牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的建立牙髓牙本质复合体体外培养模型。方法取20~30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d。分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定。结果光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性。免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性。结论该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法。     

牙髓-牙本质复合体中第三期牙本质的生物学研究

牙本质是构成牙齿主体的硬组织，而牙髓是组成牙齿的唯一的软组织，但是由于其胚胎发生和功能上的关系密切，因此将他们合称为牙髓一牙本质复合体。牙髓可以终生不断地形成牙本质，此活动受到牙髓一牙本质复合体中一些生长因子的调节。牙本质可分为三期：第一期牙本质(原发性牙本质)，是牙齿发育过程中所形成的牙本质，     

体外牙髓-牙本质复合体观察模型的初步构建

目的 体外构建牙髓-牙本质复合体模型,通过对生长于其内的牙髓细胞生长情况的观测评价该模型的构建效果。方法 构建可动态观察细胞形态的牙髓-牙本质复合体模型。将增殖稳定的人牙髓细胞接种于模型内培养,检测细胞在髓腔环内与牙本质髓腔内壁的关系和形态学表现,以及结构内细胞的增值活性等。结果 人牙髓细胞可以在本研究构建的模型内稳定增殖生长。 结论 本研究成功构建了体外牙髓-牙本质复合体动态观察模型,人牙髓细胞可在其内稳定增殖生长。     

牙髓牙本质复合体的nNOS阳性神经纤维

目的:研究神经型一氧化氮合酶（nNOS）在牙髓牙本质复合体中的表达,探讨其分布与功能的关系。方法:收集新鲜健康人前磨牙60颗,经固定、脱钙、石蜡包埋、切片,nNOS免疫组织化学染色。结果:在根髓nNOS阳性神经纤维呈粗大束状,向颈部逐渐变细,分支少;在颈部,束状纤维呈放射状至冠髓;在冠髓束状纤维大量分支呈网状,部分围绕于血管,部分止于牙髓基质,部分经成牙本质细胞层进入前期牙本质和成熟牙本质近髓1/3牙本质小管。结论:nNOS阳性神经纤维存在于人牙髓牙本质复合体中,部分围绕于血管周围,可能与血管功能调节有关,部分止于牙髓基质、前期本质和牙本质小管内,可能与牙内因素和牙外因素引起的感觉有关。     

人根尖乳头干细胞生成牙髓牙本质复合体的实验研究

目的应用组织工程方法,探讨人根尖乳头干细胞（SCAP）进行牙髓牙本质复合体再生的可能性。方法从牙根未发育完
全的健康阻生智齿中分离牙乳头,用组织贴块法培养SCAP。细胞分别在成骨诱导液中培养3周及普通培养基中培养60 d后,
用茜素红检测钙结节形成情况,免疫荧光法和RT-PCR检测成骨细胞标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨涎蛋白（BSP）、骨钙素（OC）和
牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。选取5~6周雌性裸鼠6只,将SCAP与羟磷灰石/磷酸三钙（HA/TCP）复合培养作为实验组,仅
有HA/TCP作为对照组,分别植入同一只裸鼠背部皮下,左右侧各1个。8周后移植物行HE染色和免疫组化染色观察新生组织
情况。结果SCAP在体外经成骨诱导3周及普通培养基培养60 d后,茜素红染色阳性,且表达成骨细胞标志物ALP、BSP、OC
和DSP。实验组移植物8周后可见牙髓牙本质样结构形成,且紧靠牙本质样结构内侧的细胞DSP阳性表达,而对照组未见任何
硬组织形成。结论SCAP可应用于组织工程,进行牙髓牙本质复合体再生。
     

人前磨牙牙髓牙本质复合体的增龄变化

目的 :研究人前磨牙牙髓牙本质复合体的增龄性变化 ,探讨牙衰老和老年牙病的形态学基础。方法 :收集健康人前磨牙 ,按年龄分组 ,然后脱钙 ,石蜡包埋 ,切片 ,HE染色 ,光镜观察与图像定量分析。结果 :随年龄增加 ,牙髓牙本质复合体钙盐大量沉积 ,牙髓体积缩小 ,牙髓内细胞、血管、牙本质小管和牙髓体密度减少 ;牙髓内结缔组织纤维与细胞外基质体密度增加 ,各年龄组间具有显著性差异。结论 :随年龄增加 ,牙髓牙本质复合体的生物活性成分减少 ,非生物活性成分增加。     

全冠牙体预备后影响牙髓-牙本质复合体反应因素的研究

目的:观察全冠牙体预备后牙髓牙本质复合体的反应及剩余牙本质厚度和修复时间对牙髓的影响。方法:选择因正畸需要拔除的健康第一前磨牙38颗,根据牙体制备的深度不同分为3组,暂时冠修复后分别于术后1,3,6周后拔除观察牙髓的炎症反应及剩余牙本质厚度。结果:全冠牙体预备后,牙髓组织主要表现为轻、中度的炎症反应。6周左右可见修复性牙本质形成。剩余牙本质厚度影响牙髓的反应,牙本质越厚,牙髓重度炎症的发生率越低(P<0.05)。结论:术后观察时间对牙髓预后的影响是以剩余牙本质的厚度为前提,剩余牙本质小于2mm时,时间与牙髓反应关系密切(P<0.01)。剩余牙本质为2～2.5mm时,时间与牙髓的反应相关(P<0.05)。但剩余牙本质厚度大于2.5mm时,时间与牙髓反应无关。     

体外培养人牙髓干细胞的生物学特性

目的研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性。方法收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周,茜素红染色观察诱导后细胞矿化情况,免疫荧光法检测牙本质涎蛋白(DSP)表达,改良Kap low氏法检测诱导前后碱性磷酸酶的表达。结果诱导前细胞表达Stro-1、Cbfa-1、和Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶呈弱表达,不表达DSP;诱导后细胞表达DSP,碱性磷酸酶呈强表达,并可见钙结节形成。结论分离所得细胞具有较高的增殖和分化能力,与间充质干细胞具有相似的表面标志,并在诱导后表达DSP而具备牙髓干细胞的特征。     

体外培养人牙髓干细胞的生物学特性

目的 研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性.方法 收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周,茜素红染色观察诱导后细胞矿化情况,免疫荧光法检测牙本质涎蛋白(DSP)表达,改良Kaplow氏法检测诱导前后碱性磷酸酶的表达.结果 诱导前细胞表达Stro-1、Cbfa-1、和Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶呈弱表达,不表达DSP;诱导后细胞表达DSP,碱性磷酸酶呈强表达,并可见钙结节形成.结论 分离所得细胞具有较高的增殖和分化能力,与间充质干细胞具有相似的表面标志,并在诱导后表达DSP而具备牙髓干细胞的特征.     

组织工程技术应用于牙髓—牙本质再生的研究进展

众所周知,牙髓-牙本质复合体关系密切,牙髓为牙本质提供营养,并能不断形成牙本质,牙本质则将牙髓与外界有害刺激隔离,一旦牙本质的完整性受到破坏,牙髓暴露,常需将牙髓去除,最终可能导致牙丧失.     

体外细胞炎性损伤模型的建立

目的 体外复制细胞炎性损伤模型用于体外炎症研究.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养后分组,用不同浓度(0、0.1、1、10、20μg/ml)的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点(4、12、24、48h)收样品,检测细胞上清中的白介素-6(IL-6)水平.结果 每个时间点的HUVEC:LPS(0.1、1、10、20μ,g/ml)比LPS(0μg/ml)刺激后IL-6分泌明显增高(P＜0.05);48h内随时间增加,IL-6分泌增加,呈线性关系;相同时间点不同LPS浓度(0.1、1、10、20 μg/ml)刺激细胞产生的IL-6分泌差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外LPS刺激HUVEC是理想的细胞炎性损伤模型.     

Establishment of an Organic Model of SMC Proliferation with Cultured Aorta of Rats

Objective To study the mechanism of proliferous vascular disease as well as its prevention and treatment, an organic model was established with rat aorta. Methods The aorta segments of rats were cultured in vitro for 5, 8 and 13 days respectively. The proliferation of smooth muscle celI（SMC） was observed by HE staining and bromodeoxyuridine（Brdu） DNA labeling, and the expressions of hypertension-related gene- 1 （HRG- 1 ） and smooth muscle 22 alpha（SM22ct） mRNA was detected by RT-PCR. Results After being cultured 5 days in vitro, various degrees of proliferation of SMC on cultured artery segments was observed by HE staining and the conspicuous plaques were developed after being cultured 13 days. The nuclei of proliferous cells labeled by Brdu were seen under microscope. The expressions of HRG-1 and SM22amRNA decreased with prolonging of culture time and it completely disappeared after being cultured 13 days. Conclusion The results demonstrate that the culturing of rat aorta segments in vitro can induce the proliferation of SMC and the transformation of phenotype from contractile to synthesize type. This may be a good organic model that supplies a good experimental platform for us to research the mechanism of proliferous vascular disease as well as its prevention and treatment.     

桡动脉体外药物敏感模型的建立

 [摘要] 目的: 利用组织浴槽的方法体外模拟在体桡动脉,摸索建立体外桥血管药物敏感模型,研究单一因素改变对血管舒缩状态的影响。方法: 取成年男性桡动脉,4℃ Krebs- Ringer保存液中切割成3－4mm宽,内膜完好的血管环,两端分别牵引并水浴至10ml麦式组织浴槽中并连接至换能器、生理记录仪和适度的前负荷上,待血管环状态稳定后记录初长度及静息张力。分别用终浓度为0.06M的K+、20μM的乙酰胆碱评估内膜组织的完整性和证实血管环舒张、收缩活性。其中内膜完整并且舒缩活性良好的血管环作为一组,分别用不同终浓度的苯肾上腺素作为刺激因素,观测血管环的收缩程度的变化。绘制在不同半对数克分子浓度苯肾上腺素下,血管环收缩静息张力变化曲线。结果: 所有血管环在水浴槽中均能很快达到稳定状态。对KCl和乙酰胆碱的反应敏感提示血管环内膜完整及收缩舒张功能良好。苯肾上腺素对数克分子浓度与血管环静息张力呈正相关。结论: 利用组织浴槽建立药物敏感模型在方法上是可行的。血管环可以很好的模拟桥血管在体内的状态,确定采用实验所得苯肾上腺素浓度-静息张力曲线中的E50浓度作为后续实验中刺激血管收缩的标准浓度。     

脑缺血损伤体外模型的建立及评价

目的建立一种符合脑缺血损伤的体外模型,并评价其可靠性。方法运用海马神经细胞原代培养技术,采用厌氧袋及糖剥夺法相结合建立体外脑缺血损伤模型。观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活性;化学比色法检测细胞质及细胞外液中乳酸脱氢酶（LDH）的活力,计算LDH的漏出率;流式细胞仪检测神经细胞的凋亡率。结果与正常组比较,当损伤在8h以内时,神经细胞活性、凋亡率及LDH的漏出率无显著性差别（P＞0.05）;当损伤在12h以上时,细胞形态损伤严重,细胞活性明显下降（P＜0.01）,细胞凋亡率及LDH漏出率显著上升（P＜0.01）。结论厌氧袋及糖剥夺相结合法能有效的建立脑缺血损伤体外模型,并具有良好的可靠性。     

PC12细胞铅中毒模型的建立

目的以PC12细胞为研究对象,建立铅中毒体外模型,用于研究铅中毒对神经细胞生长发育的影响。方法应用含不同浓度醋酸铅（终浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0μmol/L）的DMEM培养基与PC12细胞共同培养0、12、24、36、48h;观察细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞活性;石墨炉原子吸收分光光度法测细胞内的含铅量,共同筛选出最佳作用的剂量效应及时间效应。结果与正常组比较,当铅浓度大于250μmol/L时,细胞形态损伤严重,细胞活性明显下降（P〈0.01）;当铅浓度小于250μmol/L时,细胞未出现明显损伤,细胞活性无统计学差异（P〉0.05）;时间效应筛选结果提示,当铅作用12h以上,细胞出现严重损伤,大量细胞悬浮于细胞培养基中,细胞活性明显下降（P〈0.01）。结论铅的终浓度为250μmol/L,与PC12细胞共同作用12h为建立铅中毒体外模型的最佳条件。     

大鼠成骨细胞的体外培养和鉴定

目的 探讨正常新生大鼠颅骨中分离培养大批成骨细胞并进行功能鉴定。方法 将新生SD大鼠处死，无菌条件下取出颅骨，剔净后剪成1mm×1mm×1mm碎块，0．1％胶原酶Ⅱ消化15min，碎骨块接种于培养瓶中培养，通过观察细胞形态学及钙化结节、碱性磷酸酶染色进行鉴定。结果 用改良组织块法分离的大鼠成骨细胞，在体外培养时可维持其在体内的功能：合成碱性磷酸酶，最终能形成矿化结节。结论 用改良组织块法进行大鼠成骨细胞培养，方便易行，可分离、培养大量高纯度成骨细胞，在体外传代后仍保留其表型特征。     

建立体外血脑脊液屏障模型方法学研究

目的：采用原代分离培养Sprague-Dawley（SD）大鼠脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells,BMECs）和星形胶质细胞（astrocyte,As）建立相对简单可靠、重复性好、接近在体状态的体外血脑脊液屏障（blood-cerebrospinal fluid barrier,blood-CSF barrier）模型。方法：原代分离、纯化和培养BMECs 和As,通过细胞形态学和免疫细胞化学染色方法鉴定原代培养的细胞;通过培养在具有特殊质材和孔径的Transwell 小室上建立体外血脑脊液屏障实验模型,采用倒置显微镜观察细胞形态结构,经跨内皮电阻值（trans endothelialelectrical resistance,TEER）、4 h 液面试漏实验、两种特征性酶检测、荧光素钠通透性（sodium fluorescent,Na-FLU）评价模型的屏障功能。结果：原代培养的BMECs 具有典型的“铺路石”样外观,Ⅷ因子鉴定细胞纯度在95% 以上;As 有细长突触,胞质较浅,胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic portein,GFAP）鉴定细胞纯度在95% 以上。通过测定TEER 值共培养模型组显示高电阻值（378.97±11.38） Ω·cm2;4 h 液面试漏试验阳性;γ- 谷氨酰转肽酶（γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）表达分别为（30.88±2.87） μmol·min-1·mL-1 和（2.51±0.88）金氏单位·100 mL-1;Na-FLU 跨膜渗透系数（2.228±0.85）×106 cm·s-1。结论：建立的体外血脑脊液屏障模型在形态学、电阻和通透性方面具备了血脑脊液屏障的基本特性。     

胫骨平台复杂骨折三维实体模型的建立及应用

目的研究在个人计算机上对胫骨平台复杂骨折CT数据进行三维实体模型建立的可行陛及其意义。方法将5例胫骨平台复杂骨折CT扫描原始数据导人Mimics软件中,对胫骨平台复杂骨折进行三维实体模型建立。结果5例胫骨平台复杂骨折均成功建立三维实体模型。结论三维实体模型的建立对胫骨平台复杂骨折的诊疗及进一步研究具有较大的价值。     

不同培养时间软骨细胞的生物学特性

目的 探讨软骨细胞在体外不同培养时间的生物学特性。方法 把罗骨细胞置盖玻片上２,观察不同培养时间细胞的形态学变化和增殖能力,应用阿新蓝和三色染色,观察细胞在培养过程中酸性粘多糖（ＧＡＧ）、和胶原分泌情况。结果 软骨细胞经体外单层培养,传代４～５代后,细胞形态逐渐由多角形变为俊形,基质分泌减少,ＧＡＧ和胶原染色变浅。结论 软骨细胞在体外培养３周左右是作为有组织工程的最佳种子细胞。