阿托伐他汀对内皮细胞增殖和内皮脂酶mRNA表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞增殖和内皮脂酶mRNA表达的影响。方法不同浓度阿托伐他汀(2、4、6、8及10μmol/L)与人脐静脉内皮细胞分别孵育2、4、8、12及24 h后,用半定量逆转录聚合酶链反应法检测人脐静脉内皮细胞内皮脂酶mRNA的表达,用嗜银蛋白分析法观察人脐静脉内皮细胞的增殖情况。结果阿托伐他汀抑制人脐静脉内皮细胞内皮脂酶mRNA表达,该作用呈剂量依赖性和时间依赖性。阿托伐他汀作用下,人脐静脉内皮细胞内嗜银蛋白颗粒随浓度的增加和作用时间的延长减少趋势越明显。两因素直线相关分析显示,内皮脂酶mRNA表达与嗜银蛋白颗粒数呈正相关关系(r=0.963,P<0.01)。结论阿托伐他汀抑制人脐静脉内皮细胞的增殖,抑制人脐静脉内皮细胞内皮脂酶mRNA的表达,且呈时间—剂量依赖性。人脐静脉内皮细胞的增殖与人脐静脉内皮细胞内皮脂酶mRNA的表达呈正相关。     

罗格列酮抑制高糖诱导的内皮细胞黏附作用

目的 研究罗格列酮对高糖诱导的内皮细胞黏附作用的影响.方法 应用不同浓度葡萄糖处理内皮细胞后,加入不同浓度罗格列酮,用免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链反应分别检测血管细胞黏附分子1蛋白及mRNA的表达.同时各处理组行内皮细胞-单核细胞黏附试验.结果 葡萄糖可诱导血管细胞黏附分子蛋白和mRNA的表达明显增加(P<0.05),在16.7 mmol/L时作用最显著;应用罗格列酮后,血管细胞黏附分子1蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.05).葡萄糖可诱导内皮细胞-单核细胞黏附增加,且与葡萄糖浓度呈正相关;罗格列酮可抑制内皮细胞-单核细胞黏附(P<0.05).结论 在一定葡萄糖浓度范围内,罗格列酮可能通过抑制葡萄糖诱导的内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达来抑制内皮细胞-单核细胞的黏附作用,这可能是罗格列酮抗糖尿病相关的动脉粥样硬化作用之一.     

The Effects and Mechanism of GSA on Expression of MCP-1 in Cultured Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Objectives To investigate the effects and mechanism of glycated serum albumin(GSA) on expression of Monocyte chemoattratant protein-1(MCP-1) in Endothelial Cells. Methods Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)are cultured with GSA of different concentrations and interfered by glycosylation products inhibitor Aminoguanidine (AG) and anti-oxidant N-acetylcy-steine (NAC), The expression of MCP-1 are evaluated by Immunocytochemistry and Sandwich ELISA. MDA content and SOD activity are determined by the technique of TBA and XOD respectively. Results GSA can stimulate MCP-1 production and secretion. Immunocytochemistry showed that after HUVECs were cultured with 50 mg/L GSA, expression of MCP-1 in group 4hrs, 8hrs and 12hrs was 1.3, 1.9 and 2.8 fold as much as that in control group (P < 0.01), and there was significant difference among the experiment groups(P < 0.01). Sandwich ELISA showed that expression of MCP-1 in three different groups was 1.6, 2.4 and 3.0 fold as much as that in control group(P < 0.01), and there was significant difference among the experiment groups(P < 0.01); GSA can cause the decrease of SOD activity(P < 0.05) and increase of MDA content(P < 0.01); AG and NAC can restrain obviously the expression of MCP-1 of HUVECs stimulated by GSA(P < 0.01); NAC can restrain the effect of GSA on SOD activity and MDA content in HUVECs (P < 0.05). Conclusions GSA can stimulate the expression of MCP-1 of endothelial cells by inducing endothelial cells oxidative stress.     

Parthenolide对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用研究

目的观察Parthenolide对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和凋亡的影响。方法胶原酶消化法培养HUVEC,在HUVEC培养基中加入不同浓度的Parthenolide作用不同的时间,以MTT法检测细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,1、5μmol/L Parthenolide组对脐静脉内皮细胞增殖活性的抑制作用无明显影响(P>0.05);10、15、20μmol/L Parthenolide组显著抑制HUVEC的增殖活性(均P<0.01),并且呈时间依赖性和剂量依赖性增加。5μmol/L Parthenolide组在6h、12h、24h时,细胞凋亡指数与对照组相比均无统计学差异(均P>0.05),101、5μmol/L Parthenolide组在6h、12h、24h各个时间段的凋亡指数均高于对照组(均P<0.01);且Parthenolide10μmol/L和15μmol/L组在12和24h的凋亡指数均高于6h(P<0.01),但12和24h上述两组相比无统计学差异(P>0.05)。结论一定浓度范围内的Parthenolide对内皮细胞的增殖和凋亡无明显影响,而高浓度时可同时抑制细胞增殖和诱导HUVEC凋亡。     

普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

为探讨普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 ,采用培养的人脐静脉血管内皮细胞 ,观察溶血磷脂酰胆碱对内皮细胞产生和分泌一氧化氮及其合酶、组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂及乳酸脱氢酶活性的影响 ,并观察普罗布考的保护作用。结果发现 ,溶血磷脂酰胆碱明显增加乳酸脱氢酶活性 (4 8.0± 4 .1比 2 8.0± 7.5 ,P <0 .0 5 ) ,增加细胞死亡率 (9.9± 1.2比 6 .3± 0 .9,P <0 .0 5 ) ;同时抑制内皮型一氧化氮合酶 (4 8.0± 4 .3比 6 3.4± 6 .8)及组织型纤溶酶原激活剂活性 (0 .31± 0 .0 5比 0 .4 3± 0 .0 7,P <0 .0 5 ) ,增强纤溶酶原激活物抑制剂的活性 (1.39± 0 .2 1比 0 .97± 0 .11,P <0 .0 5 ) ,具有剂量—依赖效应。预先应用不同剂量的普罗布考 (10～ 5 0mmol L)后 ,该效应明显减弱。以上提示 ,溶血磷脂酰胆碱能直接损伤内皮细胞 ,抑制组织型纤溶酶原激活剂及内皮型一氧化氮合酶活性 ,增强纤溶酶原激活物抑制剂活性 ,普罗布考对内皮细胞具有保护作用     

曲格列酮对凝血酶诱导的内皮细胞诱导型一氧化氮合酶和黏附分子表达的抑制作用

目的:研究过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)配体(曲格列酮)对凝血酶刺激的人脐静脉内皮细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和黏附分子表达的影响,旨在探讨曲格列酮对血管内皮细胞保护作用。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别设立空白对照组、凝血酶对照组和不同浓度的(1、5、10、25、50、100μmol/L)曲格列酮实验组预作用2h,然后以凝血酶(5U/ml)诱导作用4h。采用免疫组织化学和Western-blot分析法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)以及诱导型一氧化氮合酶蛋白表达水平。结果:在凝血酶诱导作用下HUVEC表达的ICAM-1、VCAM-1和诱导型一氧化氮合酶均较空白对照组明显增加(P<0.05);当曲格列酮浓度大于1或5μmol/L预作用后,给予凝血酶诱导,曲格列酮可显著抑制凝血酶诱导的ICAM-1、VCAM-1和诱导型一氧化氮合酶表达增加(P<0.05),且在一定浓度范围内表现为剂量依赖性。结论:PPARγ配体曲格列酮能够抑制凝血酶诱导的内皮细胞ICAM-1、VCAM-1和诱导型一氧化氮合酶表达的增加,具有对内皮细胞保护作用。     

香烟烟雾提取物对人内皮细胞细胞间黏附分子-1和白介素-8表达以及与多形核中性粒细胞黏附的影响

目的探讨香烟烟雾提取物（CSE）诱导作用对人内皮细胞细胞间黏附分子-1（ICAM—1）和白介素-8（IL-8）表达以及与多形核中性粒细胞（PMN）黏附的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）；制备香烟烟雾提取物（CSE）；用不同浓度（0、2．5％、5．0％、10．0％）CSE刺激内皮细胞，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测不同时间点（1h、3h、6h、9h、12h、24h、48h）收集的细胞培养上清液IL-8的浓度，细胞免疫化学染色（SABC）检测ICAM-1在不同时间点（3h、6h、9h、12h）内皮细胞上的表达，细胞记数法测定（1h、3h、6h、9h、12h）后PMN与内皮细胞的黏附率（PMN—EC）。结果（1）各CSE浓度组干预12h后，ICAM-1在EC上的表达量随着干预浓度的增加而增高，除了2．5％CSE干预组和5．0％CSE干预组之间无差异外，各组间差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；10．0％CSE干预不同时间点后，随着干预时间的延长，ICAM-1在内皮细胞上的表达量增加。各时间组之间差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。（2）随着CSE干预浓度的增加和干预时间的延长，内皮细胞表达IL-8的浓度增高，各组间差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。（3）各CSE浓度组干预12h后，PMN—EC黏附率随着干预浓度的增加而增加，各组间差异均有非常显著性意义（P〈0.01）。10.0％CSE干预不同时间点后，随着干预时间的延长，PMN—EC黏附率增加，各时间组差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。结论香烟烟雾提取物可以刺激激活血管内皮细胞ICAM-1和IL-8表达，增强PMN与内皮细胞的黏附。     

非对称性二甲基精氨酸对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的 探讨非对称性二甲基精氨酸对人脐静脉内皮细胞表达可溶性细胞间粘附分子1、内皮素1、一氧化氮的影响。并观察不同浓度L-精氨酸对非对称性二甲基精氨酸效应的拮抗作用。方法 以不同浓度的非对称性二甲基精氨酸（分别为1、4、8、12和16μmol/L）与人脐静脉内皮细胞共育及固定浓度的非对称性二甲基精氨酸（16μmol／L）加不同浓度的L-精氨酸（分别为0.2、0．4、0．8、1．6和3．2mmol／L）与人脐静脉内皮细胞共育24h，分别用酶联免疫吸附法、硝酸还原酶法、放射免疫法检测培养基中可溶性细胞间粘附分子1、内皮素1及一氧化氮的浓度。结果 非对称性二甲基精氨酸呈剂量依赖性增加人脐静脉内皮细胞可溶性细胞间粘附分子1和内皮素1的表达，降低一氧化氮的表达（P〈0．05），接近生理范围的非对称性二甲基精氨酸（即1μmol／L）对内皮功能没有明显的影响；外源性补充L-精氨酸可逆转非对称性二甲基精氨酸的效应，且呈剂量依赖性（P〈0．05），但当外源性L-精氨酸的剂量大到一定程度时即加入L-精氨酸／非对称性二甲基精氨酸〉100时，内皮功能并不能得到进一步改善。相关分析显示培养基中可溶性细胞间粘附分子1、一氧化氮、内皮素1的表达和加入非对称性二甲基精氨酸的的浓度明显相关。其相关系数r分别为0．943、-0．937和0．934（P〈0.01）。结论 非对称性二甲基精氨酸可通过增加内皮细胞表达可溶性细胞间粘附分子1和内皮素1，减低内皮细胞产生一氧化氮来导致内皮功能紊乱，且内皮功能紊乱的程度与非对称性二甲基精氨酸的浓度明显相关；外源性补充L-精氨酸可逆转非对称性二甲基精氨酸的效应；寻找有效的方法调节非对称性二甲基精氨酸的浓度可能是改善内皮功能，防治心血管疾病的一个新目标。     

脂质体介导血管内皮生长因子基因在内皮细胞的稳定表达

建立稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系 ,为其在组织化工程血管的应用奠定基础。将真核表达载体PCD2 VEGF1 2 1 用阳离子脂质体介导 ,转染人脐静脉内皮细胞系细胞 ,G4 18筛选 ,获得G4 18抗性单克隆细胞 ,扩增后分别用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学及血管通透性实验检测血管内皮生长因子的转录、蛋白质的表达及其生物学活性。结果发现 ,逆转录聚合酶链反应检测出了转录血管内皮生长因子的稳定转染细胞克隆 ,该单克隆细胞的免疫组织化学检测血管内皮生长因子蛋白质表达呈阳性 ,血管通透性实验和细胞生长实验发现其表达产物具有生物学活性 ,而作为对照的转空白质粒细胞和未转染细胞上述实验结果皆为阴性。结果表明 ,该方法成功建立了稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系单克隆细胞     

C反应蛋白对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2的影响

目的通过观察C反应蛋白对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2的影响,探讨C反应蛋白导致动脉粥样硬化斑块不稳定的可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,给予不同浓度的人重组C反应蛋白及普伐他汀干预,分为空白对照组、C反应蛋白5mg/L组、C反应蛋白20mg/L组、C反应蛋白100mg/L组及C反应蛋白20mg/L 普伐他汀组,培养24h后采用Westernblot及逆转录聚合酶链反应法在蛋白及mRNA水平观察各组细胞表达基质金属蛋白酶2的差异。结果C反应蛋白5mg/L组、20mg/L组及100mg/L组基质金属蛋白酶2蛋白条带的相对灰度值逐渐增高,呈浓度依赖性;而普伐他汀干预组相对灰度值明显低于C反应蛋白20mg/L组(P<0.05)。随着C反应蛋白干预浓度的增加,基质金属蛋白酶2mRNA的表达量也相应增加,呈浓度依赖性,普伐他汀可以减轻这种作用。结论C反应蛋白干预体外培养的人脐静脉内皮细胞后,可上调基质金属蛋白酶2的表达,因此C反应蛋白在导致动脉粥样硬化斑块不稳定方面有直接致炎症作用及炎症放大作用。     

瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸损伤的人脐静脉内皮细胞

目的　探讨瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。方法　原代培养HUVEC,2～3代进行实验,用一定浓度Hcy损伤HUVEC建立细胞损伤模型,然后瑞舒伐他汀干预研究,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活性,硝酸还原酶法检测细胞上清的一氧化氮（NO）含量,硫代巴比妥酸法检测MDA的水平;Real-time　PCR检测SOD1　mRNA表达的变化。结果　Hcy刺激24　h　SOD1　mRNA表达量、NO、SOD浓度较空白对照组显著降低,MDA含量较空白对照组显著升高（P<0.05）;瑞舒伐他汀预处理2　h后再加入等浓度Hcy,刺激24　h后SOD1　mRNA表达量、NO、SOD浓度显著升高,MDA含量显著下降（P<0.05）。结论　瑞舒伐他汀可通过改善SOD活性和减低MDA水平发挥抗氧化作用,且这种作用独立于它的降脂作用。     

Heat Shock Provides Delayed Protection against Oxidative Injury in Cultured Human Umbilical Vein Endothelial Cells

During both mild and severe ischemia, vascular endothelial cells lining large and small vessels of the ischemic organ are exposed to oxygen-derived free radicals resulting in oxidative damage to the organ. Heat shock has been shown to induce thermotolerance and also protect against ischemic injury, possibly via increased synthesis of heat shock proteins (HSPs). We hypothesized that heat shock preconditioning may protect human endothelial cells against oxidative damage. Cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were subjected to heat shock (42°C, 1 h) and allowed to recover for 2 or 20 h, at which times the cells were oxidatively stressed for 1 h by exposing them to 100–200μmol/l of hydrogen peroxide (H₂O₂). Cellular damage was assessed immediately and 18 h later by morphology and release of lactate dehydrogenase (LDH). No protection of HUVEC was seen using the 2-hour recovery interval, but a significant protection (P<0.05) was observed after the 20-hour delay. Northern blot analysis at 1 and 2 h after heating showed induction of HSP-70 mRNA. Western blot analysis demonstrated a significant increase in HSP-72 protein after 2 as well as 20 h of recovery from heat shock, although the amounts of protein at the two times were not significantly different. Furthermore, no differences in the activity of the antioxidant enzyme catalase were observed between heated and unheated HUVEC at 2 and 20 h after heat preconditioning. Thus, heat shock preconditioning inducesdelayedprotection against oxidative injury in HUVEC, and the mechanism of protection appears to involve more than the expression of HSP-72 or activity of catalase.     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

为探讨同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响，采用400umol／L同型半胱氨酸作用于培养的人脐静脉内皮细胞，以^35S-Na2SO4为示踪物标记细胞合成的蛋白聚糖，通过离子交换层析，凝胶过滤层析分离蛋白聚糖。结果发现，实验组培养液中总蛋白聚糖降低，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖含量也降低，但其百分含量未见改变。细胞层中蛋白聚糖未见明显变化。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白

为探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白 ,使人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸孵育 8h后 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法检测RANTES蛋白的表达。免疫细胞化学检测结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞能表达RANTES蛋白。培养的内皮细胞与 0 .1、0 .5及 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其RANTES蛋白表达的平均吸光度值分别为 0 .0 4 34± 0 .0 0 6 3、0 .0 788± 0 .0 0 5 3和 0 .10 6 1± 0 .0 2 15 ,均显著高于对照组 (0 .0 2 0 0± 0 .0 0 32 ) ,方差分析发现 ,组间均存在显著性差异 (P <0 .0 1)。Westernblot检测结果发现 ,当内皮细胞与 0 .1、0 .5和 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其免疫染色条带的积分吸光度值分别为 8873、10 2 0 0和 10 80 0 ,分别是对照组 (3881)的 2 .2 9倍、2 .6 3倍和 2 .78倍。此结果提示 ,培养的人脐静脉内皮细胞表达低水平的RANTES蛋白 ,同型半胱氨酸能提高其RANTES蛋白的表达     

四氢生物喋呤对内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响

目的 探讨四氢生物喋呤(BH_4)对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮(NO)和超氧阴离子(O_2~(?))的影响。方法 在培养液中分别加入不同浓度的D—葡萄糖、胰岛素和BH_4，24h后取细胞培养液分别测定一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、NO和O_2~(?)浓度。结果 BH_4(10、100、500μmol／L)使内皮细胞NOS活性增高，500μmol／L BH_4使内皮细胞NO产生增加，10或100μmol／L BH_4对内皮细胞产生NO有增加的趋势，但与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；25mmol／L葡萄糖 BH_4(10、100、500μmol／L)对内皮细胞产生NO与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；高浓度胰岛素(10、100、1000mU／L) BH_4(10、100、500μmol／L)使内皮细胞NOS活性增强，NO产生增加。BH_4(10、100、500μmol／L)对内皮细胞SOD活性无明显影响，但可以改善25mmol／L葡萄糖对内皮细胞SOD活性的影响；胰岛素 BH_4对内皮细胞SOD活性无明显影响(P＞0.05)。BH_4(10、100、500μmol／L)使内皮细胞产生O_2~(?)减少，并可以改善25mmol／L葡萄糖对内皮细胞产生O_2~(?)影响；胰岛素 BH_4组O_2~(?)浓度明显低于对照组和不同浓度胰岛素组(P＜0.01)。结论 BH_4可以增加培养的人脐静脉内皮细胞NOS活性，使NO产生增加而使O_2~(?)水平下降。     

阿魏酸抑制培养人内皮细胞粘附分子的表达

观察阿魏酸对活化的人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响,以探讨其抗动脉粥样硬化的部分分子机制.用10 mg/L脂多糖刺激培养的人脐静脉内皮细胞4 h,诱导其表达E-选择素;用300 μmol/L过氧化氢刺激内皮细胞2 h,诱导其表达P-选择素.部分细胞在刺激前30min用0.21、0.41或0.62mmol/L阿魏酸预处理.用流式细胞术检测内皮细胞粘附分子表达水平,用逆转录聚合酶链反应检测内皮细胞E-选择素mRNA表达水平.结果发现,阿魏酸抑制内皮细胞E-选择素及P-选择素表达,同时抑制E-选择素mRNA表达.提示阿魏酸抗动脉粥样硬化作用可能与其抑制内皮细胞粘附分子表达有关.     

阿魏酸抑制培养人内皮细胞粘附分子的表达

观察阿魏酸对活化的人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响，以探讨其抗动脉粥样硬化的部分分子机制。用10mg／L脂多糖刺激培养的人脐静脉内皮细胞4h，诱导其表达E-选择素；用300μmol／L过氧化氢刺激内皮细胞2h，诱导其表达P-选择素。部分细胞在刺激前30min用0．21、0．41或0．62mmol／L阿魏酸预处理。用流式细胞术检测内皮细胞粘附分子表达水平，用逆转录聚合酶链反应检测内皮细胞E-选择素mRNA表达水平。结果发现，阿魏酸抑制内皮细胞E-选择素及P-选择素表达，同时抑制E-选择素mRNA表达。提示阿魏酸抗动脉粥样硬化作用可能与其抑制内皮细胞粘附分子表达有关。     

纳米细菌对人脐静脉内皮细胞的损伤及超氧化物歧化酶分泌的影响

目的探讨纳米细菌对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤及超氧化物歧化酶(SOD)分泌的影响。方法用含有不同浓度纳米细菌的培养液培养HUVEC,采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力;用浓度为0.5 Mcfarland纳米细菌攻击HUVEC,分别于0、6、12、24、48、72 h检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和SOD水平。结果与对照组比较,纳米细菌(吸光度值为0.001、0.005和0.02)处理HUVEC CRL2480细胞48、72 h后,细胞活力显著降低(P0.05);与对照组比较,纳米细菌处理组细胞培养液中LDH和SOD浓度显著增高(P0.05),而MDA含量无显著变化(P0.05)。结论纳米细菌能损伤HUVEC,同时增加HUVEC中SOD活性。