丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚（３０－３００μｍｏｌ·Ｌ－１）影响大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）与肌醇－１,４,５－三磷酸（ＩＰ３）合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理．结果表明,与丙泊酚共同培养７２ｈ,对ＰＡＳＭＣ［Ｃａ２＋］ｉ基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素（ＮＥ３μｍｏｌ·Ｌ－１）引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）时,丙泊酚抑制ＮＥ升高［Ｃａ２＋］ｉ作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制ＮＥ促进ＩＰ３合成作用．结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制ＩＰ３介导的细胞内钙释放密切相关．     

经典活化型/替代活化型巨噬细胞对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨经典活化型(M1)/替代活化型(M2)巨噬细胞对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法将分离培养的C57BL/6小鼠的VSMC与小鼠的骨髓来源的M1/M2型巨噬细胞分别按照1∶1,1∶2,1∶4,1∶8比例共培养并加入氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)40 ng/L刺激24 h后,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-10的浓度,用Annex in V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测平滑肌细胞凋亡率。设不加巨噬细胞为对照组。结果按上述比例共培养后M1型巨噬细胞共培养组(M1组)与M2型巨噬细胞共培养组(M2组)相比较上清液中TNF-α的浓度分别是(119.1±18.4)pg/ml与(28.6±6.4)pg/ml;(139.9±5.8)pg/ml与(24.6±1.3)pg/ml;(152.0±4.5)pg/ml与(23.1±4.1)pg/ml;(181.0±14.2)pg/ml与(16.1±1.7)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);而IL-10的浓度分别是(25.4±5.8)pg/ml与(30.3±4.9)pg/ml(P=0.32);(21.1±0.8)pg/ml与(37.3±4.3)pg/ml;(16.9±1.2)pg/ml与(44.4±8.5)pg/ml;(14.6±2.7)pg/ml与(61.8±12.5)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);VSMC凋亡率分别是(12.0±1.1)%与(5.4±1.2)%;(15.3±1.2)%与(4.4±0.8)%;(17.0±1.2)%与(4.0±1.1)%;(19.0±1.9)%与(2.1±0.8)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 M1型巨噬细胞与VSMC共培养促进了平滑肌细胞的凋亡,而M2型巨噬细胞与VSMC共培养抑制平滑肌细胞的凋亡。可能是由于M1型巨噬细胞能分泌更多的TNF-α,促进VSMC的凋亡;相反,M2型巨噬细胞分泌大量IL-10,抑制VSMC的凋亡。     

家兔主动脉血管平滑肌细胞内钙动员及小檗胺作用的共聚焦研究

观察小檗胺 (Ber) 对高钾除极,Bay K8644,5-羟色胺 (5-HT) 及咖啡因升高细胞内钙水平 (［Ca²⁺］_i) 的影响。以Fluo-3/AM负载家兔培养的主动脉平滑肌细胞 (VSMC),共聚焦显微术测定［Ca²⁺］_i,结果以荧光强度(FI)表示. 结果：(1) 在细胞外钙为1.3 mmol·L^-1时, VSMC胞浆静息FI明显高于核区, 且不受Ber的影响. (2) Ber 10-100 μmol·L^-1预处理可抑制KCl 60 mmol·L^-1或Bay K8644 100 μmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i,抑制5- HT 1 μmol·L^-1升高［Ca²⁺］_i的持续相,但不影响［Ca²⁺］_i的一过性升高。维拉帕米10 μmol·L^-1具有相似作用. (3) 在无钙Hanks液中,Ber预处理对咖啡因100 mmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i无明显抑制作用。结果表明,Ber可阻断外钙内流,但不抑制内钙释放,这可能与Ber阻断电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道的作用有关.     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及对细胞内活性氧和Ca2+动态变化的影响

目的研究辛伐他汀诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡及细胞内活性氧与Ca2+水平的变化,以探讨凋亡机制.方法20 μmol·L-1辛伐他汀处理K562细胞,24 h 后光镜观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧和细胞内游离Ca2+水平.结果20 μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞 48 h 后出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;AnnexinV-FITC/PI检测细胞早期凋亡率,处理组凋亡率高于对照组,随药物作用时间延长逐渐增大,具有时间依赖性.荧光染料2',7'-二氯荧光乙酰乙酸(2',7'-dichloro fluorescein diacetate, DCFH-DA)检测K562细胞内活性氧,不同时间处理组与对照组比较活性氧均升高,峰值时间为 24 h,与对照组比较发生显著改变.荧光染料Fluo-3AM检测K562细胞内游离Ca2+浓度,不同时间细胞内游离Ca2+浓度均升高,峰值时间为 12 h,与对照组比较发生显著变化.结论辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过提高细胞内活性氧及游离Ca2+水平,从而导致细胞凋亡.     

MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及对caspase3表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)表达的影响。方法采用多个浓度(2.5,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC48h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测caspase3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达。结果蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导VSMC凋亡的机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)活性,促进caspase3基因转录,使细胞内caspase3增加而促进细胞凋亡。     

色满卡林对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：观察色满卡林对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法：30只12 wk龄SHR,随机分为高血压组、色满卡林组,另设正常对照组。色满卡林组给予色满卡林0.6 mg·kg~(-1)·d~(-1),分2次灌胃；另2组每日给予等量的生理盐水,共16 wk。监测尾动脉收缩压。用免疫组化法检测Bcl-2,Bax和PCNA蛋白表达。荧光标记TUNEL法检测VSMCs凋亡,计算VSMCs凋亡指数(SMAI)。结果：高血压组与正常对照组比较,收缩压明显增高(P＜0.05)；VSMCs中的Bcl-2,PCNA蛋白表达明显增强(P＜0.05)；SMAI明显减少(P＜0.01)；Bax蛋白表达2组间差异无显著意义(P＞0.05)。与高血压组比较,色满卡林组尾动脉收缩压呈降低趋势,但差别无显著意义(P＞0.05)；VSMCs的Bcl-2和PCNA蛋白的表达减少(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降；SMAI增加(P＜0.05)。结论：色满卡林促进了SHR的VSMCs凋亡,可能机制是通过调节VSMCs的Bcl-2/Bax蛋白表达平衡。     

维拉帕米诱导血管平滑肌细胞凋亡及其在再狭窄机制中的作用

目的探讨维拉帕米能否诱导血管平滑肌细胞凋亡及细胞凋亡在再狭窄机制中的作用。方法分别取正常兔髂动脉,动脉粥样硬化及再狭窄髂动脉血管中膜组织进行平滑肌细胞培养,［３Ｈ］ ＴｄＲ参入法测定细胞增殖活性,维拉帕米诱导平滑肌细胞凋亡,通过电镜观察,ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞仪了解各组平滑肌细胞凋亡情况。结果维拉帕米诱导下,平滑肌细胞的变化具有凋亡的典型特征。血管成形术后,细胞增殖及凋亡系统均被激活,再狭窄组细胞增殖程度增加２６％,细胞凋亡激活程度增加１９％,二者比例失衡。结论维拉帕米能够引起血管平滑肌细胞凋亡,而平滑肌细胞凋亡的相对减少在再狭窄的发生机制中发挥一定的作用。     

肾素前体受体依赖性诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖和肥大

目的研究肾素前体通过非血管紧张素Ⅱ途径诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖和肥大。方法利用3 H同位素标记的胸苷和亮氨酸的结合检测血管平滑肌细胞增殖和肥大。肾素受体siRNA进行受体表达抑制。结果肾素前体处理细胞48h后剂量依赖性诱导细胞内3 H同位素标记的胸苷和亮氨酸含量增高(n=6,P<0.05)。而且,20nmol/L肾素前体处理24h后细胞内3 H同位素标记的亮氨酸显著增高(n=6,P<0.05)。预处理血管紧张素Ⅱ受体抑制剂(ARB)坎地沙坦(100nmol/L)和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂卡托普利(1mmol/L)对20nmol/L肾素前体诱导的细胞增殖和肥大没有作用,然而对于肾素受体siRNA处理后的细胞肾素前体不能引起细胞的增殖和肥大。结论肾素前体诱导血管平滑肌细胞产生的增殖和肥大效应是肾素受体依赖的,而不是通过血管紧张素Ⅱ的产生发挥作用。     

全反式维A酸对血管平滑肌细胞增殖，细胞内钙离子和氢离子含量的影响

The effect of all trans retinoic acid (ATRA) on changes of DNA synthesis, intracellular free calcium content (［Ca²⁺］_i) and intracellular pH (pH_i) of cultured rabbit vascular smooth muscle cells (VSMC) induced by fetal calf serum (FCS) were studied by ［³H］ thymidine incorporation, Fura-2/AM and BCECF/AM fluorescent probe mark and digital image processing techniques. The results showed that (1) ATRA (0.01, 0.1 and 1.0 μmol·L^-１) significantly inhibited 20% FCS-induced VSMC DNA synthesis and its maximal inhibitory rate at 1 μmol·L^-１was 90%; (2) incubated with 20% FCS for 5 min, VSMC ［Ca^２＋］_i increased and VSMC ［H^＋］_i decreased. These effects of FCS were significantly inhibited by ATRA 0.1 μmol·L^-1 preincubated for 10 min. The results indicate that ATRA lowering VSMC ［Ca²⁺］_i and pH_i may be attribute to inhibition of the proliferation of VSMC.     

钙诱导的钙释放引起一株血管平滑肌细胞株凋亡

目的：对钙诱导的钙释放引起血管平滑肌细胞株A10凋亡的可行性及其钙调节机制进行初步研究.方法：以钾离子孵育并以多种工具药进行干预,观测对A10细胞细胞核形态学,DNA琼脂糖凝胶电泳,细胞凋亡率,细胞线粒体膜电位的影响.结果：钾离子孵育能浓度相关性地促进A10细胞凋亡;硝本地平、ryanodine、BAPTA/AM、环胞素对中浓度钾离子孵育所致A10细胞凋亡有抑制作用;Zn^2＋、肝素对钾离子所致A10凋亡无抑制作用.结论：钾离子孵育将导致外钙经电压依赖性钙通道内流,通过升高胞浆内钙离子浓度激活ryanodine受体而不是IP3受体释放内钙,促进线粒体大量摄取而致A10细胞凋亡,该过程可能需要内钙持续释放但与容量依赖性外钙内流无关.     

预适应和前胡丙素对缺氧肥厚血管平滑肌胞内钙离子浓度及NO含量的影响

观察了预适应和前胡丙素对缺氧肥厚血管平滑肌胞内钙离子浓度 ([Ca2 +]i)及NO含量的影响 .①建立两肾一夹肾血管性高血压大鼠模型 ,分离培养主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC) ,以fura 2 /AM为钙指示剂。测得前胡丙素 (2 0mg·kg- 1·d- 1,术后第9周起ig 9周 )治疗和缺氧预适应 (5minN2 ,5min95%O2 + 5%CO2 混合气体 ,循环 3次 )对缺氧 (30minN2 )所致肥厚VSMC对KCl和去甲肾上腺素刺激反应性升高 ([Ca2 +]i 升高 )有明显的拮抗效应 .②用血管紧张素Ⅱ刺激致VSMC肥厚 ,前胡丙素 (10μmol·L- 1温育 2 4h)和缺氧预适应合用使缺氧肥厚VSMC的NO含量恢复至正常VSMC水平 .结果提示前胡丙素与缺氧预适应对肥厚VSMC缺氧损伤有协同性的保护作用 .     

醋柳黄酮对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的 :探讨醋柳黄酮 (TFH )、槲皮素(Que)、异鼠李素 (Isor)对自发性高血压大鼠 (SHR)及Wistar Kyoto大鼠 (WKY )血管平滑肌细胞(VSMC)胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 :采用钙荧光探针Fluo 3/AM检测TFH及其主要单体Que和Isor,对培养的SHR及WKY的VSMC[Ca2 + ]i 水平在高钾 (K+ )、去甲肾上腺素 (NE)、血管紧张肽Ⅱ (AngⅡ )刺激下的改变 ,并与传统的钙拮抗剂维拉帕米进行对照研究。结果 :(1)TFH10 0mg·L- 1,Que 0 .1mol·L- 1,Isor 0 .1mol·L- 1对静息状态SHR的VSMC [Ca2 + ]i 有一定的抑制作用 (P <0 .0 1) ;而对WKY的VSMC [Ca2 + ]i无明显影响 (P >0 .0 5 )。 (2 )高K+ 使SHR[Ca2 + ]i 增加明显强于WKY(P <0 .0 1) ,TFH ,Que ,Isor明显抑制高K+ 去极化引起的SHR和WKY [Ca2 + ]i 升高 ,与维拉帕米作用相似 ,其对SHR [Ca2 + ]i升高的抑制作用明显强于对WKY(P <0 .0 1)。 (3)NE ,AngⅡ使SHR[Ca2 + ]i增加明显大于WKY (P <0 .0 1) ,TFH ,Que ,Isor对NE ,AngⅡ通过受体介导引起的SHR和WKY的VSMC[Ca2 + ]i 升高具有明显的抑制作用。 (4 )无细胞外钙存在下 ,TFH ,Que ,Isor对NE引起的SHR和WKY的VSMC[Ca2 + ]i 也具有一定程度的抑制效应 ,其对SHR[Ca2 + ]i 升高的抑制效应明显强于对WKY(P <0 .0 1)?     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用，并研究福辛普利对其的影响。方法：采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和福辛普利对其的影响。结果：血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngⅡ作用，对细胞凋亡有一定的影响，同时可影响凋亡调控基因的表达。结论：血管紧张素Ⅱ具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用，尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用。     

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

他汀类药物与血管平滑肌细胞凋亡

血管平滑肌细胞（VSMC）的异常增殖和迁移在粥样斑块形成和冠状动脉介入治疗（PCI）后再狭窄中起非常重要的作用。他汀类药物不仅是一种有效的调脂药，同时还有多种调脂以外的作用。如他汀类药物可以抑制VSMC的增殖和迁移，并诱导其凋亡。临近病变部位的中层VSMC的凋亡可能造成斑块纤维帽容易破裂，进而引起斑块不稳定和临床事件。但研究证实他汀类药物有稳定斑块的作用，且新生内膜VSMC对他汀类药物诱导的凋亡作用比普通的血管中层VSMC更敏感。因此，他汀类药物的促新生内膜VSMC凋亡作用可能对预防PCI术后再狭窄起有益作用。具体作用机制以及临床上如何合理发挥此类作用尚待进一步研究。