Talin1在输卵管妊娠患者的输卵管和绒毛中高表达并促进妊娠滋养细胞的侵袭

目的 验证Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达差异及对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响,探讨其作用机制。方法 采用免疫组化及Western blot检测Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达定位及蛋白表达差异;HTR-8/SVneo细胞内转染Talin1 siRNA,划痕实验及Transwell实验检测Talin1对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRTPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Snail的表达。结果 正常输卵管组织及妊娠输卵管组织中均可检测到Talin1的阳性表达,主要表达于纤毛细胞的细胞质中;妊娠输卵管组织中Talin1的蛋白表达高于正常输卵管组织（P<0.01）;输卵管妊娠绒毛中Talin1表达高于宫内妊娠绒毛（P<0.01）;沉默Talin1抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭（P<0.01）和迁移（P<0.05）;Talin1下调HTR-8/SVneo细胞中N-cadherin、MMP-2、Snail的表达（P<0.05）,上调MMP-9的表达（P<0.05）。结论 输卵管妊娠患者的输卵管组织及绒毛中Talin1的表达显著升高,输卵管妊娠的发生可能和Talin1调控妊娠滋养细胞的侵袭相关。     

血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞胰岛素样生长因子-1表达及细胞侵袭力的影响

目的 探讨血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达及细胞侵袭力的影响.方法 分别以1%、5%及10%胎牛血清(FBS)处理HTR-8/SVneo细胞48 h后,荧光定量PCR检测细胞的IGF-1及MMP-2 mRNA水平,细胞免疫荧光检测细胞IGF-1、MMP-2蛋白表达,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭力;进一步添加人重组IGF-1处理后,观察HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达、细胞增殖及侵袭能力的改变.结果 随着血清浓度降低,细胞增殖能力明显下降(P<0.05);血清限制抑制细胞IGF-1、MMP-2的mRNA及蛋白表达(P<0.05),导致细胞侵袭力下降(P<0.05);补充人重组IGF-1能显著上调HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达水平(P<0.05),促进HTR-8/SVneo细胞侵袭(P<0.05).结论 血清限制下调人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞IGF-1表达,可能通过引起其MMP-2表达降低来介导细胞侵袭力下降;补充人重组IGF-1有助于促进HTR-8/SVneo细胞增殖及侵袭.     

Klotho对滋养细胞侵袭的影响

目的:研究Klotho对绒膜外滋养细胞系HTR8/SVneo侵袭的影响。方法:用免疫组化检测子痫前期及正常孕妇胎盘组织Klotho蛋白表达情况。实验分组为对照组、Klotho重组蛋白组、Klotho siRNA组。Transwell小室法检测侵袭能力,Western Blot检测细胞蛋白表达水平。结果:子痫前期胎盘组织Klotho表达水平明显低于正常胎盘组织。Klotho重组蛋白处理细胞后,HTR8/SVneo细胞侵袭能力显著增强、其表达的基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达上调。Klotho siRNA处理细胞后,HTR8/SVneo细胞侵袭能力显著减弱、其表达的MMP-2及MMP-9表达显著下调。结论:Klotho可能通过介导MMP-2和MMP-9的表达调节滋养细胞侵袭能力,为子痫前期发病机制的研究提供了新线索。     

低氧经miR-130a-3p靶向Sirt7对人滋养细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的 探究低氧条件下miR-130a-3p靶向去乙酰化酶7(Sirt7)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 以HTR-8/SVneo细胞为研究对象，将miR-130a-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor-NC转染至细胞中或联合Sirt7抑制剂97491干预，采用低氧(1%O₂)处理48 h, qRT-PCR检测细胞中miR-130a-3p及Sirt7 mRNA表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot检测细胞中Sirt7、HIF-1α、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平；TargetScan Human 7.1在线软件和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-130a-3p与Sirt7的靶向关系。结果 低氧可上调HTR-8/SVneo细胞中miR-130a-3p表达水平，下调Sirt7 mRNA和蛋白表达水平；miR-130a-3p低表达可升高Sirt7 mRNA表达水平；提高细胞迁...     

小干扰RNA抑制高迁移率族蛋白B1基因表达对肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭能力的影响.方法 L9981细胞分3组,其中2组分别转染靶向HMGB1基因的siRNA(HMGB1-siRNA组)和无关序列siRNA(无关siRNA组),1组为空白对照组.转染后72 h,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平;细胞活力计数仪测定各组细胞活力.分别在转染后24、48、72和96 h应用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞生存状态.应用Boyden小室实验检测转染后72 h各组细胞的体外侵袭力.结果 HMGB1-siRNA组HMGB1mRNA相对表达量(1.0±0.0)明显低于无关siRNA组(12.8±1.3,P<0.05)和空白对照组(12.1± 1.0,P<0.05),HMGB1蛋白表达水平也明显受到抑制;细胞活力(44.7%±1.7%)明显低于无关siRNA组(73.7%±2.1%,P<0.01)和空白对照组(77.3%±1.9%,P<0.01).MTT测定显示转染后不同时间HMGB1-siRNA组L9981细胞生长均受到明显抑制.Boyden小室实验显示HMGB1-siRNA组穿膜细胞数(个/高倍视野,18.3±2.2)明显少于无关siRNA组(127.7±9.3,P<0.01)和空白对照组(132.3±10.7,P<0.01).结论 利用siRNA技术抑制HMGB1基因表达可有效抑制肺癌细胞的体外增殖和侵袭.     

HADHA通过调节PI3K/AKT信号通路抑制人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo迁移与侵袭

目的 探讨羟酰基辅酶A脱氢酶α亚基（hydroxyacyl-CoA dehydrogenase alpha subunit, HADHA）对人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法 通过组织免疫荧光染色检测HADHA在6～8周正常早孕绒毛及复发性自然流产绒毛样本中表达水平的差异;慢病毒系统构建HADHA过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系,并采用qRT-PCR、Western blot、Transwell、细胞划痕实验评价HADHA对HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭能力和相关基因表达的影响;转录组测序及生物信息学分析筛选HADHA可能调控的靶基因及信号通路;加入蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)抑制剂明确HADHA调节HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭的具体分子机制。结果 HADHA在复发性自然流产样本的绒毛外滋养层（extravillous trophoblast, EVT）中较正常对照组中高表达。过表达HADHA的HTR-8/SVneo细胞中迁移侵袭相关基因HLA-G、MMP2、MMP9、NCAD的表达水平降低...     

ARID1A通过阻断Wnt/β-catenin通路抑制滋养层细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨富含AT的相互作用结构域蛋白1A(AT-rich interactive domain 1A,ARID1A)对子痫前期(preeclampsia, PE)滋养层细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及潜在分子机制。方法 采用RT-qPCR及Western blot测定30例PE患者及30例正常妊娠者胎盘组织中ARID1A表达情况。以人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo为研究对象,实验分组为：control组(无处理)、NC组(转染空载体)、ARID1A组(转染ARID1A过表达载体)、ARID1A+氯化锂(LiCl)组(转染ARID1A过表达载体后再用50 mmol/L的LiCl处理)。采用MTT法检测细胞增殖,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力,采用RT-qPCR及Western blot法检测胎盘组织中ARID1A的mRNA和蛋白表达水平,采用Western blot法检测HTR-8/SVneo细胞中ARID1A、MMP-2、MMP-9、Wnt1、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平。结果 PE患者胎盘组织中ARID1A的表达水平显著高于正常胎...     

黄芪甲苷对高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/SVneo）焦亡及侵袭迁移的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/SVneo）焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组：对照组（未处理）、高糖组（高糖刺激）及黄芪甲苷50、100μmol/L组（高糖刺激+黄芪甲苷）。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,分别采用Transwell实验和划痕实验测定细胞侵袭、迁移能力,Hoechst 33342/碘化丙啶（PI）双荧光染色评估细胞焦亡情况,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶剪切体（cleaved-Caspase-1）、消皮素D-N端（GSDMD-NT）、白细胞介素18(IL-18)蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞活力显著降低,细胞迁移率显著降低,侵袭细胞数显著减少,PI阳性细胞比例显著增加,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著升高（P<0.05或P<0.01）;与高糖组比较,黄芪甲苷处理组细胞活力显著升高,细胞迁移率显著增加,...     

长链非编码RNA母系印记基因3对人类绒毛发育的作用

目的 研究长链非编码RNA (lncRNA)母系印记基因3(MEG3)对人类流产绒毛发育的影响,并探讨其分子机制.方法 收集自然流产及人工流产各15例患者的绒毛组织,使用免疫组化方法检测其凋亡因子Bax及凋亡抑制因子Bcl-2的表达,使用qPCR法检测MEG3的表达.在人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中过表达MEG3后,利用qPCR法检测MEG3的表达,利用细胞侵袭实验比较过表达组与对照组细胞的侵袭能力.结果 人工流产绒毛组织中Bax的表达低于自然流产绒毛,而Bcl-2的表达高于自然流产绒毛(P＜0.01).人工流产绒毛组织中的MEG3的表达低于自然流产(P＜0.01).人滋养层细胞系HTR-8/SVneo细胞中过表达MEG3后,HTR-8/SVneo细胞侵袭能力降低(P＜0.01).结论 IncRNA MEG3可调控滋养层细胞的凋亡及侵袭能力,影响人类绒毛的发育.     

SHH信号通路对子痫前期患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响及其机制

目的：探讨激活SHH信号通路对子痫前期（PE）患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法：将HTR8/SVneo细胞分为正常对照组、缺氧/复氧（H/R）处理组和purmorphamine+H/R处理组。Western blotting法检测PE胎盘组织和正常妊娠晚期胎盘组织及各组HTR8/SVneo细胞中SHH信号通路相关蛋白SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平,流式细胞术（FCM）检测各组HTR8/SVneo细胞的凋亡率,Transwell小室法检测各组HTR8/SVneo细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HTR8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平。结果：PE胎盘组织HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平均明显低于正常妊娠晚期胎盘组织（P<0.05）;H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显低于正常对照组,细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.05）;purmorphamine+H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显高于H/R处理组（P<0.05）,细胞凋亡率明显低于H/R处理组（P<0.05）。结论：激活SHH信号通路可减少PE患者胎盘组织中HTR8/SVneo细胞凋亡,并通过上调MMP-2和MMP-9表达提高细胞的侵袭能力。     

化瘀消癥颗粒调控Talin1抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭迁移的研究

目的 研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 制备化瘀消癥颗粒含药血清,CCK8实验检测不同浓度化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响并筛选后续实验药物浓度,划痕实验、Transwell实验检测化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8...     

维生素D通过下调miR-21的表达促进人胎盘滋养细胞的迁移和侵袭

目的探讨维生素D对microRNA-21表达的调控作用以及对人胎盘滋养细胞迁移、侵袭能力的影响。方法不同剂量维生 素D刺激HTR-8/SVneo细胞24、48、72 h后,RT-qPCR 检测microRNA-21表达情况;将miR-21 mimic、miR-21 mimic-nc、miR- 21 inhibitor和miR-21 inhibitor-nc分别转染至HTR-8/SVneo细胞,或将miR-21 mimic、miR-21 inhibitor联合维生素D共同刺激 细胞,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,western blot 检测E-cadherin、Fibronectin、MMP9的蛋白表达水平。结果维 生素D刺激HTR-8/SVneo细胞后抑制了micoRNA-21的表达,且抑制作用呈浓度-时间依赖性增强。单独转染miR-21 mimic抑 制HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力,E-cadherin表达水平增加,Fibronectin、MMP9表达水平降低;联合维生素D共同刺激细 胞则可以减弱该作用。单独转染miR-21 inhibitor 促进了HTR-8/SVneo 细胞的迁移、侵袭能力,E-cadherin 表达水平降低, Fibronectin、MMP9表达水平增加;联合维生素D共同作用与单细胞独转染miR-21 inhibitor相比,细胞迁移、侵袭能力以及蛋白 水平无明显改变。结论维生素D可能通过下调microRNA-21的表达来影响子痫前期发生发展。     

人绒毛外滋养层细胞HTR-8/SVneo 中Toll样受体mRNA的表达及对吲哚胺2,3-双加氧酶mRNA水平的影响

目的系统检测人绒毛外滋养细胞HTR-8/SVneo中Toll样受体（TLR）mRNA的表达情况,定量分析TLRs配体刺激前后吲
哚胺2,3双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO）mRNA的表达差异。方法RT-PCR检测HTR-8/SVneo细胞中TLR 1-10
mRNA 的表达情况;实时荧光定量RT-PCR 检测TLR3、TLR4、TLR7/8、TLR9 配体刺激前后IDO mRNA 表达水平。结果
HTR-8/SVneo细胞中有IDO及TLR 1-10 mRNA表达;在48 h内IDO mRNA表达随着时间延长,呈升高趋势;IDO mRNA的表
达与培养基营养状况相关;TLRs配体刺激后,除TLR-3转录水平表达下调外,TLR-4、7、8、9 mRNA表达均上调;poly（I∶C）刺激
后IDO mRNA 表达低于正常组,IFN-γ刺激后表达高于正常组（P<0.05）。结论TLRs mRNA的表达提示该细胞具有抗感染作
用;HTR-8/Svneo细胞中IDO mRNA的表达与母胎界面营养状况相关;TLRs配体刺激剂对TLRs及IDO mRNA表达的影响不
仅验证了TLRs的功能活性,而且提示了IDO在抗病原体免疫应激中可依赖TLRs途径发挥作用。
     

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨Src同源物2磷酸酶2（SHP-2）对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法 用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SHP-2在子痫前期（PE）组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞（HTR-8/SVneo）增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）的磷酸化水平。结果 HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论 SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点     

C型凝集素样受体CLEC-2在人滋养细胞系HTR-8/SVneo的表达与调控

目的研究C型凝集素样受体CLEC-2在人早孕期母胎界面滋养细胞的表达及调控。方法应用免疫细胞化学法和Western blot法检测人滋养细胞系HTR-8/SVneo中CLEC-2的表达;并观察不同浓度人绒毛膜促性腺激素（hCG）、孕激素及雌激素对其表达CLEC-2的影响。结果 HTR-8/SVneo显著表达CLEC-2。与对照组相比,2.5和5.0kU/LhCG处理组CLEC-2的表达上调;相反,经0～10-7mol/L浓度雌激素处理后,HTR-8/SVneo中CLEC-2的表达呈剂量依赖性降低;孕激素不影响CLEC-2的表达。结论 HTR-8/SVneo表达CLEC-2受hCG升调节、雌激素降调节;CLEC-2可能参与调节人早孕期滋养细胞的生物学行为,进而参与正常妊娠的维持。     

ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力

目的 探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化（EMT）过程的影响。方法 将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westen boltting（WB）实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过 WB 实验检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关蛋白：Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果 ALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著（P<0.05）;shALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著（P<0.05）。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。     

RAC3基因对早期滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3（RAC3）对早期滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2015年5月至2016年5月在海军军医大学（第二军医大学）长征医院门诊或住院的不明原因自然流产和人工流产妊娠妇女的绒毛组织各20例,应用qPCR法检测绒毛组织中Rac3 mRNA的表达。取C57/B6小鼠孕6.5、14.5和19.5 d的胎盘组织进行mRNA芯片检测。在早期人滋养层细胞系HTR-8/SVneo中干扰和过表达RAC3后,应用CCK-8法和Transwell实验检测RAC3对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 不明原因自然流产绒毛组织中Rac3 mRNA的表达低于人工流产绒毛组织（P<0.05）。小鼠孕6.5、14.5 d胎盘组织中Rac3 mRNA的表达高于孕19.5 d（P均<0.05）。与对照组相比,干扰RAC3表达后HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱（P均<0.05）,过表达RAC3后HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强（P均<0.01）。结论 RAC3对早期滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有重要调控作用。