细胞周期调控蛋白与口腔癌相关性

细胞周期调控研究不断取得新进展。细胞周期因子、周期因子依赖蛋白激酶及其相应的抑制因子等在正常细胞周期中起着重要作用。其中某一个或几个环节的失调都有导致细胞分裂异常的危险性,与细胞恶性转化密切相关。本文对细胞周期调控蛋白作用机理以及在口腔癌发生中的意义作一综述。     

肿瘤坏死因子受体相关因子联合核因子-κB激酶结合激酶1和干扰素刺激因子基因在介导DNA疫苗免疫中的作用

肿瘤坏死因子受体相关因子联合核因子-κB激酶结合激酶1(TBK1)基因不但在DNA疫苗诱导体液免疫和细胞免疫等特异性免疫时发挥着重要的作用,而且在诱导固有免疫方面也有其独特的作用。干扰素刺激因子基因(STING)是由TBK1基因诱导Ⅰ型干扰素产生从而在固有免疫反应时不可缺少的组分。本文就TBK1和STING基因在介导DNA疫苗免疫中的作用作一综述。     

肿瘤坏死因子受体相关因子6与破骨细胞

肿瘤坏死因子受体相关因子是细胞胞浆内的一类重要的接头分子。其中肿瘤坏死因子受体相关因子6，通过与破骨细胞表面的核因子κB受体激动剂结合，并将信号下传，激活c-Src、Jun氨基末端激酶、核因子κB，在破骨细胞的分化与成熟过程中起着重要的作用。     

Oct4基因转染对人牙髓细胞多能相关转录因子表达的影响

目的研究腺病毒介导的转录因子Oct4转染人牙髓细胞(DPCs)对其多能相关转录因子表达的影响。方法采用Admax包装系统构建携带目的基因Oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒载体,以不同感染复数(MOI)转染DPCs,荧光倒置显微镜检测转染率以最适MOI转染DPCs,实时荧光定量RT-PCR检测转染后1、2、3、5、7和14d,Oct4、AP、Nanog、Utf1和Sox2的表达变化。结果利用Admax包装系统成功构建并获得高滴度重组腺病毒载体,最适MOI=200,实时荧光定量RT-PCR检测结果发现,Oct4、AP、Nanog和Utf1 mRNA在转染后1d开始表达,7d达到最大值,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),随后表达下调,且7d时AP mRNA的表达量显著高于Oct4、Utf1和Nanog(P<0.05),Sox2在转染后各时间点均不表达。结论转录因子Oct4瞬时转染可激活多能相关转录因子AP、Nanog和Utf1的表达,从而可能影响DPCs的未分化性能。     

缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）与口腔肿瘤的研究进展

缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是细胞缺氧适应与应答调节的关键因子。通过调控其下游基因的表达在肿瘤发生、发展中起重要作用,同时其表达又与肿瘤的预后和对放化疗的敏感性密切相关。本文就HIF-1α在口腔肿瘤中的研究进展作一综述。     

TRAF6在犬乳恒牙替换阶段的表达

目的：观察犬乳恒牙替换过程中肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor-associated factor 6,TRAF6）的表达,探讨其在此过程中发挥的作用。方法：免疫组化方法检测TRAF6在犬乳恒牙替换期中的表达。结果：TRAF6在破骨细胞、破牙细胞及恒牙胚成釉细胞、成牙本质细胞层中表达阳性。结论：TRAF6可能参与了犬乳恒牙替换的生理过程中乳牙根吸收及恒牙胚的发育。     

低氧诱导因子-1α与口腔肿瘤治疗

低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是细胞低氧适应与应答调节的关键因子,在机体许多生理及病理过程中起关键作用。HIF-1α对肿瘤生物学特性改变的调控成为近年来肿瘤研究的热点之一。研究证实HIF-1α在动物及人体许多肿瘤中过量表达,并通过调控其下游基因的表达影响肿瘤的生长、血管形成、凋亡及侵袭与转移等特性。近年来HIF-1α与头颈部肿瘤发生和发展关系及基于HIF-1α的治疗策略的研究取得了较大的进展。本文就HIF-1α在口腔肿瘤治疗中的研究进展作一综述。     

肿瘤坏死因子α及其抑制剂的研究进展

肿瘤坏死因子(TNF)α是一种在多种生物效应中起作用的细胞因子,主要由单核细胞、巨噬细胞和胸腺依赖淋巴细胞产生,分为溶解型和膜结合型.TNFα通过与其受体(TNFR)特异性结合引起一系列细胞因子改变,进而实现促细胞生长和程序性细胞死亡并促进牙周炎、种植体周围炎以及局限性肠炎和类风湿性关节炎等疾病发展的作用.TNFα抑制剂分为大分子抑制剂和活性小分子抑制剂,种类繁多,作用机制复杂,已大量应用于临床治疗并取得了优异的疗效;而新型TNFα抑制剂TNFR1前配体结合序列复合物对于TNFα引起的程序性细胞死亡、关节炎破骨活动有明显的抑制作用,具有治疗TNFα参与的炎性疾病的潜能.     

应用蛋白质芯片技术筛选人舌鳞癌细胞株差异性炎症因子的初步研究

目的研究应用蛋白质芯片(抗体芯片)技术筛选、分析人舌鳞状细胞癌细胞株中差异性炎症因子的效果,为进一步探讨口腔癌与炎症的关系奠定基础。方法体外培养人舌鳞癌细胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113和人正常口腔黏膜上皮细胞,消化后分别提取胞内、胞外蛋白,上芯片孵育,封闭,清洗。采用激光扫描仪扫描芯片,Axon GenePix Pro6.0软件提取芯片数据,对获得的80种炎症因子表达数据采用AAH-CYT-G5软件分析,上调因子信号值以大于200、比值大于2.0为纳入标准;下调因子信号值以大于200、比值小于0.66为纳入标准,分别对3种人舌鳞癌细胞株(UM-1、CAL-27、Tca-8113)与人正常口腔黏膜上皮细胞,以及高侵袭性细胞株(UM-1、CAL-27)与低侵袭性细胞株(Tca-8113)进行两两比较,筛选出差异性炎症因子。挑选3种显著差异性炎症因子,用酶联免疫吸附法再次检测其蛋白表达,所得结果用单因素方差分析进行统计学分析,进一步验证芯片法所获得的结果。结果根据纳入标准,从检测的80种因子中筛选出有表达的炎症因子9个,包括干扰素诱导蛋白10(inter-feron inducible protein10,IP-10)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(macrophage inflammatory protein1β,MIP-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)、骨保护素蛋白(osteoprotegerin,OPG)、调节活化蛋白(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)6种舌鳞癌细胞株中高表达的细胞因子,及单核细胞趋化因子4(monocyte chemoattractant protein4,MCP-4)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)、转化生长因子-β3(transforminggrowth factor-β3,TGF-β3)3种舌鳞癌细胞株中低表达的细胞因子。鳞状细胞癌细胞和正常口腔鳞状上皮细胞之间比较,胞内IL-1β呈高表达,MCP-4呈低表达,胞外OPG呈高表达;高、低侵袭性细胞株之间比较,胞内RANTES呈高表达,IGFBP-4、TGF-β3呈低表达,胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α呈高表达。酶联免疫吸附法检测发现UM-1和CAL-27胞外IP-10、MIP-1β、MIP-3α的表达量和Tca-8113相比呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其结果与芯片筛选结果一致。结论蛋白质芯片技术能够较为准确地筛选出不同舌鳞癌细胞株之间差异性炎症因子,这些差异性炎症因子可能与肿瘤细胞的生物学行为有一定的联系。     

牙周基础治疗对中重度牙周炎患者血清BDNF和炎症因子的影响

目的:探讨牙周基础治疗对中重度牙周炎患者血清脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和炎症因子水平的影响.方法:选取门诊100例中重度牙周炎患者,随机分为治疗组和对照组各50例.治疗组接受牙周基础治疗,对照组接受口腔卫生宣教.观察两组治疗前后牙周指数、BDNF和...     

流体剪切力对MLO—Y4骨细胞骨性标志物表达的影响

目的通过研究MLO-Y4骨细胞受流体剪切力作用前后骨性标志物在mRNA水平的表达变化,探讨机械力影响骨组织代谢中骨细胞的作用。方法以小鼠成骨细胞(MOB)为参照,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MLO-Y4细胞在体外培养条件下,以及受流体剪切力作用0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h,24 h后骨性标志物在mRNA水平的表达特征和变化。结果以MOB为参照,在mRNA水平,体外培养条件下MLO-Y4细胞骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)高表达;破骨细胞分化因子(RANKL)、骨保护因子(OPG)低表达,但RANKL/OPG比值明显高于MOB。受流体剪切力作用后,MLO-Y4细胞ALP、OCN表达降低;RANKL和OPN表达增加;OPG随加力时间也有一定变化。结论 MLO-Y4细胞具有分化终末骨细胞的特点;流体剪切力作用后,RANKL/OPG比值以及ALP、OCN和OPN等骨性标志物的表达发生变化,为其参与机械力信号到生物信号的传导过程提供了间接证据。     

乏氧对IL-17调控牙周膜细胞RANKL及OPG表达的影响

目的探究不同乏氧条件下IL-17对人牙周膜成纤维细胞RANKL及OPG表达的影响。方法在常氧(氧体积分数20%)及不同乏氧条件下:轻度乏氧(氧体积分数10%)、中度乏氧(氧体积分数5%)、重度乏氧(氧体积分数2%)IL-17处理人牙周膜成纤维细胞24 h。通过CCK8比色法检测细胞增殖情况,实时定量RT-PCR和Western-blot方法检测细胞中骨吸收相关因子RANKL及骨保护因子OPG的表达水平。结果氧体积分数10%、5%时,人牙周膜成纤维细胞的增殖与时间呈正相关关系,氧体积分数2%时,细胞增殖受到明显抑制。乏氧培养后随氧体积分数的降低,人牙周膜成纤维细胞RANKL蛋白及mRNA的表达升高,OPG的蛋白及mRNA表达呈现先升后降的趋势。结论当氧体积分数在5%左右时最大程度上调RANKL/OPG比例,提示中度乏氧可促进IL-17调控人牙周膜成纤维细胞骨吸收相关因子的表达,并参与牙槽骨的改建。     

IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究

目的通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料。方法原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定。取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强。结论IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关。     

TRAF6在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 :研究肿瘤坏死因子受体相关因子 6(TRAF6)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法 :制备大鼠牙胚发育各阶段标本 ,进行TRAF6的免疫组化研究。结果 :TRAF6在牙胚发育中呈动态时空表达。结论 :TRAF6可能是新发现的一种参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的胞内信号转导分子。     

张力作用下牙周组织破骨细胞分化因子、破骨细胞发生抑制因子表达变化的研究

目的:运用原位杂交的方法,观察破骨细胞分化因子(ODF)、破骨细胞发生抑制因子(OCIF)在正畸大鼠牙周组织改建过程中张力侧的表达变化,探讨ODF、OCIF与正畸牙周组织改建的关系。方法:8周龄成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、牙齿移动1d组、3d组、5d组、7d组,共5组,每组6只。在大鼠上颌右侧第一磨牙与上颌切牙之间安置正畸矫治器装置,施力50g。在相应时间段处死实验动物,取材固定,进行原位杂交染色、图像分析。结果:在牙齿移动3d后,OCIF原位杂交染色在张力侧逐渐深染,OCIF mR-NA阳性细胞数量逐渐增多,OCIF阳性表达在5d时达到最高,并可见到有新骨形成;7d时OCIF阳性表达及分布情况与3d时相类似。张力侧牙周膜细胞、成骨细胞的ODF原位杂交染色阳性反应随天数的增加有逐渐增强趋势,并可观察到有ODFmRNA阳性破骨细胞出现,但表达变化并不明显。结论:ODF及OCIF参与了正畸牙周组织改建过程,OCIFmRNA在张力区随正畸牙齿移动表达升高具有时间依赖性。     

骨保护因子及其配体调控骨吸收的研究进展

成骨细胞或骨髓基质细胞在破骨细胞分化、激活过程中起重要作用。骨保护因子及其配体是各种亲骨性因子、骨代谢激素、药物调节骨代谢的核心因子。其中,骨保护因子是抑制破骨细胞骨吸收功能的核心因子,通过阻断其配体——破骨细胞分化因子对骨吸收的激活作用来调控骨代谢的平衡。因此,骨保护因子在治疗多种骨病中具有巨大潜力,有望成为治疗骨质疏松症的理想药剂。     

Egr-1对机械力诱导人牙周膜细胞炎症反应的作用及机制研究

目的:研究早期生长转录因子(early growth responsive gene-1,Egr-1)对机械应力(mechanical stress,MS)介导人牙周膜细胞(human periodontal membrane cells,hPDLs)炎症因子分泌和表达的影响及可能机制.方法:以实时定量PCR和ELISA法检测MS加载不同时间(6、12、24和48 h)和不同形变率(3％、6％、12％和15％)时炎症因子IL-13、IL-6、IL-8和IL-11的分泌和表达水平.MS对Egr-1表达的影响采用实时定量PCR和Western印迹法检测,沉默Egr-1对炎症因子的作用采用实时定量PCR和ELISA检测.应用Western印迹法检测Egr-1下调对PTEN/PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响.进一步采用20 μmol/L PI3K/Akt抑制剂LY294002预处理hPDLs 30 min,研究Egr-1沉默在MS介导炎症因子表达中的可能机制.采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:IL-1[β、IL-6、IL-8和IL-11的分泌和mRNA表达随着作用时间和形变率的增加而升高,12％的MS作用24 h后,其分泌程度和表达水平最高.12％的MS加载24 h显著上调Egr-1表达.沉默Egr-1显著抑制MS诱导炎症因子表达.Egr-1沉默下调PTEN表达,上调p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平,LY294002预处理可部分阻断Egr-1沉默对炎症因子分泌及表达的抑制作用.结论:沉默Egr-1通过PETN/PI3K/Akt信号通路抑制MS诱导的炎症因子分泌和表达.     

重组人肿瘤坏死因子-α联合肿瘤坏死因子受体1基因转染杀伤舌癌细胞的实验研究

目的 :观察重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)对建系细胞 (T T)作用效应与机制。方法 :反转录PCR方法克隆人TNFR1基因 ,并将其稳定转染入舌癌细胞中 ,建系并鉴定 ;通过MTT法检测、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳及电镜观察检测rhTNF α对T T细胞的作用效果与机制。结果 :成功构建含TNFR1基因的真核表达质粒 pcDNA3 TNFR1,并建立表达TNFR1蛋白活性的舌癌细胞系T T ;较之亲本Tca 8113细胞及转染空载体的T pc细胞 ,rhTNF α对T T细胞具有更强的细胞毒作用 ,且通过介导细胞凋亡的方式发挥其作用。结论 :重组人肿瘤坏死因子 α联合肿瘤坏死因子受体 1基因转染可有效地杀伤舌癌细胞 ,为舌癌基因治疗提供理论依据。     

口腔肿瘤及正常组织中M期促进因子的活性

目的 通过对口腔正常组织与混合瘤、高分化粘液表皮样癌及颊癌中的M期促进因子（M－phase promoting facto,MPF)的存在状态及活性的比较，探讨MPF与口腔肿瘤的发展及恶性度间的关系。方法 利用免疫印迹法及Gollicano法测定MPF的量并进行活性测定分析。结果 MPF的2个亚基cdc2及CyclinB都存在于口腔正常组织、混合瘤、高分化粘液表皮样癌及颊癌中，且肿瘤组织中的MPF量高于正常组织；肿瘤组织中的MPF的活性量高于正常组织。颊癌较正常组织高64％，提示很可能MPF的活性变化与肿瘤的恶性度有关。结论 MPF存在于正常组织、混合瘤、高分化粘液表皮样癌及颊癌中，肿瘤组织中的量及活性均高于正常组织。蛋白激酶C可激活MPF,在肿瘤组织中蛋白激酶C可能通过激活MPF来促进肿瘤的增殖。MPF的活性可能与肿瘤的发展及恶性度相关。