两个布依族短指（趾）畸形家系的遗传学研究

短指畸形是人类典型的孟德尔式显性遗传，本文通过对两个布依族指畸形大家系５代５５人的调查研究，发现患者２０人，进行了遗传学研究，认为家系１短指畸形系遗传短指畸形Ａ－１亚型并兼有Ｅ型的特征。家系２短指畸形为ＢｅｌｌＢ型，属国内首例报告。绘制家系谱分析，确认两大家系均属常染色体显性遗传特点。     

甲状腺癌差异表达cDNA消减文库的构建

目的 应用抑制性消减杂交技术，构建人甲状腺癌与正常甲状腺差异表达的cDNA消减文库。方法 分别从甲状腺癌及正常甲状腺组织中提取总RNA，应用高效、灵敏的抑制性消减杂交技术，构建成功cDNA消减文库，再转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 构建成功具有高消减效率的人甲状腺癌组织cDNA消减文库，文库扩增得到了400个克隆，随机挑取50个制备质粒，酶切分析均得到50bp-400bp大小插入片段，这些片段可能就是载有高度特异性的目的片段。结论 人甲状腺癌组织cDNA消减文库的建立为进一步克隆甲状腺癌特异性表达的新基因奠定了基础。     

中国南海短指软珊瑚化学成分研究

目的研究短指软珊瑚Sinulariasp.的化学成分。方法利用硅胶色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、HPLC等手段对化学成分进行分离纯化;通过理化性质、波谱分析方法结合文献对照,鉴定化合物的结构。结果从短指软珊瑚甲醇提取物中,共分离鉴定了11个单体化合物:胆甾醇(1)、(22E)-麦角甾-5,22-二烯-3β-醇(2)、胆甾-5,20-二烯-3β-醇(3)、麦角甾-5,24(28)-二烯-3β-醇(4)、柳珊瑚甾醇(5)、3β-羟基胆甾-5-烯-7-酮(6)、3β-羟基麦角甾-5,24(28)-二烯-7-酮(7)、(22E)-3β-羟基麦角甾-5,22-二烯-7-酮(8)、3β-羟基麦角甾-5-烯-7-酮(9)、(22E)-3β-羟基胆甾-5,22-二烯-7-酮(10)、鲨肝醇(11)。结论化合物6～10为首次从该属软珊瑚中分离得到。化合物7在10μg.mL-1浓度水平,对K562肿瘤细胞株的抑制率为22.74%,对HeLa肿瘤细胞株的抑制率为9.98%。     

短指软珊瑚中的生态活性物质

目的研究南海短指软珊瑚（Sinulariasp．）的生态活性物质。方法利用硅胶柱色谱、SephadexLH-20及HPLC等层析手段,对短指软珊瑚粗提物进行分离纯化,应用现代波谱技术（NMR、MS等）鉴定化合物结构。结果从该珊瑚中分离鉴定了7个甾醇类化合物,分别是：麦角甾-7,24（28）·二烯-3β,5β,6β-三醇（1）,（24R）麦角甾7,22二烯-3β,5β,6α-三醇（2）,麦角甾-24（28）-烯-3B,5α,6β-三醇（3）,（24S）-24-甲基-麦角甾-7-烯-3β,5α,6β三醇（4）,23-去甲基柳珊瑚甾-7-烯。3β,5α,6β-三醇（5）,过氧化麦角甾醇（6）,胆甾醇（7）。结论除海洋无脊椎动物中常见的胆甾醇和过氧化麦角缁醇外,这些化合物均为具有3β,5α,6β-三羟基结构片段的麦角甾醇类似物。初步的体外活性测试实验表明这些化合物对细菌、真菌和藻类有不同程度的抑制作用。     

中国南海短指软珊瑚Sinularia acuta化学成分研究△

目的 研究短指软珊瑚Sinularia acuta的化学成分。方法 利用薄层色谱、硅胶色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、ODS中低压色谱、半制备HPLC等方法对化学成分进行了分离纯化;通过NMR、MS等方法,并结合文献对照,鉴定化合物的结构。结果 从短指软珊瑚的甲醇提取物中,分离鉴定了13个单体化合物：麦角甾-5, 22, 24(28)-三烯-3β-醇(1)、麦角甾-5, 24(28)-二烯-3β-醇(2)、胆甾-5-烯-3β-醇(3)、(22E)-胆甾-5, 22(23)-二烯-3β-醇(4)、(22E)-3β-羟基胆甾-5, 22(23)-二烯-7-酮(5)、3β-羟基麦角甾-5, 24(28)-二烯-7-酮(6)、(22E)-3β-羟基麦角甾-5, 22(23)-二烯-7-酮(7)、3β-羟基麦角甾-5-烯-7-酮(8)、3β-羟基胆甾-5-烯-7-酮(9)、尿嘧啶(10)、胸腺嘧啶(11)、脱氧胸腺嘧啶核苷(12)、脱氧腺嘌呤核苷(13)。结论 化合物(1-13)均为首次从该种软珊瑚中分离得到。     

中国南海短指软珊瑚Sinularia sp.的化学成分研究

目的研究南海短指软珊瑚的化学成分。方法综合利用各种层析方法分离和纯化化合物,并利用光谱学和理化性质来鉴定化合物结构。结果从中分离得到8个甾体化合物,分别鉴定为24-methylcholesta-5,24(28)-diene-3β,7β3,19-triol(1)、24-methylcholesta-5,24(28)-diene-3β,7β,19-triol-7β-monoacetate(2)、litosterol(3)、24-methylcholesta-5,24(28)-diene-3β,7β,19-triol-3β,7β,19-triacetate(4)、24-methylcholesta-24(28)-ene-3β,5α,6β,19-tetrol(5)、hyrtiosterol(4α-methyl-2β,3β,8β,11β-tetrol-5α-ergost-22(23),24(28)-diene)(6)、5,6-epoxylitosterol(7)、armatinol A(8)。结论化合物1～8都是首次从该属软珊瑚中分离得到。     

西沙短指软珊瑚Sinularia cf. molesta化学成分研究△

目的 研究西沙短指软珊瑚Sinularia cf. molesta的化学成分。方法 利用薄层色谱、硅胶色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、MPLC、HPLC等方法对化学成分进行分离纯化;通过NMR、MS等方法,并结合文献,鉴定化合物的结构。结果 从短指软珊瑚的甲醇粗提物中,分离鉴定了8个单体化合物：(5\"Z)-5-(2\", 6\"-二甲基癸烷-5\", 7\"-二烯)呋喃-3-羧酸 (1), Norcembrene (2), Norcembrene E (3),(1R, 3S, 4S, 7E, 11E)-3, 4-环氧西松烷-7, 11, 15-三烯 (4), (3E, 7Z, 11Z)-西松烷-2-羰基-3, 7, 11, 15-四烯 (5), clavirolides D (6),β-谷甾醇 (7), 3β-羟基-24-亚甲基胆甾-5-烯-7-酮 (8)。结论 所有化合物(1-8)均为首次从该种分离得到,化合物(5, 6)为第一次从Sinularia属中分离得到。     

指固有动脉角形穿支皮瓣整复指屈曲挛缩畸形的效果

目的 探讨指固有动脉源血管的角形穿支皮瓣修复指屈曲挛缩方法及效果。方法 选择2015年3月至2016年12月安徽医科大学第一附属医院住院和门诊收治的瘢痕手指屈曲挛缩及先天性手指腱膜挛缩患者14例。所选病例均沿指两侧方设计指固有动脉角形穿支皮瓣进行整复。指固有动脉穿支皮瓣供区面积1.4 cm×2.0 cm~1.8 cm×2.5 cm。术后随访3~20个月,观察皮瓣色泽、质地、外观、感觉恢复及手指活动度。结果 术后14例皮瓣均成活。除2例指尾端表皮剥脱外,伤口均一期愈合。皮瓣无臃肿,外形满意。指端指腹触痛觉,指体两点辨别觉4~6 mm。皮瓣感觉稍减退。结论 应用指固有动脉角形穿支皮瓣整复轻中度指屈曲挛缩畸形,具有手术创面小、色质同源,外观形态佳等优点,是整复轻中度指屈曲挛缩畸形较理想的方法。     

短指软珊瑚属次级代谢产物化学成分及其生物活性研究进展

短指软珊瑚属（Sinularia）分布十分广泛,富含结构新颖、生物活性显著的次级代谢产物,已成为国际上海洋天然产物的研究热点之一。该属软珊瑚中的次级代谢产物主要涉及倍半萜、二萜、倍半萜一二萜二聚体、二萜二聚体、降倍半萜、降二萜、降二萜二二聚体、杂萜、甾体及其糖苷、神经酰胺、长链烷基糖苷、亚精胺等结构类型,其中很多化合物具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗炎等生物活性。本文综述了1975年至2013年4月间报道的短指软珊瑚中的次级代谢产物及其生物活性的研究进展,以期为该领域海洋天然产物的后续研究与开发提供参考。     

中华大蟾蜍耳后腺全长cDNA文库的构建

目的构建中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)耳后腺全长cDNA文库。方法采用TRIzol法提取耳后腺总RNA,经亲和色谱纯化获得总mRNA。以总mRNA为模板,利用In-FusionSMART-erTMDirectional cDNA Library Construction Kit获得初始文库,测定文库滴度、重组率及插入片段长度。随机选取211个克隆进行测序。结果初始文库的滴度为1.3×109cfu.L-1,重组率90%,插入片段大小分布为0.4～4.0 kbp,平均片段大小约为1.1 kbp。共获得180个表达序列标签(ex-pressed sequence tag,EST)。结论此方法所构建文库各项指标均符合要求,为从功能基因组水平研究中华大蟾蜍耳后腺的基因表达及其功能奠定基础。     

Osx cDNA反义表达载体的构建

目的：构建反义Osterix(Osx)cDNA表达载体。方法：快速提取人全血基因组DNA。以DNA为模板，经过两步PCR扩增获得Osx编码序列，与pGEM-T Easy连接获得重组克隆载体。将Osx编码序列反向克隆人真核表达载体pcDNA3，进行序列测定。结果：经序列分析证实，Osx扩增序列完全正确，且反向插入到pcDNA3载体。结论：成功构建了Osx反义表达载体，为研究Osx对成骨细胞分化的影响奠定了基础。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌细胞差异表达基因cDNA文库的建立

目的　建立二烯丙基二硫 (DADS)诱导人胃癌细胞MGC80 3细胞差异表达基因的cDNA文库。方法　采用抑制消减杂交技术 ,筛选DADS处理人胃癌细胞MGC80 3细胞后差异表达的相关基因。经过抑制消减杂交和巢式聚合酶链反应扩增 ,获得富集的差异表达的cDNA文库 ,PCR检测插入片断的阳性克隆。结果　建立DADS诱导人胃癌MGC80 3细胞差异表达基因的cDNA文库 ,并从消减文库中随机挑取的 10 0个白色克隆中筛选个阳性克隆 ,发现插入片断为 10 0～ 6 0 0bp。结论　应用抑制消减杂交方法可有效筛选DADS处理人胃癌细胞MGC80 3细胞后差异表达的相关基因 ,其消减cDNA文库的建立 ,为进一步寻找胃癌发生相关新基因 ,深入揭示DADS对肿瘤细胞的作用机制提供了新的重要线索。     

人膀胱癌BLZ211细胞cDNA文库的构建分析

目的:构建人膀胱癌BLZ211细胞表达型cDNA文库,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。方法:提取BLZ211细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,削平cDNA末端,连接EcoRI适配子,磷酸化EcoRI适配子5′端,XhoI酶切,Sephacryl-S400柱除去小于400bpcDNA片段,与λZAP表达载体连接,包装蛋白包装后建成cDNA文库;取出1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1-Blue-MRF’,测定文库大小、重组率;随机挑取7个噬斑,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下,释放出PBK-CMV噬菌粒;感染大肠杆菌XLOLR,铺于卡那霉素抗性的LB平板;挑取克隆,37℃震摇过夜;抽提质粒,经EcoRI和XhoI酶切后,初步确定片段的大小及多样性。结果:构建成含1.39×106重组子的BLZ211细胞cDNA文库,重组子平均插入外源片段长约1.3kb。结论:所建文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。     

Screening of phage displayed human liver cDNA library against dexamethasone

This paper described an attempt to establish a new method to screen the target biomolecule from phage displayed cDNA library against small molecule drug insoluble in water. Dexamethasone was selected as the model drug, and the screening was carried out in an Eppendorf tube packed with the drug. The whole procedure was monitored by PCR with the enriched specific phage clone as the template. After four rounds screening, the PCR products of selected phages with the lengths of 400 and 600 bp were sequenced, and revealed identical sequences with cytochrome c oxidase subunit III and albumin respectively by GenBank searching. Furthermore, frontal analysis-capillary electrophoresis (FA-CE) was performed to study the interaction between dexamethasone and albumin, and the binding constant was calculated to be 1.153 x 10(3), validating the weak specific interaction between the drug and the target protein. All these results demonstrated that with insoluble drug as the solid phase directly, the screening of target large molecule expressed in phage display cDNA library was feasible, which might pave an easy way to screen the candidate drug targets.     

赤魟尾刺cDNA表达文库的构建

目的　以赤尾刺为出发材料,构建以真核表达载体pcDNA 3.0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法　应用SMART^TM cDNA Library Construction 技术和初步生物信息学分析等方法。结果　通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析,已获得了56个赤新EST序列,其中已确定的全长cDNA克隆有24个,包括IPL肿瘤抑制因子、亲环素cyclophilin A、硒蛋白selenoprotein W、半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin A、tyrosyl-tRNA synthetase 和 calcineurin 类似物蛋白等。结论　这些基因在赤中绝大多数均为首次发现。赤尾刺cDNA表达文库的成功构建,将有利于对赤尾刺中药应用的分子作用机理的深入研究     

小鼠IL-18真核表达质粒的构建及其生物学活性的鉴定

目的构建小鼠白细胞介素18(interleukin18,IL-18)的真核表达质粒,并检测其表达的IL-18的生物学活性。方法采用RT-PCR获得小鼠IL-18基因,通过EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及连接反应,构建pEGFP-mIL-18真核表达载体,重组载体经过限制性内切酶、PCR及DNA序列测定等证实连接片段的正确性后,转染HEK293细胞系,荧光显微镜观察GFP-mIL-18融合蛋白的表达,收集转染后72h的上清液,MTT法检测上清液中IL-18表达产物的生物学活性。结果酶切分析、PCR鉴定、DNA测序表明成功地构建了pEGFP-mIL-18真核表达载体,MTT法证明表达产物有刺激小鼠脾细胞增殖的功能。结论所获pEGFP-mIL-18真核表达载体能在体外表达具有生物学活性的IL-18,为进一步研究IL-18的功能和运用奠定了基础。     

抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。