靶向HER-2 mRNA反义寡核苷酸对SK-BR-3乳腺癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响

目的　检测HER 2特异性的反义寡核苷酸HA82 4对SK BR 3乳腺癌细胞Caspase 3蛋白表达的影响。 方法　选用HER 2高表达的SK BR 3乳腺癌细胞株作为试验的细胞株。HA82 4合成如前所述 ,HA4为已报道的阳性序列 ,Scramble设定为随机对照序列。上述药物分别以浓度为 2 0 0nmol·L-1孵育SK BR 3细胞 8h和 36h ,之后采用逆转录PCR法与免疫细胞化学技术检测SK BR 3细胞HER 2mR NA及Caspase 3蛋白表达水平。 结果　与Scramble对照序列相比 ,HA82 4、HA4能抑制HER 2mRNA的表达 ,HA82 4作用更强 ;与Scramble相比 ,HA82 4、HA4对Caspase 3蛋白表达水平则无影响。结论　HA82 4、HA4这两种靶向HER 2mRNA反义药物对SK BR 3乳腺癌细胞株增殖的抑制作用可能与激活Caspase 3蛋白无关。     

长春瑞滨诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡及机制

目的　观察长春瑞滨 (VRB)诱导人肺癌Calu 3细胞凋亡时Bcl 2和半胱天冬酶 3的表达有无变化。方法　以不同浓度的VRB( 2 0 ,40和 60 μmol·L-1)作用于体外培养的人肺癌Calu 3细胞 2 4h后 ,TUNEL法和吖啶橙染色法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白表达水平 ;以半胱天冬酶 3荧光分析检测试剂盒测定肺癌细胞半胱天冬酶 3活性。结果　VRB( 2 0 ,40和60 μmol·L-1)处理细胞 2 4h ,TUNEL法及吖啶橙染色均观察到典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞仪检测VRB处理的肺癌细胞凋亡率分别为 ( 3 .1±0 .6) % ,( 7.8± 1 .2 ) %和( 1 9.6± 4.3 ) % ,较对照组 (凋亡率为 0 )显著增高且呈剂量依赖性 (P <0 .0 1 ) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率分别为 ( 3 7.6±6.9) % ,( 2 5 .4±6.2 ) %和( 8.4±2 .5 ) % ,较对照组 ( 4 8.3±7.1 ) %显著降低且呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ;肺癌细胞半胱天冬酶 3活性分别为 ( 3 3 2± 1 6) ,( 4 1 7± 1 1 )和 ( 63 1± 2 7)μmol·L-1·h-1,较对照组 ( 1 95±1 2 ) μmol·L-1·h-1显著增高且呈剂量依赖性(P <0 .0 1 )。结论　VRB可以诱导肺癌细胞凋亡 ,抑制Bcl 2表达及增强半胱天冬酶 3活性     

骨化三醇体外诱导人肝癌细胞IGFBP-3的表达及细胞凋亡的实验研究

目的:探讨骨化三醇[2β-(3一hydro-)-calcitriol]对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用MTT比色法观察骨化三醇对HepG2的生长抑制作用,以荧光显微镜和流式细胞仪观察HepGz的凋亡,RT-PCR检测骨化三醇处理前后HepG2细胞中胰岛素样生长因子受体结合蛋白-3(IGFBP- 3)mRNA表达水平的变化。结果:骨化三醇显著抑制HepG2细胞的体外增殖,并诱导细胞凋亡。不同浓度的骨化三醇(10-8,10-7,10-6,10-5mol·L-1)作用HepG2 48 h细胞凋亡率分别达(27.3±s 2．3)％,(33±6)％,(35±5)％,(48±7)％,明显高于对照组(8±4)％(P<0．05)。RT-PCR结果显示骨化三醇处理HepG2 24 h后IGFBP-3 mRNA表达水平明显升高。结论:骨化三醇体外显著抑制HepG2增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与通过激活细胞内IGFBP-3 mRNA的表达有关。     

乳腺癌原癌基因HER-2反义寡脱氧核苷酸-叶酸诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究乳腺癌原癌基因HER-2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对乳腺癌细胞SK-Br-3凋亡和蛋白表达的影响。方法:采用DNA原位末端标记染色和Annexin-V荧光标记法检测ASODN-叶酸(FA)对乳腺癌细胞凋亡的影响,免疫组化检测p185蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,ASODN-FA组凋亡指数、早期凋亡细胞阳性率、p185表达平均光密度值2组分别为(4.60±1.76)%、(17.37±2.78)%,(2.75±1.09)%、(18.62±1.80)%,0.31±0.06、0.11±0.02(P<0.05)。结论:HER-2A-SODN可诱导乳腺癌细胞SK-Br-3的早期和晚期凋亡,p185蛋白表达降低。     

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca~(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响

目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 ,而改善VD临床症状     

槲皮素对多柔比星致乳大鼠心肌细胞抗氧化酶活性及Fas/FasL表达变化的影响

目的探讨槲皮素对多柔比星致乳大鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法原代培养乳大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、多柔比星1.72μmol·L-1损伤组和多柔比星+槲皮素25,50及100μmol·L-1组。槲皮素与心肌细胞培养3h后,加入多柔比星继续培养24h,正常对照组仅加等量DMEM培养液。倒置显微镜下观察细胞生长状态,比色法检测培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,用RT-PCR和Western印迹法检测Fas和FasL的mRNA和蛋白的表达。结果与正常对照组相比,多柔比星损伤组心肌细胞生长状态差,GSH-Px和SOD的活性降低,Fas和FasL的mRNA和蛋白的表达均升高。槲皮素25,50及100μmo·lL-1均可拮抗多柔比星所致的上述变化:GSH-Px分别为(76±3),(73±4),(71±3)vs(69±3)kU·L-1;SOD活性分别为(31±2),(29±2),(29±2)vs(26±2)kU.L-1;Fas mRNA:0.61±0.11,1.04±0.12,1.29±0.11 vs 1.61±0.16;FasL mRNA:0.81±0.07,1.24±0.10,1.57±0.09vs1.79±0.11;Fas蛋白:1.08±0.12,1.54±0.10,1.89±0.11 vs 2.15±0.15;FasL蛋白:1.51±0.08,1.70±0.12,2.20±0.09 vs 2.41±0.26。结论槲皮素可减轻多柔比星致乳大鼠心肌细胞凋亡,Fas和FasL蛋白表达的减少是其可能机制之一。     

虫草菌丝对实验性肝纤维化的防治作用及其机制研究

目的 :探讨虫草菌丝对实验性慢性肝炎纤维化形成的抑制作用及其可能的作用机制。方法 :以CCl4 及乙醇诱导大鼠肝纤维化模型 ,自造模 10d后给予虫草菌丝悬浊液灌胃 ,同时设立正常对照组和模型对照组。于造模 9wk后处死全部大鼠 ,取血及肝组织标本。使用HE染色法观察肝组织形态学变化和肝纤维化病理学分级 ,生化及放免法测定血清ALT ,AST ,透明质酸 (HA) ,板层素 (LN)含量 ,使用免疫组化法及原位杂交法观察α 平滑肌动蛋白(α SMA) ,转化生长因子 β1(TGFβ1) ,血小板衍生生长因子 (PDGF) ,Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白或mRNA表达情况。结果 :与模型组相比 ,虫草组大鼠血清HA ,LN ,AST ,ALT含量均显著下降 (2 0 2±s 79vs316± 94 ;5 0± 3vs 6 0± 10 ;86± 34vs 2 2 4± 179;14 7± 6 0vs 2 73± 130 ;P <0 .0 5 )。肝组织表达α SMA ,TGFβ1,TGFβ1mRNA ,Ⅰ型胶原mRNA ,PDGF均显著减少 (0 .2± 0 .14vs 1.7± 1.4 ;1.7±0 .5vs 3.2± 1.2 ;1.1± 0 .8vs 2 .6± 1.4 ;0 .9±0 .4vs 1.9± 0 .7,P <0 .0 5 )。Ⅲ型胶原mRNA表达呈下调趋势 (0 .4± 0 .3vs 1.0± 0 .7,P =0 .0 6 95 )。而PDGFmRNA的表达下调则不明显 (0 .4± 0 .3vs 0 .7± 0 .5 ,P >0 .0 5 )。结论 :虫草菌丝能够抑制慢性肝炎纤维化的形成 ,延缓其     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:将泛素蛋白酶体抑制剂MG-132加入胃癌细胞SGC7901,用四氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测生存素的表达。结果:MG-132对胃癌细胞有显著的抑制作用,24,48h的IC50分别为80.9,9.1μmol·L-1;MG1325.0μmol·L-1作用胃癌细胞24,48,72,96h后,细胞凋亡率分别为(4.2±s0.6)%,(30±4)%,(47±6)%,(53±6)%,生存素在胃癌细胞中呈高表达,经MG132作用后,表达明显降低。结论:MG132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并下调生存素的表达。     

阿柔比星与米托蒽醌联合应用对HeLa细胞凋亡及拓扑异构酶Ⅱ表达的影响

目的　探讨拓扑异构酶Ⅱ (TopoⅡ )催化抑制剂阿柔比星 (ACR)对TopoⅡ毒性抑制剂米托蒽醌(MIT)杀伤HeLa细胞的影响。方法　应用MTT方法检测药物单用和联合应用对HeLa细胞的抑制作用 ;采用单细胞凝胶电泳方法检测药物对DNA链断裂的影响 ;双荧光方法检测细胞凋亡率 ;免疫细胞化学方法观察TopoⅡ表达变化。结果　MTT法检测表明 ,ACR能够减低MIT对HeLa细胞的抑制作用。单细胞凝胶电泳显示 ,MIT在 1,10 ,10 0nmol·L- 1浓度作用下 ,细胞DNA断裂长度分别为 (3.0± 0 .3) ,(6 .8± 0 .4 ) ,(10 .8± 1.0 ) μm。上述浓度MIT与 0 .2μmol·L- 1的ACR共同作用后 ,DNA断裂长度依次减低为 (1.0± 0 .3) ,(3.9± 0 .4 ) ,(6 .1± 0 .3) μm。两者相比差别明显 (P <0 .0 1)。细胞凋亡检测表明 ,MIT在 1,10 ,10 0nmol·L- 1浓度作用下 ,细胞凋亡分别为(9 .9± 1.7) % ,(5 5 .4± 3.9) % ,(98.0± 7.1) %。上述浓度MIT与 0 .2 μmol·L- 1的ACR共同作用后细胞凋亡依次降低为 (3.9± 0 .3) % ,(2 5 .5± 3.5 ) % ,(79.2± 5 .3) %。两者相比差别明显 (P <0 .0 1)。进一步采用免疫组织化学方法检测表明 ,ACR与MIT合用组较MIT单用组TopoⅡ的表达显著减少。结论　ACR可拮抗MIT对HeLa细胞的杀伤作用。     

中、低热量饮食,中等量运动和二甲双胍治疗青少年肥胖病人初探

目的 :探讨中、低热量饮食 ,中等量运动和二甲双胍治疗青少年肥胖的疗效。方法 :2 4例单纯性肥胖青少年志愿者 ,随机分为A ,B 2组。A组 1～ 8wk和B组 17～ 2 4wk服用二甲双胍 0 .2 5 g ,tid ;B组 1～ 8wk和A组 17～ 2 4wk服用安慰剂 1片 ,tid。结果 :A ,B 2组病人治疗前后的BMI分别为 (35±s 9vs 2 6± 6;35± 9vs 2 5± 6)kg·m- 2 ,WHR (1.0 2± 0 .10vs 0 .84± 0 .0 6;1.0 1± 0 .0 8vs0 .84± 0 .0 6) ,Fins[(80± 2 1) ,(5 9± 14) ;(80± 2 3) ,(5 4± 13)mU·L- 1],TG[(3.8± 1.6) ,(1.8± 1.0 ) ;(3.9± 1.5 ) ,(1.6± 0 .9)mmol·L- 1],TC[(6.8±2 .1) ,(5 .0± 1.1) ;(6.9± 2 .1) ,(5 .0± 1.7)mmol·L- 1],BUA[(4 93± 132 ) ,(35 6± 79) ;(4 91± 15 3) ,(378± 10 6) μmol·L- 1]和γ GT [(5 2± 13) ,(32±10 ) ;(5 1± 12 ) ,(32± 10 )U·L- 1]均明显降低 (均P<0 .0 5 ) ;A组 1～ 8wk服用二甲双胍时BMI ,WHR ,FIns ,TG ,γ GT的降低较B组更明显 ,而B组 17～ 2 4wk加用二甲双胍后与A组的差异消失。结论 :中、低热量饮食 ,中等量运动和二甲双胍对青少年肥胖病人有一定治疗作用     

靶向HER-2 mRNA模拟二级结构中局部保守序列的反义药物优化设计及QSAR分析(英文)

目的:验证mRNA二级结构保守性在反义药物设计中的作用,获得靶向HER-2 mRNA的优于已报道阳性药物的序列。方法:RNAstructure用于模拟HER-2 mRNA二级结构,设计21个反义硫代寡脱氧核苷酸(S-ODN)。用SK-BR-3乳腺癌细胞评价S-ODN体外活性,SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析,RT-PCR检测S-ODN对HER-2表达的影响。结果:11个靶向模拟二级结构完全保守局域(LM)的S-ODN中,有9个获得低于或相似于HA4的IC_(50)值,且其IC_(50)值显著低于靶向部分保守与非保守LM的AS-ODN(P<0.05),靶二级结构单元膨胀环的碱基数,靶结构自由能在QSAR方程中有统计意义,多元回归R=0.967,P=0.005)。结论:针对模拟靶mRNA二级结构中高度保守LM部位进行反义药物设计可提高阳性率,并获得优于阳性对照的S-ODN。     

不同靶点的反义bcl—2寡核苷酸对白血病细胞足叶乙甙敏感性影响的研究

目的探讨针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对足叶乙甙诱导HL-60和K562细胞凋亡的影响。方法应用MTT法和流式细胞仪检测反义寡核苷酸与足叶乙甙联合作用的HL60和K562细胞中bcl-2蛋白表达和细胞凋亡及足叶乙甙IC50值。结果10μmol     

赖氨大黄酸通过抑制HER-2信号通路诱导乳腺癌SK-Br-3细胞凋亡

为研究赖氨大黄酸(rhein lysinate，RHL)对人乳腺癌细胞株SK-Br-3细胞增殖、凋亡的影响及HER-2信号通路在其中的作用。应用MTT法检测赖氨大黄酸对SK-Br-3细胞增殖的影响；应用流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡；应用Western blotting检测HER-2信号通路蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平；应用RT-PCR和免疫化学方法分别检测HER-2 mRNA和蛋白表达水平。结果显示， 赖氨大黄酸能有效抑制乳腺癌SK-Br-3细胞增殖， 作用48 h的IC₅₀值为85 μmol·L^{-1，并能诱导其凋亡，随药物浓度的增加，细胞凋亡率也逐渐升高；Western blotting结果显示，赖氨大黄酸抑制HER-2蛋白表达和蛋白磷酸化，抑制NF-κB蛋白表达，升高p53和p21蛋白表达；RT-PCR和免疫化学结果表明，赖氨大黄酸能抑制HER-2 mRNA的转录水平，从而抑制其蛋白表达。因此，赖氨大黄酸能有效抑制SK-Br-3细胞增殖，并诱导其凋亡，HER-2/NF-κB/p53/p21参与了赖氨大黄酸诱导SK-Br-3细胞凋亡的过程。赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的难题，并且能够通过HER-2信号通路诱导细胞凋亡，有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。}     

Reversal of HER-2 over-expression renders human ovarian cancer cells highly resistant to taxol

Currently, the treatment options for advanced ovarian cancer are limited. Thus, the majority of the patients are treated with drugs with considerable side effects but in many cases without clinical benefit. The relationship between activation of an oncogene like the HER-2 receptor and drug sensitivity, is of considerable interest as this molecular marker may allow to better predict response to chemotherapy. The aim of this study was to evaluate whether over-expression of the HER-2 receptor would modulate drug responsiveness to doxorubicin, cisplatin and taxol in ovarian cancer cells. An anti-HER-2-targeted ribozyme approach was used to abrogate HER-2 expression in human SK-OV-3 ovarian cancer cells. SK-OV-3 cells expressing very low residual levels of HER-2 protein, were then assessed for their sensitivity to doxorubicin, cisplatin and taxol and compared to control cells. HER-2 expression had no effect on the cytotoxicity of doxorubicin (IC50=10 nM) or cisplatin (IC50=5 microM) in proliferation assays. In contrast, the sensitivity to taxol was increased approximately 70-fold in SK-OV-3 ovarian cancer cells expressing high levels of HER-2 (IC50=10(-5) nM) compared to HER-2 depleted cells (IC50=7x10(-4) nM). If these findings can be confirmed in patients, it could be possible that HER-2 expression may serve as a marker for response to taxol treatment in ovarian cancer patients.     

siRNA抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞株VEGF基因表达的实验研究

目的研究siRNA(small interfering,RNA)对乳腺癌细胞SK-BR-3的VEGF基因表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成一条针对VEGF基因的siRNA,使用脂质体转染的方法导入细胞,观察转染后乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖变化,MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测转染后VEGFmRNA表达水平的变化,ELISA检测蛋白表达的下降效果。结果所设计的siRNA能有效抑制乳腺癌细胞的生长;降低了VEGFmRNA的表达;蛋白表达水平也显著降低。作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有这种效果,不起作用。结论 siRNA可以有效抑制细胞株SK-BR-3中VEGF的表达,从而抑制细胞生长。应用RNA干扰技术可以有效抑制肿瘤细胞的增殖。     

HER-2癌基因反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨癌基因HER-2反义寡核苷酸联合放疗对乳腺癌细胞的影响。方法实验分组如下:HER-2反义寡脱氧核苷酸组、HER-2正义寡脱氧核苷酸组、叶酸对照组和空白对照组。用RT-PCR方法、MTT法及平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞SK-Br-3受药物处理后,经60Coγ射线照射,HER-2表达水平、细胞存活分数和集落形成率的改变。结果经HER-2反义寡核苷酸-叶酸处理的细胞,对60Coγ射线的放射敏感性增加,细胞的HER-2癌基因表达水平降低,存活分数及集落形成率与正义寡核苷酸、叶酸和空白对照组比较明显降低(P<0.05),而正义寡核苷酸、叶酸与空白对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论HER-2反义寡核苷酸抑制癌基因表达的作用增加乳腺癌细胞SK-Br-3对放疗的敏感性。     

Evaluation of Generation 2 and 3 Poly(Propylenimine) Dendrimers for the Potential Cellular Delivery of Antisense Oligonucleotides Targeting the Epidermal Growth Factor Receptor

PURPOSE: To evaluate low generation, G2 and G3, poly(propylenimine) dendrimers for the potential cellular delivery of antisense oligonucleotides (ODNs) targeting the epidermal growth factor receptor (EGFR) in A431 epidermoid carcinoma cells. METHODS: Cell cytotoxicity of the dendrimers was evaluated using trypan blue exclusion assays. Cellular uptake studies of fluorescently labeled ODNs were performed using fluorescence-activated cell sorting analysis. Intracellular fate of dendrimer-delivered ODNs was assessed in both fixed and live cells using fluorescent microscopy. Antisense ODN activity was assessed in terms of cancer cell growth, inhibition of target EGFR protein, and reduction in mRNA levels. RESULTS: G2 dendrimer (DAB-8) was less toxic than G3 (DAB-16) dendrimer in A431 cells, with IC50 of >175 and approximately 30 microg/ml, respectively. Uptake of fluorescently labeled ODN:dendrimer complexes was increased by up to 100-fold compared to a marker of fluid-phase endocytosis and up to 9-fold over free ODN at the optimal dendrimer:ODN (w/w) ratio of 5:1. Uptake of dendrimer:ODN complexes was significantly reduced at 4 degrees C (p < 0.05). Live cell fluorescent microscopy resulted in an intracellular distribution of dendrimer:ODN complexes that was suggestive of endocytic uptake; in contrast, cell fixation resulted in an artefactual nuclear localization. Treatment of A431 cells with anti-EGFR antisense ODN:dendrimer complexes inhibited cell growth, protein, and mRNA expression to levels comparable to Oligofectamine-mediated delivery. CONCLUSIONS: G2 and G3 poly(propylenimine) dendrimers markedly improved the delivery and activity of ODNs and thus may represent general reagents for the delivery of ODNs to cells in culture.