三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）调亡的作用。方法：建立大鼠ＶＳＭＣｓ增生模型。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（ＭＴＴ法）、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法观察Ａｓ２Ｏ３诱导ＶＳＭＣｓ凋亡的作用。结果：经Ａｓ２Ｏ３作用后ＶＳＭＣｓ出现典型的凋亡变化,透射电镜下可风细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。ＤＡ琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形电泳条带。汉式细胞术检     

三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡机制的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的机制,为其作为药物涂层支架的涂层药物提供理论依据.方法 用改良的植块贴壁法体外培养SD大鼠VSMCs,应用MTT法、酶标仪法、流式细胞术等方法观察不同浓度As2O3诱导VSMCs凋亡时裂解液中线粒体跨膜电位(△Ψm) 及半胱天冬蛋白酶-3(caspse-3)活性的变化.结果 适宜浓度As2O3诱导VSMCs凋亡时△Ψm明显下降,与对照组相比P<0.05;裂解液中caspse-3酶活性明显增高,与对照组相比,P<0 05.结论 适宜浓度的As2O3可明显促进VSMCs凋亡,其可能机制是降低△Ψm和激活caspse-3酶.     

普罗布考抗过氧化氢诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的初步研究

目的研究抗氧化剂普罗布考对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响.方法采用流式细胞术、高效液相色谱分析等方法研究不同浓度H2O2作用下细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化与细胞凋亡,以及普罗布考抗凋亡作用与细胞内GSH变化的关系.结果①2mmol/LH2O2使细胞内GSHc含量下降至0.67μmol/L(P<0.01)、细胞凋亡率显著增加(45.70%).②普罗布考加H2O22rnmol/L共同处理后细胞内GSHc含量明显增加(3.53μmol/L),细胞凋亡率显著下降(21.59%).结论2mmol/L H2O2使细胞内GSHc含量显著下降,VSMC大量凋亡.普罗布考通过维持细胞内氧化还原平衡,降低细胞内GSH消耗,抑制H2O2诱导VSMC凋亡.     

增殖抑制基因诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的:研究增殖抑制基因(hyperplasia suppressor gene,HSG)诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用,探讨其可能的机制.方法:采用重组复制缺陷型腺病毒载体携带大鼠HSG基因,转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞后,通过荧光染色检测细胞核的完整性,用流式细胞术检测细胞DNA含量的变化,用测定caspase-3活性等方法评价过表达HSG对细胞凋亡的作用;进行Western印迹检测过表达HSG对凋亡信号通路相关蛋白表达的影响.结果:用流式细胞术和细胞核染色结果显示过表达HSG能诱导血管平滑肌细胞凋亡,与对照组相比,流式细胞术检测到过表达HSG 72 h显著增加亚二倍体细胞百分率(39.6%±3.2% vs. 2.6%±0.9%,P＜ 0.01).测定细胞内caspase-3活性发现,与对照组相比,过表达HSG能增高caspase-3活性(0.354±0.104 vs. 0.064±0.022,P＜0.01).Western印迹显示HSG能增加细胞色素c的释放和下调Bcl-2的表达(0.26 ± 0.03 vs. 1.06±0.07,P＜0.01).结论:HSG通过影响Bcl-2/Bax的表达,促进细胞色素c的释放继而激活caspase-3诱导血管平滑肌细胞凋亡,活化线粒体途径可能是其诱导凋亡的机制之一.     

氧化型胆固醇诱导兔血管平滑肌细胞凋亡

目的：研究氧化型胆固醇(Triol与25-OH)对兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡的诱导,并观察其时效与量效关系。方法：原代培养兔VSMC,利用光镜、电镜、DNA电泳及TUNEL法作为凋亡检测法。结果：光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变,电泳示“DNA ladder”,TUNEL法示正常兔VSMC凋亡率为3.62％,用Triol和25-OH不同质量浓度(5、10、15、20 mg*L－1)分别处理细胞24 h后,凋亡率明显升高;用Triol和25-OH（15 mg*L－1）分别处理细胞0、12、24、36 h后,凋亡率随时间延长而增加。结论：氧化型胆固醇(Triol与25-OH)可以诱导血管平滑肌细胞发生凋亡,且呈时间和剂量依赖性。     

三氧化二砷诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3)体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖及诱导其凋亡的作用。方法：以不同浓度的As2O3处理SW1990,用MTT法测定细胞增殖情况,并利用AnnexinⅤ早期凋亡检测试剂盒、电子显微镜、流式细胞仪以及免疫组化染色等检测细胞凋亡情况。结果：（1）As2O3抑制SW1990细胞增殖的作用与相同浓度的顺铂相似。（2）10ug/mlAs2O3作用12h后即观察到细胞凋亡明显增多,48h后凋亡率达24%;免疫组化染色证实As2O3作用后细胞Bcl-2表达阳性率较作用前及对照组减少,Bcl-2/Bax比值耳降。结论：As2O3体外可抑制SW1990增殖,其主要途径是诱导细胞凋亡。     

同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞增殖与凋亡

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人VSMC,MTT法检测人VSMC增殖,流式细胞术检测人VSMC凋亡.结果:体外培养的人VSMC在终浓度为100,200,500和1000 μmol/L Hcy的培养液中孵育24 h后的A值均高于对照组(P<0.05),表明Hcy可诱导人VSMC增殖,而且呈浓度依赖性诱导人VSMC增殖(r=0.94,P<0.01).终浓度为200,500和1000 μmol/L Hcy时细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),表明较高浓度的Hcy可以诱导人VSMC凋亡,而且这一效应呈浓度依赖性(r=0.85,P<0.05).结论:Hcy可以诱导VSMC增殖和凋亡.     

支架植入诱导平滑肌细胞凋亡在防治再狭窄中的作用

[目的]观察支架对损伤血管中膜平滑肌细胞凋亡相关基因Bcl-2及BaxmRNA表达的影响.探讨支架防治再狭窄的作用机理.[方法]选用雄性新西兰兔50只,随机分为球囊组及支架组,设正常对照.分别于术后3、7、14、28及56d取材,进行病理形态学研究,用原位杂交的方法测定血管中膜平滑肌细胞中Bcl-2mRNA及BaxmRNA表达.[结果]光镜下发现,支架组较球囊组管腔狭窄程度明显减轻,术后56d最为显著(P<0.05);原位杂交显示,支架组在术后3～28dBcl-2mRNA表达大于球囊组,28d时最为明显(P<0.05),BaxmRNA表达也较球囊组增加,以7d为著(P<0.05).从Bcl-2/Bax的比值来看,支架组的比值在术后3～28d却均小于球囊组,差异有统计学意义.[结论]普通支架植入使中膜VSMC增殖与凋亡的平衡发生变化,凋亡的程度相对地超过单纯球囊损伤,最终使再狭窄程度减轻.     

三氧化二砷对球囊拉伤后兔血管平滑肌细胞作用的实验研究

目的　探讨三氧化二砷对球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的促凋亡作用及其对再狭窄防治的意义。方法　贴块法行球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞培养 ,将细胞分为正常对照组 ,三氧化二砷 (浓度分别为 1 0、2 0、3 0、4 0及 5 0 μmol/L)组 ,通过绘制细胞生长曲线、DNA电泳、透射电镜、原位细胞凋亡检测试剂盒 (TUNEL)来观察三氧化二砷促细胞凋亡作用。结果　随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制细胞的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关 ,观察第7天、浓度为 5 0 μmol/L时活细胞数为 (5 30± 0 10 )× 10 5/ml与正常对照组 (2 8 77± 0 93)× 10 5/ml相比较差异有显著意义P <0 0 5 )。透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由 18 0 %± 3 1%增至 39 8%± 2 7% (P <0 0 5 )。正常对照组均不见上述变化。结论　三氧化二砷可促进球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的凋亡 ,抑制其过度增殖。     

外源性基因在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

分别构建了带有标记基因ＬａｃＺ和人的全长尿激酶原（ＰｒｏＵＫ）或纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）基因的逆转录病毒载体，通过磷酸钙共沉淀法或假病毒感染法，转染血管平滑肌细胞，经Ｇ４ｌ８筛选得到抗性集落。分析证明，外源性基因可以整合到细胞染色体上，并可表达出相应的具有生物活性的蛋白质。提示血管平滑肌细胞可以作为心血管疾病基因治疗的靶细胞。     

三氧化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对T淋巴细胞白血病细胞株的作用及其机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对细胞株的生长抑作用,流式细胞仪测定细胞凋亡峰,端粒重复扩增法检测端粒酶活性,实时RT-PCR测定端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达.结果2～6μmol/L As2O3可抑制Molt-4细胞生长,且随着时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更为明显(P<0.05).药物作用72h,As2O3对Molt-4细胞生长抑制半数致死量为4.68μmol/L.2～6μmol/L浓度范围内,As2O3诱导Molt-4细胞的凋亡率随时间的延长和药物剂量的增大而升高(P<0.05).6μmol/L药物作用96h,K562细胞和Molt-4细胞的凋亡率分别为83.44%±18.04%和77.93%±6.00%.As2O3能显著抑制Molt-4细胞株端粒酶活性,下调hTERT mRNA表达.结论As2O3有明显抑制T淋巴细胞白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用.通过下调hTERT mRNA表达,从而抑制端粒酶活性可能是As2O3的主要作用机制之一.     

一氧化氮诱导VSMC凋亡观察

目的研究动脉粥样硬化和冠脉气囊成形术后再狭窄中血管平滑肌细胞数量异常增多的机制,并初步探讨ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用。材料和方法　以ＳＮＡＰ作为ＮＯ供体,采用ＨＥ,ＴＵＮＥＬ,荧光双染后光镜观察以及电镜、流式细胞术、细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳对ＳＮＡＰ作用下的细胞凋亡进行鉴定和检测。结果　观察发现, ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ　 ＳＮＡＰ作用 ８－１０ ｈ即能明显地诱导培养的血管平滑肌细胞凋亡。结论 ＳＮＡＰ以浓度依赖方式诱导血管平滑肌细胞凋亡;细胞爬片的ＨＥ染色结合ＴＵＮＥＬ标记是检测凋亡的较为准确且简单的方法。     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞作用的体外观察

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0及5.0 μmol/L)组,通过透射电镜、DNA电泳、原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,Western印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化.结果 随三氧化二砷浓度的增加能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关,观察第7天、浓度为5.0μmol/L时细胞生存数为[(4.41±0.10)×105/ml,正常对照组(30.11±0.93)×105/ml差异有统计学意义,P<0.05],透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由(16.0±3.1)%增至(38.7±2.7)%(P<0.05),三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,抑制其过度增殖.     

三氧化二砷诱导血液肿瘤细胞凋亡的机制研究

目的 了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）改变有关及其可能机制。方法 以急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４、慢性淋巴细胞性白血病细胞系ＳＫＷ３、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞系Ｎａｍａｌｗａ及其它２个急性髓性白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｕ９３７为体外模型,应用碘化丙啶（ＰＩ）／Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（Ｒｈ１２３）双重染色检测ΔΨｍ,通过测定细胞活力、亚Ｇ１     

辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡及对凋亡相关基因表达的影响

目的 :观察辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡及可能参与其中的凋亡相关基因。方法 :贴块法体外培养 VSMC,以透射电子显微镜技术、流式细仪 PI/Annexin 双重染色等鉴定细胞凋亡 ;Western印迹杂交法检测 Bax、Bcl- 2蛋白表达及 caspase- 3的激活情况。结果 :加入 30μmol/L辛伐他汀 2 4 h后电镜显示细胞呈典型的凋亡形态 ,PI/Annexin 染色流式细胞仪检测凋亡细胞占 (35 .5± 5 .8) %显著多于对照组 (15 .1± 5 .0 ) %(P<0 .0 5 ) ;辛伐他汀不改变 Bcl- 2蛋白的表达 ,而使 Bax蛋白表达增高并激活 caspase- 3。结论 :辛伐他汀能诱导VSMC产生凋亡 ,并与 Bax表达增高及 caspase- 3的激活有关     

酸性环境抑制高磷诱导大鼠VSMCs 钙化的机制研究

目的 探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响及其机制。 方法 体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs 按随机数字表法分为正常对照组、 高磷＋ pH 7.4 组、高磷＋ pH 7.1 组。刺激4 d 后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot 检测活化T 细胞 核因子c1（NFATc1）、Runt 相关转录因子2（Runx2）基因和蛋白的表达。刺激14 d 后,对各组细胞进行 钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶（ALP）活性测定。结果 与正常对照组比较,高磷＋ pH 7.4 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达升高（P <0.05）;与高磷＋ pH 7.4 组比较,高磷＋ pH 7.1 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达降低（P <0.05）。相关性分析发现,NFATc1 蛋白表达水平与ALP 活性、 Runx2 蛋白表达水平呈正相关（P <0.05）。结论 酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs 钙化,其机制可 能是通过降低NFATc1 表达,抑制VSMCs 表型转化来实现的。