口腔扁平苔藓患者CD4+T细胞中miR-155功能调控对CD4+T细胞和角质形成细胞的影响

目的 探讨糜烂型口腔扁平苔藓(erosive oral lichen planus,EOLP)患者 CD4+T 细胞中miR-155功能调控对CD4+T 细胞及角质形成细胞的影响.方法 选择EOLP 患者和健康志愿者各6名,用磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分离 CD4 + T 细胞.以 Lipofectamin2000为载体,通过人 miR-155 agomir 和人 miR-155 antagomir及其相应阴性对照的修饰作用,实现CD4+T细胞中miR-155的功能性调控,使用ELISA检测上清中IFN-γ水平,同时用CCK8检测CD4+T细胞和角质形成细胞增殖活性.结果 EOLP患者CD4+T细胞中miR-155分别经agomir和antagomir修饰后,上清中IFN-γ含量较其阴性对照组下降(P<0.05);CD4+T细胞中miR-155功能无论上调或下调,均可以提高角质形成细胞的增殖活性,而共培养体系中角质形成细胞的细胞形态和增殖活性都会发生改变.结论 miR-155功能上调会使EOLP CD4+T细胞和角质形成细胞的增殖活性增加,而miR-155功能下调则会使EOLP CD4+T细胞增殖活性下降而角质形成细胞的增殖活性增加.     

OLP角质形成细胞体外培养的研究进展

口腔扁平苔藓（OLP）是一种病因不明的慢性炎症性疾病。在其病变发展过程中,角质形成细胞可作为非专职的抗原提呈细胞,对自身抗原进行识别、吞噬和提呈,因此成熟的角质形成细胞模型有助于研究OLP的发病机制。目前原代OLP角质形成细胞较难获取,其体外培养易受微生物污染,同时培养基以及细胞活力等诸多因素都是培养成功的关键。本文就OLP角质形成细胞体外培养的国内外进展作一综述。     

槟榔碱对口腔角质形成细胞端粒酶逆转录酶表达的影响

目的：观察槟榔碱对人口腔角质形成细胞（KC）端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA及蛋白表达的影响，进一步探讨hTERT在口腔黏膜下纤维性变（OSF）癌变过程中的作用机制。方法：体外培养正常口腔黏膜的上皮细胞，将实验细胞分为0．03、0．06、0．09g／L槟榔碱组、空白对照组。采用Western印迹法和RT-PCR方法观察槟榔碱对KC hTERT mRNA及蛋白表达的影响。结果：槟榔碱能呈剂量依赖性增加KC hTERT mRNA及蛋白表达，0．03、0．06、0．09g／L槟榔碱组hTERT mRNA及蛋白表达均高于空白对照组（P〈0．05）。结论：槟榔碱对KChTERT mRNA与蛋白表达有明显诱导作用，且在一定范围内呈剂量依赖关系，槟榔碱诱导KChTERT过度表达可能在OSF癌变过程中起重要作用。     

大鼠口腔黏膜角质形成细胞体外连续培养的研究

目的探讨SD大鼠口腔黏膜角质形成细胞的培养方法及生物学特性。方法取SD大鼠口腔黏膜,用Dispase酶分离后经胰酶消化,接种无血清培养基,观察细胞存活率和生长情况,传代并签定细胞来源,绘制二代细胞生长曲线。结果获取的细胞呈"铺路石"状,为上皮细胞的典型形态,角蛋白免疫组化染色阳性,证明为单一的角质形成细胞。结论应用Dis-pase酶和胰酶联合消化并采用无血清培养液培养的方法,可成功地在体外对角质形成细胞进行培养和传代。     

缺氧对口腔扁平苔藓角质形成细胞增殖及缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 探讨缺氧对人口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)角质形成细胞增殖及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1 α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,以期为OLP发病机制的研究提供新思路.方法 体外分离培养OLP角质形成细胞;使用密闭培养箱模拟缺氧环境,分为常氧组和缺氧组,两组细胞分别培养12、24、36及48 h,采用细胞计数试剂盒8的方法监测缺氧各时点细胞增殖状况,并确定进一步实验干预时间点,每组实验均重复3次;SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测各组细胞HIF-1α、VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平,并采用相关性分析研究VEGF、MMP-9与HIF-1α的相关性.结果 24、36、48 h缺氧组OLP角质形成细胞增殖力(A值)(分别为0.340±0.002、0.415±0.006、0.546±0.006)均显著低于同时间点常氧组(分别为0.431 ±0.001、0.620±0.004、1.022±0.005),P＜0.01; 24、36、48 h缺氧组VEGF(2.087±0.291、3.189±0.573、5.402±0.563)及MMP-9(2.936±0.500、4.083±0.300、6.374±0.858)的mRNA表达量均显著高于常氧组(P＜0.05),HIF-1α (0.414±0.093、0.751±0.056、0.875±0.040)、VEGF (0.393±0.046、0.557±0.078、0.767±0.045)及MMP-9 (0.250±0.053、0.384±0.038、0.611 ±0.092)的蛋白表达量均显著高于常氧组(P＜0.05).HIF-1α与VEGF(r =0.905,P=0.000)及MMP-9(r =0.881,P=0.000)的蛋白表达水平均呈显著正相关.结论 缺氧在一定时间内可抑制OLP角质形成细胞增殖,上调细胞中HIF-1α蛋白、VEGF及MMP-9 mRNA和蛋白的表达;缺氧环境下HIF-1α可能通过调控下游靶基因参与OLP的病情进展.     

口腔扁平苔藓病损区细胞间黏附分子1、干扰素γ表达及意义

目的:探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1)和干扰素γ(IFN-γ)在口腔扁平苔藓(OLP)病损形成及发展中的作用和意义.方法:55 例OLP和10 例正常口腔黏膜石蜡包埋组织,采用免疫组化SP法检测ICAM-1和IFN-γ蛋白表达情况,分析两者的相关性及其与OLP临床病理特征的关系.结果: ICAM-1 和IFN-γ在OLP病损中的表达高于正常口腔黏膜中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05).OLP上皮组织中ICAM-1的表达与IFN-γ的表达存在正相关关系(P<0.05).IFN-γ和上皮ICAM-1的阳性表达率与OLP基底细胞液化程度存在正相关关系(P<0.05).结论:OLP病损中ICAM-1异常高表达可能与IFN-γ有关,两者协同参与了口腔扁平苔藓病理过程,可能在OLP病损形成中起重要作用.     

人胚胎干细胞源角质形成细胞用于药物毒理检测的探讨

目的 探讨人胚胎干细胞源角质形成细胞（keratinocytes derived from human embryonic stem cells, K-hESCs）用于药物细胞毒理检测反应的可行性,为建立新的生物安全性评价模型提供依据。方法 应用CCK-8法检测细胞活性和细胞毒性。观察维A酸（RA）、5氟尿嘧啶（5-FU）、地塞米松（DEX）和青霉素G（PG）对K-hESCs、人原代牙龈上皮细胞（human gingival epithelial cells, HGECs）和人永生化口腔上皮细胞系（human immortalized oral epithelial cells, HIOEC）的细胞毒性反应。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果 RA作用于HGECs、HIOEC和K-hESCs 3种角质形成细胞后,其药物半数抑制浓度（IC₅₀）分别为6.1±0.03、5.62±0.05和6.58±0.02;5-FU作用于3种细胞后,IC₅₀分别为1.65±0.02、3.00±0.02和1.72±0.04;DEX作用于3种细胞后,IC₅₀分别为113.67±0.014、328±0.002和126.17±0.05;PG作用于3种细胞后,IC₅₀分别为2200±1.34、3795±2.42和2880±1.5。4种药物对HIOEC和HGECs的IC₅₀有统计学差异（P<0.05）。对K-hESCs和HIOEC的IC₅₀差异也有统计学意义（P<0.05）,但对K-hESCs和HGECs的IC₅₀差异无统计学意义（P>0.05）。结论 在一般细胞毒性上, K-hESCs的药物半数抑制浓度比HIOEC更接近HGECs,可模拟人体正常细胞的反应。     

槟榔碱诱导口腔角质形成细胞凋亡研究

目的:了解槟榔碱(arecoline)对体外培养的人口腔黏膜角质形成细胞(keratinocyte,KC)凋亡的影响。方法:不同浓度的槟榔碱以及在不同时间处理体外培养的KC,在荧光显微镜下观察KC凋亡形态学改变并计算凋亡百分率,用比色法检测Caspase-3活性的改变。结果:1)槟榔碱能以一定时间和浓度依赖方式诱导培养的KC发生凋亡,其细胞凋亡率较正常对照组明显增高(P<0.05)。2)槟榔碱作用KC,其Caspase-3活性较正常对照组明显增高(P<0.05)。结论:槟榔碱可诱导KC凋亡,Caspase-3可能参与了这一细胞凋亡过程的调控。KC凋亡异常可能是口腔黏膜下纤维性变的重要发病机理之一。     

角质形成细胞低表达Hsp90蛋白与小细胞外囊泡数量的相关性及其临床意义探讨

目的： 评价角质形成细胞中热休克蛋白90（heat shock protein 90,Hsp90）表达水平与小细胞外囊泡（small extracellular vesicles,sEVs）数量的关系。方法： 采用人角质形成细胞株（HaCaT）,分为野生型组、短发夹RNA干扰组（shRNA组,Hsp90蛋白抑制剂）和格尔德霉素抑制组（17-AAG组,Hsp90低表达）,进行体外培养。以超速离心法收集各组培养体系中的sEVs,利用透射电镜观察其形态学特征;蛋白质免疫印迹法鉴定生物学特性;纳米颗粒跟踪分析检测粒子数量。采用GraphPad Prism 8.0软件包中的t检验（非参数Mann-Whitney U检验）统计分析各组之间sEVs的数量差异。结果： 超速离心法获得的HaCaT细胞来源的sEVs符合形态学和生物学鉴定标准,sEVs中Hsp90蛋白无明显表达。shRNA干扰角质形成细胞中的Hsp90AA1表达后,其sEVs数量上升。第5天时,shRNA干扰组的sEVs粒子数为[（177.4 ±4.18）×10⁸, n=3],与空载质粒组的粒子数[（82.34±4.83）×10⁸, n=3]相比显著升高（P<0.000 1）。17-AAG抑制Hsp90蛋白5天后,17-AAG组的粒子数为[（652.5±26.73）×10⁸, n=3],对照组粒子数为[（262.22±5.44）×10⁸,n=3],差异具有统计学意义（P<0.000 1）。结论： 低表达Hsp90蛋白可促进HaCaT细胞分泌sEVs,sEVs可能与炎症状态下上皮细胞和免疫细胞间的物质传递有关。     

Smad 2/3、7蛋白在OLP CD8+T细胞中的表达

目的:观察Smad2/3、在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)CD8 T细胞中的表达。方法:采用免疫7 组化双标记法检测28例OLP组织中CD8 T细胞Smad2/3、7蛋白表达水平。设10例临床正常口腔黏膜(Normal oral mucosa,)为对照组。结果:NOMNOM组织中CD8 /Smad2/3、CD8 /Smad7双标记阳性细胞均为零。OLP组织中, CD8/Smad2、3和CD8 /Smad7双标记细胞的阳性率分别为1.020 1.24,5.524±5.074。结论:与NOM相比, OLP组织中CD8 T细胞Smad2、 3表达无明显升高。而Smad7阳性颗粒均位于细胞浆中,可能部分阻碍了TGF-β/Smad正向反馈通路,从而引起CD8 T细胞抑制不足,造成OLP慢性炎症的长期持续。     

CD133在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探究肿瘤干细胞标记物CD133在口腔正常黏膜、口腔扁平苔藓（OLP）及口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达情况及临床意义,评估其作为OLP恶性转化的早期诊断指标、OSCC治疗干预靶标的临床价值,为进一步研究口腔黏膜癌变机制提供基础。 方法回顾性分析10例正常口腔黏膜、60例OLP、60例OSCC患者的临床资料,运用免疫组织化学技术检测各组病理组织中CD133表达情况,采用Mann-Whiney秩和检验比较各组间CD133表达差异,卡方检验统计分析CD133与各临床因素的关系。采用免疫组织化学技术和免疫印迹技术检测人口腔癌前病变细胞株（DOK）和人OSCC细胞株（CAL-27）中CD133的表达情况,t检验比较CD133在DOK与CAL-27细胞株中含量差异。 结果口腔正常黏膜、OLP、OSCC三组中,CD133的阳性率为0（0/10）、31.67%（19/60）、63.33%（38/60）,表达逐渐增强。CD133在口腔正常黏膜与OLP表达强度差异有统计学意义（Z=-2.046,P= 0.041）。CD133在OLP与OSCC表达强度差异具有统计学意义（Z=-3.777,P<0.001）。CD133在DOK中弱阳性表达,在CAL-27中阳性表达,DOK与CAL-27中CD133含量差异有统计学意义（t=-5.029,P= 0.001）CD133与OSCC的临床分期和淋巴结转移有关。 结论CD133作为评估OLP恶性转化潜能的指标及OSCC早期治疗干预靶标可能具有重要临床价值。     

炎症组织中CD40/CD40L与白细胞介素-8和单核细胞趋化蛋白-1的相关性

CD40/CD40L相互作用可促进多种细胞前炎症细胞因子和趋化因子的产生,如白细胞介素(IL)-8和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1,而IL-8和MCP-1可趋化炎症细胞向炎症部位聚集,从而调节炎症的发生和发展.下面就CD40/CD40L与IL-8和MCP-1在炎症组织中的相关性以及CD40/CD40L诱导IL-8和MCP-1的调节因素等作一.     

口腔白斑和口腔鳞状细胞癌患者血清前列腺素E2和干扰素-α的意义

目的：血清前列腺素E2（FGE2）、干扰素－α（IFN－α）的检测对诊断口腔早期癌的临床意义。方法：60例可疑病人及30名正常人空腹血的实验室前列腺素E2、干扰素－α测试。结果：口腔鳞状细胞癌前列腺素E2恙白斑、正常人有显著差别，而白斑与正常人前列腺素E2水平无显著差别；口腔鳞状细胞癌、白斑的干扰素－α水平与正常人有显著差别；口腔鳞状细胞癌与白斑干扰素－α水平无显著差别。结论：血清前列腺素E2、干扰素－α的检测作为一种辅助诊断对诊断口腔早期癌是有意义的。     

钛表面PDLLA-LN5复合涂层的构建及对角质形成细胞生物学行为的影响

目的:在纯钛表面构建聚消旋乳酸-层粘连蛋白5(PDLLA-LN5)复合缓释涂层,观察对角质形成细胞生物学行为的影响.方法:以纯钛为基底(P组),表面滴加PDLLA(PDLLA组),通过层层组装-物理吸附的方法制备载LN5的PDLLA涂层(PDLLA/LN5组),扫描电镜观察试样表面形貌,ELISA法测定LN5的释放曲线...     

缺氧诱导因子-1α在口腔扁平苔藓组织及鳞状细胞癌组织中的表达研究

目的：通过免疫组化方法观察缺氧诱导因子-1a（hypoxia induced factor-1α,HIF-1α）在正常口腔黏膜、口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）、OLP伴不典型增生及口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨HIF-1α在OLP发生发展以及癌变过程中的作用。方法：收集OLP25例,OLP伴不典型增生11例,口腔鳞状细胞癌14例,正常口腔黏膜10例组织标本,采用免疫组化方法对各组织中HIF-1α表达进行分析。结果：HIF-1α在正常口腔黏膜组织中不表达,在OLP组织、OLP伴不典型组织及口腔鳞状细胞癌组织中均有阳性表达。表达强度由低到高依次为：OLP伴不典型增生组、OLP组、鳞状细胞癌组,各组间均有显著性差异（P〈0.005）。结论：正常口腔黏膜组织,OLP,OLP伴不典型增生以及鳞状细胞癌组织中HIF-1α的表达具有显著性差异,提示HIF-1α参与了口腔扁平苔藓的发生发展以及癌变的过程。     

口腔鳞癌中HIF-1α和CD44v6的表达及其相关性研究

目的：探讨CD44v6、HIF-1α在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达、两者相关性及其作用。方法：采用免疫组织化学方法检测HIF-1α和CD44v6在65例OSCC和20例正常非肿瘤组织中的表达情况、以及两者的相关性。结果：HIF-1α和CD44v6在OSCC中的阳性表达率分别为83.08%和87.69%,均高于正常组织15.0%和10.0%;差异均有显著性意义（P〈0.01）;CD44v6和HIF-1α在OSCC中的表达呈正相关关系（r=0.391,P〈0.01）。结论：HIF-1α和CD44v6在OSCC组织中呈过表达,二者之间的相互作用与OSCC增殖、侵袭和转移密切相关。     

口腔鳞状细胞癌主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A和B的表达

目的研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A和B(MICA、MICB)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者外周血淋巴细胞和健康成人外周血淋巴细胞中的表达差异,以及MICA、MICB对OSCC细胞生物学的影响及其意义。方法提取OSCC患者和健康成人外周血淋巴细胞,从中提取RNA。采用聚合酶链反应(PCR)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MICA、MICB在OSCC患者外周血淋巴细胞和健康成人外周血淋巴细胞的表达差异。结果 PCR显示,OSCC患者及健康成人外周血淋巴细胞均表达MICA mRNA、MICB mRNA,但RT-PCR结果显示目的基因在两者中表达差异较大,OSCC患者外周血淋巴细胞MICA mRNA表达水平相当于健康成人的(2.8795±0.1343)倍,MICBmRNA表达水平相当于健康成人的(2.3268±0.1367)倍,均显著高于健康成人(P<0.01)。结论 OSCC外周血淋巴细胞MICA mRNA、MICB mRNA表达显著高于其在健康成人外周血淋巴细胞中表达。     

OX40/OX40L轴介导T细胞免疫参与口腔扁平苔藓病程的研究进展

口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）是一种发病机制尚不明确的、常见的口腔黏膜慢性疾病。T细胞的局部浸润在其病理过程中起关键作用。越来越多的研究支持辅助性T细胞（helper T cell,Th）如Th1/Th2、Th17/调节T细胞（regulatory T cells,Treg）及其相关细胞因子的失衡与OLP的发病进展密切相关。近年来研究显示,共刺激分子OX40(CD134)及其配体OX40L(CD252)在T细胞免疫应答过程中具有重要意义而受到关注,参与Th1/Th2、Th17/Treg的平衡调控,介导促炎和抗炎的失衡,影响多种自身免疫性疾病的发生发展。但目前缺乏OX40/OX40L轴介导OLP发病过程中T细胞亚群失衡作用机制的研究。因此,未来仍需要针对OX40/OX40L轴调控OLP中T细胞亚群平衡机制开展大样本的临床和体内外实验研究。