TGF-β1和CNTF在大鼠移植神经干细胞后的损伤脊髓中的表达

目的 研究在受损伤脊髓移植神经干细胞后对其TGF-β1和CNTF表达的影响.方法 将正常成年SD雌性大鼠35只,分为:单纯脊髓全横断组、假手术组、NSCs移植组.NSCs移植组在脊髓全横断后第7天时进行NSCs移植,其它2组不移植NSCs;通过RT-PCR测定脊髓损伤局部头侧在移植术后3,7,14 d TGF-β1和CNTF的表达.结果 移植术后3 d,7 d,单纯全横断组TGF-β的表达大于神经干细胞组.CNTF仅在术后7 d,前者表达大于后者,其余时间段2组间2因子的表达无统计学意义.结论 神经干细胞移植使脊髓损伤局部TGF-β1的表达降低,但对CNTF表达的影响不大.     

TGF-β1联合IGF-1诱导hAMSC向韧带成纤维细胞分化的效应研究

目的 探讨TGF-β1联合IGF-1诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cell,hAMSC)向韧带成纤维细胞分化的效应和相关分子表达水平。方法 分离培养第3代hAMSC,过表达TGF-β1(Ad-TGF-β1)和IGF-1(Ad-IGF-1)腺病毒转染细胞后,将细胞分为空白对照组、IGF-1组、TGF-β1组和TGF-β1+IGF-1组,使用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测韧带成纤维细胞相关基因表达情况,使用细胞免疫荧光观察TGF-β1联合IGF-1对hAMSC向韧带成纤维细胞分化的特异性标志因子包括Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ),Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ),腱调蛋白(tenofovir,TNMD)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在基因和蛋白表达水平改变。结果 培养至第3代,hAMSC贴壁生长,呈长梭状、漩涡形态;TGF-β1和IGF-1过表达腺病毒转染第3代hAMSC 24h后;PCR结果显示,使用TGF-β1+Ad-IGF-1诱导第3代hAMSC后第7天时,韧带成纤维细胞相关基因包括COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、FN、TNMD的mRNA表达水平显著高于其他各组(P<0.05);细胞免疫荧光染色结果显示Ad-TGF-β1转染细胞联合IGF-1诱导第3代hAMSC后,第7天与第3天比较,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著高于其他各组。结论 体外通过使用腺病毒,高表达TGF-β1与IGF-1,可显著增强诱导hAMSC向韧带成纤维细胞分化,并且韧带成纤维细胞相关基因和蛋白水平表达明显增强。     

IGF-Ⅰ联合TGF-β1促成骨细胞的增殖和分化效应

目的 探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(rhlGF-Ⅰ)和重组人转化生长因子β 1(rhTGF-β1)联合应用对成骨细胞增殖和分化的影响.方法 ①体外培养成骨细胞株MG-63,分组以不同浓度的IGF-β(0.1、1.0、10.0和100.0 ng/mL)或TGF-β 1(0.01、0.1、1.0和10.0 ng/mL)培养,MTT法检测细胞增殖,得到IGF-Ⅰ与TGF-β单独作用的最适浓度.②选用最适浓度的IGF-Ⅰ,TGF-Ⅰ单独或联合培养,MTT法检测细胞增殖,ALP试剂盒检测细胞分化,分析两种细胞因子联合应用时,在成骨细胞增殖和分化过程中的作用.结果 ①IGF-Ⅰ与TGF-β对成骨细胞MG-63均有一定的促增殖和促分化作用.促增殖作用以10 ng/mL的IGF-Ⅰ在第3天,1 ng/mL的TGF-β1在第5天最为显著.②在上述浓度联合刺激条件下,促增殖和促分化效果均优于单一的IGF-Ⅰ或TGF-β1单独应用组.结论 IGF-Ⅰ与TGF-β1均有一定的促MG-63细胞增殖和分化效应,两者联合应用时具有良好的协同作用.     

TGF-β1和IGF-Ⅰ在兔骨关节炎模型软骨中的表达及其意义

目的:探讨TGF-β1和IGF-Ⅰ在兔骨关节炎(OA)模型软骨细胞中的表达及意义。方法:新西兰兔40只,随机分成实验组和对照组各20只。实验组选用Hulth法造模,对照组行单侧膝关节切开,两组分别于术后4、8周各处死10只。取术肢股骨髁标本行HE染色镜下观察软骨细胞排列情况;免疫组化染色检测TGF-β1和IGF-Ⅰ的表达情况,并应用镜下观察结合病理图像分析系统计算各组软骨细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ表达的细胞分数。结果:(1)HE染色:实验组软骨细胞排列分层混乱,细胞稀疏,有软骨缺损;部分软骨细胞集聚、肿胀,且可见大量空陷窝。(2)免疫组化染色:TGF-β1和IGF-Ⅰ在两组中均有表达,而实验组细胞分数均明显高于对照组(P<0.01);实验组的软骨缺损部位细胞分数均明显高于软骨完整部位细胞分数(P<0.01),造模后8周细胞分数较4周明显增高(P<0.01)。结论:OA时TGF-β1和IGF-Ⅰ的表达均增多,且随软骨缺损程度的加重表达增高明显,软骨无修复。其机制需进一步研究。     

温针灸对膝骨性关节炎患者血清中IGF-1、TGF-β和FGF-2表达水平影响的研究

目的 观察温针灸治疗膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的疗效并比较治疗前后患者血清转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)的水平,探讨温针灸治疗膝骨性关节炎的机理.方法 80例KOA患者随机分为温针灸治疗组和双氯芬酸钠药物对照组,每组各40例,收集治疗前后患者血清,用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测温针灸治疗KOA患者血清IGF-1、TGF-β和FGF-2水平.结果 温针灸和口服双氯芬酸钠均能使KOA患者临床症状减轻(均P＜0.05),并且前者在改善患者临床症状方面优于后者;温针灸治疗KOA后,患者血清中IGF-1、TGF-β和FGF-2含量明显升高(均P＜0.05).结论 温针灸对KOA的疗效与其调高患者血清中IGF-1、TGF-β和FGF-2水平有关.     

溃克灵加减方对TNBS结肠炎模型大鼠IGF-1、TGF-β1、CTGF表达的影响

目的:通过检测TNBS结肠炎模型大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的含量,探讨溃克灵加减方(MKKL)抗炎症性肠病纤维化的可能机制.方法:建立TNBS结肠炎模型,应用HE染色、Masson三色胶原染色观察结肠病理组织学变化及胶原纤维增生情况,免疫组化检测结肠IGF-1、TGF-β1、CTGF蛋白表达变化.结果:与对照组比较,模型组大鼠结肠组织胶原增生,IGF-1、TGF-β1、CTGF蛋白表达均显著增加(P＜0.01).与模型组比较,原方组、加减方组大鼠结肠胶原增生及IGF-1、TGF-β1、CTGF蛋白表达均显著减少(P＜0.05).加减方组对IGF-1、TGF-β1蛋白的下调作用明显优于原方组(P＜0.05),对CTGF蛋白的调节作用无统计学意义.结论:溃克灵加减方可能通过减少胶原沉积和下调肠道IGF-1、TGF-β1和CTGF的表达达到抗纤维化的目的.     

TGF-β1和 EGFP 体外电转染兔骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：通过电转染介导转化生长因子β1(TGF-β1)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原表达的情况。方法用全骨髓细胞贴壁培养法分离、培养兔 BMSCs;诱导14 d 后,免疫组化和 Western blot 法检测Ⅱ型胶原表达。结果 BMSCs CD90表达阳性,CD31表达阴性;成功转染 TGF-β1至 BMSCs;通过免疫组化及 Western blot 法检测TGF-β1组细胞内Ⅱ型胶原有较强的表达,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组和空白对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)。结论电转 TGF-β1质粒至兔 BMSCs,可以促进Ⅱ型胶原表达。     

体外培养神经干细胞PDGF、EGF和GDNF的表达

目的为研究体外培养小鼠神经干细胞（NSC）血小板源性生长因子（PDGF）、表皮生长因子（EGF）和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的基因表达.方法取小鼠胚胎海马NSC培养并鉴定,提取其总RNA,用RT-PCR技术检测培养NSC内PDGF、EGF、GDNFmRNA的表达.结果培养NSC中PDGF mR-NA表达最强,EGF mRNA明显表达,但几乎未检测到GDNF mRNA.结论为了解NSC分泌神经营养因子发挥生物学作用提供了理论基础.     

六味地黄丸对小鼠自发性乳腺癌TGF-β1、P-ERK表达的影响

目的：探讨六味地黄丸抑制小鼠自发性乳腺癌的生长机理。方法：观察六味地黄丸对患瘤小鼠一般状态、肿瘤体积、肿瘤质量的影响情况,Wester印迹法观察不同剂量组中TGF-β、P-ERK蛋白表达情况。结果：六味地黄丸低剂量组患瘤小鼠的生存时间明显长于对照组（P〈0.05）,六味地黄丸高剂量组、低剂量组的肿瘤体积、肿瘤质量明显短于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,六味地黄丸高、低剂量组均可明显降低TGF-β1,P-ERK蛋白表达（P〈0.01）。结论：六味地黄丸可抑制小鼠自发性乳腺癌的生长,其机制可能是与TGF-β/MAPK信号传导通路有关。     

体外培养神经干细胞NGF、BDNF和NT-3及其受体trkA、trkB和trkC的表达

目的检测体外培养神经干细胞（NSC）神经生长因子（NGF）,脑源性深营养因子（BDNF）,神经营养因子3（NT-3）及其受体trkA、trkB、trkC的表达．方法胎鼠海马神经干细胞培养并鉴定后,提取其总RNA,RT-PCR技术检测NGF、BDNF、NT-3及其受体trkA、trkB、trkC的表达情况．免疫组化染色观察i种生长因子在NSC的分布和亚细胞定位．结果RT-PCR显示NSC表达i种生长因子及其受体mRNA．免疫组化染色显示NSC表达i种生长因子蛋白,免疫阳性产物主要分布于细胞质．结论体外培养NSC表达NGF,BDNF,NT-3及其受体,提示三种因子对NSC发育和发挥生物学功能可能有重要作用．     

肺纤维化小鼠肺组织中MMP-9和TGF-β1的表达及意义

目的探讨肺纤维化小鼠肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达及意义。方法将60例C57BL/6小鼠随机均分为实验组、治疗组和对照组,其中实验组和治疗组采用博莱霉素诱导建立肺纤维化小鼠模型,其余20例健康小鼠作为对照组,采用免疫组化SP法测定实验组和对照组肺组织中MMP-9和TGF-β1蛋白的表达情况。并采用格列卫对治疗组进行干预,对治疗前后肺组织中MMP-9和TGF-β1的表达情况进行比较。结果对免疫组化测得的光密度值进行比较,实验组MMP-9和TGF-β1的值明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。将治疗组中进行干预的20只小鼠进行MMP-9和TGF-β1的光密度值测定,干预前后进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺纤维化小鼠肺组织中MMP-9和TGF-β1呈高表达,格列卫对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度可能有抑制作用。     

TGF-β1在胃癌中的表达

目的研究TGF-β1在胃癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学Envision二步法对68例胃癌及30例正常胃黏膜组织的TGF-β1进行检测,分析对比检测结果。结果 TGF-β1胃癌组织中表达明显高于正常胃组织,两者之间比较具有显著性差异（P〈0.05）。结论 TGF-β1的表达与癌细胞分化程度、浸润程度以及淋巴结转移有关,TGF-β1的表达检测对胃癌的早期诊断与判断预后有重要意义。     

TGF-β1改善体外培养小鼠胚胎种植率及其作用机制的研究

目的 探讨TGF-β1在体外对小鼠胚胎发育及胚胎种植的影响及其作用机制.方法 ①收集小鼠2-细胞期胚胎,在含不同剂量TGF-β1的M16培养液中进行体外培养,观察胚胎发育情况,并进行胚胎移植,观察着床率;②测定移植后小鼠外周血及胚胎种植部位母胎界面IL-10/INF-γ水平.结果 ①1 ng/mL和10 ng/mL TGF-β1能提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率.其中TGF-β1 10 ng/mL时作用最显著,TGF-β1浓度过高对体外胚胎发育不利;②M16+TGF-β1 10 ng/mL组体外培养囊胚移植后母胎界面INF-γ低于M16组,差异有统计学意义[(30.89±11.31) pg/mL vs. (43.23±18.09) pg/mL,P<0.05].两组间IL-10水平无明显差异.结论 ①小鼠胚胎体外培养基中加入适宜浓度TGF-β1可提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率;②TGF-β1可能通过促进体外胚胎发育速率和质量,改善胚胎和内膜发育同步性,促进母胎界面Th1/Th2平衡向Th2偏移而促进胚胎着床.     

TGF-β1及其受体mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究哮喘大鼠肺组织中TGF-β1及受体TGF-βRⅠ、TGF-β RⅡmRNA的表达水平,以了解TGF-β1在哮喘中的作用及其受体对其作用的调节机制.方法将30只成年雌性SD大鼠分为正常对照组,单纯致敏组和哮喘模型组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射法复制大鼠哮喘模型,利用RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡmRNA的表达水平.结果TGF-β1mRNA的表达水平致敏组与正常组相比增加(70.21±11.68 vs 53.07±10.27,P＜0.05),哮喘组与正常组相比显著增加(114.14±16.57 vs 53.07±10.27,P＜0.01),TGF-β R Ⅰ mRNA的表达水平在致敏组和哮喘组相当,均较正常组下调(83.21±11.52 vs 100.14±16.13,85.76±12.95 vs 100.14±16.13,P＜0.05).TGF-βRⅡmRNA的表达水平致敏组与正常组相比有下降(89.04±9.23 vs 103.05±11.46,P＜0.05),哮喘组与正常组相比则显著下降(56.53±7.34 vs 103.05±11.46,P＜0.01).结论TGF-β1可能作为一个抗炎因子在哮喘的变应性炎症前阶段及炎症过程中起着重要作用,TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ的表达水平在哮喘组和致敏组的下降说明TGF-β1信号通路在哮喘的变应性炎症中和炎症前阶段的活化程度,TGF-βRⅡ表达水平在哮喘组的显著下降则显示TGF-β1信号通路可能被下调从而抑制其抗炎作用的发挥.     

TGF-β1对绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA表达的影响

目的:研究外源性TGF-β1作用不同时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA表达的影响.方法:研究对象为永生化绒癌JEG-3细胞系,以100ng/ml浓度的TGF-β1分别作用JEG-3细胞0h、12h、24h、48h和72h,采用RT-PCR法检测各组细胞MMP-9 mRNA的表达.结果:随着TGF-β1作用时间的延长,MMP-9 mRNA的表达逐渐增加(P<0.01).结论:绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA的表达对外源性TGF-β1的刺激呈现一定的时间效应,可能与绒癌的侵袭转移相关.     

人乳癌组织中TGF-β1的表达

目的：探讨人乳癌组织中TGF-β1的表达与临床病理分期的关系。方法：应用免疫组织化学S-P法检测不同乳腺组织（导管原位癌12例;浸润性乳癌50例,包括髓样癌5例,黏液癌4例,浸润性导管癌41例;正常乳腺组织15例）中TGF-β1的表达（癌组织按TNM分期,0～Ⅰ期17例,Ⅱ～Ⅲ期45例）。结果：正常乳腺和乳癌组织中TGF-β1的表达差异有统计学意义（P=0．041）;在0～Ⅰ期与Ⅱ～Ⅲ期乳癌组织之间及有腋淋巴结转移和无腋淋巴结转移组织之间差异也有统计学意义（P分别为0．026,0．018）;但在不同组织学分级乳癌组织间其表达差异无统计学意义（P=0．538）。结论：TGF-β1有助于判断乳癌患者的临床病理分期并对腋淋巴结有无微转移灶做出评估,进而指导外科治疗。     

TGF-β1、C-Fos在单基因遗传自然发病型糖尿病小鼠颌下腺的表达

目的:探讨db/db(单基因遗传自然发病型)自发性糖尿病小鼠颌下腺转化生长因子β1(TGF-β1)、C-Fos蛋白的表达情况.方法:分别取3、4、6、8、10月龄db/db糖尿病小鼠颌下腺(实验组)及相应月龄的db/ m正常小鼠颌下腺(对照组),每组5只小鼠.SP免疫组化染色观察颌下腺TGF-β1及C-Fos的表达情况.结果:随着糖尿病的进展,db/db糖尿病小鼠颌下腺TGF-β1阳性细胞数逐渐增加,明显高于同龄对照组(P＜0.01);各月龄糖尿病小鼠颌下腺C-Fos阳性细胞数逐渐减少,明显低于同龄对照组(P＜0.01).结论:db/db糖尿病小鼠颌下腺TGF-β1的表达上调可能与糖尿病间质纤维增生密切相关,而C-Fos的低表达可能与颌下腺实质的萎缩性形态学变化密切相关.