重组人β防御素2在膀胱上皮细胞中的表达及活性检测

目的探讨重组人β防御素2(hBD2)真核表达载体在人膀胱上皮细胞中的表达,并观察重组hBD2的体外抗菌活性。方法采用脂质体转染法将hBD2重组真核表达质粒pCAGG-hBD2导入无血清培养的人膀胱上皮细胞株T24细胞,利用RT-PCR法、Western blotting分别在核酸水平及蛋白质水平检测hBD2的表达。ELISA测定培养上清中hBD2的浓度,菌落计数法检测上清对尿路致病性大肠杆菌(UTI89)和克雷白杆菌(TOP52)的临床分离株的抗菌效果。结果 RT-PCR和Western blotting结果显示,转染后hBD2可在T24细胞中有效地表达。上清中hBD2的含量为(36.5±3.2)ng/106个细胞,菌落计数法显示,hBD2对UTI89和TOP52临床分离株有显著的杀菌作用。结论 hBD2重组真核表达载体脂质体法转染人膀胱上皮细胞后,可高效表达具抗菌活性的基因重组hBD2。     

人β-防御素-3调控呼吸道合胞病毒致哮喘幼鼠的气道重塑及白细胞激活

目的:探究人β-防御素-3(hBD3)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染诱发哮喘幼鼠气道重塑与白细胞激活的影响及其机制.方法:采用卵清白蛋白(OVA)合并RSV诱发建立幼鼠哮喘模型,期间予100μg·kg-1·d-1 hBD3溶液灌胃;制备肺泡灌洗液(BALF),瑞氏染色测定BALF细胞总数与各细胞计数,ELISA法检测B...     

人β-防御素3融合细菌膜穿透增加蛋白在毕赤酵母中的表达

目的:探讨采用酵母表达系统进行人β-防御素3(hBD3)与细菌膜穿透增加蛋白(BPI)融合表达的可行性.方法:将hBD3成熟肽基因通过Linker蛋白与BPI基因串联,克隆于酵母表达载体pPICZαB中,电转导入X-33毕赤酵母菌,经重组酵母基因组PCR和表型鉴定获得阳性克隆,对阳性克隆进行甲醇诱导表达,上清进行目的蛋白纯化和Western Blot鉴定.结果:重组载体经酶切和测序证实序列正确,重组X-33-pICZαB-hBD3-BPI克隆经甲醇诱导24 h后,上清SDS-PAGE电泳显示有目的蛋白表达,Western Blot分析表明重组蛋白抗人hBD3和BPI均阳性,该目的蛋白依次通过疏水色谱、离子交换色谱纯化,蛋白纯度达到89%.结论:采用毕赤酵母系统融合表达hBD3和BPI是可行的.     

hBD2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究

目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果。结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P<0.05),且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复。     

重组人β防御素-2基因对支气管肺发育不良新生鼠肺泡及肺血管发育的影响

目的研究重组人β防御素-2（humanβdefensin-2,hBD2）对高氧诱导支气管肺发育不良（BPD）新生鼠肺泡及肺血管发育的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、空载体组和hBD2组,每组12只。大鼠暴露于90%高氧箱内14d建立BPD模型,hBD2组于第4天气管穿刺注入1×107/ml含有hBD2编码基因的重组腺病毒25滋l,空载体组注入等量空载体腺病毒。于第7、14天采集肺组织标本,qPCR检测肺组织hBD2mRNA表达;比较各组大鼠肺组织形态学变化,测定肺泡辐射状计数（RAC）和平均内衬间隔（MLI）;免疫组化测定肺组织血管内皮生长因子（VEGF）表达,ELISA法测定肺组织炎症因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-10表达水平。结果梯度稀释法测定病毒滴度为1×109/ml,用稀释液稀释100倍得到1×107/ml。在大鼠出生后第7、14天,与hBD2组比较,空气组、高氧组、空载体组大鼠hBD2mRNA表达水平均明显为低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;第7、14天,高氧组和空载体组大鼠的RAC、MLI、AOD值、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平与空气组、hBD2组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。HE染色及免疫组化染色结果显示高氧暴露后大鼠肺泡及肺血管发育受阻,hBD2组大鼠肺泡和肺血管发育改善。结论hBD2基因治疗可促进高氧诱导BPD新生鼠的肺泡及肺血管发育,并减轻肺部炎症。     

hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒载体的构建及表达

目的 制备人血小板源性生长因子-A(human platelet-derived growth factor A, hPDGF-A) 和人β防御素2(human beta defensins, hBD2)双基因共表达腺病毒载体并观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)中的表达.方法 将hPDGF-A和hBD2通过内部核糖体插入位点(internal ribosome entry site, IRES) 连接后,以同源重组的形式插入腺病毒表达载体,由人胚肾293 细胞包装,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒.重组病毒感染BMSCs后,用RT-PCR检测重组腺病毒的表达.结果 ①成功构建穿梭质粒pAdTrack-hPDGF-A-IRES2-hBD2.②成功构建重组腺病毒质粒pAdeasy-hPDGF-A-IRES2-hBD2.③293细胞包装获得有感染能力的重组腺病毒.④转染的BMSCs高表达hPDGF-A和hBD2.结论 构建了hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒载体,证实其转染BMSC后的表达.     

β-防御素在复发性鼻息肉中的表达及意义

目的：检测人β-防御素（human β—defensin-1，hBD-1和human β—defensin-2，hBD-2）mRNA在复发性鼻息肉中的表达，分析hBD—1和hBD-2在复发性鼻息肉发病中作用。方法：应用逆转录．聚合酶链反应技术（reverse transcripatase-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测鼻息肉患者术前鼻息肉、复发性鼻息肉患者手术后复发鼻息肉、鼻息肉患者术后恢复正常的鼻黏膜及正常对照鼻黏膜各10例中hBD—1J和hBD-2mRNA的表达。结果：hBD—1mRNA在鼻息肉患者术前鼻息肉、术后复发鼻息肉、鼻息肉患者术后恢复正常鼻黏膜、正常鼻黏膜中均有表达，且组间差异无统计学意义（P＞0．05）；hBD-2mRNA在鼻息肉术前组织和复发性鼻息肉组织中均有表达，在正常对照鼻黏膜和鼻息肉术后恢复鼻黏膜的中几乎没有表达。结论：hBD-1为固有表达，hBD-2为诱导表达。β-防御素可能在鼻息肉的发病中起一定的作用。     

早产儿感染诊断中检测白介素-6、白介素-8、白介素-10的临床价值

目的 探讨白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)以及白介素-10 (IL-10)在诊断早产儿细菌感染中的临床价值.方法 收集早产儿感染患者50例,正常足月新生儿16例为对照组.两组分别检测CRP、IL-6、IL-8、IL-10,并比较IL-6、IL-8、IL-10之间与CRP的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确度.结果 早产儿感染患者IL-6、IL-8与CRP水平明显升高,与正常新生儿比较差异有显著性(P＜0.05);IL-10水平与正常新生儿比较差异无显著性(P＞0.05).IL-6敏感度较高(88.00％);IL-8特异性、阳性预测值、准确度较高(68.75％、86.96％、55.00％),IL-10准确度较低(4.55％).结论 测定IL-6、IL-8在早产儿感染诊断中较IL-10更具临床参考价值.     

白塞病患者血清白介素-12及白介素-4水平的观察

目的通过检测白塞病 (Behcet’sDisease ,BD)患者血清白细胞介素 - 12 (IL - 12 )、白细胞介素 - 4 (IL - 4 )的水平 ,探讨T淋巴细胞亚群与BD发病的关系。方法　采用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定BD患者和健康体检者血清IL - 12和IL - 4的水平。结果　①BD组与对照组相比血清IL - 12、IL - 4水平及IL - 12 /IL - 4比值均明显升高 ,差异有显著性 (p <0 .0 5 ) ;②BD活动组与缓解组及缓解组和对照组相比血清IL - 12水平和IL - 12 /IL - 4比值明显升高 ,差异有极显著性 (p <0 .0 0 1) ;而血清IL - 4水平的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　活动期BD患者的Th1型及Th2型免疫反应均增强 ,但存在Th1细胞优势活化状态 ,破坏了体内Th1/Th2正常平衡。血清IL - 12水平可作为观察BD病情活动的良好监测指标。     

大鼠基底前脑中神经降压肽样和甘丙肽样神经元的老年变化

作者用免疫组化法及显微分光光度计研究了年轻(4—5月)及老年(2—24月)大鼠基底前脑中神经降压肽样(NT-L)和甘丙肽样(GAL-L)胞体及纤维终末的老年变化,NT-L胞体主要位于基底前脑的外侧隔核(LS),斜角带核(DBN)及腹侧苍白球(VP)中,NT-L纤维终末主要位于LS及VP中,GAL-L胞体主要位于内侧隔核(MS)及DBN中,LS和VP中仅有少量纤维终末。老年大鼠LS,DBN及VP中NT-L胞体的数量以及MS,DBM中GAL-L胞体的数量均比年轻大鼠明显减少,光吸收率明显下降,我们的结果表明大鼠基底前脑中的NT-L及GAL-L神经元有明显的老年变化,此种变化的意义有待进一步研究。     

人β-防御素和维生素D在社区获得性肺炎中的临床应用进展

正呼吸道上皮通过呼吸过程与外界环境直接接触,为了抵抗外界有害微生物入侵,人体逐渐进化出了一套完整有效的先天性免疫系统。除物理屏障外,上皮细胞分泌大量的抗微生物肽(antimicrobial peptides,AMPs),是宿主先天性免疫系统的重要组成部分~([1-2]),人β-防御素(humanβ-defensins,hBD)是AMPs家族中的重要一员~([3])。hBD主要分为1～4型,     

白介素-6和肿瘤坏死因子-α及白介素-10在急性冠脉综合征中的作用

目的探讨白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-10(IL-10)在急性冠脉综合征(ACS)中的作用及临床意义。方法选择急性心肌梗死(AMI)患者30例、不稳定型心绞痛(UAP)患者30例、稳定型心绞痛(SAP)患者27例、对照组非冠心病患者20例为研究对象,分别检测血清IL-6、TNF-α和IL-10水平并进行比较分析。结果AMI组、UAP组的血清IL-6、TNF-α、IL-10水平与SAP组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);AMI组的血清TNF-α、IL-10水平与UAP组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。AMI组的lg[(IL-6 TNF-α)/IL-10]值与SAP组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-6介导的炎症反应可能参与动脉粥样斑块的易损和破裂;TNF-α在促进动脉粥样硬化(AS)形成及斑块不稳定方面可能起重要作用;促炎因子与抗炎因子的比值关系能更全面、准确地反映机体的炎症反应情况,IL-6、TNF-α与IL-10的比值在ACS中的意义尚待进一步的研究。     

类风湿关节炎患者血清白介素-33、白介素-35表达及其临床意义

目的:初步探讨白介素-33(IL-33)、白介素-35(IL-35)在类风湿关节炎(RA)发病中的意义。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测50例RA患者(其中RA活动组25例,RA缓解组25例)、25名健康对照组血清IL-33、IL-35水平,并与临床资料进行相关性分析。结果:RA活动组患者血清IL-33水平(332.02±31.43)pg/ml显著高于RA缓解组(227.56±48.02)pg/ml及健康对照组(77.03±20.68)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05),RA缓解组与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05);RA活动组血清IL-35水平(236.14±32.20)ng/L显著低于RA缓解组(353.21±24.61)ng/L及健康对照组(349.60±28.45)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05),RA缓解组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。RA患者血清IL-33与IL-35水平之间呈显著负相关(r=-0.473,P<0.05);血清IL-33水平与关节肿胀数、关节压痛数、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关(P<0.05);血清IL-35水平与关节肿胀数、关节压痛数、ESR、CRP、DAS28评分、类风湿因子(RF)、抗CCP抗体呈负相关(P<0.05)。结论:RA活动组患者血清IL-33水平升高、IL-35水平减低,二者可能参与了RA发生发展,并可作为RA病情活动的预测指标。     

白介素-5的研究进展

白介素-5(interleukin-5,IL-5)是近年来发现的一种具有免疫调节功能的生物活性介质.它在机体免疫功能中起着十分重要的作用,特别是在病原体侵入机体后的粘膜免疫增强活性中扮演着重要的角色.本文就其分子结构、生物学活性及其在器官移植、临床感染及粘膜免疫佐剂等方面的研究进展作一简要综述.     

雾化吸入肺内转染人β防御素2基因的实验研究

目的 探讨以雾化吸入方式向大鼠气管上皮细胞转染人β防御素2基因(hBD2)的可行性.方法 薄膜法制备新型阳离子脂质体,并按不同重量比与pLXSN-hBD2重组质粒混合构成脂质体/质粒复合物.将筛选出的适当重量比的脂质体/质粒复合物以雾化吸入方式对大鼠进行肺内转染(实验组,n=11);对照组(n=5)转染空白载体pLXSN.以PCR法和蛋白质印迹法检测雾化吸入后大鼠气管上皮细胞中hBD2的表达.结果 雾化后不同重量比脂质体/质粒复合物的微囊结构均受到明显影响,以10:1者结构破坏最小,更适于雾化.PCR检测显示雾化吸入后2组大鼠气管上皮细胞基因组DNA中均整合入相应质粒.蛋白质印迹法检测显示实验组大鼠转染后2 d气管上皮细胞hBD2蛋白表达量最高(4866.9±148.2),随时间延续而逐渐降低,21 d表达量为3.2±1.5;而对照组无hBD2蛋白表达.结论 新型阳离子脂质体雾化后具有转染活性,pLXSN-hBD2重组质粒能通过雾化吸入方式转染大鼠气管上皮细胞并获得表达,并且hBD2蛋白的表达能持续一段时间.     

平滑肌肿瘤组织中DNA含量和bcl-2基因的表达

①目的　探讨平滑肌肿瘤中DNA含量、异倍体率及bcl 2表达与病理学特征的关系。②方法　采用IMS型彩色病理图像分析系统对 38例平滑肌肿瘤细胞DNA含量及倍体特征进行定量分析 ;同时采用免疫组织化学SABC方法检测 33例平滑肌肉瘤中Bcl 2蛋白的表达。③结果　DNA含量 (DI值 )在平滑肌瘤 (LM )、潜在恶性平滑肌瘤 (PMSMT)、平滑肌肉瘤Ⅰ级 (LS Ⅰ )及平滑肌肉瘤Ⅱ级 (LS Ⅱ )间的差异有显著意义 (F =10 .19,P <0 .0 1) ,其中LM组和PMSMT组低于LS Ⅰ和LS Ⅱ组 ,差异有显著意义 (q =3.5 5～ 6 .96 ,P <0 .0 5 ) ,LM组与PMSMT组 ,LS Ⅰ与LS Ⅱ组比较差别无显著性 (q =1.81,0 .74 ,P >0 .0 5 )。恶性平滑肌肿瘤 (包括PMSMT和LS)组织的DNA含量及异倍体率均高于LM ,差异有显著性 (t=2 .16 ,P <0 .0 5 ;P =0 .0 0 16 )。肿瘤直径 >10cm者DNA含量高于直径 <6cm者 (F =4 .97,q =4 .4 5 ,P <0 .0 5 ) ;直径 <6cm者与 6～ 10cm者 ,直径 >10cm者与6～ 10cm者DNA含量比较差异均无显著性 (q =1.6 9,2 .0 3,P >0 .0 5 )。有坏死者与无坏死者DNA含量比较 ,差异有显著性 (t=2 .76 ,P <0 .0 1) ,但其异倍体率比较无显著性差异 (P =0 .0 83)。Bcl 2蛋白阳性率在PMSMT ,LS Ⅰ及LS Ⅱ间比较差别无显著性 (P =0 .0 8～ 0 .75 )。④     

高渗盐水对手术病人血浆白介素-2和白介素-6的影响

目的 :对比观察 7.5 %高渗氯化钠溶液 (HTS)对人血浆IL - 2和IL - 6的影响 ,探讨其对人体免疫功能的调节作用及可能机制。方法 :随机将 40例ASAⅠ -Ⅱ级择期手术病人分为A、B两组 (每组 2 0例 ) ,A组 (实验组 )在麻醉前输入 7.5 %氯化钠溶液 (HTS) 4ml/kg,B组 (对照组 )在麻醉前输入等量的复方氯化钠溶液 ,随后均以复方氯化钠溶液维持循环稳定。分别于输高渗盐水或等量的复方氯化钠溶液前 (T1)、后 1.5h(T2 )和 2 4h(T3 )取血测定IL - 2和IL - 6。结果 :A组病人在T3 时IL - 6上升 (P <0 .0 5 ) ;IL - 2也有上升趋势 ,但无统计学意义。结论 :高渗氯化钠溶液可以通过升高IL - 2和IL - 6促进淋巴细胞和吞噬细胞功能 ,增强机体免疫力 ,对人体的免疫应答过程起到有益的调节作用。     

心理应激对大鼠颞下颌关节内白介素-1白介素-6表达的影响

目的 通过对心理应激大鼠颞下颌关节(tempommandibular joint,TMJ)的形态、生理学评估及相关炎性因子的检测,探讨心理应激对TMJ的可能致病机制.方法 采用交流箱心理应激动物模型,检测空白对照组、心理应激组(PS组)、心理应激加地西泮组(PS+DI组)大鼠血清中Cor和ACTH水平;运用RT-PCR技术检测心理应激不同时期大鼠TMJ内炎性因子IL-1和IL-6的表达变化.结果 空白对照组血清中Cor和ACTH值与PS组有显著差异(P＜0.01),空白对照组血清中Cor和ACTH值与PS+DI组无显著差异(P＞0.05);空白对照组IL-1(分别为(0.453±0.021)mg/L,(0.439±0.028)mg/L,0.454±0.023)mg/L、IL-6[分别为(0.525±0.028)mg/L,(0.515±0.028)mg/L,(0.518±0.022)mg/L]与PS组IL-1[分别为(0.981±0.024)mg/L,(0.746±0.017)mg/L,(0.510±0.016)mg/L]、IL-6[分别为(0.820±0.023)mg/L,(0.694±0.019)mg/L,(0.579±0.015)mg/L]有显著差异(P＜0.05),与PS+DI组IL-1[分别为(0.549±0.014)mg/L,(0.498±0.014)mg/L,(0.444±0.022)mg/L]、IL-6[分别为(0.599±0.015)mg/L,(0.541±0.015)mg/L,(0.487±0.008)mg/L]差异无显著性(P＞0.05).结论 心理应激可能在TMD形成过程中起着重要作用.     

进展期生殖器和生殖器外硬化性苔藓的临床病理分析

目的 探讨进展期生殖器和生殖器外硬化性苔藓(LS)的临床病理特征并比较其差异。方法 回顾性分析北京医院皮肤科活检确诊的55例进展期生殖器和生殖器外LS患者的临床病理资料并比较两者差异。结果 男11例、女44例;单发于生殖器者38例,单发于生殖器外者15例,生殖器和生殖器外LS并存者2例。生殖器外LS主要及背部(14.55%)和四肢(7.27%)。无症状、瘙痒、疼痛的患者分别占28.30%、73.58%、24.53%,无症状的生殖器外LS患者比例明显高于生殖器LS(χ²=31.224,P=0.000),生殖器LS出现瘙痒的比例明显高于生殖器外LS(χ²=39.073,P=0.000),疼痛感仅见于生殖器LS中。57例活检标本取自上述患者,其中生殖器部位40例,生殖器外部位17例。除真皮浅层均质化外(100%),常见病理改变有角化过度(98.25%),棘层萎缩(50.88%),基底层液化变性(52.63%),血管扩张(64.91%),血管周围淋巴细胞(100%)、组织细胞(85.96%)浸润,苔藓样炎症浸润(54.39%)。生殖器LS标本出现棘层肥厚(χ²=4.402,P=0.036)、血管扩张(χ²=9.330,P=0.002)、嗜酸性粒细胞浸润(χ²=4.162,P=0.041)的比例高于生殖器外LS,出现毛囊角栓的比例低于生殖器外LS(χ²=5.076,P=0.024)。结论 进展期生殖器LS与生殖器外LS之间在临床症状及毛囊角栓、棘层肥厚、血管扩张和嗜酸性粒细胞浸润等病理改变中均有一定差异。     

卡介苗诱导人肺腺上皮细胞hBD-1 mRNA的增强表达

使用热灭活的卡介苗刺激培养的人肺腺上皮细胞(SPC－A－1),利用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法和Northern杂交分析,证实了卡介苗能诱导SPC－A－1细胞β－防御素－1基因(hBD－1)的增强表达。卡介苗菌量和刺激时间与SPC－A－1细胞hBD－1基因表达量的关系曲线显示,hBD－1 mRNA 在人肺腺上皮细胞的增强表达在一定范围内表现为具刺激剂量和时间依赖关系。实验为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下了基础。