂3．0g/kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组均显著高于免疫低下模型组[（22．90&;#177;9．267）％，（19．50＋6．485）％，（9．00＋3．091）％，（P〈0．01）]。②各组小鼠血清溶血素水平（吸光度413）比较：活血祛瘀剂3．0，0．75g/kg组均显著高于正常对照组[0．680&;#177;0．015，0．570&;#177;0．068，0．403&;#177;0．045，（P〈0．01）]。活血祛瘀剂3．0g／kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g／kg＋环磷酰胺组均显著高于免疫低下模型组[0．519&;#177;0．032，0．387&;#177;0．041，0．290&;#177;0．068，（P〈0．01）1。③各组小鼠脾淋巴细胞转化率（吸光度，570-630）比较：活血祛瘀剂3．0g／kg组显著高于正常对照组[0．530&;#177;0．060，0．458&;#177;0．048，（P〈0．01）1。活血祛瘀剂3．0g/kg＋环磷酰胺组，活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组均显著高于免疫低下模型组[0．647&;#177;0．036，0．555&;#177;0．038，0．225&;#177;0．043，（P〈0．01）]。结论：不同剂量的活血祛瘀剂虽对正常小鼠免疫指标的影响有所不同，但对免疫抑制剂引起的细胞和体液免疫功能低下均有一定的保护和促进作用。     

姬松茸复合多糖对环磷酰胺的增效作用及其机制

目的：观察姬松茸复合多糖是否对环磷酰胺的抗肿瘤作用有增效效应。并分析其作用机制。 方法：实验于2003—03／2004—04在齐齐哈尔医学院医药科学研究所完成。①选用健康成年昆明种小鼠135只，按随机数字表法分为9组：正常对照组，荷瘤对照组，环磷酰胺组，姬松茸复合多糖高、中、低剂量组，姬松茸复合多糖高、中、低剂量＋环磷酰胺组，每组15只。②除正常对照组小鼠外，将0．2mL浓度为1&;#215;10^10L^-1S180肿瘤细胞接种于其余小鼠腋窝皮下。正常对照组和荷瘤对照组灌胃0．5ml。生理盐水，1次／d，共10d。环磷酰胺组先灌胃0．5ml。生理盐水。6h后腔注射环磷酰胺10mg／（kg&;#183;d）；姬松茸复合多糖高剂量、中剂量、低剂量组分别按700，350，175mg／（kg&;#183;d）灌胃姬松茸复合多糖[姬松茸多糖（50％）、香菇多糖（33％）、茯苓多糖（94％）均购自浙江庆元县金源真菌多糖有限公司。姬松茸多糖、香菇多糖、茯苓多糖以质量比4：2：1的比例混合。用前以蒸馏水稀释至所需浓度]1次/d，共10d。姬松茸复合多糖高、中、低剂量＋环磷酰胺组先分别灌胃350，175，88mg／（kg&;#183;d）姬松茸复合多糖，6h后各组小鼠腹腔注射环磷酰胺5mg／kg；正常对照组和荷瘤对照组胃饲给予等体积蒸馏水。1次／d，共10d。③用药4周后。计算抑瘤率[（1-实验组平均瘤重／荷瘤对照组平均瘤重）&;#215;100％]。依q值评价联合用约增效情况。q=两药合用时的抑瘤率／[A药的抑瘤率＋（1-A药的抑瘤率）B药的抑瘤率1。q=0.85～1．25为两药作用相加，q〉1.25为两药作用增强（或协同），q〈0.85为两药拮抗。④应用电子显微镜观察肿瘤细胞形态变化，采用酶联免疫分析法检测血清白细胞介素2和P27蛋白表达变化。⑤组间比较采用t检验。 结果：在实验过程中。荷瘤对照组造模失败1只，死亡3只。环磷酰胺组死亡3只，造模失败2只。姬松茸复合多糖高剂量组死亡2只。联合用药组死亡2只，造模失败1只。有121只进入结果分析。①抑瘤率：姬松茸复合多糖高、中、低剂量组和环磷酰胺组分别为10．6％，52.5％，30.2％。72．1％，姬松茸复合多糖高、中、低剂量＋环磷酰胺组分别为65．8％，83．4％，82.7％，q值分别为0．876,0．962，1．027，均〉0.85，表明不同剂量的复合多糖能增强环磷酰胺的抗小鼠S180肿瘤的作用。②血清白细胞介素2水平：荷瘤对照组明显低于正常对照组（t=11．655，P〈0．01），复合多糖中、低剂量组，姬松茸复合多糖中、低剂量＋环磷酰胺组明显高于荷瘤对照组和环磷酰胺组（t=2．413-9．935，P〈0．05～0．01）。③P27蛋白表达：荷瘤对照组明显低于正常对照组（t=68．976，P〈0．01），而各治疗组明显高于荷瘤对照组（t=3．188-2．684，P〈0．01）。姬松茸复合多糖中、低剂量和姬松茸复合多糖高、低剂量＋环磷酰胺组明显高于环磷酰胺组（t=3．132—5．511，P〈0．01）。④透射电镜观察结果：单用姬松茸复合多糖各剂量组可见肿瘤细胞核固缩明显，凋亡细胞数量增多。部分细胞核崩解形成小体。姬松茸复合多糖各剂量＋环磷酰胺组可见肿瘤细胞体积变小，细胞核固缩明显，细胞表面微绒毛消失，细胞内游离核蛋白体明显减少，胞质内线粒体空泡变性。 结论：不同剂量的复合多糖均能增强环磷酰胺的抗小鼠S180肿瘤作用，其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡，增强白细胞介素2、抑癌基因p27的表达有关。     

景蜂胶囊调节小鼠免疫功能的量效分析

目的：观察不同剂量的景蜂胶囊对小鼠免疫功能的影响。 方法：①对小鼠免疫器官质量的影响：选择BALB／c小鼠50只。按随机数字表法分成5组，即空白对照组。贞芪扶正胶囊组（0．8s／kg）和景蜂胶囊（由红景天、枸杞、高原油菜蜂花粉、党参、女贞子多糖和黄芹多糖组成）0．4，0．8，1．2g／kg组，每组10只，连续给药7d，测量各组小鼠胸腺和脾脏质量。②对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响：取BALB／c小鼠50只，分组及给药方法同上。连续给药7d，尾静脉注射墨汁10mL／kg，分别称取肝，脾质量。计算廓清指数k和校正指数。③对体液免疫功能的影响：取BALB／c小鼠50只、分组及给药方法同上。连续给药3d后，给予绵羊红细胞悬液0．2mL进行免疫，免疫4d后，麻醉摘取小鼠眼球取血，分离血清，计算每个样品的半数溶血值。④对细胞免疫功能的影响：取BALB／c小鼠50只，分组及给药方法同上。连续给药7d。第8天麻醉剪去小鼠尾梢0．2cm，取血推片，计数100个淋巴细胞，计算T淋巴细胞百分率。⑤对小鼠迟发型变态反应的影响：取BALB／c小鼠50只，分组及给药方法同上。连续给药3d后，尾静脉注射绵羊红细胞悬液0．1mL进行致敏。5d后。在小鼠左侧脚掌注射绵羊红细胞悬液0．1mL，在小鼠右侧脚掌注射生理盐水0．1mL，24h后测量两侧脚掌厚度的差值。 结果：250只小鼠全部进入结果分析，无脱失。①各组小鼠的胸腺、脾脏质量相比差异无显著性意义（P〉0．05）。②景蜂胶囊0．8，1．2g／kg组小鼠的廓清指数、校正指数均显著高于空白对照组（P〈0.05～0．01）。③景蜂胶囊0．4，0．8，1．2g／kg组小鼠的溶血素抗体生成水平均显著高于空白对照组（P〈0．05--0．01）。④景蜂胶囊0．8，1．2g／kg组小鼠外周血T淋巴细胞百分率均显著高于空白对照组（P〈0．05-0．01）。⑤景蜂胶囊1．2g／kg组小鼠左、右侧脚掌厚度的差值显著大于空白对照组（P〈0．05）。 结论：景蜂胶囊具有提高小鼠免疫功能的作用，其中0．8，1．2g/kg剂量组表现更为显著。     

强肌健力口服液影响脾虚小鼠蛋白质合成的效应

目的：观察强肌健力口服液对实验性脾虚证小鼠蛋白质合成的影响。方法：实验于2005-08／09在广州中医药大学核医学实验室完成。采用随机抽签法将4周龄健康雄性NIH小鼠78只分为正常对照组（n=14）、脾虚模型组（n=17）、强肌健力口服液高剂量组（n=15）．强肌健力口服液中剂量组（n=17）、四君子汤组（n=15）。采用利血平复制脾虚证动物模型，正常对照组动物腹腔注射生理盐水0．1mL／（只&;#183;d），同时灌服蒸馏水0．5mL／（只&;#183;d）；脾虚模型组动物腹腔注射利血平0．2mg／（kg&;#183;d），并灌服蒸馏水0．5mL／（只&;#183;d）；强肌健力口服液高剂量组及中剂量组动物腹腔注射利血平0．2mg／（kg&;#183;d），并灌胃强肌健力口服液（由北芪、党参、升麻、白术、甘草等组成，每毫升含生药1．204g），给药剂量为26g／kg及13g／kg，1次／d；四君子汤组动物腹腔注射利血平0．2mg／（kg&;#183;d），并灌服四君子汤（由党参、白术、茯苓、灸甘草组成）26g/kg，1次／d，连续用药16d。测定各组动物脾、胸腺、肾、肝、小肠等组织蛋白质水平的变化，以及各组动物造模前后体质量和脾、肾、胸腺、肝脏质量的变化。结果：在实验过程中因灌胃失误及造模等原因引起动物死亡，其中正常对照组1只，脾虚模型组5只，强肌健力口服液高剂量组3只，四君子汤组2只，最终进入结果分析67只。①与正常对照组比较，脾虚模型组动物脾脏、肾脏、肝脏、小肠组织蛋白质含量均显著降低（Q=10．64，8．06，14．71，11.22；P均〈0．01），胸腺组织蛋白质含量则升高（Q=10．68；P〈0．01），心肌组织则无改变；强肌健力口服液及四君子汤能使脾脏、肾脏、肝脏组织蛋白质含量升高（Q=3．67，2．93，3．78，3．95；P均〈0．05）；同时使胸腺蛋白质含量降低。②实验前各组小鼠体质量差异不显著（P=0．993）；实验结束后脾虚模型组小鼠体质量明显比正常对照组减轻（Q=17．32，P〈0．01）；强肌健力口服液和四君子汤组小鼠体质量比脾虚模型组显著升高（Q=6．69，5．03，8．30，P均〈0．01）。③脾虚模型组小鼠脾脏、肾脏、胸腺、肝脏、心肌组织质量比正常对照组减轻（P均〈0．01）；强肌健力口服液和四君子汤组小鼠脾脏、肾脏、胸腺、肝脏、心肌组织质量增加。结论：强肌健力口服液对蛋白质合成有促进作用，从而发挥其健脾益气作用。     

地黄管食通口服液对放射治疗食管癌细胞凋亡及相关调控基因蛋白的影响

目的：观察以养阴润燥、清热解毒为基本治法组方的中药复方制剂地黄管食通口服液对放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡的影响，分析该口服液作用机制。 方法：实验于2004—11／2005-08在郑州大学动物实验中心SPF级实验室（动物实验）和郑州大学分子医学重点实验室（其他实验）完成。①选用清洁级Wistar大鼠125只，6～8周龄，雌雄不拘。取20只大鼠作为空白对照组；其余大鼠均皮下注射甲基戊基亚硝胺溶液5mg／kg造成食管癌模型，每周1次，连续16周，每周称体质量1次，根据体质量增长调节注射给药量。末次大鼠注射给予甲基戊基亚硝胺溶液后，除20只大鼠（模型组）外，将其余造模大鼠用氯胺酮腹腔注射麻醉（0．1g／kg，2mL／kg），应用^60Co放射治疗机进行大鼠食管局部^60Co照射，剂量为2Gy／d。连续5d。②末次照射24h后，分别给予相应受试药物，动物分组及给药情况如下：空白对照组（n=20）：灌胃蒸馏水10mL／（kg&;#183;d）；模型组（n=20）：灌胃蒸馏水10mL／（kg&;#183;d）；放疗组（n=17）：灌胃蒸馏水10mL／（kg&;#183;d）：六味地黄丸组（n=17）：灌胃六味地黄丸（成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹皮、茯苓；河南宛西制药股份有限公司生产，批号：20010691；9g／粒）生药含量4．5g／（kg&;#183;d）；地黄管食通口服液低、中、高剂量组（n=17）：灌胃地黄管食通口服液（地黄管食通口服液：成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹疫、茯苓、山豆根、冬凌草；由河南中医学院第一临床医学院制剂中心提供，批号：020117；10mL／支）生药含量0．5．1．0，1．5g／（kg&;#183;d）。每组均干预5周。③采用原位末端标记法检测细胞凋亡情况，计数细胞凋亡比例的均数为凋亡指数。④采用免疫组化方法检测P53，Bcl-2蛋白表达：P53和Bcl-2蛋白阳性反应均呈棕黄色颗粒。按显色有无及阳性细胞多少可分为4个等级：阴性（-）：整个切片未见阳性染色；弱阳性（＋）：阳性细胞数〈25％；中度阳性（＋＋）：阳性细胞数25％-50％；强阳性（＋＋＋）：阳性细胞数〉50％。⑤两组计量和计数资料差异比较采用t检验和X^2检验。 结果：纳入125只大鼠，各组取10只用于结果分析。①细胞凋亡指数：地黄管食通各剂量组明显高于模型组（P〈0.05-0．01），六味地黄丸组和地黄管食通各剂量组明显高于放疗组（P〈0．05—0.01）。②P53蛋白表达阳性率：模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组（P〈0．05-0．01）。地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组（P〈0．05—0．01），以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显（P〈0．01）。③Bcl-2蛋白表达阳性率：模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组（P〈0.05-0．01）。地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组（P〈0．05-0．01），以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显（P〈0．01）。 结论：地黄管食通口服液可促进放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡，该作用发生可能与抑制P53蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达有关。