不同核酸提取法对HCMV-DNA准确定量的影响

目的评价不同核酸提取法对人巨细胞病毒核酸(HCMV-DNA)荧光定量PCR准确定量的影响。方法含HCMVAD169株病毒颗粒的病毒培养物,以不同浓度分别与10份健康人HCMV-DNA阴性血浆标本混合;另取15份临床移植患者HC-MVpp65抗原血症阳性血浆样本,上述2种标本分别用碱裂解吸附法、沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿抽提法提取病毒核酸模板,随后运用荧光定量聚合酶链反应对样本进行定量分析,并作评价。结果15例临床检测阳性血浆标本中,酚-氯仿法提取效率为最高(P<0.05),换算后其相对提取效率为100%,而沉淀煮沸裂解法为90%,碱裂解吸附法为65%;此外,沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿法的重复性均好于碱裂解吸附法,变异系数(CV)值分别为0.26、0.30和0.39。结论经典、传统的酚-氯仿抽提法仍不失为实验室首选的核酸提取方法。     

两种HBV—DNA核酸提取法对荧光定量PCR结果的影响

目的比较免核酸提取法与煮沸裂解法对HBV—DNA提取后荧光定量PCR检测结果的影响。方法用两种前处理方法不同的试剂盒检测7．0×102～7．0×107IU／ml的HBV—DNA阳性标准品和84例临床小三阳患者血清,对结果进行重复性、相关性分析。并计算两种方法对低浓度HBV—DNA值的阳性检出率。结果阳性标准品HBV—DNA浓度大于103IU／ml样本的均值两种方法比较,相关性良好（线性相关,r=0．993）,CV比较发现,免核酸提取比煮沸裂解的CV要小。临床小三阳患者84例HBV—DNA浓度在1酽～103IU／ml的标本,免核酸提取法阳性检出率为25％高于煮沸裂解法的11．9％（P=0．015）。结论免核酸提取法操作简单,结果稳定可靠,线性范围宽,有益于乙肝病毒感染窗口期的早期诊断。     

应用分子信标荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒核酸的评价

目的：分子信标(Molecular Beacon)是近年新发展的一种荧光标记发夹形寡核苷酸探针。本目的在于对国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒(厦门泰伦生物工程有限公司的“乙型肝炎病毒荧光PCR定量检测试剂盒”)的主要性能进行评价。方法：以Roche公司的乙型肝炎病毒(HVB)定量检测试剂盒AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test Kit为参比,对分子信标定量检测临床血清标本HBV DNA的结果,进行比较和分析。结果：根据两种试剂盒定量检测34份乙型肝炎和非肝炎血清及一份系列10倍稀释血清(含高水平HBV DNA)的数据,并以Roche试剂盒的结果为参比标准,分子信标试剂盒定量检测HBV DNA的相对敏感性、特异性和符合率均为100％(分别为：19／19,15／15和34/34);其定量检测HBV DNA的线性范围和下限分别为10^3～10^3copies/ml和10^3copies/ml;两种试剂盒定量检测HVB DNA的相关系数(r)＝0．987。结论：初步结果表明：该国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒的主要性能,与Roche公司的AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test试剂盒相似,并具有较后更宽的线性定量范围。     

孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系

目的 探讨孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对53例HCMV感染的孕妇血液中HCMV DNA进行定量检测,并检测其胎儿血、新生儿血或胚胎绒毛中HCMV DNA含量.结果 胎儿发生宫内感染及妊娠不良结局与孕妇血中HCMV DNA含量有关,发生胎儿宫内感染的孕妇,其HCMV DNA含量达到105copies/mL以上,且随着血中HCMV DNA含量的增高,感染率呈显著增高趋势.结论 孕妇血中HCMV DNA含量升高是胎儿宫内HCMV感染及发生妊娠不良结局的重要因素之一,当孕妇血中病毒含量>105copies/mL时,其病毒含量可作为导致胎儿宫内感染的参考阈值.     

鸭乙型肝炎病毒核酸荧光定量PCR方法的建立及应用

目的：建立鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)荧光定量的方法。方法：根据DHBV DNAS基因区的序列设计扩增所需3条引物，通过偶联反应用AmpliSensor荧光信号标记半巢式引物，经过前期不对称扩增、半巢式扩增及在线检测建立DHBV DNA阳性标准品QPCR的标准曲线，并将70份鸭血清分别用荧光定量PCR方法和地高辛标记的DHBV DNA探针斑点杂交的方法检测，比较结果的相关性。结果：DHBV DNA阳性标准品经过30次循环后，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出有180bp、70bp两个片段，与设计的片段大小相符，扩增产物的浓度与标准品的起始浓度成正比，扩增指数的数值大小与该循环时己合成的扩增产物的量成正比，起始浓度的大小与要合成的一定扩增产物的量所需的循环次数成反比。用荧定量PCR方法和斑点杂交的方法检测血清中DHBV DNA的结果有良好的相关性(r＝0．97，P＜0.01，ν＝58)。结论：荧光定量PCR方法可作为检测DHBV DNA含量的一个重要手段。     

2403份不同类型标本中人巨细胞病毒DNA的检出情况及临床分析

目的 探讨孕妇和婴儿不同类型标本中人巨细胞病毒（HCMV）DNA的检出情况,并进行临床分析。方法 2021年5月至2021年10月收集到在昆明市妇幼保健院检验科采用荧光定量PCR法进行HCMV-DNA检测的临床标本共2 403份,对不同标本来源人群、不同类型标本的HCMV-DNA检出率进行回顾性分析。结果 2 403份不同类型的标本中,乳汁的HCMV-DNA检出率为31.70%,尿液为0.85%,血清为0%。2个年龄段（0～28 d和28 d至6个月）母亲乳汁、尿液标本的检出率随婴儿年龄增加而增高,且差异均有统计学意义（P <0.001）。同时进行了尿液及其母亲乳汁HCMV-DNA检测的221例婴儿中,检出率：乳汁22.62%,尿液0.45%,乳汁的检出率高于尿液。当母亲乳汁标本HCMV-DNA阴性,患儿自身尿液标本为阳性的占0.58%,阴性占99.42%;母亲乳汁标本HCMV-DNA阳性时,患儿自身尿液标本全为阴性。结论 孕妇及其婴儿的各类标本中,乳汁标本的HCMV-DNA检出率明显高于其他类型标本,对于疑似HCMV感染的孕妇或婴儿,建议首先采集母亲乳汁标本进行检测。然而母亲乳...     

以硅类作为吸附材料的两种不同核酸提取方法在HCV-RNA定量检测中的应用比较

目的 比较及评价以硅类作为吸附材料的两种不同核酸的提取方法在丙型病毒性肝炎定量检测中的效果.方法 选取124份抗-HCV阳性血清,分别采用核酸纯化柱提取法和二氧化硅吸附法提取HCV-RNA,用实时荧光定量PCR对其提取效果进行比较分析.结果 ①124份抗-HCV阳性血清中以柱提法提取核酸后进行HCV-RNA定量检测的阳...     

外周血干细胞移植后并发巨细胞病毒感染的荧光定量PCR检测与防治

目的评价荧光定量PCR技术对外周血干细胞移植(PBSCT)后并发巨细胞病毒(CMV)感染的临床意义.方法用荧光定量PCR技术对5例行异基因PBSCT(Allo-BSCT)、1例行自体PBSCT患者的血液,在移植前后进行CMV DNA动态检测.CMV感染的预防,移植早期采用阿昔洛韦,外周血中性粒细胞数达1.0×109/L用国产更昔洛韦5mg/kg/天.血CMV DNA阳性患者用进口更昔洛韦10mg/kg/天加膦甲酸钠80mg/kg/天治疗.结果 5例PBSCT患者血CMVDNA阴性,临床上未发生CMV引起的疾病;1例Allo-PBSCT患者在移植前后血CMV DNA呈阳性,+60天发生间质性肺炎,用进口更昔洛韦、膦甲酸钠和免疫球蛋白治疗,低氧血症一度好转,后合并细菌和真菌败血症而死亡.结论荧光定量PCR对CMV DNA的检测特异性强、快速、灵敏.PBSCT患者CMV DNA阳性者应按CMV活动性感染及时治疗.     

定量PCR监测骨髓移植患者人巨细胞病毒感染

目的用定量PCR方法监测骨髓移植患者中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)活动性感染. 方法用双标记探针水解的荧光定量PCR方法,检测4例骨髓移植患者移植前、后随访的血标本140份(其中血浆与外周血多形核细胞各50%)中HCMV DNA拷贝数,并作动态分析.血浆标本中HCMV DVA的检出与HCMV IgG和IgM作平行比较. 结果 4例患者除病例4外,均在术后30～50d间HCMV DNA拷贝数增加,同一时间外周血多形核细胞中HCMV DNA的拷贝数高于血浆.当给予适量更昔洛韦,则能抑制其继续升高.4例患者血清中HCMV IgM始终呈阴性,IgG始终呈阳性. 结论荧光定量PCR方法是用以监测骨髓移植患者中HCMV活动情况、指导临床适时用药的一种快速有效的方法.     

FQ-PCR法对孕前及孕中进行HCMV检测的临床意义

目的 运用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对孕前及孕中进行人巨细胞病毒(HCMV)检测,探讨受检者孕前及孕时感染HCMV的临床意义.方法 对302例孕前妇女和620例产前孕妇均做HCMV检测,取宫颈分泌物标本用FQ-PCR法做HCMV-DNA检测,取血清标本用ELISA法做HCMV-IgM检测.结果 302例孕前妇女宫颈分泌物标本HCMV-DNA阳性96例,血清标本HCMV-DNA阳性5例;620例产前孕妇宫颈分泌物标本HCMV-DNA阳性94例,血清标本HCMV-DNA阳性7例.可见用FQ-PCR法检测HCMV-DNA的阳性率远高于用ELISA法检测HCMV-IgM,ELISA法检测HCMV感染阳性率明显偏低,说明FQ-PCR法敏感性显著高于ELISA法.结论 宫颈分泌物组和血清组有明显差异,运用FQ-PCR技术对孕前及孕时进行HCMV检测具有重要的临床意义.     

核酸检测中两种核酸提取方法的比较

为了提高输血安全，有效缩短EIA的“窗口期”，检出病毒变异株，降低血源性病毒的传播，深圳市血液中心除按献血法要求对血液进行常规检测外，还对常规检测结果合格的血液标本进行核酸检测。     

不同提取方法对麻黄中麻黄碱提取得率的比较研究

目的　比较优选麻黄浸提方法。方法　以盐酸麻黄碱为化学成分指标 ,对中药麻黄 5种提取方法 (半仿生法、水煎煮法、温浸法、酸性乙醇回流提取法、水蒸气蒸馏法 )进行平行比较研究。结果　麻黄碱的提取得率为半仿生法 >水煎煮法 >酸性乙醇回流提取法 >温浸法 >水蒸气蒸馏法。结论　半仿生法提取效果最好     

不同核酸检测方法对献血者隐匿性乙肝病毒感染的分析

目的 分析不同核酸检测方法对献血者隐匿性乙肝病毒感染的检测能力.方法 方便抽取2015年1月-2016年10月期间到献血站进行无偿献血的8000名人员,对其分别选择Procleix Ultrio以及nested-PCR两种自动核算检测系统对其血浆标本予以HBN核酸检测,同时序列分析核酸阳性标本.结果 通过研究后可知,40名献血者HBsAg检测结果为阳性,比例经计算后为0.50%,420名献血者抗-HBc结果为阳性,比例经计算后为5.25%,25例献血者经过Procleix Ultrio以及nested-PCR能力相当,表现为阳性结果.结论 献血人员中隐匿性乙肝病毒感染比例较高,而核酸检测方法的差异性致使检测能力有所不同.     

不同浸提方法对一次性使用注射器细胞毒性的影响

目的：比较两种浸提方法对一次性使用注射器细胞毒性试验结果的影响。方法：分别采用公称容量法和克重法用含血清的1640完全培养基对一次性使用注射器进行浸提,37 ℃、24h加入含细胞的96孔板中继续培养,72h后通过MTT比色法进行吸光度检测,采用细胞增殖度比较两种浸提方法对细胞毒性试验结果的影响。结果：1mL一次性使用注射器用两种浸提方法进行细胞毒性试验结果均为1、2级,两种浸提方法的相关系数R为0.704,P为0.034;5mL一次性使用注射器用两种浸提方法进行细胞毒性试验结果均为1、2级,两种浸提方法的相关系数R为0.689,P为0.040;10mL一次性使用注射器用两种浸提方法进行细胞毒性试验的结果有6批为1、2级,有3批为4级,两种浸提方法的相关系数R为0.956,P为0.000。结论：用两种浸提方法对3种规格的注射器进行细胞毒性试验,3种规格一次性使用注射器的细胞毒性试验结果均具有良好的相关性,两种浸提方法对一次性使用注射器细胞毒性的结果基本无影响。     

不同提取方法对测定蜂胶产品总黄酮含量的影响

【目的】探讨不同提取方法对测定蜂胶产品中总黄酮含量的影响。【方法】以芦丁为对照品,采用分光光度法测定不同方法所提取的蜂胶中总黄酮的含量。【结果】药典法和甲醇索氏提取法所得总黄酮的含量较高,以芦丁计分别为0.1982、0.1978 mg/g,两者无显著性差异。【结论】与药典法比较,甲醇索氏提取法简便、省时、经济,在测定总黄酮的含量时可以考虑用甲醇索氏提取法来代替药典法。     

不同提取方法测定野马追药材中绿原酸含量比较研究

目的：研究野马追药材中绿原酸含量测定的前提取方法及绿原酸含量的质控标准。方法：采用高效液相色谱法,比较了不同的提取方法、提取溶媒、提取时间和溶媒用量测定野马追药材中绿原酸含量。结果：采用超声提取方法提取野马追药材中绿原酸,且绿原酸高效液相法测定进样量在0.0908～1.362μg（r=0.9999）间呈良好的线性关系,平均回收率为100.12%,RSD为1.31%。结论：绿原酸超声提取方法和高效液相测定含量方法简便,可用于该药材的质量控制。     

不同提取方法测定野马追药材中绿原酸含量比较研究

目的:研究野马追药材中绿原酸含量测定的前提取方法及绿原酸含量的质控标准。方法:采用高效液相色谱法,比较了不同的提取方法、提取溶媒、提取时间和溶媒用量测定野马追药材中绿原酸含量。结果:采用超声提取方法提取野马追药材中绿原酸,且绿原酸高效液相法测定进样量在0.0908～1.362μg(r=0.9999)间呈良好的线性关系,平均回收率为100.12%,RSD为1.31%。结论:绿原酸超声提取方法和高效液相测定含量方法简便,可用于该药材的质量控制。     

核酸对老年激素水平影响

目的 :探讨核酸对老年性激素水平的影响。方法 :选择 6 0～ 75岁健康老年 2 0人 ,男女各半 ,口服核酸 3个月后 ,应用放射免疫分析方法 (RIA)测定睾丸酮 (T)、雌二醇 (E2 )、促卵泡激素 (FSH)和促黄体生成素 (LH)的含量。结果 :口服核酸后男性T和女性E2 含量明显增高 ,FSH和LH含量男女性均明显下降。以上经统计学处理 ,差异显著 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 :说明核酸能够促进老年性功能 ,它是抗衰老的重要物质     

核酸对老年人性激素水平的影响

目的 探讨口服核酸对老年人体内性激素水平的影响。方法 选择60－75岁健康老年20人,男女各半,口服珍奥核酸3月后,应用放射免疫分析方法（RIA）测定睾酮（T）、雌二醇（E2）、促卵泡激素（FSH0和促黄体生成素（LH）的含量。结果 口服核酸后男性T玫女性E2含量明显增高,FSH和LH含量男女性均明显下降,经统计学处理,差异显（P＜0．05,P＜0．01）。结论 核酸对老年人的性功能有一定的促进作用。